免疫介导的造血抑制与骨髓衰竭

再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA,以下简称再障)是一组以造血干/祖细胞损伤、外周血全血细胞减少,临床以贫血、出血、感染为主要表现的骨髓造血功能衰竭性疾病(骨髓衰竭)。先天性或遗传性骨髓衰竭的发病机制研究近年来获得不少新进展。本文主要讨论获得性再生障碍性贫血。我国再障的年发病率为74/105,高于欧美国家,其中急性再障(AAA)的发病率为14/105,慢性再障(CAA)的发病率为60/105。再障的发病机制有造血干/祖细胞减少或缺陷、造血微环境缺陷和免疫异常。目前再障的临床治疗,国外主要用免疫抑制剂抗胸腺球蛋白（ATG）或/和环胞菌素A（CsA）及骨髓移植,雄激素已极少应用,仅作为“补救”或“替代”治疗措施;国内主要是免疫抑制剂、雄激素和补脾肾中药。     

中西医结合治疗成人重型和输血依赖性非重型再生障碍性贫血体会

再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)主要分为重型(severe AA,SAA)和非重型再生障碍性贫血(non-severe AA,NSAA)两类。AA属于中医“髓劳”范畴,SAA和NSAA分别归属于“急髓劳”和“慢髓劳”。SAA和输血依赖性NSAA(TD-NSAA)的中西医结合治疗疗效确切,结合近期再生障碍性贫血的临床进展和治疗体会,提出SAA多处于以“细胞因子风暴”为典型特征的“异常免疫”阶段,此阶段以异常免疫为主要矛盾,以骨髓衰竭为次要矛盾,应以免疫抑制剂+中药补肾活血解毒为主治疗,TD-NSAA所处阶段多以骨髓衰竭为主要矛盾,治疗应以补肾健脾中药+雄激素为主促进骨髓造血功能恢复。连续治疗6个月无效的TD-NSAA应根据SAA中西医结合治疗方案进行治疗。     

慢性再生障碍性贫血患者中医证型与T-bet/GATA-3相关信号通路、Th亚群的相关性

目的从Th细胞失衡、转录因子T-bet/GATA-3及相关信号通路水平分析其与慢性再生障碍性贫血(CAA)中医证型的关系。方法选择CAA患者,辨证分为脾肾阳虚组和脾肾阴虚组各20例,另选20例健康者做对照(正常组),采用实时荧光定量PCR检测CAA患者外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达,采用流式细胞术、酶联免疫吸附法检测CAA患者外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平。结果脾肾阴虚组患者PBMNCT-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1、IFN-γ、IL-12均高于脾肾阳虚组(P<0.05),并且此2组患者亦高于正常组(P<0.05),而GATA-3、STAT6、IL-43组比较则无统计学差异(P>0.05)。结论与脾肾阳虚型患者相比,CAA脾肾阴虚型存在更严重的IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路异常活化和Th1偏移,脾肾阴虚型存在更明显的免疫异常状态。     

银屑灵熏剂蒸汽治疗对寻常型银屑病外周血单个核细胞表达T-bet、GATA-3蛋白水平的影响

目的 探讨银屑灵熏剂蒸汽治疗寻常型银屑病的临床疗效及对外周血单个核细胞（PBMC）表达T-bet及GATA-3蛋白水平的影响。方法 对30例寻常型银屑病患者行银屑灵熏剂蒸汽治疗,观察PASI评分下降率并使用Western blot法检测患者及25名健康对照者PBMC中T bet和GATA 3蛋白水平的变化,观察PASI评分与T-bet和GATA-3蛋白水平相关性。结果30例患者治愈12例,显效9例,有效8例,无效1例。治愈率为40.0%,有效率为96.7%。寻常型银屑病患者PBMC表达T-bet蛋白水平（1.7917±0.3840）较对照组（0.8860±0.1486）升高（P＜0.01）。GATA 3蛋白水平（0.8777±0.3114）较对照组（1.2384±0.1783）降低（P＜0.01）。经银屑灵熏剂治疗后,T-bet蛋白表达降为1.3410±0.3642,而GATA-3蛋白升高为1.0883±0.2435,治疗前后改变均有统计学意义（P＜0.01）。其中PASI评分与T-bet蛋白表达水平呈正相关（r=0.7448,P＜0.01）,与GATA-3蛋白表达水平呈负相关（r=－0.8291,P＜0.01）。结论 银屑灵熏剂蒸汽治疗银屑病有效,其可能机制是通过调节寻常型银屑病患者PBMC中转录因子T-bet/GATA-3蛋白的平衡表达,纠正寻常型银屑病患者Th1/Th2细胞亚群失衡的免疫异常,有效治疗银屑病。     

三伏天灸对支气管哮喘患者T-bet、GATA-3、Foxp3及STAT-6影响的初步研究

目的:探讨转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3及STAT-6在支气管哮喘患者中的作用,研究三伏天灸治疗支气管哮喘的免疫调节机理。方法:将18例支气管哮喘患者纳入治疗组,选取18例健康志愿者纳入对照组,运用实时荧光定量PCR检测支气管哮喘患者治疗前、治疗6个月后和对照组样本外周血单个核细胞(PBMNC)中T-bet、GATA-3、Foxp3和相关信号通路STAT-6的mRNA表达,采用流式细胞术检测外周血Th1、Th2比例,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4水平。结果:经三伏天灸治疗后,支气管哮喘患者IFN-γ分泌降低,T-bet、GATA-3表达水平升高,STAT-6水平降低;治疗前后Foxp3水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:三伏天灸可下调STAT-6,上调T-bet、GATA-3,从而抑制Th2过度分泌,调节Th1/Th2比例平衡,在哮喘病程中起到免疫调节作用。     

肝肾不足型斑秃患者PBMC中Th1/Th2型细胞因子转录因子T-bet mRNA表达状况

目的：探讨肝肾不足型斑秃患者外周血单核细胞（PBMC）中Th1／Th2型细胞因子、转录因子T-bet mRNA表达状况与斑秃发病的关系。方法：用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测8例轻型斑秃、12例重型斑秃（肝肾不足型）患者及10例正常人外周血单一核细胞（PBMC）经PHA刺激后Th1型细胞因子（IFN-γIL-12）、Th2型细胞因子IL-10及转录因子T-bet mRNA的表达水平。结果：经PHA刺激后轻型斑秃患者PBMC中Th1型细胞因子（IFN-γ、IL-12）基因表达水平轻度升高，与正常对照组比较无显著性差异（P〉0．05）；Th2型细胞因子（IL-10）基因表达下降，显著低于正常对照组（P〈0．05）；转录因子T-bet mRNA表达水平明显升高，显著高于正常对照纽（P〈0．05）。重型斑秃患者PBMC中Th1型细胞因子（IFN-γIL-12）及转录因子T-bet基因表达不仅显著高于正常对照组（P〈0．01），而且还高于轻型斑秃病人（P〈0．05）；Th2型细胞因子（IL-10）基因表达显著低于正常对照组（P〈0．05），与轻型斑秃病人比较无显著性差异。结论：肝肾不足型斑秃患者PBMC中Th1／Th2型细胞因子基因表达失衡，呈现以Th1型细胞因子和转录因子T-bet基因过度表达为特征的Th1型反应，可能参与了斑秃的发病机制，也可能是斑秃肝肾不足证型的微观本质之一。     

温肾补阳法对变应性鼻炎患者转录因子T-bet/GATA-3表达的影响

目的:研究变应性鼻炎患者转录因子T-bet/GATA-3的表达及温肾补阳法对其作用。方法:选择符合诊断标准(中医肾阳虚型;西医属常年性变应性鼻炎)的患者91例,治疗组41例,对照组50例,另选择正常健康的受试者20例作为空白对照组。治疗组采用金匱肾气丸合苍耳子散为主方加减治疗;对照组采用氯雷他定治疗,疗程4周。本实验采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测变应性鼻炎患者外周血淋巴细胞培养上清液中白细胞介素4(IL-4)和r干扰素(INF-r)浓度,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)测定淋巴细胞中T-bet、GATA-3mRNA表达水平。结果:温肾补阳组患者治疗后同治疗前相比,INF-r、T-bet水平明显提高(P0.05),IL-4、GATA-3水平明显下降(P0.05),同正常对照组相比无明显差别(P0.05)。而氯雷他定治疗前后无明显改善。结论:温肾补阳法可通过调节T-bet/GATA-3表达,纠正失衡的Th1/Th2细胞因子网络,从而对变应性鼻炎产生治疗作用。     

以转录因子T-bet/GATA-3为靶标的哮喘治疗手段探要

目的:探讨转录因子T-bet/GATA-3在哮喘发病中的作用机理,分析以T-bet/GATA-3为靶标的哮喘治疗手段。方法:总结近10年关于T-bet/GATA-3在哮喘发病中的机理研究及以此为靶标治疗哮喘的相关文章,进行分析、归纳。结果:T-bet/GATA-3作为哮喘发病中的转录因子,能够客观地反映Th1/Th2细胞分化和Th1型细胞因子、Th2型细胞因子的变化。以其为靶标治疗哮喘的方式近年取得的进展主要有生物制剂、免疫疗法、中医药、以及神经生长因子、寡核苷酸、转录因子圈套策略等分子和基因水平的治疗方法。结论:以转录因子T-bet/GATA-3为靶标的哮喘治疗手段近年取得较多进展,提示在转录水平将Th0细胞向Th1/Th2细胞分化这个环节作为治疗疾病的靶点,可能成为延长哮喘缓解期、减少复发的关键。     

加减固本防哮饮对支气管哮喘患者缓解期外周血T-bet/GATA-3比值及Th1/Th2平衡的影响

目的:观察加减固本防哮饮对支气管哮喘患者缓解期外周血T-bet/GATA-3比值及Th1/Th2平衡的影响。方法选取2016年12月～2018年11月间在本院接受治疗的支气管哮喘缓解期患者65例,随机数字表法分成2组,对照组(32例)采用沙美特罗替卡松粉吸入剂,观察组(33例)在对照组基础上加服加减固本防哮饮。观察患者临床疗效、治疗前后肺功能、中医证候评分、血清白细胞介素-4(IL-4)、γ-干扰素(IFN-γ)含量及结合蛋白-3(GATA-3)及转移因子T-bet mRNA表达。结果观察组患者总的有效率为93.94%,高于对照组的81.25%(P0.05);治疗后观察组患者PEF、FEV1较治疗前、对照组升高(P0.05);治疗后观察组患者ACT评分较治疗前、对照组升高,中医证候积分较治疗前、对照组降低(P0.05);治疗后观察组患者血清IL-4含量较治疗前、对照组降低,IFN-γ含量、IFN-γ/IL-4比值较治疗前、对照组升高(P0.05);治疗后观察组患者GATA-3mRNA表达较治疗前、对照组降低,T-bet mRNA表达、T-bet/GATA-3比值较治疗前、对照组升高(P0.05)。结论加减固本防哮饮可改善支气管哮喘患者缓解期患者肺功能,提升疗效,其作用机制可能和调控外周血T-bet/GATA-3及Th1/Th2平衡有关。     

基于T-bet/GATA-3表达研究化痰祛瘀法对哮喘小鼠气道炎症及免疫失衡的影响

目的:研究转录因子T-bet和GATA-3在哮喘模型小鼠疾病进展过程中的改变及其意义及其在Th1/Th2失衡中的作用,探讨化痰祛瘀法对支气管哮喘防治作用的机理。方法:通过卵蛋白致敏、激发建立支气管哮喘小鼠模型,于激发后7天和21天分批取材,用RT-PCR法检测肺组织匀浆中T-bet、GATA-3 mRNA表达。结果:激发7天后:与空白组比较:模型组T-bet明显降低,GATA-3明显升高,T-bet/GATA-3比值明显降低;两用药组T-bet及T-bet/GATA-3比值均明显降低,组间无明显差异。与模型组比较:两用药组T-bet均无明显变化,GATA-3均明显降低,T-bet/GATA-3比值均明显升高;组间无明显差异。哮喘激发21天后:与空白组比较:模型组T-bet明显降低,GATA-3明显升高,T-bet/GATA-3比值明显降低;两用药组T-bet及T-bet/GATA-3比值均明显降低。与模型组比较:地塞米松组T-bet无明显差异,GATA-3明显降低,T-bet/GATA-3比值明显升高;中药组T-bet明显升高,GATA-3明显降低,T-bet/GATA-3比值明显升高;两组间无明显差异。结论:BALB/c小鼠经OVA致敏及雾化激发后,使转录因子T-bet/GATA-3表达失衡,模型小鼠出现气道炎症及气道重建的相关表现,符合中医病机中的"痰瘀互结"。化痰祛瘀法对T-bet/GATA-3表达失衡具有双向纠偏的调节作用。对改善气道慢性炎症及气道重建方面,其疗效与地塞米松相近,但作用环节较对照组更为广泛,且随用药时间延长,有累加效应。     

Effect and mechanism of ligustrazine on Th1/Th2 cytokines in a rat asthma model

Ligustrazine is an alkaloid isolated from the rhizome of Chuanxiong (Ligusticum chuanxiong Hort), which is known to possess antioxidant, anti-inflammatory, anti-fibrosis and immunomodulative effects. It is used clinically to treat asthma as an assistant therapy of glucocorticoid. The purpose of this study was to explore the effects of intraperitoneal ligustrazine on Th1/Th2 cytokines in a rat asthma model and the underlying mechanism. SD rats were sensitized and challenged with ovalbumin (OVA) to establish an asthmatic model. Within 24 hours after the last ovalbumin challenge, changes in airway histology were observed. The concentrations of IL-4 and IFN-gamma in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were measured by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The protein expressions of GATA-3 and T-bet in lung were measured by Western blot. The results showed that an increase of Th2 cytokine and an inhibition of Th1 cytokine were accompanied by an increased expression of GATA-3 protein and a decreased expression of T-bet protein in rat asthmatic airways compared to those in normal control group. Intraperitoneal ligustrazine administration could significantly lower the level of IL-4 in BALF and the expression of GATA-3 protein in lung and also increase the level of IFN-gamma and T-bet in asthmatic rats, resulting in a decreased percentage of eosinophils (EOS) in BALF and ameliorated airway inflammatory cell infiltration. In conclusion, ligustrazine inhibits OVA induced airway inflammation by modulating key master switches GATA-3 and T-bet that result in reversing the Th2 cytokine patterns in asthma.     

放射线对小鼠T细胞分化相关蛋白T—bet、GATA-3、RORγt、Foxp3表达的影响

目的：观察放射线对小鼠脾脏T细胞分化特异性转录因子T—bet、GATA-3、RORlt、Foxp3蛋白表达水平的影响。方法：60Coγ射线（1．0Gy,5．5min）照射Balb／c小鼠,分别于照射后第4、8、12及20天检测小鼠外周血象;骨髓病理切片观察骨髓造血组织增生情况;WesternBlot法检测脾脏T细胞分化特异性转录因子T_bet、GATA-3、RORγt、Foxp3蛋白表达水平。结果：吖射线照射后小鼠外周血白细胞和血小板数量显著降低;骨髓造血细胞显著减少,脂肪细胞明显增多;放射线照射Balb／c小鼠,脾脏GATA-3、RORγt、Foxp3蛋白表达下降,于照射后第4天表达水平最低,之后逐渐升高但低于正常对照组水平（P〈0．05）;脾脏T—bet蛋白表达水平明显高于对照组水平（P〈0．05）;T—bet／GATA3、RORγt／Foxp3比值明显增大（P〈0．05）,于照射后第4天比值最大。结论：放射线抑制Balb／c小鼠骨髓造血,同时导致脾脏T细胞分化异常;骨髓造血功能低下可能与T细胞分化异常相关。     

艾灸预处理对大负荷训练运动员外周血转录因子T-bet和GATA-3 mRNA表达的影响

目的:探讨艾灸预处理对运动员大负荷训练阶段运动性免疫机能失衡的防治作用机制。方法:12名男子中长跑运动员,随机分为对照组(6名)和观察组(6名)。在大负荷训练阶段,对照组只训练,观察组在每天下午训练后灸关元、足三里穴(双)或关元、三阴交穴(双),每天灸一组,两组穴位交替治疗。分别在大负荷运动训练前、大负荷运动训练3周后、调整训练1周后采用实时荧光定量PCR技术检测外周血白细胞转录因子T-bet(T-box expressed in T cells)和GATA-3(GATA binding protein 3)mRNA的表达。结果:(1)两组运动员T-bet mRNA的表达均表现为上升的趋势,对照组上升了4.52%,观察组上升了14.8%,但两组间和组内比较差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)GATA-3mRNA表达,对照组调整训练后与大负荷训练前和大负荷训练后相比均明显上升(P<0.05),观察组调整训练后与同期对照组相比显著下降(P<0.05)。(3)T-bet、GATA-3mRNA比值,对照组大负荷训练后比大负荷训练前增高了13.58%,调整训练后比大负荷训练前降低了29.63%,整体上呈现下降趋势;观察组大负荷训练后比大负荷训练前增高75.16%,调整训练后比大负荷训练前仍增高35.4%,整体上呈现上升趋势。结论:(1)中长跑运动员调整训练后GATA-3mRNA明显增高,上调T辅助淋巴细胞(Th)2型细胞因子产生,导致了Th 1/Th 2平衡向Th 2漂移;(2)艾灸预处理抑制了运动员大负荷训练后GATA-3mRNA过度表达,可能是维持运动员Th 1/Th 2动态平衡的机制之一。     

补肾中药对哮喘缓解期患儿Th1/Th2平衡的影响

目的探讨补肾中药调节T1／Th2平衡治疗哮喘的分子机制。方法哮喘缓解期儿童20例,抽取静脉抗凝血分离单个核细胞（peripheral blood mononuelear cells,PBMC）。每份血样均分为3部分,分为空白组、喘可治（CKZ）Ⅰ组和CKZⅡ组,加入不同浓度的药物体外培养48h,分别收集细胞沉淀。荧光定量PCR检测T—bet mRNA、GATA-3 mRNA的表达强度及细胞因子IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA的表达水平。结果不同剂量CKZ干预后,PBMC中T—bet mRNA的表达均较空白组显著增强,以CKZⅡ组的差异更为明显（P〈0．01）;CKZ组与空白组比较,GATA-3 mRNA的表达强度差异无显著性;CKZ组的IFN-γ mRNA的表达较空白组增强,其中CKZⅡ组与空白组比较差异有显著性（P〈0．05）;CKZⅡ组IL-4 mRNA的表达强度较空白组显著减低（P〈0．01）。CKZ组的T—bet／GATA-3比值与空白组比较,差异无显著性（P〉0．05）;CKZ组的IFN-γ／IL-4的比值较空白组上升,其中CKZⅡ组与空白组相比显著升高（P〈0．05）。结论补肾中药CKZ可以通过转录因子和细胞因子多个环节,增强Th1细胞的功能,同时抑制Th2细胞的功能,对Th1／Th2平衡具有多层次的调节作用。