细胞因子在内毒素诱导的前葡萄膜炎小鼠房水和血清中的表达

目的 通过分析内毒素诱导的C3H/HeN小鼠的前葡萄膜炎模型中房水和血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1、IL-6、IL-10、干扰素-y(interferon-γ,IFN-γ)的浓度,探讨急性前葡萄膜炎可能的发病机制.方法 取180只C3H/HeN小鼠,分为对照组(n-30)和实验组(n=150),将霍乱弧菌内毒素(18 001株,古典生物型,小川血清型)溶于无菌生理盐水中,终浓度为2×103g·L-1,实验组小鼠足底注射100μL制作内毒素诱导的前葡萄膜炎模型;对照组注射等量生理盐水.于诱导后4 h、8 h、16 h、24 h、48 h断颈处死实验组小鼠(各30只).以10只小鼠为一单样本,微量进样器抽取前房水;眼球摘除后微量进样器于眼窝处取外周血.对照组于注射生理盐水后即刻处死小鼠,样本收集方法同实验组.微球流式技术栓测小鼠房水及血清中TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10、IFN-γ的浓度.结果 所有实验组小鼠均成功诱导出急性前葡萄膜炎.在小鼠房水中,TNF-α于4 h达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.002);4 h、8 h、16 h及24 h时,在房水和血清内的浓度差异均无统计学意义(均为P＞0.05).IL-1、IL-6在血清中均于16 h达峰值,与对照组相比差异均有统计学(P=0.001、0.000);且诱导后各时间点在房水内的浓度均高于血清.IL-10在房水中于24 h达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.003),与相同时间点血清内的浓度相比差异亦有统计学意义(P=0.003).IFN-γ于4 h、24 h在房水和血清中的表达差异有统计学意义(P=0.033、0.032).各细胞因子在房水中的表达变化基本与炎症进程相符.结论 细胞因子在眼内炎症发生过程中起着重要作用,网络调控将成为治疗方向.     

糖尿病性白内障患者血清与房水中细胞因子表达的变化

目的：分析糖尿病性白内障患者血清和房水中维生素C、氧化应激产物、炎症因子及血管内皮生长因子(VEGF)水平变化。

方法：选取2018-01/2019-12我院收治的糖尿病性白内障患者40例40眼作为观察组,单纯白内障患者40例40眼作为对照组。分析两组患者血液和房水样本中维生素C、氧化应激产物(丙二醛)、炎症因子(IL-6和IL-8)及VEGF水平的差异。

结果：两组患者血清维生素C水平无差异(P>0.05),但观察组房水维生素C水平明显低于对照组(20.6±13.6mg/L vs 27.2±9.9mg/L,P<0.05); 两组患者血清丙二醛水平无差异(P>0.05),但观察组房水丙二醛水平明显高于对照组(12.6±4.6nmol/mL vs 8.0±3.1nmol/mL,P<0.001); 观察组血清和房水IL-6、IL-8水平均明显高于对照组(P<0.001); 两组患者血清VEGF水平无差异(P>0.05),但观察组房水VEGF水平明显高于对照组(45.6±20.6pg/mL vs 16.5±4.5pg/mL,P<0.001)。

结论：糖尿病性白内障患者与单纯白内障患者相比,虽然血清维生素C、氧化应激产物及VEGF水平相似,但其房水中维生素C、氧化应激产物及VEGF水平存在较大的差异,同时糖尿病性白内障患者血清和房水炎症因子水平相比单纯白内障患者更高。     

大肠杆菌内毒素诱导的大鼠眼内炎表现及细胞因子的表达

目的 观察大肠杆菌内毒素(LPS)诱导的大鼠眼内炎模型组织病理学特征和玻璃体内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和LPS的表达模式.方法 采用随机数字表法将大鼠随机分为生理盐水对照组(SC组)136只、眼内炎组(EO组)168只、空白对照组(BC组)12只.E0组玻璃体腔注射5 μl LPS溶液诱导眼内炎动物模型;SC组注入等量无菌生理盐水;BC组不作任何干预.注射后6、12、24、48、72 h,5、7 d,观察大鼠眼部炎症表现并分别摘除各组眼球行组织病理学检查,并取其玻璃体检测细胞因子TNF-α、IL-1β和LPS的浓度.结果 EO组注射后6～72 h,眼内可见严重炎症反应,注射后7 d炎症基本消退.注射后24 h,眼内白细胞浸润数量为(1224.64±132.2)个/眼,达到高峰;注射后72 h,浸润细胞数量迅速下降至(342.25±47.7)个/眼.EO组注射后24 h,TNF-α和IL-1β浓度分别为(996.18±89.45)、(5556±1440)pg/ml,均达到高峰并持续至注射后48 h,随后迅速下降;注射后7 d,TNF-α和IL-1β浓度分别为(22.16±5.84)、(73.7±18.7)pg/ml.EO组注射后72 h,玻璃体腔内LPS含量迅速下降为(11.03±3.41)ng,7 d后玻璃体腔内LPS含量为(0.22±0.08)ng.结论 大鼠眼内炎模型的主要病理特征是大量白细胞眼内浸润,TNF-α、IL-1β的高水平表达以及玻璃体腔自发性细菌成分清除;TNF-α、IL-1β表达模式与LPS眼内清除过程一致.     

大肠杆菌内毒素诱导的大鼠眼内炎表现及细胞因子的表达

Objective To observe the histopathologic features and expression patterns of tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-1β(IL-1β) and Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) in the rat vitreous with LPS induced-endophthalmitis. Methods Wistar rats were randomly divided into saline control group (SC, 136 rats),endophthalmitis group (EO, 168 rats)and blank control group (BC, 12 rats). EO group received an intravitreal injection of 5βl LPS; SC group received 5μl sterile saline and no intervention for BC group. Six, 12, 24, 48, and 72 hours, 5 and 7 days after injection, intraocular inflammation were observed and the eyes and vitreous were collected for histopathological examination and measurement of TNF-α, IL-1β and LPS expression. Results Severe inflammatory responses in the eyes were observed in EO group between six and 72 hours after LPS injection, ocular inflammation subsided seven days after LPS injection. In the vitreous, a peak neutrophil count was observed at 24 hours (1224. 64±132.2) cells/eye that rapidly declined at 72 hours (342. 25± 47. 7) cells/eye. The levels of TNF-α and IL-1β in EO group were peaked at 24 hours with (996.18±89.45) and(5556±1440) pg/L, respectively;Persisted at 48 hours and began to decline rapidly thereafter. Seven days after LPS injection, levels of TNF-α and IL-1β returned to baseline with (22.16 ±5.84) and (73.7±18. 7) pg/L, respectively. LPS concentration in EO group decrease rapidly at 72 hours with (11.03±3.41) ng and disappear on days 7 with (0.22±0.08) ng after LPS injection. Conclusions Massive neutrophils infiltration, high levels expression of TNF-α and IL-1β and spontaneous elimination of bacterial elements in vitreous cavity were major pathologic characteristics in this experimental model. The expression patterns of TNF-α, IL-1β were in accord with LPS clearance process.     

大肠杆菌内毒素诱导的大鼠眼内炎表现及细胞因子的表达

Objective To observe the histopathologic features and expression patterns of tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-1β(IL-1β) and Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) in the rat vitreous with LPS induced-endophthalmitis. Methods Wistar rats were randomly divided into saline control group (SC, 136 rats),endophthalmitis group (EO, 168 rats)and blank control group (BC, 12 rats). EO group received an intravitreal injection of 5βl LPS; SC group received 5μl sterile saline and no intervention for BC group. Six, 12, 24, 48, and 72 hours, 5 and 7 days after injection, intraocular inflammation were observed and the eyes and vitreous were collected for histopathological examination and measurement of TNF-α, IL-1β and LPS expression. Results Severe inflammatory responses in the eyes were observed in EO group between six and 72 hours after LPS injection, ocular inflammation subsided seven days after LPS injection. In the vitreous, a peak neutrophil count was observed at 24 hours (1224. 64±132.2) cells/eye that rapidly declined at 72 hours (342. 25± 47. 7) cells/eye. The levels of TNF-α and IL-1β in EO group were peaked at 24 hours with (996.18±89.45) and(5556±1440) pg/L, respectively;Persisted at 48 hours and began to decline rapidly thereafter. Seven days after LPS injection, levels of TNF-α and IL-1β returned to baseline with (22.16 ±5.84) and (73.7±18. 7) pg/L, respectively. LPS concentration in EO group decrease rapidly at 72 hours with (11.03±3.41) ng and disappear on days 7 with (0.22±0.08) ng after LPS injection. Conclusions Massive neutrophils infiltration, high levels expression of TNF-α and IL-1β and spontaneous elimination of bacterial elements in vitreous cavity were major pathologic characteristics in this experimental model. The expression patterns of TNF-α, IL-1β were in accord with LPS clearance process.     

外伤性眼内炎兔房水中细胞因子的表达

目的分析干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在兔眼外伤后不同时间房水中的浓度变化,探讨眼内炎的发病机制。方法将18只实验兔随机分为3组,每组6只兔。Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组和Ⅲ组右眼建立外伤性眼内炎模型,并将金黄色葡萄球菌接种于Ⅲ组受伤眼的玻璃体内。ELISA法测定造模前及造模后6h、12h、24h、48h、96h房水中IFN-γ、IL-6、IL-8、TGF-β的浓度;于6h、12h、24h、48h、96h、8d、16d分别用裂隙灯及间接显微镜观察眼部炎症情况并评分。结果造模后Ⅱ组炎症反应明显较Ⅲ组轻,造模12h后两组各时间点临床炎症评分间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中IFN-γ在造模后均升高,24h时达到高峰,分别为(516.45±20.80)ng.L-1、(508.21±31.45)ng.L-1,与造模前(337.15±17.25)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);造模后24hIL-6在Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中的浓度即达到高峰,分别为(61.69±2.11)ng.L-1、(61.81±2.18)ng.L-1,与造模前(46.34±2.09)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中IL-8在造模后48h浓度达到高峰,分别为(66.78±2.00)ng.L-1、(64.94±3.39)ng.L-1,与造模前(44.50±1.40)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。造模后24hTGF-β在Ⅱ组和Ⅲ组兔房水中的浓度最低,分别为(288.79±7.17)ng.L-1、(293.99±1.93)ng.L-1,与造模前(404.45±2.86)ng.L-1相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论外伤性眼内炎导致机体免疫系统破坏,房水中细胞因子表达发生变化,因此在眼内炎的早期,应联合采取免疫干预措施来控制炎症反应。     

细胞因子在玻璃体切除联合硅油填充术后并发性白内障患者房水中的表达

目的 比较玻璃体切除联合硅油填充术后并发性白内障患者与年龄相关性白内障患者房水中细胞因子的表达差异情况,探讨细胞因子与并发性白内障的相关性。设计 实验研究。研究对象 北京同仁医院因玻璃体切除联合硅油填充术后3个月~6年需手术治疗的并发性白内障患者（实验组）19例（19眼）及需手术治疗的年龄相关性白内障患者（对照组）11例（11眼）。方法 每例受试者白内障手术中收集房水0.1～0.2 ml,通过流式细胞仪检测房水中细胞因子IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ的表达。主要指标 上述8种细胞因子的表达量。结果 实验组中IL-6的表达量（199635.64±28156.5 fg/ml）及IL-10的表达量（273.57±206.7 fg/ml）均明显高于正常对照组 （3340.96±1970.36 fg/ml）及（117.45±64.77 fg/ml）（P均＜0.05）。其余6种细胞因子表达两组间差异则无统计学意义。结论 玻璃体切除联合硅油填充术后并发性白内障患者房水中细胞因子IL-6、IL-10含量较高,可能与并发性白内障的形成或加速有关。（眼科,2013,22：269-272）     

青光眼房水免疫球蛋白与C3的测定

报告对青光眼21例30眼手术中抽房水测定免疫球蛋白与补体C_3的含量。结果见原发性青光眼房水IgG平均值13.63mg/100ml,继发性青光眼房水IgG平均值为34mg/100ml,均比正常人房水IgG及老年性白内障房水IgG高。继发性青光眼房水IgA平均值含量为8mg/100ml,比原发性青光眼的IgA平均值为4.38mg/100ml有明显差别,均比国外正常尸眼IgA为高,但比老年性白内障房水IgA为低。继发性青光眼房水补体C_3平均值为12.25mg/100ml,明显高于原发性青光眼的补体C_3平均值4.55mg/100ml,均明显比正常尸眼补体C_3高。     

MMP-2和PEDF在氧诱导小鼠视网膜新生血管中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和色素上皮衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)在氧诱导小鼠视网膜新生血管中的表达和意义。方法随机选取80只健康C57BL/6J小鼠进行分组,取对照组(40只)和高氧组(40只)小鼠眼球作ADP酶视网膜铺片、病理切片及免疫组织化学法检测,观察视网膜血管的改变,计算视网膜新生血管突破内界膜的内皮细胞核数及检测MMP-2、PEDF蛋白的表达。结果高氧组视网膜大量新生血管形成;新生血管突破内界膜的内皮细胞核数为(32.45±1.34)个,与对照组(1.27±0.20)个相比差异有统计学意义(t=10.345,P<0.05)。高氧组与对照组相比,MMP-2蛋白在神经节细胞层、内丛状层、内核层和突破视网膜内界膜的新生血管中高表达(P<0.05);PEDF蛋白在神经纤维层、神经节细胞层、内丛状层、感光细胞层及视网膜色素上皮细胞层低表达(P<0.05)。两者表达呈显著负相关(r=-0.785,P<0.05)。结论 MMP-2和PEDF共同维持视网膜新生血管的形成。     

蛋白激酶Cα在小鼠胚胎干细胞诱导分化为神经样细胞中的表达变化

目的研究小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)定向诱导分化为神经样细胞过程中蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)的表达变化,探讨可能涉及ESC定向分化的信号机制.方法ES-D3细胞株用不含小鼠白血病抑制因子(mouseleukemiainhibitoryfactor,mLIF)的ESC培养液培养4 d,形成胚胎体(embryoid bodies,Ebs),再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100mm的培养皿,经5×10-7 mol/L维甲酸(retinoic acid,RA)诱导后,用神经特异性烯醇化酶(NSE)和NF-200来鉴定分化细胞的类型,在诱导后第1、3、5、7和14天用Western印迹和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PKCα亚型的表达变化.结果诱导前免疫组化发现PKCα在ES-D3细胞有广泛的棕黄色的阳性表达,以细胞浆和细胞膜最明显;Western印迹发现PKCα出现一条蛋白印迹条带,分子量约为84kD;诱导后第3天,NSE和NF-200开始表达,第7天达到高峰;诱导后Western印迹和RT-PCR方法都显示PKCα表达量急剧下降,以后逐渐升高,至第14天基本恢复至正常水平.结论在RA诱导ESC定向分化为神经样细胞过程中,PKCα有独特的时空表达特点,它可能对ESC的分化有非常重要的调控作用.     

腹腔巨噬细胞核因子转位在小鼠内毒素诱导葡萄膜炎发病中的作用

目的观察野生型C3H/HeN小鼠和Toll样受体4(TLR4)基因缺陷型C3H/HeJ小鼠腹腔巨噬细胞在脂多糖(LPS)刺激下激活状态的差异,从体外途径探讨TLR4传导信号在前葡萄膜炎发病中的可能作用机制。设计实验研究。研究对象健康成年C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠。方法常规提取两种小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,按处理因素不同随机分六组:C3H/HeN小鼠LPS组、正常对照组、抗TLR4单克隆抗体加LPS组、抗TLR4单克隆抗体组;C3H/HeJ小鼠LPS组、正常对照组。各组在不同处理后1h、3h、6h、12h、24h五个时间点通过免疫荧光组织化学染色进行观察。主要指标TLR4传导途径中关键分子TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)免疫荧光强度及表达位置差异。结果所有组TLR4均表达于细胞膜,MyD88表达于细胞质和细胞核。C3H/HeN小鼠LPS组和C3H/HeJ小鼠LPS组TLR4荧光强度比较,差异有统计学意义;余各组TLR4荧光强度两两比较,差异无统计学意义。C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞LPS组随LPS刺激时间的延长,各观察时间点MyD88荧光强度逐渐减弱,总体差异有统计学意义;余各组各时间点MyD88荧光强度无明显变化。C3H/HeN小鼠正常对照组、抗TLR4单克隆抗体组,C3H/HeJ小鼠正常对照组腹腔巨噬细胞各时间点NF-κB均表达于胞质,C3H/HeN小鼠腹腔巨噬细胞LPS刺激1h后NF-κB表达于胞核,3h依旧表达于胞核,此后无法检测到NF-κB的表达。C3H/HeN小鼠抗TLR4单克隆抗体加LPS组、C3H/HeJ小鼠LPS组巨噬细胞经LPS刺激1h后NF-κB转移至胞膜,直至24h一直表达于胞膜。结论腹腔巨噬细胞TLR4传导途径中核因子的转位可能与前葡萄膜炎的发病有关,特异性阻断该途径或许为前葡萄膜炎的治疗提供新思路。     

99Tc-MDP对兔实验性葡萄膜炎房水及血清细胞因子的影响

目的 探讨99锝-亚甲基二膦酸盐(99Tc-MDP,商品名为云克)对兔实验性葡萄膜炎的治疗作用.方法 将实验兔21只随机分为生理盐水对照组、地塞米松治疗组、99Tc-MDP治疗组,每组各7只.ELISA法测定实验性兔葡萄膜炎动物模型造模前、造模后5 d、给药治疗后10 d、停药后5 d房水白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)及转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)含量值、血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)及干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)含量值.结果 生理盐水对照组房水中IL-10和TGF-β在给药后10 d分别为(86.2±51.2)ng·L-1、(91.2±67.9)ng·L-1,均低于造模后5 d的(95.1±44.7)ng·L-1、(135.6±106.3)ng·L-1;给药后10 d血清TNF-α及IFN-γ分别为(151.9±57.9)ng·L-1、(4.7±1.2)ng·L～,均低于造模后5 d的(175.6±96.0)ng·L-1、(5.8±2.3)ng·L-1.地塞米松治疗组给药后10 d房水IL-10和TGF-β分别为(106.9±28.5)ng·L-1、(168.1±56.6)ng·L-1,高于造模后5 d的(82.7±41.4)ng·L-1和(117.4±45.5)ng·L-1;给药后10 d血清TNF-α及IFN-γ分别为(80.3±23.4)ng·L-1、(3.2±2.3)ng·L-1,低于造模后5 d的(188.2±104.9)ng·L-1、(5.7±3.6)ng·L-1.99Tc-MDP治疗组给药后10 d房水IL-10和TGF-β分别为(136.2±47.2)ng·L-1、(183.1±79.6)ng·L-1,高于造模后5 d的(98.1±31.3)ng·L-1和(131.7±53.4)ng·L-1;给药后10 d血清TNF-α及IFN-γ分别为(82.7±66.1)ng·L-1、(2.8±1.4)ng·L-1,均低于造模后5 d的(191.7±72.4)ng·L-1、(6.8±4.1)ng·L-1;与生理盐水对照组比较,地塞米松治疗组及99Tc-MDP治疗组均可使兔房水IL-10及TGF-β升高,血清TNF-α及IFN-γ降低,差异均有统计学意义(P均<0.05).但地塞米松治疗组与99Tc-MDP治疗组之间比较差异无统计学意义.结论 99Tc-MDP有升高兔实验性葡萄膜炎房水中IL-10和TGF-β及降低血清中TNF-α和IFN-γ的作用.由于其全身并发症少,可能成为有前景的葡萄膜炎治疗用药.     

核因子NF-KB在细菌内毒素诱导的实验性角膜基质炎中的表达

目的明确在细菌内毒素(LPS)诱导的角膜基质炎中是否存在转录调节因子一核因子NF-кB的活化表达.方法青年Wistar大鼠右眼及左眼分别给予细菌内毒素LPS(4μg@μ1-1)及其溶剂灭菌PBS各10μl角膜内注射.注射后分别于1小时、3小时、6小时、1天、3天及7天处死动物.每只角膜标本分为2份,一份行石蜡切片病理学检查,一份行冰冻切片进行免疫组织化学分析.结果病理学检查LPS注射后1小时即可见角膜缘血管内有炎症细胞聚集,随时间延长,中央角膜基质区域炎症细胞浸润明显.基质水肿,部分基质细胞溶解坏死,被巨噬细胞吞噬,至第3～7天中周边基质内有新生血管生成,基质水肿渐减轻,细胞外胶原排列紊乱,呈典型的角膜基质炎的病理改变.免疫组化检查LPS注射后1小时即出现NF-кB阳性细胞,表现为部分基质细胞核内染色阳性,染色强度以3小时和6小时为最强,随时间延长逐渐减弱,至7天时几乎无阳性细胞.结论核因子NF-кB在实验性角膜基质炎早期存在活化表达.NF-кB在细胞核内出现,可能通过与相应致炎基因的启动子与增强子结合,促进相关基因的转录,从而在角膜基质炎中起到重要作用.     

交感性眼炎患者房水和血清细胞因子水平的分析简

目的 检测交感性眼炎急性发作期患者房水和血清细胞因子的水平。方法 选取2009年1月～2011年12月在我院眼科就诊的交感性眼炎急性发作期的患者15例,前房穿刺取患者房水,同时取患者静脉血,收集血清标本。以年龄相关性白内障患者术前血清标本和术中房水作对照。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）分析交感性眼炎急性发作期患者及白内障患者房水及血清中IFN-γ（Th1细胞分泌因子）、IL-4（Th2细胞分泌因子）和IL-17（Th17细胞分泌因子）细胞因子水平。结果 交感性眼炎急性发作期患者的房水IFN-γ水平与血清中IFN-γ的水平相比明显升高,分别为（148.1±57.9）pg/mL、（6.5±5.4）pg/mL,差异有统计学意义（P〈0.01）;房水IL-4水平与血清中IL-4的水平相比差异有统计学意义（P〈0.01）,分别为（2.3±3.5）pg/mL、（8.9±5.0）pg/mL,交感性眼炎患者房水中IL-4水平明显低于血清;房水IL-17水平和血清 IL-17水平相比差异有统计学意义（P〈0.01）,分别为（48.3±21.6）pg/mL、（6.5±9.6）pg/mL,房水中IL-17水平明显高于血清。交感性眼炎急性发作期患者房水和血清IFN-γ水平与对照组房水和血清IFN-γ水平相比均明显升高（P〈0.01,P〈0.05）;交感性眼炎患者房水和血清IL-4水平与对照组房水和血清IL-4水平相比差异无统计学意义（P〉0.05,P〉0.05）;对照组房水和血清 IL-17水平均未测出。结论 交感性眼炎患者眼部炎症的发病主要是与Th1和Th17细胞分泌因子IFN-γ和IL-17有关,对于炎症的防治有指导意义。     

Tau蛋白和磷酸化Tau蛋白在C57BL/6小鼠和转基因鼠的表达

目的　探讨总Ｔａｕ蛋白（Ｔ-ｔａｕ）和磷酸化Ｔａｕ蛋白（Ｐ-ｔａｕ）在慢性青光眼模型小鼠视神经中的表达以及意义。方法　选取Ｃ５７ＢＬ／６雄性小鼠以及ＡＰＰ＋转基因鼠各４０只,每只小鼠右眼为实验眼,左眼为对照眼,通过烙闭实验眼巩膜上静脉建立慢性青光眼模型,采用免疫组织化学方法,检测视神经Ｔ-ｔａｕ以及Ｐ-ｔａｕ在不同青光眼模型中的表达情况。结果　Ｃ５７ＢＬ／６小鼠以及ＡＰＰ＋转基因鼠实验眼术后眼压均高于术前（均为Ｐ＜０．０５）,而两组术后眼压差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。Ｃ５７ＢＬ／６小鼠以及ＡＰＰ＋转基因鼠实验眼Ｔ-ｔａｕＩＯＤ值均低于对照眼（均为Ｐ＜０．０５）,而Ｐ-ｔａｕＩＯＤ值均高于对照眼（均为Ｐ＜０．０５）;Ｃ５７ＢＬ／６小鼠实验眼Ｔ-ｔａｕ和Ｐ-ｔａｕＩＯＤ值分别为１０２．２４±１２．１２和１７２．１２±９．０１,均小于ＡＰＰ＋转基因鼠（均为Ｐ＜０．０５）。ＡＰＰ＋转基因鼠实验眼视神经细胞凋亡率为（９．７２±１．０８）％,明显高于Ｃ５７ＢＬ／６小鼠实验眼（７．２４±１．２２）％,差异有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）,且两者实验眼均高于对照眼（均为Ｐ＜０．０５）。结论　慢性青光眼小鼠视网膜Ｔ-ｔａｕ蛋白表达量降低,Ｔａｕ蛋白磷酸化水平增加,视神经细胞凋亡率上升,在ＡＰＰ＋转基因小鼠中尤为明显。     

激光诱导小鼠脉络膜新生血管中补体C3的作用

目的探讨激光诱导脉络膜新生血管(choroidal neovasculature,CNV)形成机制中补体的作用。方法用氪红激光对小鼠行实验性视网膜激光光凝,建立CNV动物模型,共聚焦显微镜下观察CNV发生情况,检测补体溶血活性(CH50),用免疫组织化学方法检测补体C3,用RT-PCR分析C3a受体mRNA的表达。结果激光后第7天,对照组C57BL/6小鼠见CNV形成,而眼镜蛇毒因子(cobra venom factor,CVF)预处理组及C3-/-小鼠组未见CNV形成。CVF预处理组小鼠补体的CH50于激光后第1天、第3天、第5天、第7天分别为2%、3%、3%、2%,同时间点对照组均为100%,差异均有显著统计学意义(均为P<0.001)。激光后第1天,对照组RPE-脉络膜-巩膜复合体见C3强阳性染色,CVF预处理组及C3-/-小鼠组未见C3阳性染色。激光后对照组C57BL/6小鼠较激光前,C3a受体mRNA表达增强,激光后第5天,C3a受体mRNA水平达到高峰,并在激光后第7天维持较高水平,而CVF预处理组小鼠及缺乏补体C3的C3-/-小鼠组激光前后未见明显改变。结论氪激光诱导CNV模型,补体C3参与CNV形成。补体系统的存在和激活是激光诱导CNV形成的必要条件。     

p53和MDM2在3种RP小鼠视网膜中的表达

目的 了解凋亡相关基因p53和MDM2与视网膜色素变性（retinitis pigmentosa,RP)发病的关系。方法 以RP模式动物rds小鼠，rd小鼠，C3H小鼠及正常对照C3B小鼠为材料，提取不同发病时间（出生后7，12，17，23，29，37和50d)视网膜的总RNA，以β-actin和L19核糖体蛋白基因为内对照，RT－PCR分析小鼠发病过程中视网膜p53和MDM2的表达。结果 在C3B小鼠视网膜中，p53和MDM2的表达完全同步。出生后7d，高表达；7－12d期间，表达量迅速下降；12－50d期间，表达水平低，但基本稳定；p53和MDM2在rds小鼠的表达水平低，但基本上是同步，稳定表达。在rd小鼠中，p53的表达变化不大，但MDM2的表达则与p53不同步，类似于C3B小鼠MDM2的表达。在C3H小鼠的视网膜，p53和MDM2的表达也不同步。7－23d期间，p53的表达基本稳定；自23d后逐步下降，其中23－29d期间，p53的表达下降最快。而MDM2的表达总体变化不大。结论：在这3种RP模式动物中，虽然凋亡相关基因和MDM2存在着表达差异，但其发病过程中视网膜细胞的变性死亡可能是通过p53非依赖型途径进行的。     

Toll样受体-4在内毒素诱导的葡萄膜炎中的表达及意义

目的 探讨Toll样受体-4(TLR4)在内毒素诱导的葡萄膜炎中的表达和意义.设计 实验性研究.研究对象 Wistar大鼠12只,随机分为模型组(n=6)和对照组(n=6).方法 模型组通过足底及腹腔注射霍乱弧菌内毒素诱导出葡萄膜炎,对照组注射磷酸盐缓冲液.注射后4h、10h、16h、24h裂隙灯观察眼前节反应.注射后24h通过免疫组化方法检测眼球冰冻切片及葡萄膜铺片中TLR4的表达.TLR4阳性判定标准:呈棕黄色颗粒定位于胞膜、胞浆.主要指标 眼前节炎症反应程度、葡萄膜铺片中TLR4阳性表达的细胞数量.结果 内毒素注射后4h虹膜血管扩张充血,16h前房可见纤维素渗出.模型组虹膜铺片内可见大量TLR4阳性表达细胞,位于虹膜基质层,对照组虹膜铺片内只见少量TLR4阳性表达细胞,模型组虹膜中阳性细胞数量高于对照组(P＜0.05).冰冻切片中虹膜内偶见少量TLR4表达.脉络膜和视网膜冰冻切片及铺片中均未见阳性细胞.结论 内毒素诱导的葡萄膜炎中TLR4表达增高,提示TLR4可能在急性前葡萄膜炎的发生发展中具有一定作用.(眼科,2008,17:48-51)     

Racl和HIF-1在激光诱导小鼠脉络膜新生血管模型组织中的表达

目的研究Racl和缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF—1α）在激光诱导实验性小鼠脉络膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）模型组织中的表达及意义。方法用532nm激光诱导小鼠CNV模型，分别在光凝后1d、3d、7d、14d、28d行荧光素眼底血管造影后处死小鼠，摘除眼球制作标本，行病理切片观察及免疫组织化学检测Racl和HIF—1α蛋白在CNV组织中的表达。结果正常小鼠视网膜脉络膜组织未见Racl和HIF—1α蛋白阳性表达。激光诱导的小鼠CNV组织形成过程中均有Racl和HIF—1α蛋白的表达，激光光凝早期二者表达均增高；光凝后1d即有明显的阳性表达，二者的阳性表达率分别是11．21％和24．80％；光凝后3～7d均达到高峰，RacI蛋白的阳性表达率分别为34．58％和53．35％，而HIF-1α蛋白的阳性率为33．05％和50．35％；光凝后14d，二者的表达均下降，阳性率分别为25．50％和31．97％；光凝后28d，阳性率分别为9．32％和11．26％；二者表达呈显著正相关（r=0．943，P=0．016）。结论Racl和HIF—1α在CNV组织中存在高表达，且二者表达密切相关。