20-羟基蜕皮甾酮通过Akt/NF-κB通路调节小胶质细胞活化

目的 观察20-羟基蜕皮甾酮对脂多糖诱导的体外原代培养小胶质细胞活化的影响,并探讨其相关机制。方法 脂多糖处理原代培养的SD大鼠小胶质细胞,构建其活化模型。实验分为正常组,脂多糖处理组和脂多糖+20-羟基蜕皮甾酮组。酶联免疫法测定各组细胞培养基中IL-1β和TNF-α的浓度,Western blot法检测各组细胞胞质内p-IκBα、细胞核内p-NF-κB以及细胞内p-Akt水平。结果 10ng/ml LPS孵育小胶质细胞8h,细胞培养基中IL-1β和TNF-α浓度分别从33.73±6.42pg/ml和43.67±7.17pg/ml上升至87.16±12.78pg/ml和96.55±13.76pg/ml （P<0.01）。50μmol/L 20-羟基蜕皮甾酮和LPS一起处理细胞8h后,笔者观察到细胞上清中IL-1β和TNF-α浓度分别降低至59.37±9.24和72.81±12.69pg/ml （P<0.05）。进一步增加20-羟基蜕皮甾酮浓度至100μmol/L,细胞上清中IL-1β和TNF-α浓度进一步降低至48.11±8.42pg/ml和61.44±9.38pg/ml （P<0.01）。此外,脂多糖导致小胶质细胞胞质内p-IκBα、细胞核内p-NF-κB和细胞内p-Akt水平明显升高（P<0.01）,20-羟基蜕皮甾酮抑制上述蛋白水平的升高。结论 20-羟基蜕皮甾酮经Akt信号通路,失活NF-κB,抑制LPS诱导的小胶质细胞IL-1β和TNF-α分泌,最终改善小胶质细胞介导的炎症。     

片仔癀通过抑制TLR4/MAPK信号通路减轻LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症损伤研究

目的:研究片仔癀(PZH)对脂多糖(LPS)诱导的BV2 小胶质细胞神经炎症损伤的保护作用及机制.方法:将BV2 小胶质细胞培养于含有10％胎牛血清和1％青霉素-链霉素的RPMI-1640 完全培养基中,并置于5％CO2,37℃培养箱中常规培养.将BV2 小胶质细胞以5×104 个/m L 的密度接种于96 孔板,LP...     

瑞舒伐他汀抑制NF-κB活化下调LPS诱导小胶质细胞TNF-α表达的实验研究

目的 探讨瑞舒伐他汀能否通过抑制NF-κB活化下调LPS诱导的小胶质细胞TNF-α的表达.方法 将BV2细胞分为3组即对照组（Control组）、LPS组和瑞舒伐他汀＋LPS（Ros＋ LPS组）.在干预24小时后使用RT-PCR法和western blot法对BV2细胞TNF-α mRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用western blot法对细胞NF-κB p65磷酸化水平（Phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值）进行分析.结果 与Control组相比较,在LPS干预24小时后BV2细胞TNF-α mRNA和蛋白的表达水平以及phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值均明显升高,差异均有统计学意义（P均＜0.05）;但LPS组较Ros＋ LPS组TNF-α mRNA和蛋白的表达的升高以及Phospho-NF-κB p65/NF-κB p65比值的增加更加显著,差异均有统计学意义（P均＜0.05）.结论 瑞舒伐他汀可能通过抑制NF-κB的活化下调了小胶质BV2细胞TNF-α的合成和释放.     

雷公藤内酯对海人酸活化的BV-2小胶质细胞NF-κB表达的影响

目的:观察雷公藤内酯对海人酸活化的小胶质细胞活化增殖的影响,进一步探索雷公藤内酯抑制海人酸活化的小胶质细胞活化增殖的分子机制。方法:倒置显微镜观察BV-2小胶质细胞的活化增殖,免疫组化方法检测BV-2小胶质细胞的NF-κB蛋白表达水平,RT-PCR检测BV-2小胶质细胞的NF-κB mRNA表达水平。结果:倒置显微镜结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞胞体变大变圆,突起变短或消失。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞胞体变小变瘦,突起变细长,与对照组相似。免疫组化结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞NF-κB蛋白表达显著增加(P0.05)。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞NF-κB蛋白表达显著降低(P0.05)。RT-PCR结果显示,与对照组相比,海人酸组BV-2小胶质细胞NF-κB mRNA表达水平显著增加(P0.05)。与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组BV-2小胶质细胞NF-κB mRNA表达水平显著降低(P0.05)。结论:雷公藤内酯提取物可抑制小胶质细胞活化增殖,其分子机制可能与下调小胶质细胞NF-κB蛋白和mRNA表达有关。     

小胶质细胞NF-κB与AQP4协同表达的研究

目的观察原代培养的小胶质细胞划痕损伤后NF-κB与水通道蛋白质4(AQP4)表达的相关性。方法原代培养小胶质细胞,用免疫细胞化学鉴定其特异性表面标记物巨噬细胞分化抗原-1(Mac-1)抗体。采用划痕致伤构建细胞损伤模型。于伤后12 h及1、3、57、d用RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达,Western blot检测AQP4蛋白的表达。结果伤后12 h,NF-κB、AQP4表达不显著,1 d时表达达高峰,后逐渐降低,5、7 d时几乎无表达。结论致伤后,NF-κB与AQP4的表达具有协同性,炎症反应在创伤后脑水肿的发生、发展中发挥了重要作用。     

LINC00152通过PI3K/Akt/NF-κB信号通路调控LPS诱导小胶质细胞炎性反应的机制研究

目的 探讨lncRNA LINC00152对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的HMC3小胶质细胞炎性反应的作用机制。方法 将体外培养的HMC3随机分成4组,即空白组(以完全培养基培养)、LPS组(在空白组基础上加入1μg/ml LPS干预)、阴性对照组[即LPS+反义寡聚核苷酸(ASO)-NC组,在LSP干预基础上转染ASO]和LPS+ASO-LINC00152组(在LSP干预基础上转染ASO-LINC00152)。流式检测CD86⁺(M1型)、CD206⁺(M2型)细胞比例,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,以及细胞中iNOS活性,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测PI₃K、Akt、p65基因表达水平,Western blot法检测P...     

富马酸二甲酯通过NF-κB通路抑制IL-1β诱导的小鼠软骨细胞炎症

目的探讨富马酸二甲酯对软骨细胞炎症的治疗作用及其机制。方法用不同浓度的富马酸二甲酯处理IL-1β诱导的小鼠ATDC5细胞。通过CCK-8实验检测富马酸二甲酯对软骨细胞毒性、增殖的影响;阿利新蓝染色分析富马酸二甲酯对细胞表型的影响;实时定量荧光PCR检测MMP3、MMP9、MMP13和SOX9的mRNA表达;Western印迹法检测MMP9、MMP13、Col2a1及NF-κB通路相关蛋白表达水平;免疫荧光染色检测p65磷酸化入核的影响。结果富马酸二甲酯在0~25 μmol/L对ATDC5细胞的增殖活性没有影响;与对照组相比,IL-1β刺激ATDC5细胞后NF-κB通路被激活,IκBα蛋白表达下降,而p-IKKα、p-IκBα和p-p65蛋白表达增加,活化的NF-κB p65进入细胞核中,MMP3、MMP9、MMP13的表达上升,Col2a1和SOX9的表达下降（P＜0.05）;与IL-1β组比较,富马酸二甲酯治疗后提高IκBα表达,降低了p-IKKα、p-IκBα和p-p65的表达,阻断了NF-κB p65进入细胞核中,MMP3、MMP9、MMP13的表达下降,Col2a1和SOX9的表达上升（P＜0.05）。结论富马酸二甲酯可能通过抑制NF-κB通路来发挥对软骨细胞的保护作用,以改善软骨细胞的炎症反应。     

TLR/NF⁃κB信号通路在甲基苯丙胺诱导的原代小胶质细胞炎性反应中的作用

目的：探讨Toll样受体（Toll like receptor,TLR）/核因子（nuclear factor,NF）?κB信号通路在甲基苯丙胺（methamphetamine,METH）引起原代小胶质细胞激活及炎性因子释放的作用。方法：分离培养原代小胶质细胞,免疫荧光法鉴定原代小胶质细胞纯度。细胞予METH（300 μmol/L）染毒0 min、15 min、30 min、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h,蛋白免疫印迹检测原代小胶质细胞的激活情况及其NF?κB通路激活情况,real?time PCR检测炎性因子［肿瘤坏死因子?α（tumor necrosis factor? α,TNF?α）、白介素?1β（interleukin?1β,IL?1β）、白介素?6（interleukin?6,IL?6）］和TLR1~9、11 mRNA的表达。结果：分离出的原代小胶质细胞纯度达到95%以上。METH暴露后原代小胶质细胞激活,其激活标志物IBA?1水平增高,NF?κB通路被激活,炎性因子（TNF?α、IL?1β、IL?6）和TLR2、4~5、7~9、11的mRNA水平明显升高,TLR1的mRNA水平明显降低,差异具有统计学意义（P < 0.05）。结论：METH可通过调节TLR/NF?κB信号通路激活原代小胶质细胞并促进其释放炎性因子,因而TLR可作为METH神经炎性反应干预的潜在靶点,具有一定的治疗意义。     

不同浓度的PMA和PDTC对星形胶质细胞NF-κB表达的影响

目的探讨不同浓度的PMA和PDTC对星形胶质细胞NF-κB表达的影响。方法按照不同浓度的PMA及PDTC作用对纯化培养的大鼠星形胶质细胞进行分组,各组分别作用不同时间点后,运用免疫细胞化学方法进行NF-κB蛋白表达测定,进行干预因素和蛋白表达结果的相关分析。结果 PMA和PDTC对星形胶质细胞NF-κB的活化和抑制作用呈现剂量与时间依赖性,24h达高峰。结论可采用PMA及PDTC创建星形胶质细胞NF-κB蛋白不同水平表达模型。     

NF-κB信号通路在椎间盘退行性变中的机制研究探讨

随着人口老龄化的日益加剧,椎间盘退行性变造成的下腰痛已经成为严重的医疗和社会问题.基础研究表明,椎间盘退行性变的本质不仅是基质合成和分解代谢过程之间的失衡,还有炎症反应的不断进行.而这两种生物学进程均需特定的信号通路介导,特别是核因子-κB(NF-κB)介导的通路.目前NF-κB通路已经被认为是一些肌肉骨骼疾病中炎症和...     

α-倒捻子素通过NF-κB途径抑制LPS/ATP诱导的小胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活

目的 探究α-倒捻子素（α-mangostin）在脊髓损伤后小胶质细胞炎症模型中作用及相关机制。方法 体外培养小鼠小胶质细胞系BV-2细胞,利用脂多糖和三磷酸腺苷（LPS/ATP）联合诱导的方式建立BV-2炎症模型。CCK-8法检测不同浓度（0、10、20、40、80μmol/L）的α-mangostin对LPS/ATP刺激下的细胞增殖活力影响以筛选适宜的α-mangostin浓度范围;将BV-2细胞分为Ctrl组、LPS/ATP组、40μmol/Lα-mangostin组和不同浓度（10、20、40μmol/L）的α-mangostin干预组（分别记为LPS/ATP+10μmol/Lα-mangostin组、LPS/ATP+20μmol/Lα-mangostin组与LPS/ATP+40μmol/Lα-mangostin组）。ELISA实验检测各组BV-2细胞上清液中促炎因子白介素-6/1β/18(IL-6、IL-1β、IL-18)和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量,Westernblot检测各组细胞中NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体相关蛋白NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC...     

辛伐他汀诱导裸鼠体内K562细胞凋亡过程中NF-κB通路的分子变化

目的:探讨辛伐他汀在裸鼠体内引起的K562细胞NF-κB信号通路的分子变化,以说明辛伐他汀是否依赖NF-κB信号通路参与K562细胞凋亡发生.方法:体外培养慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞,接种于18只BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下,构建移植瘤模型.随机分为3组,每组6只.对照组腹腔注射生理盐水0.2 ml,两个处理组分别注射0.2 g/L的辛伐他汀0.25 ml(0.05 mg)和0.4 ml(0.08 mg).均隔日注射,连续6次.采用TUNEL法检测K562细胞早期凋亡的变化,RT-PCR检测K562细胞中NF-κB信号通路IKK-β、IκB-α、NF-κB1 mRNA的差异表达.结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的凋亡,且高剂量组凋亡率高于低剂量组(P＜0.01);不同剂量的辛伐他汀能够引起 IKK-β、IκB-α、NF-κB1 mRNA的表达下调(P＜0.01).结论:辛伐他汀可诱导K562细胞凋亡,可能与NF-κB通路基因的表达下调有关.     

紫铆因抑制脂多糖诱导小胶质细胞炎性反应的作用机制研究

目的 探讨紫铆因抑制脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞炎性反应的作用机制.方法 以LPS诱导BV2小胶质细胞活化建立体外神经炎症细胞模型.MTT法检测紫铆因对BV2细胞存活率的影响;qPCR法检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平;Western blot法检测各组细胞内核因子-κB(NF-κB) p65和ERK信号通路相关蛋白的表达变化;免疫荧光染色观察各组细胞内NF-κcB p65的核转录活性变化.结果 紫铆因干预BV2细胞24 h后,对细胞活力无明显影响;紫铆因能显著下调LPS诱导BV2细胞活化后炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平;紫铆因能明显降低LPS诱导BV2细胞活化后,ERK信号通路相关蛋白的磷酸化水平,并且能有效抑制NF-κB p65的核转录活性,阻止其向核内转移.结论 紫铆因可以抑制LPS诱导的小胶质细胞活化,降低BV2小胶质细胞的炎性反应.     

keap1-Nrf2与NF-κB信号通路相关性研究进展

keap1是细胞内信号通路中一种非常重要的调节蛋白,其最常见的靶标蛋白是核转录因子Nrf2,主要介导细胞抗氧化应激反应。keap1除了能调节Nrf2,还能直接影响NF-κB信号通路,与炎症、肿瘤、白血病、神经系统疾病等关系密切。keap1可以介导不同的信号通路,协调不同信号通路的反应。本文主要就keap1-Nrf2与NF-κB信号通路相关性的研究进展做一简要综述。     

Wnt2B通过NF-κB/p65调节乳腺癌细胞的凋亡

目的研究Wnt2B对乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡的影响,探讨其在乳腺癌发生发展过程中的重要作用。方法应用免疫组化技术检测40例乳腺癌组织标本中Wnt2B的表达;应用Western blot检测乳腺癌配对细胞系MDA-MB-231和MCF-7中Wnt2B蛋白水平;通过瞬时转染Wnt2B特异的siRNA沉默高表达Wnt2B的MDA-MB-231细胞系后,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡水平;应用Western blot、共聚焦显微镜和凝胶电泳迁移实验(EM-SA)检测下调Wnt2B表达后对NF-κB/p65的表达和活性的影响。结果相对于Wnt2B阴性表达的正常乳腺组织,35例乳腺癌组织的表达呈强阳性并且存在核浆转移现象;在高转移细胞系MDA-MB-231中Wnt2B表达明显高于低转移细胞系MCF-7;针对Wnt2B的siRNA沉默成功下调MDA-MB-231中Wnt2B表达后,细胞凋亡率明显增加并伴随NF-κB/p65的表达下降和活性降低;应用NF-κB/p65特异性的抑制剂PDTC阻断此通路后,Wnt2BsiRNA诱导细胞的凋亡效应被阻断。结论 Wnt2BsiRNA通过NF-κB/p65通路抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231的凋亡而产生抗瘤作用,Wnt2B可能成为乳腺癌有效治疗靶点之一。     

NF-κB与动脉粥样硬化的研究进展

核因子-κB（nuclear factor-kappaB,NF-κB）是一种具有基因转录多项调控作用的转录因子,能与靶基因的启动子或增强子部位的κB位点结合,启动基因的转录。NF-κB作为信号转导途径中的枢纽,与免疫、肿瘤的发生与发展、细胞凋亡的调节及胚胎发育有密切关系。     

MyD88抑制肽对LPS诱导BV2小胶质细胞极化状态的抑制作用及其机制

目的：观察髓样分化因子88（MyD88）抑制肽（MIP）对脂多糖（LPS）激活BV2小胶质细胞极化的影响,阐明其作用机制。方法：将对数生长期的BV2小胶质细胞分为对照组（不进行处理）、LPS组（给予1 mg·L^-1 LPS处理）和不同剂量MIP+LPS组（分别给予25、50和100μmol·L^-1 MIP预处理1 h后,再加入1 mg·L^-1 LPS）。采用MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组BV2小胶质细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）和白细胞介素18（IL-18）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组BV小胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶1（Arg-1）蛋白表达水平。结果：LPS组BV2小胶质细胞体积变大,突起增多,呈阿米巴状;不同剂量MIP+LPS组小胶质BV2细胞活化率较LPS组明显减少（P<0.05或P<0.01）。MTT法检测,与对照组比较,LPS组细胞存活率明显降低（P<0.01）;与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞存活率明显提高（P<0.05或P<0.01）。RT-qPCR法和Western blotting法检测,与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平及iNOS蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,而IL-4和IL-10 mRNA表达水平及Arg-1蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,且呈剂量依赖性。结论：MIP能够抑制活化的BV2小胶质细胞向M1型极化,促进其向M2型转化,抑制炎症的过度激活。     

萝卜硫素预处理通过TLR4/MyD88/NF-κB通路对缺氧/复氧大鼠心肌细胞的保护作用

目的:探讨萝卜硫素对缺氧/复氧(H/R)大鼠心肌细胞的保护作用及可能机制.方法:大鼠原代心肌细胞分为5组,正常对照组不处理,H/R组建立H/R模型(缺氧3 h/复氧3 h),低、中、高浓度萝卜硫素组在分别给予0.1、1.0、5.0μmol/L萝卜硫素预处理1 h后建立H/R模型.采用倒置显微镜观察细胞形态,应用MTS法...     

IκBα突变型基因对缺氧缺糖损伤永生化神经前体细胞的保护作用

目的:检测在缺氧缺糖环境中,IκBα突变型基因对永生化神经前体细胞株(INPCs)NF-κB的活性、细胞存活及细胞损伤的影响.方法:在建立转染pcDNA3.1及转染pcDNA3.1/IκBαM INPCs的基础上,用MTT法检测缺氧缺糖处理3,6和9 h后两细胞株的存活率,用荧光素酶报告基因检测两细胞株缺氧缺糖6 h前后NF-KB的活性,并测定缺氧缺糖6 h处理后培养液中乳酸脱氢酶的含量,用Hoechst33342染色观察细胞核的形态.结果:转染pcDNA3.1/IκBαM的INPCs中NF-kB的活性均低于转染pcDNA3.1的INPCs,缺氧缺糖6 h或9 h时,前者存活率高于后者,且6 h时前者上清中的乳酸脱氢酶释放量较少,缺氧缺糖可使两细胞株的部分细胞核呈现凋亡改变.结论:IκBα突变型基因可降低INPCs中NF-κB的活性,提高INPCs在缺氧缺糖处理后的存活率,减轻细胞损伤.