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许超平 《内科急危重症杂志》2023,29(6):490-494
摘要 目的:探讨DNA损伤激活的长链非编码RNA(NORAD)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖及对硼替佐米(BTZ)化疗耐药性的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测健康人和骨髓瘤患者、不同MM细胞系中NORAD表达差异,并分析其与MM患者生存率关系;运用慢病毒转染技术,干扰细胞系中NORAD的表达,检测其表达差异;定量PCR(qPCR)检测骨髓瘤细胞系中人类非编码RNA-144a-3p(hsa-miR-144a-3p)的表达;采用双荧光酶素报告验证NORAD和hsa-miR-144a-3p的结合;通过RNA 结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验进一步验证LncRNA和miRNA的结合;细胞计数试剂8(CCK8)法检测各细胞处理后细胞活性。细胞克隆试验检测细胞增殖能力。结果:MM患者细胞系中NORAD常高表达,提示预后差,生存期短;敲除NORAD基因后,MM耐药细胞系对BTZ药物敏感性增加。MM患者hsa-miR-144a-3p高表达,在骨髓瘤细胞系中加用miR-144a-3p类似物时细胞增殖能力下降;NORAD低表达可显著抑制细胞增殖,细胞对药物敏感性增强。细胞克隆形成实验也证实NORAD低表达可抑制癌细胞增殖。结论:NORAD高表达可增强 MM 对 BTZ 化疗耐药性,NORAD可直接与hsa-miR-144a-3p结合,上调其在MM细胞中的表达,进一步调控癌细胞增殖,同时调控患者对BTZ药物敏感性。 相似文献
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目的建立耐奥沙利铂(L-OHP)的人结直肠癌耐药细胞株(HT-29/L-OHP),检测相关耐药基因LAPTM4β的表达,探讨其在L-OHP耐药中的作用机制。
方法采用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结直肠癌耐药株HT-29/L-OHP;应用LAPTM4β-35蛋白抑制剂作用于HT-29/L-OHP细胞株后,流式细胞技术检测细胞凋亡,比较其与HT-29/L-OHP细胞株对于L-OHP的耐药情况;应用RT-PCR检测LAPTM4β mRNA的表达;应用Western blot测定LAPTM4β-35蛋白的表达。
结果成功建立人结直肠癌耐药细胞株HT-29/L-OHP,流式细胞技术检测结果表明应用LAPTM4β-35蛋白抑制剂作用于HT-29/L-OHP细胞株后,其对于L-OHP的耐药明显低于HT-29/L-OHP细胞株。HT-29/L-OHP细胞株中LAPTM4β mRNA表达水平明显高于亲本细胞株HT-29,分别为5.613±0.139和1.105±0.187,(P<0.05),LAPTM4β-35蛋白在HT-29/L-OHP细胞和HT-29细胞的相对表达量2.203±0.080和1.033±0.070,(P<0.05)。
结论LAPTM4β在结直肠癌耐药细胞株中过表达,与结直肠癌奥沙利铂耐药密切相关,可以作为结直肠癌耐药的一个敏感的生物学标志物。 相似文献
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目的 探讨去甲斑蝥酸钠(SNCTD)对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/DDP的逆转作用及可能分子机制.方法 (1)采用CCK法筛选出SNCTD对A549/DDP的无毒浓度(即对细胞抑制率<10%的药物浓度),并检测出顺铂及与无毒浓度SNCTD联合对耐药细胞株的IC50;(2)采用流式细胞仪检测无毒浓度SNCTD对细胞内罗丹明123的蓄积情况;(3)采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测1、2倍无毒浓度SNCTD处理细胞48h后耐药相关基因mdrlmRNA,MRP1 mRNA的表达.结果 (1)SNCTD对A549/DDP的无毒浓度为5μg/ml,与顺铂联合用药降低A549/DDP的耐药性,逆转倍数为1.97;(2)无毒浓度SNCTD处理耐药细胞48h后细胞内罗丹明123荧光强度明显增强(F=36.99,P<0.05);(3)1、2倍无毒浓度SNCTD处理耐药细胞后mdr1,MRP1mRNA表达明显减低,并具有浓度依赖性.结论 SNCTD对A549/DDP具有耐药逆转作用,其作用机制可能与下调耐药相关基因mdr1,MRP1的表达,影响膜蛋白外排泵功能有关. 相似文献
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目的探讨microRNA-21(miR-21)在卵巢癌化疗耐药中的作用及机制。方法荧光定量RT-PCR法检测miR-21在人卵巢癌细胞株A2780及A2780/Taxol的表达水平,合成miR-21的干扰序列,以脂质体为载体转染A2780/Taxol细胞;MTT法检测细胞转染前后对紫杉醇的耐药性;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白质印迹法检测磷酸酶基因(PTEN)、BAX及Bcl-2蛋白。结果 miR-21表达下调后,A2780/Taxol对紫杉醇的IC50值明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞内PTEN、BAX蛋白表达水平增加,Bcl-2表达降低。结论 miR-21在人卵巢癌耐药株中呈高表达,其可能是介导人卵巢癌耐药的主要因素之一,具体机制可能是降低PTEN、BAX及升高Bcl-2来介导肿瘤细胞耐药。 相似文献
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多发性骨髓瘤患者p16基因甲基化及砷剂诱导去甲基化的研究 总被引:6,自引:1,他引:6
目的探讨p16基因启动子区CpG岛甲基化在多发性骨髓瘤(MM)患者发病中的作用以及三氧化二砷(As2O3)诱导p16基因的去甲基化作用。方法采用巢式甲基特异性PCR法检测MM患者以及利用As2O3作用前后人MM细胞株U266的p16基因的甲基化状态,RTPCR检测U266细胞用药前后p16基因mRNA的表达变化,生长曲线、MTT法检测As2O3对细胞的生长和增殖抑制。利用流式细胞仪检测DNA含量分析法探讨As2O3对骨髓瘤细胞系U266周期的影响。结果MM患者p16基因的甲基化比例为54.8%,U266细胞存在p16基因甲基化,p16基因不表达,As2O3作用后p16基因甲基化程度明显减弱至消失,与未处理组相比,不同剂量作用72h后p16基因表达阳性条带灰度值与βactin比值分别为0.22±0.10、0.59±0.11、0.68±0.09,阳性对照灰度比值为0.77±0.13,其差异有统计学意义(P<0.01)。结论p16基因甲基化在MM患者中较为常见,这可能为MM的诊断和治疗提供借鉴;As2O3可诱导p16基因去甲基化,使p16基因表达上调,恢复其活性,为去甲基化治疗提供新思路。 相似文献
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目的 探讨三氧化二砷(As2O3)联合IFNα-2a治疗人多发性骨髓瘤(MM)的可行性。方法将人MM细胞系U266细胞株随机分为4组,空白对照组不行特殊处理,As2O3组加入As2O3,IFNα-2a组加入IFNα-2a,As2O3+IFNα-2a组同时加入As2O3及IFNα-2a。孵育48h后用双标记流式细胞术检测细胞凋亡率,用流式细胞仪检测细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体表达。结果As2O3+IFNα-2a组细胞凋亡率、TRAIL及其受体表达均显著高于其他三组(P〈0.05),空白对照组TRAIL及其受体表达均显著低于其他三组(P〈0.05)。结论As2O3,及IFNα-2a均可上调TRAIL及其受体表达,促进U266细胞凋亡,且两者有协同作用;此为临床治疗MM提供了新的思路。 相似文献
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目的探讨KIF2C在上皮性卵巢癌化疗耐药中的作用及其潜在的分子机制。方法检测驱动蛋白家族成员(KIF)2C在顺铂敏感细胞株A2780和顺铂耐药细胞株A2780DDP中的差异表达。在A2780细胞株中加入不同浓度、不同时间的顺铂, 检测KIF2C的差异表达。用慢病毒感染A2780DDP细胞株, 构建KIF2C稳定过表达的卵巢癌细胞株(KIF2C-OV)。将相同浓度的顺铂添加到KIF2C-OV及其对照组(Ctrl-OV)细胞系中。用CCK-8检测KIF2C过表达对耐药细胞株A2780DDP细胞增殖的影响。最后, 对KIF2C在卵巢癌细胞系中发挥耐药作用的分子机制进行初步探索。结果 KIF2C在A2780DDP细胞株中显著低表达。在A2780细胞株中加入顺铂后, KIF2C的表达随着顺铂浓度和作用时间的增加而降低。用慢病毒感染A2780DDP细胞株, 构建KIF2C-OV。加入顺铂后, KIF2C-OV细胞株的增殖能力明显低于Ctrl-OV细胞系。p-Erk在A2780DDP细胞株中表达升高。在A2780细胞株中加入不同浓度梯度及不同时间梯度的顺铂, p-Erk的表达随顺铂浓度的升高而升高,... 相似文献
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多发性骨髓瘤多药耐药机制及治疗学进展 总被引:1,自引:0,他引:1
多发性骨髓瘤(MM)是原发于浆细胞的恶性肿瘤,其对化疗药物产生耐药是影响疗效的主要障碍。虽然多数MM患者对初次化疗敏感,但最终都会复发。最新研究表明,临床难治MM患者有多种多药耐药(MDR)机制,。如P-gp介导的MDR、肺耐药相关蛋白(LRP)过度表达、BCL-X表达引起的凋亡抑制、糖皮质激素受体异常、谷胱甘肽和谷胱甘肽转移酶(GSH/GST)增高及拓朴异构酶Ⅱ表达下降等,而异博定等药物在逆转MDR方面有一定作用。近年来,强烈化疗,干扰素、大剂量化疗加移植等方法相继出现,为MM的治疗开辟了新途径。 相似文献
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应用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)技术 ,检测 32例多发性骨髓瘤 (MM)患者、2 7例非恶性血液病患者和健康人的 Sorcin基因表达水平。结果为 MM患者 Sorcin基因表达高于正常对照组 ,差异高度显著(P<0 .0 0 1) ;Sorcin基因阳性表达初诊组 4例 (2 2 .2 % )、缓解组 1例 (14 .3% )、复发难治组 5例 (71.4 % ) ,复发难治组高于初诊组和缓解组 ,差异显著 (分别为 P=0 .0 315 ,P=0 .0 4 89) ;临床耐药组 Sorcin基因阳性表达显著高于非临床耐药组 (P=0 .0 0 4 ) ;Sorcin基因阳性表达者缓解率为 2 0 .0 % ,阴性表达者为 86 .4 % ,差异高度显著 (P=0 .0 0 2 )。认为多发性骨髓瘤患者临床耐药与 Sorcin基因过度表达密切相关 ,Sorcin基因过度表达是影响预后的重要因素 ,可作为检测临床耐药和判断预后的指标之一 相似文献
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目的建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。方法以人肺腺癌A549细胞为亲本株,应用高浓度反复间歇法模拟临床给药模式建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株。MTT法绘制生长曲线、计算倍增时间,同时检测耐药株细胞对顺铂、依托泊苷、紫杉醇、长春新碱的药物敏感性。结果亲本株IC_50为(181.75±12.56)ng/ml,耐药株IC_50为(4930.40±129.71)ng/ml,最终获得耐药指数为27.18±1.16的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株,命名为A549/PEM。A549和A549/PEM增殖速度接近,倍增时间分别为(62.78±1.06)h和(62.35±0.89)h(P=0.773)。A549/PEM同时对顺铂、依托泊苷耐药,耐药指数分别为(1.93±0.02)、(8.26±1.55);对紫杉醇、长春新碱敏感,耐药指数分别为(0.89±0.10)、(0.95±0.11)。结论本研究成功建立的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。 相似文献
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全反式维甲酸对多种胰腺癌细胞的诱导凋亡作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的观察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否诱导人胰腺癌细胞的凋亡。方法分别将人胰腺癌细胞SW1990、PaTu8988、BxPC3和ATRA共同孵育后,用MTT法检测细胞活性,分别用流式细胞仪检测、TUNEL和透射电镜观察细胞的凋亡。结果MTT法显示,ATRA对3株人胰腺癌细胞株SW1990、PaTu8988和BxPC3的生长均有明显的抑制作用(P<0.05)。流式细胞仪的检测、TUNEL和电镜的观察结果均证实ATRA诱导后,3株胰腺癌细胞株凋亡率均高于对照(P<0.01),并随诱导时间延长而增加。结论ATRA在体外能显著抑制多株胰腺癌细胞株的生长,并促进其凋亡。 相似文献
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目的:探讨在人结肠癌多药耐药细胞株HCT8/V中JNK信号传导通路与多药耐药1(MDR1)基因表达的关系.方法:MTT法检测人结肠癌多药耐药细胞株HCT8/V及其敏感株HCT8细胞对多种抗肿瘤药物的敏感性;抑制JNK信号通路的激活后,采用双荧光素酶活性报告基因检测MDR1启动子转录活性的表达;实时荧光定量PCR检测MD... 相似文献
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目的检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞中CUL4A mRNA表达,探讨其临床意义。方法采用实时荧光PCR相对定量法检测38例MM患者(MM组)和20例非血液肿瘤患者(对照组)骨髓单个核细胞CUL4A mRNA的表达情况。结果 MM组骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量较对照组增加(P<0.05)。MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达量与临床分期、血清β2-MG水平相关(P均<0.05),与性别、年龄、免疫学分型不相关(P均>0.05)。治疗有效的MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA相对表达水平低于治疗无效患者(P=0.003)。结论 MM患者骨髓单个核细胞CUL4A mRNA表达上调可能是促进MM发展的因素之一,检测CUL4A可以为MM的诊断及治疗提供参考。 相似文献
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目的 观察全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)能否诱导人胰腺癌细胞的凋亡.方法 分别将人胰腺癌细胞SW1990、PaTu8988、BxPC3和ATRA共同孵育后,用MTT法检测细胞活性,分别用流式细胞仪检测、TUNEL和透射电镜观察细胞的凋亡.结果 MTT法显示,ATRA对3株人胰腺癌细胞株SW1990、PaTu8988和BxPC3的生长均有明显的抑制作用(P < 0.05).流式细胞仪的检测、TUNEL和电镜的观察结果均证实ATRA诱导后,3株胰腺癌细胞株凋亡率均高于对照(P < 0.01),并随诱导时间延长而增加.结论 ATRA在体外能显著抑制多株胰腺癌细胞株的生长,并促进其凋亡. 相似文献
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《中国多发性骨髓瘤诊治指南(2020年修订)》关于微小残留病(MRD)疗效标准部分仍参照2016年发表在《柳叶刀》上的国际骨髓瘤工作组(IMWG)多发性骨髓瘤(MM)疗效和MRD评估共识。大量研究证实MM治疗后的MRD转阴与患者的长期无进展生存(PFS)密切相关,而且越来越多的学者建议在临床试验中将MRD作为PFS的替代终点。因此,应用二代流式细胞仪、二代测序等方法检测MRD,对于MM患者预后预测、分层治疗等具有重要意义。由于新药治疗的出现以及各种检测方法自身存在的不足,MRD疗效评估尚存在一些问题,需要血液科医生高度关注。 相似文献
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人肝癌多药耐药细胞株survivin蛋白的表达及意义 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨人肝癌多药耐药细胞株survivin蛋白表达与肝癌细胞多药耐药的关系.方法用阿霉素(DOX)浓度梯度递增导法,建立人肝癌多药耐药细胞株(Bel-7402/DOX).用流式细胞仪检测肝癌细胞凋亡率,同时用蛋白印迹(Western blot)检测其survivin蛋白表达.结果随着培养液中 DOX 浓度的增加Bel-7402/DOX 的凋亡率逐渐增加,survivin蛋白的表达逐渐增强.结论Survivin蛋白的表达变化可能与人肝癌细胞获得性耐药有关. 相似文献
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目的观察Notch1信号通路活化与多发性骨髓瘤(MM)发生、发展及耐药的关系,为MM治疗提供新靶点。方法利用携带Notch1-ICN逆转录病毒载体及Notch1-对照病毒(CON)载体感染RPMI8226细胞(分别为病毒组及病毒对照组),同时设未经感染的细胞为未转染组,采用Western blot法检测Notch1-ICN蛋白表达鉴定细胞;采用CCK-8法检测细胞增殖情况及对硼替佐米敏感性的影响;流式细胞术检测细胞周期。结果病毒组Notch1-ICN表达明显上调,约为病毒对照组和未转染组的2.5倍;培养后48、72、96 h病毒组细胞增殖率均显著高于病毒对照组(P均<0.01);随硼替佐米浓度增高,各组细胞抑制作用均逐渐增加,且同浓度条件下病毒组抑制率显著低于病毒对照组及未转染组(P<0.05或0.01);病毒组S期细胞比例明显高于其余两组(P均<0.01)。结论 Notch1信号通路活化与MM的发生、发展及耐药密切相关,有望成为MM治疗的新靶点。 相似文献