何首乌饮对过度训练大鼠睾丸组织3β-羟基类固醇脱氢酶的影响

目的 探讨何首乌饮对过度训练大鼠睾丸组织3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的影响.方法 30只雄性SD大鼠随机分为5组,A组为安静对照组;B组为安静何首乌饮组;C组为自然恢复组;D组为何首乌饮治疗组;E组为何首乌饮预防组,每组6只.C组、D和E组大鼠复制力竭运动动物模型,其中的E组每天训练前给何首乌饮20g/(kg...     

何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织P450胆固醇侧链裂解酶和类固醇激素急性调节蛋白的影响

目的 探讨何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和类固醇激素急性调节蛋白(StAR)的影响.方法 60只雄性SD大鼠,随机分为安静对照组(A组)、安静何首乌饮组(B组)、模型组(C组)、自然恢复组(D组)、何首乌饮治疗组(E组);何首乌饮预防组(F组),每组10只.C、D、E和F组大鼠复制运动疲劳动物模型,其中F组每天训练前给何首乌饮20g/(kg·d)(含生药4.8kg/L)灌胃60 d.模型成功后E组给何首乌饮20 g/(kg·d)(含生药4.8kg/L)灌胃治疗60 d.采用美国Beckmancoulter Unicel Dxl 800仪器测定睾酮水平; 采用RT-PCR、Western blotting和免疫组织化学法检测各组睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达变化.结果 P450scc免疫组织化学阳性颗粒主要表达于间质细胞及精母细胞,B组和F组表达最强,C组最弱,与其余各组相比差异有统计学意义.P450scc蛋白和mRNA表达变化为B、F组明显高于E、D和A组(P<0.05),C组明显低于A组(P<0.05),A组和D组以及B组和F组两两之间差异无显著性;StAR免疫组织化学阳性颗粒主要表达于睾丸间质细胞胞质,阳性强度表现为E组和F组最强,C组最弱.StAR蛋白和mRNA表达变化为E和F组明显高于A、D组(P<0.05),C组明显低于A组(P<0.05),A、D组之间无差异.结论 何首乌饮可以提高睾酮合成限速酶P450scc和StAR的表达.     

何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织黄体生成素受体的影响

目的:探讨何首乌饮对运动疲劳大鼠睾丸组织黄体生成素受体(LHR)的影响.方法:复制运动疲劳动物模型,测定睾酮水平,采用RT-PCR、免疫印迹和免疫组织化学法检测各组睾丸组织LHR的表达变化.结果:LHR免疫组化阳性颗粒主要表达于间质细胞以及精母细胞胞膜和胞质,何首乌饮预防组和何首乌饮治疗组阳性信号较强,模型组最弱.LHR蛋白和mRNA表达变化为:何首乌饮预防组、何首乌饮治疗组明显高于对照组和何首乌饮组,模型组明显低于对照组.结论:何首乌饮可以提高大鼠睾丸组织LHR的表达.     

何首乌饮对衰老大鼠睾丸组织细胞Rb/p53信号转导通路的影响

目的 通过检测Rb、p16、p53、p19、p21在衰老大鼠睾丸组织中的表达,探讨何首乌饮抗大鼠睾丸组织衰老的机制。 方法 选用8周龄SD雄性大鼠84只,随机分为正常组、模型组、何首乌饮高、中、低剂量组、何首乌丸剂组、自然恢复组,每组12只,采用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型。采用免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR法检测磷酸化Rb蛋白（pRb）、p16、p53、p19、p21在大鼠睾丸组织的表达差异。 结果 模型组大鼠睾丸组织Rb、p53、p16、p19、p21表达明显增加,pRb表达明显减少（P<0.05）;何首乌饮、何首乌丸组能显著提高pRb的表达,降低Rb、p53、p16、p19、p21表达（P<0.05）,何首乌饮高剂量组调节作用大于其他各组（P<0.05）。 结论 何首乌饮通过调节睾丸组织Rb/p53信号转导通路相关基因和蛋白表达起到延缓衰老的作用。     

17β-雌二醇对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 观察17β-雌二醇对大鼠心缺血再灌(I/R)损伤的保护作用并探讨其机制. 方法 30只成年雌性SD大鼠卵巢切除后,随机分成C组(I/R假手术组)、 I/R组和 I/R+E2组(17β-雌二醇预处理).17β-雌二醇预处理2周后建立大鼠心肌缺血再灌注模型,用氯化三苯甲基四氮唑(TTC)染色法测量心肌梗死范围,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,免疫组织化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos的蛋白表达. 结果 17β-雌二醇能明显减少缺血再灌注心肌梗死体积,降低心肌细胞凋亡率,减弱缺血再灌注心肌细胞c-Fos的表达. 结论 雌激素对大鼠缺血再灌注心有保护作用,其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达有关.     

何首乌饮对衰老大鼠生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响

目的探讨何首乌饮对衰老大鼠睾丸生精细胞线粒体凋亡通路关键基因表达的影响。方法选用12月龄Wistar雄鼠45只,随机分为3组:青年对照组、自然衰老组、何首乌饮组,每组15只,何首乌饮组和自然衰老组于16个月开始分别灌胃何首乌饮和等量蒸馏水,连续60d。青年对照组于12月龄,其余两组于18月龄分别进行实验,通过Real-time PCR、免疫荧光染色和免疫印迹法,观察各组大鼠睾丸组织线粒体凋亡通路关键基因DR6、BAX、Caspase-3、Cyt-C、14-3-3σ的表达变化。结果自然衰老大鼠线粒体凋亡通路关键基因14-3-3σ表达明显低于青年对照组,DR6、BAX、Caspase-3、Cyt-C表达明显高于青年对照组;而何首乌饮用药后能明显逆转上述现象。结论何首乌饮提高衰老大鼠精子质量与线粒体凋亡通路有关。     

何首乌饮减轻β-淀粉样蛋白诱导的海马神经元损伤的作用机制

目的 探讨何首乌饮对β 淀粉样蛋白（Aβ）诱导的大鼠原代培养海马神经元损伤保护作用及可能机制。方法 采用新生24h 内的SD大鼠进行原代培养海马神经元,将培养10d的海马神经元分为模型组、何首乌饮保护组、何首乌饮治疗组、何首乌饮对照组及空白对照组。Hoechst33258染色观察海马神经元的凋亡率;免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测各组海马神经元硫氧还蛋白1（Trx1）蛋白和mRNA的表达情况。 结果 模型组细胞凋亡率增高（P<0.05）,Trx1蛋白和mRNA的表达量明显减少（P<0.05）;与模型组相比,何首乌饮治疗组和预防组的凋亡率明显降低（P<0.05）,Trx1蛋白和mRNA的表达量明显增加（P<0.05）。 结论 何首乌饮可明显减轻Aβ诱导的海马神经元的损伤,其机制可能与增加抗氧化蛋白Trx1的表达有关。     

谷氨酸和白细胞介素-1β致痫大鼠海马PKAcβ、PKCα的免疫反应变化

目的：研究谷氨酸和白细胞介素-1β(IL-1β)致痫大鼠海马PKAcβ、PKCα的免疫反应变化。方法：大鼠于脑立体定位仪上行侧脑室注射,A组为生理盐水对照组;B组注射阈下致痫量的L-谷氨酸钠;C组注射致痫剂量的L-谷氮酸钠;D组单纯注射IL-1β;E组联合注射IL-1β和阈下致痫量的L-谷氨酸钠。注射完毕1h后用SABC法显示5组大鼠海马的PKAcβ、PKCα的免疫反应变化。结果：C、D、E3组大鼠均有明显的痫性发作,且海马PKAcβ、PKCα的免疫反应均明显强于A组。结论：在谷氨酸和IL-1β的致痫活动中,PKAcβ、PKCα参与了其细胞内信号转导过程。     

何首乌饮对离体大鼠睾丸间质细胞p53、Bcl2和BAX mRNA表达的影响

目的:探讨何首乌饮对离体大鼠睾丸间质细胞p53、 Bcl2、BAX mRNA表达的影响。方法:用自由基氧化损伤方法建立睾丸间质细胞衰老模型,通过β-半乳糖苷酶染色观察何首乌饮对离体大鼠睾丸间质细胞衰老情况的影响;应用实时荧光定量PCR检测p53、Bcl2和BAX mRNA在间质细胞中表达水平。结果:间质细胞模型组β-半乳糖甘酶含量明显高于正常组,何首乌饮能明显降低间质细胞衰老标志物β-半乳糖甘酶的含量。模型组间质细胞p53、BAX的mRNA水平明显高于正常组,Bcl2的mRNA表达水平低于正常组;何首乌饮干预组的p53、BAX的mRNA表达低于模型组,Bcl2的mRNA表达水平高于模型组。结论:何首乌饮可以上调间质细胞Bcl2mRNA表达水平,下调p53和BAX的mRNA表达。     

植物雌激素α-玉米赤霉醇与17β雌二醇、戊酸雌二醇对兔食饵性动脉粥样硬化的作用

目的:研究新的植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)的抗动脉粥样硬化(AS)作用。方法:49只新西兰成熟未孕雌兔分成6组。A组为正常对照组;B组为假手术组;C组为高脂对照组;D组为17βE2雌二醇组;E组为戊酸雌二醇组;F组为α-ZAL组。分别测定血清TC,LDL-C,HDL-C含量和血浆ET-1及NO水平,肉眼观察并用扫描仪测定各组主动脉内膜脂质斑块沉积面积与内膜总面积之比。并进行病理组织学观察。测定子宫重量/体重。结果:主动脉内膜脂质斑块沉积与内膜总面积之比为B、D、E、F组vs C组P<0.01。病理观察:C组内皮脱落和大量泡沫细胞;B、D、E、F组上述病理变化明显减轻,内皮基本正常或正常,仅有少量或无泡沫细胞。子宫重量/体重D、E、F组较C组明显增加,但F组增加明显小于D组、E组。血清TC、LDL-C、C组均明显升高,而B、D、E、F组明显低于C组,HDL-C各组无显著差异;血浆ET-1与NO水平C组明显升高,而B、D、E、F组明显下降。结论:α-ZAL可减少主动脉内膜脂质斑块沉积面积,减轻病理变化,减轻高脂血症,降低增高的ET-1与过度增高的NO,具有较强的抗AS作用。但对子宫增大作用明显小于17βE2与E2V。     

多沙唑嗪干预对α_1肾上腺素能受体抗体阳性糖尿病大鼠心肌的保护作用

目的:探讨多沙唑嗪干预对α1肾上腺素能受体自身抗体(α1R-Ab)阳性糖尿病(DM)大鼠心肌转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原表达的影响及其心肌保护作用。方法:Wistar大鼠分为5组:A组(正常对照组,n=10)、B组(DM模型组,n=10)、C组(DM+多沙唑嗪干预组,n=10)、D组(α1R-AbDM组,n=8)和E组(α1R-AbDM+多沙唑嗪干预组,n=8)。腹腔注射链脲佐霉素(STZ)复制T2DM模型。造模成功后,D组和E组于当周、第4、8、12、16周尾静脉注射α1R-Ab注射液(100μg/100g),建立α1R-AbDM模型。C组和E组均从注射α1R-Ab起每日给予多沙唑嗪0.36mg/Kg灌胃,持续16周。A组不予任何处理。16周后处死各组大鼠,取左室心肌组织常规病理切片和超薄切片,采用免疫组化检测左室心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达量,电镜观察心肌超微结构。结果:A组大鼠心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达明显低于B、C、D、E组(均P<0.01),C组心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达低于B组(P<0.05),E组心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达亦明显低于D组(P<0.05);电镜下,A组心肌未见明显异常;D组心肌线粒体减少,排列紊乱,呈空泡变性,间质胶原增生,微血管基底膜增厚;而E组心肌病变较D组明显减轻;C组心肌病变亦较B组明显减轻。结论:多沙唑嗪可通过抑制α1R-Ab阳性DM大鼠心肌组织中TGF-和Ⅰ型胶原表达,减轻DM大鼠心肌间质纤维化,保护心肌。     

何首乌饮对大鼠睾丸间质细胞类固醇激素合成急性调节蛋白和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶蛋白表达的影响

目的探究何首乌饮影响大鼠睾丸间质(Leydig)细胞类固醇激素合成急性调节蛋白(St AR)和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)蛋白表达的变化。方法选用10~20 d的幼年雄性Wistar大鼠,分离、培养Leydig细胞,然后收集。采用氧化损伤的方法建立Leydig细胞衰老模型。实验分组:间质细胞衰老模型组,何首乌饮处理组,首乌丸处理组,正常组和何首乌饮对照组。结果衰老模型组Leydig细胞St AR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显低于正常组和何首乌饮对照组(P0.01)。另一方面,何首乌饮和何首乌丸干预组St AR和P450scc的免疫组织化学染色强度明显高于衰老模型组(P0.05),何首乌饮组好于何首乌丸组。结论何首乌饮可提高睾丸Leydig细胞St AR和P450scc蛋白的表达,提高睾酮的合成能力,从而延缓Leydig细胞衰老。     

中药何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理

目的探讨何首乌饮抗大鼠卵巢组织衰老的机理。方法36只SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、预防组。采用D-半乳糖连续腹腔注射法制造雌性大鼠亚急性衰老模型,预防组在造模的同时以中药方剂何首乌饮灌胃。应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)方法检测各组大鼠卵巢组织p53、p19ARF、Rb及p16基因的表达,用Western blotting方法检测各组大鼠卵巢组织Rb及p16蛋白的表达情况。结果何首乌饮明显抑制了衰老大鼠卵巢组织中p53、p19ARF、Rb以及p16基因表达的上调趋势(P<0.05),且明显降低了衰老大鼠卵巢组织中Rb及p16蛋白的表达(P<0.05)。结论何首乌饮抑制衰老途径中关键的调节因子p53、p19ARF、Rb及p16的表达,从而起到抗大鼠性腺衰老的作用。     

17β-雌二醇对去势大鼠子宫内膜厚度的影响

目的:探索外源性使用雌激素对去势后大鼠子宫内膜厚度的影响。方法:96只雌性成年SD大鼠,随机分为假手术组、模型组和17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)治疗组,模型组和E2治疗组行去势手术,并且E2组给予不同剂量、不同时间的E2背部皮下注射后处死,假手术组于动情前期处死,取子宫标本,行HE染色,在200倍显微镜下随机选取六个位置拍照,测量子宫腔上皮厚度。结果:去势E2治疗组大鼠子宫的发育与替代雌激素的用量呈明显的量效关系及时效关系。E2浓度在6μg.只-1,连续使用2 d时,去势大鼠子宫内膜形态学检查与假手术组组基本相似,子宫腔上皮厚度比假手术组大鼠增加8%,可认为是合理的雌激素替代剂量与时间。     

瘦素受体、IRF-1和糖皮质激素受体-β在肥胖哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达

目的:观察体外培养肥胖哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)表达瘦素受体(OB-R)、干扰素调节因子-1(IRF-1)及糖皮质激素受体-β(GR-β)的情况,探讨肥胖与难治性哮喘的关系。方法:60只雄性SD大鼠随机分为四组,即正常体质量对照组(A组)、正常体质量哮喘组(B组)、肥胖对照组(C组)、肥胖哮喘组(D组),肥胖及哮喘模型建立后取各组大鼠气道,体外培养ASMC,反转录PCR(RT-PCR)测OB-R mRNA的表达,蛋白印迹法测定IRF-1及GR-β蛋白的表达。结果:OB-R mRNA的表达,B组、C组及D组较A组明显增加,D组较B组及C组明显增加;IRF-1和GR-β蛋白的表达,B组、C组及D组较A组明显增加,D组较B组及C组明显增加。结论:OB-R、IRF-1及GR-β在ASMC中表达的增加可能与肥胖哮喘发病及激素抵抗相关。     

补肾中药何首乌饮对衰老大鼠睾丸组织表皮生长因子及其受体表达的影响

目的:观察何首乌饮对衰老雄性大鼠睾丸组织表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)表达的影响.方法:选用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型,并用补肾中药何首乌饮进行干预,采用免疫组织化学和免疫印迹观察各实验组大鼠EGF、EGFR在睾丸组织表达的变化.结果:与正常对照组大鼠比较,模型组、自然恢复组大鼠睾丸组织EGF、EG-FR表达减少,而何首乌饮可以提高睾丸组织EGF、EGFR表达,与模型组和自然恢复组比较差异有统计学意义.结论:何首乌饮能够提高衰老大鼠睾丸组织EGF、EGFR表达,具有一定延缓睾丸组织衰老作用.     

何首乌饮延缓大鼠睾丸间质细胞衰老与调控胰岛素/胰岛素样生长因子-1信号通路的关系#br#

目的 探讨何首乌饮延缓大鼠睾丸间质（Leydig）细胞衰老与调控胰岛素/胰岛素样生长因子-1（IGF-1）信号通路的关系。方法 采用氧化损伤的方法建立大鼠Leydig细胞衰老模型。用流式细胞术检测各组细胞周期的变化。应用Real-time PCR、免疫荧光和Western blotting技术检测Leydig细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因的表达水平，并运用胰岛素受体/IGF受体特异性抑制剂BMS-754807处理细胞，用流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果 与正常组相比，衰老组β-半乳糖苷酶阳性细胞率可达60%（P＜0.05），G1 期所占比重明显增加， S期所占比重明显减少（P＜0.05）。胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因表达变化：衰老组胰岛素受体（INSR），胰岛素受体底物（IRS1）、IRS2、IGF1表达水平明显低于正常组（P＜0.05），胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP3）的 mRNA表达明显高于正常组（P＜0.05），何首乌饮可逆转上述现象。用 BMS-754807处理衰老的Leydig细胞后，Bcl-2 mRNA表达水平低于衰老组（P＜0.05），用何首乌饮和BMS-754807同时处理衰老的Leydig细胞，细胞凋亡率高于何首乌饮组（P＜0.05）。结论 何首乌饮通过调控胰岛素/IGF-1信号传导通路延缓Leydig细胞衰老。     

去势大鼠干眼症模型眼表损伤的研究

建立去势大鼠干眼症模型并对其眼表损伤进行研究。60只Wistar大鼠随机分为6组,每组10只。A组为雌性对照组,B组为雌性假手术组,C组为雌性去势组,D组为雄性对照组,E组为雄性假手术组,F组为雄性去势组。A组与D组大鼠正常饲养,不作处理。C组大鼠去除卵巢,B组重复手术过程但不去除大鼠卵巢,F组大鼠去除双侧睾丸及附睾,E组大鼠重复手术过程但不去除睾丸及附睾。所有大鼠均与术前及术后2、4、6月进行泪液分泌量、角膜上皮荧光素染色和泪膜破裂时间检测。A、B、D、E组大鼠泪液分泌量、角膜上皮荧光素染色和泪膜破裂时间检测均差异不显著(P>0.05)。去势组大鼠(组C和组F)角膜荧光染色在术后2月起为阳性,并随时间增加而加重。去势6月后,去势组(组C和组F)的泪液分泌量、泪膜破裂时间与其他组相比差异极显著(P<0.01),并且C组与F组相比差异极显著(P<0.01)。大鼠去势后造成眼表损伤可能是干眼症原因之一。     

长期运动性疲劳与运动缺乏对Wistar大鼠神经内分泌系统的不同影响

目的: 观察长期运动性疲劳与运动缺乏2种不同状态对机体神经内分泌系统的影响。方法: 60只雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组、运动性疲劳模型组、运动缺乏模型组,每组20只。采用“基础饮食复合负重游泳”方法(2周)建立运动性疲劳大鼠模型;采用“限制活动”方法建立运动缺乏大鼠模型,时间共计10周。实验结束后测定大鼠爬杆时间、双抗夹心ELISA法测定各组大鼠下丘脑促甲状腺激素释放激素(thyrotropin-releasing hormone,TRH)及血清去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、肾上腺素(epinephrin,E)含量;放射免疫均相竞争法测定下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)、垂体促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophic hormone,ACTH)与促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)以及血清皮质酮(corticosterone,CORT)、三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine, T3)、甲状腺素(tetraiodothyronine,T4)含量,以评价交感神经－肾上腺髓质系统、下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenocortical, HPA)轴、下丘脑-垂体-甲状腺(hypothalamo-pituitary-thyroid, HPT)轴功能。结果: 2模型组大鼠爬杆时间明显缩短;运动性疲劳模型组大鼠交感神经－肾上腺髓质系统与HPA轴功能抑制,HPT轴无变化;运动缺乏模型组大鼠HPA轴功能亢进、HPT轴功能抑制,交感神经－肾上腺髓质系统无变化。结论: 长期运动性疲劳与运动缺乏均能影响机体神经内分泌系统,导致其调节机制失衡,但二者的作用靶标及趋势不同。     

促性腺激素释放激素类似物对大鼠中缝核簇5-HT样阳性物质表达的影响

研究促性腺激素释放激素类似物 ( Gn RH-A)对大鼠中缝核簇 5 -HT样阳性物质表达的影响 ,采用酶联免疫吸附试验测定血清激素水平 ,用免疫组织化学方法和图像分析技术观察大鼠中缝核簇 5 -HT样阳性物质的表达。结果证明 :( 1) Gn RH-A组大鼠血清 17β-雌二醇 ( E2 )、LH及 FSH水平较正常对照组下降 ,差异显著 ( P<0 .0 5 ) ;与去卵巢组 ( OVX)比较 ,E2 相似 ,差异不显著 ( P>0 .0 5 ) ,但 L H、F SH较低 ( P<0 .0 5 ) ;与 Gn RH-A+E2 组比较 E2 浓度较低 ,差异显著 ( P<0 .0 5 ) ,L H、FSH相似 ( P>0 .0 5 )。( 2 ) 5 -HT样阳性物质在大鼠中缝背核 ,中缝正中核表达较多 ,Gn RH-A组大鼠中缝背核 ,中缝正中核 5 -HT样阳性细胞数及光密度值都低于正常对照组 ( P<0 .0 5 ) ,与去卵巢组相似 ( P>0 .0 5 )。 ( 3 ) Gn RH-A、17β-雌二醇联合用药后 ,大鼠中缝背核 ,中缝正中核 5 -HT样阳性细胞数及光密度值都与正常对照组相似 ,无显著差异 ( P>0 .0 5 )。结论 :Gn RH-A可改变大鼠中缝背核 ,中缝正中核 5 -HT样阳性物质表达 ,从而影响其神经元的功能 ,此点可能与其副作用类似绝经综合征有关。