rhHSP110毕赤酵母工程菌的大规模发酵及产物纯化

目的：探讨重组人HSP110（rhHSP110）毕赤酵母工程菌在80 L发酵罐中大规模发酵的工艺及发酵产物rhHSP110的纯化方法。方法：在摇瓶中制备rhHSP110工程菌种子2 L,将种子接种到80 L发酵罐中,采用补料分批培养方式对工程菌进行高密度发酵。控制和优化各种发酵条件,经历72 h后结束发酵。将发酵液离心,经阳离子交换层析对上清中的表达产物进行纯化。结果：控制发酵温度为30℃ ,pH值为4.2,溶氧值为20%以上,在酵母细胞湿重达到200 g•L^-1时开始甲醇诱导表达,72 h后结束发酵。发酵上清通过阳离子交换 层析纯化后获得纯度为80%的rhHSP110,产量为500 mg•L^-1。结论：rhHSP110酵母工程菌在80 L发酵罐高密度发酵成功,为rhHSP110的产业化生产及临床研究了奠定基础。     

毕赤酵母菌分泌表达重组抑肽酶的高密度发酵工艺研究

目的:对毕赤酵母高密度表达重组抑肽酶的发酵工艺进行探讨。方法:先通过摇瓶培养方法,确定表达抑肽酶的毕赤酵母在BSM培养基中生长所需的最佳配方。在此基础上,采用分批补料培养方法,对毕赤酵母pSA/GS115进行高密度发酵。紫外吸收法测定重组抑肽酶竞争性抑制胰蛋白酶对底物BAEE的水解活性。结果:BSM培养基中毕赤酵母生长必需的最佳配方为甘油40 g.L-1、氨水单次补加量0.1%、甲醇流加量1%。经过毕赤酵母高密度发酵,发酵液上清中蛋白的表达量为37.08 mg.L-1,目的蛋白活性达到4 450 BAEEU.ml-1,比摇瓶培养表达提高了8倍。结论:本发酵工艺可实现酵母工程菌的高密度表达发酵,其发酵产物具有较高的生物活性,为下一步大规模化制备抑肽酶奠定了基础。     

输液泵在改良人源多肽抗生素LL-37表达量的应用和探析

目的改良毕赤酵母发酵条件,提高人源多肽抗生素LL-37表达量。方法用无油气体压缩机供氧,电脑输液泵控速给养料的方法,对毕赤酵母发酵进行改良。结果改良方法提高了毕赤酵母表达量约1.65倍。结论无油气体压缩机对发酵中氧气的供给、电脑输液泵控速给养料的改良方法,提高了LL-37的表达量。     

甘油对毕赤酵母高密度发酵表达重组水蛭素Ⅱ的影响

目的：考察甘油对毕赤酵母生长和重组水蛭素Ⅱ表达的影响。方法：在摇瓶和IOL发酵罐中用含有不同浓度甘油的培养基培养毕赤酵母，测定毕赤酵母的生长和重组水蛭素Ⅱ的表达。结果：发酵培养基中初始甘油浓度为5g／L时，毕赤酵母生长速度明显加快；补料过程中甘油浓度大于70g／L时，毕赤酵母生长受到抑制。与不加甘油相比较，诱导表达期维持培养基中甘油浓度在5g/L以下，重组水蛭素表达可提前4h，诱导30h其活性达13000 ATU／ml，比仅用甲醇诱导时效价提高了7．7％。结论：降低初始培养基中甘油浓度有利于毕赤酵母生长，补料过程中培养基甘油浓度应维持在押制毕赤酵母生长的浓度之下，诱导阶段培养基中少量的甘油有利于水蛭素的表达.     

何首乌酵母发酵提取液对小鼠的肝毒性作用

[目的]探讨何首乌酵母发酵提取液对小鼠的肝毒性作用.[方法]取雄性小鼠随机分为正常对照组(蒸馏水10mL/kg)、何首乌酵母发酵提取液大、中、小剂量(5,3,1g/kg)组,末次灌胃给药后禁食1夜,摘取眼球取血,分离血清,测定血清总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶及γ-L-谷氨酰转肽酶等指标水平,取肝匀浆测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量.取对数生长期的张氏肝细胞,加入20μL不同质量浓度的何首乌酵母提取液,于72 h后测定抑制率.[结果]何首乌酵母发酵提取液对小鼠肝毒性的实验结果显示,与正常对照组比较,何首乌酵母发酵提取液各剂量组血清总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶及γ-L-谷氨酰转肽酶指标均有不同程度的升高,但差异无统计学意义(P>0.05);与正常对照组比较,何首乌酵母发酵提取液大剂量组SOD活性低、MDA含量增高,但差异均无统计学意义(P>0.05);与正常对照组比较,何首乌酵母发酵提取液小剂量组SOD活性升高、MDA含量降低,两者间差异亦无统计学意义(P>0.05).何首乌酵母发酵提取液对张氏肝细胞毒性的实验结果显示,与正常对照组比较,加入50,100,200 mg/L质量浓度实验组的OD值降低,较加入400,800 mg/L质量浓度实验组的OD值增高,各组间差异均无统计学意义(P>0.05).各组乳酸脱氢酶及SOD,MDA水平间差异亦均无统计学意义(P>0.05).[结论]何首乌酵母发酵提取液对小鼠未见有明显的肝毒性作用,对张氏肝细胞亦未见有毒性作用.     

金色链霉菌培养条件优化研究

金色链霉菌摇瓶培养适宜的接种量为3．2％、接种时间为25h、温度在28℃左右。4g／L的硫酸铵和0．043g／L无机磷有利于产物金霉素(CTC)合成。酵母膏的加入对CTC的合成有一定促进作用，以3g／L的效果较好。在50L发酵罐中，较低浓度的无机磷对CTC发酵有利；酵母膏的加入量以4．2g／L最佳，产物效价比酵母膏加入量为2．8g／L和5．6g／L时高3．1％和9．79／5，优化发酵过程的CTC产率提高了18％。     

巴斯德毕赤酵母表达的人抑瘤素M发酵条件及发酵产物分析

目的：研究巴斯德毕赤酵母表达的人抑瘤素M（hOSM）大规模发酵条件。方法：利用hOSM毕赤酵母高表达菌株,于试管水平进行发酵pH条件的摸索,以补料分批培养方式在 80 L发酵罐中对hOSM工程菌进行3个批次的高密度发酵,控制和优化各种发酵条件,通过SDS-PAGE对发酵产物进行分析。结果：最终确定在pH 5.0的FM21培养基中扩增菌体,待菌体密度达190 g/L 时添加甲醇诱导,在发酵液pH 5.5的条件下,发酵温度稳定在28℃,通入空气的流量为2 vvm, 转速为650 r/min,罐内压力为10 P,溶解氧保持在25%左右,甲醇流加速度在9.3 mL/h/L 初始发酵液体积,诱导36 h时结束发酵,hOSM占分泌总蛋白的28%,产量达到280 mg?L-1。结论：应用hOSM工程菌能够进行稳定的发酵,为进行下一步生物学功能测定提供充足的物质基础。     

三种改变酵母细胞透性方法对1,6-二磷酸果糖生产的影响

目的：研究不同方法改变酵母细胞透性对1,6-二磷酸果糖生产的影响。方法：采用反复冻融、甲苯处理、活化培养这三种方法改变酵母细胞透性并测定这些改变了细胞透性和生理状态的酵母的1,6-二磷酸果糖生产能力：结论：三种方法均使1,6-二磷酸果糖的发酵产量提高,其中活化培养方法使1,6-二磷酸的发酵产量达40mg／mL。     

山蛭素Hs基因在甲醇毕赤酵母中表达

[目的]山蛭素基因在甲醇毕赤酵母中表达。[方法]利用PCR点突变方法改造山蛭素基因，将山蛭素基因克隆到pGEM-Teasy载体中，对重组质粒测序，构建了毕赤酵母表达载体pPIZB-Hs，然后转化有活性的GS115酵母菌株，筛选表达酵母菌株GS115，摇瓶发酵。[结果]改造的山蛭素基因在重组酵母中表达，重组蛋白质具有对凝血酶抑制活性。[结论]利用PCR点突变方法能改造山蛭素基因，并能在毕赤酵母中表达。     

盐酸植物鞘氨醇对多种实验大鼠溃疡模型的抗溃疡作用

作者将西弗汉逊酵母Pichia（Hansenula）ciferrii ATCC 14091发酵、提取，制得盐酸植物鞘氨醇（PS-HCl），研究了PS-HCl对4种胃溃疡模型大鼠的抗溃疡作用。     

Implementing an Integrative Multi-agent Clinical Decision Support System with Open Source Software

Clinical decision making is a complex multi-stage process. Decision support can play an important role at each stage of this process. At present, the majority of clinical decision support systems have been focused on supporting only certain stages. In this paper we present the design and implementation of MET3—a prototype multi-agent system providing an integrative decision support that spans over the entire decision making process. The system helps physicians with data collection, diagnosis formulation, treatment planning and finding supporting evidence. MET3 integrates with external hospital information systems via HL7 messages and runs on various computing platforms available at the point of care (e.g., tablet computers, mobile phones). Building MET3 required sophisticated and reliable software technologies. In the past decade the open source software movement has produced mature, stable, industrial strength software systems with a large user base. Therefore, one of the decisions that should be considered before developing or acquiring a decision support system is whether or not one could use open source technologies instead of proprietary ones. We believe MET3 shows that the answer to this question is positive.     

Use of personal computers in a teaching hospital in Zambia

This article reports on doctors who imported microcomputers to Zambia to use in a teaching hospital. The types of programs utilized and the cost of the programs is provided. Computers are used in both hospital and general practice and are often large, powerful, and expensive models that would be inappropriate in the developing countries. This is particulary true where there is a lack of trained technicians locally to maintain both hardware and software. Recent reductions in the costs of buying and running microcomputers meant that it became possible to consider using them more in medical practice, and user friendly software made them particularly suitable for use in hospitals in developing countries. Personal computers are useful because they enable doctors to teach and write in countries in which medical and administrative manpower is limited. The effectiveness of many doctors in developing could be increased if they had access to microcomputers. The authors promote the use of microcomputers as cost effective and urge any doctors planning to work in a developing country where research or administration will be part of their job to take a computer with them.     

木质纤维植物制乙醇研究进展

木质纤维植物是一个至今为止尚未被成功开发,且含有丰富的可作为特定工业用途的可发酵的糖的生物原料。木质纤维植物制乙醇越来越引起世界各国的广泛关注,技术研发的关注点几乎一致,均围绕着预处理、水解糖化、糖液发酵、酶制备等技术关键进行攻关。国外,木质纤维植物生产乙醇正逐步走向一个技术成熟的阶段,我国,该技术的成套化研发也已有报道。但是目前世界上还没有一家成功利用木质纤维植物生产乙醇的商业化运行企业。     

环隙气升式反应器的开发——Ⅱ.维生素C两步发酵过程

在400mm直径的环隙气升式发酵罐(Ⅰ)内进行了两步发酵试验,由山梨醇制取维生素C的前体——2-酮基-L-古龙酸。测定了第二步发酵过程的氧传递速率和体积传质系数。实验表明,在产酸中期的平均体积传质系数仅为相同表观气速下,空气-水系统的体积传质系数的40%左右。采用性能指标PI作为评价发酵罐操作性能的标准,求得(Ⅰ)的最佳空气流量,并与机械搅拌罐(Ⅱ)作比较。发酵试验表明,(Ⅰ)非常适用于两步发酵过程。在适宜的操作条件下,其总收率可达85%左右。所以(Ⅰ)完全能替代(Ⅱ),从而大大节约能耗和投资费用。     

利用SwishMax编制医学工具软件

采用SwishMax软件编制输液抢救智能辅助计算系统、血气分析判断软件等医学工具软件,介绍软件实际应用效果及编制经验。软件的应用有助于提高对应的临床诊疗及科研效率。认为SwishMax脚本语言功能强大,适合非计算机软件专业人员应用。     

无相变热交换器的尺寸选择

在工业上应用比较广泛的液-液热交换器的尺寸决定是很多工程设计人员所必须面对的。笔者较详细地介绍了‘Heat Exchanger’软件的编制思路和采用的最新的计算方法,并通过具体的例子描述了软件的使用方法。该软件不仅可以选择较经济的热交换尺寸,而且对满足传热要求的在标准内的热交换尺寸从小到大的壳径都列举出来,以作为使用者来选择比较,更准确和经济地选择适合工况的热交换器的尺寸。对有经验的或者刚参加工作的工程人员都是一个很好的工具。     

一种实用的中医知识表达语言TCMKRL及专家系统生成环境TCM-ES-GE

介绍一种新型的中医知识表达语言TCMKRL.这种语言将有利于中医专家系统知识获取这一瓶颈问题的解决,而且能够被中医师掌握和运用。所开发的专家系统生成母机是按计算机辅助软件工程原则设计的强有力的软件工具,使专家系统批量化生产成为可能.     

青霉素发酵过程特点与控制对策

通过过程参数相关,模型化和在线辩识对青霉素发酵过程特点进行了研究,认为采用自适应控制可降低对模型精度的要求,是一个较为有效的控制方法。但对至今以人工经验为主的大多数发酵过程操作,模糊专家系统也是一种有效的控制方式。     

中美两所医学高校机构知识库的对比分析

运用文献分析、对比分析等方法,分析了马萨诸塞大学医学院机构知识库和北京大学医学部机构知识库的建立单位、开放程度、使用软件、内容类型、计量学指标与工具,提出了建立机构知识库时应用补充计量学的必要性,指出了应用补充计量学工具中存在的问题及应对策略,为我国医学高校机构知识库的建设提供理论依据。     

发酵监控系统上位计算机软件编程研究

提出了利用上位机参与实时控制,综合分析在线参数、离线参数和间接参数,辅助发酵过程工艺研究和优化控制,并给出了上位机软件包的部分源程序及框图。该软件包对发酵工艺人员进一步了解菌种的遗传特性、细胞代谢调节和反应器工程特性方面有较大帮助。