金粉蕨素抑制氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡

研究金粉蕨素对氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡的影响及可能机制。用过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞株ECV304,制备内皮细胞凋亡模型。应用四甲基偶氮唑盐还原法观察细胞活性;流式细胞术和Tunel法检测细胞凋亡率;用Western blot检测细胞天冬氨酸凋亡蛋白酶3活性。结果发现,金粉蕨素(0.3、1和3 μmol/L)呈浓度依赖性地增加内皮细胞活性,显著降低细胞凋亡率(15.5％±1.2％、12,6％±0.9％、8.2％±0.8％比22.7％±3.9％,P<0.05);同时金粉蕨素(3 μmol/L)抑制过氧化氢诱导天冬氨酸凋亡蚤白酶3的活化,与阳性对照药金雀异黄酮作用强度相似。结果提示,金粉蕨素拮抗氧化应激诱导的血管内皮细胞凋亡可能与抑制天冬氨酸凋亡蛋白酶3活化有关。     

普罗布考对溶血磷脂酰胆碱致培养人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

为探讨普罗布考对溶血磷脂酰胆碱致培养人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用 ,采用培养的人脐静脉血管内皮细胞 ,观察溶血磷脂酰胆碱对内皮细胞产生和分泌一氧化氮及其合酶、组织型纤溶酶原激活剂、纤溶酶原激活物抑制剂及乳酸脱氢酶活性的影响 ,并观察普罗布考的保护作用。结果发现 ,溶血磷脂酰胆碱明显增加乳酸脱氢酶活性 (4 8.0± 4 .1比 2 8.0± 7.5 ,P <0 .0 5 ) ,增加细胞死亡率 (9.9± 1.2比 6 .3± 0 .9,P <0 .0 5 ) ;同时抑制内皮型一氧化氮合酶 (4 8.0± 4 .3比 6 3.4± 6 .8)及组织型纤溶酶原激活剂活性 (0 .31± 0 .0 5比 0 .4 3± 0 .0 7,P <0 .0 5 ) ,增强纤溶酶原激活物抑制剂的活性 (1.39± 0 .2 1比 0 .97± 0 .11,P <0 .0 5 ) ,具有剂量—依赖效应。预先应用不同剂量的普罗布考 (10～ 5 0mmol L)后 ,该效应明显减弱。以上提示 ,溶血磷脂酰胆碱能直接损伤内皮细胞 ,抑制组织型纤溶酶原激活剂及内皮型一氧化氮合酶活性 ,增强纤溶酶原激活物抑制剂活性 ,普罗布考对内皮细胞具有保护作用     

溶血磷脂酰胆碱对人脐静脉内皮细胞血管紧张素系统的影响

目的 观察溶血磷脂酰胆碱（Lysophosphatidyl choline,LPC）对人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）血管紧张素系统的影响。方法 体外培养HUVECs,分为正常对照组、低浓度（10μg/L）LPC 组、中浓度（20μg/L）LPC 组和高浓度（40 μg/L）LPC 组。采用放射免疫法和RT-PCR 法检测LPC 对HUVECs 血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ,AngⅡ）蛋白及AngⅡ 1 型受体（AngiotensinⅡ type1 receptor,AT1R）、AngⅡ 2 型受体（AngⅡ type2 receptor,AT2R）mRNA 表达的影响。结果 与正常对照组相比,LPC 可显著上调HUVECs AngⅡ蛋白及AT1R mRNA 的表达。结论 LPC 能够上调人脐静脉内皮细胞血管紧张素系统部分组分的表达。     

多烯磷脂酰胆碱治疗脓毒血症患者对肝脏的保护作用

目的探讨多烯磷脂酰胆碱治疗脓毒血症患者对肝脏的保护作用。方法将32例脓毒血症患者分为观察组16例和对照组16例。观察组在早期加用多烯磷脂酰胆碱治疗7d。结果两组患者在入院当天血清ALT和AST水平均在正常范围内,两组间无显著性差异（P〉0.05）;治疗3天时,对照组患者ALT为54.3±9.8U/L,AST为65.1±11.0U/L,而治疗组则分别为42.1±8.7U/L和49.5±12.1U/（l P〈0.05）;治疗7天时,对照组ALT为89.4±11.2U/L和AST为104.6±12.5U/L,明显高于治疗组（ALT50.2±14.2U/L,AST47.6±10.1U/L,P〈0.01）。结论多烯磷脂酰胆碱治疗严重脓毒血症患者对肝功能有一定的保护作用。     

多烯磷脂酰胆碱对肝细胞保护机制的研究进展

多烯磷脂酰胆碱(PPC)是从大豆中高度浓缩提取的一种磷脂,主要活性成分为多聚磷脂酰胆碱二酰甘油,或多聚乙酰卵磷脂,是构成所有细胞膜和亚细胞膜的重要组成部分.     

多烯磷脂酰胆碱联合水飞蓟素治疗酒精性脂肪肝的疗效观察

目的观察多烯磷脂酰胆碱联合水飞蓟素治疗酒精性脂肪肝的临床疗效。方法 72例酒精性脂肪肝患者随机分为治疗组(36例)和对照组(36例),治疗组给予多烯磷脂酰胆碱和水飞蓟素联合治疗;对照组仅给予甘草酸二铵治疗,疗程均为4周。治疗结束后比较两组治疗总有效率、肝功能指标、肝纤维化指标及药物不良反应。结果治疗组总有效率(86.1%)明显优于对照组(66.7%)(P<0.05);治疗结束后治疗组ALT、AST为(40.47±11.14)U/L和(54.14±10.71)U/L,较对照组显著降低(P<0.05);治疗结束后治疗组肝纤维化指标表达水平明显低于对照组(P<0.05);治疗期间两组均未见明显不良反应。结论多烯磷脂酰胆碱联合水飞蓟素治疗酒精性脂肪肝疗效显著,无明显副作用,值得临床推广应用。     

肝源性磷脂酰胆碱对肝细胞酒精性损伤的保护作用

酒精性肝病（ALD）是世界范围内备受关注的肝病之一。目前对酒精性肝病的治疗，除解酒、对症治疗外，尚缺乏特效药物。磷脂酰胆碱（PC）又称卵磷脂，是动物细胞膜的重要组分之一，具有广泛的生理活性，如降血脂、防止动脉硬化、促进大腑活动、延缓衰老、增强学习和记忆力等。目前，国内外对卵磷脂的研究与开发多集中于大豆和蛋黄。有研究表明，大豆PC对肝细胞损伤具有一定的保护作用。     

8-硝基白杨素对溶血性磷脂酰胆碱损伤内皮细胞的保护作用

目的 研究8-硝基白杨素（8-NOChR）对溶血性磷脂酰胆碱（LPC）损伤内皮细胞的保护作用及可能机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,MTT检测LPC对HUVEC的损伤作用及不同浓度8-NOChR拮抗LPC损伤HUVEC生长作用;平皿克隆检测不同浓度的8-NOChR拮抗LPC抑制HUVEC细胞克隆形成;FCM检测8-NOChR调整LPC损伤HUVEC细胞周期变化;用Western blot检测细胞周期相关蛋白表达。结果 MTT提示经LPC作用的HUVEC生长活性呈时间和浓度依赖性降低,与NS组或0.1%DMSO组比较差异有统计学意义（P<0.05）;与LPC组相比较,8-NOCHR呈浓度依赖性地提高LPC损伤的HUVEC生长活性（P<0.05）,提高细胞克隆形成率（P<0.05）;降低HUVEC G₂/M期数目（P<005）;同时Cyclin A和Cyclin B蛋白激活（P<0.05）,P53和P21蛋白表达下调（P<0.05）,而CDK1蛋白表达却不变（P>0.05）。结论 8-NOCHR拮抗LPC损伤的内皮细胞的生长活性,可能与其激活Cyclin A和Cyclin B,下调P53和P21蛋白表达相关。     

溶血磷脂酰胆碱诱导内皮细胞表达血管内皮生长因子及丹酚酸B的抑制作用

研究溶血磷脂酰胆碱对内皮细胞中血管内皮生长因子表达的影响以及丹酚酸B的保护作用。在人脐静脉内皮细胞株ECV30 4培养基中加入溶血磷脂酰胆碱或溶血磷脂酰胆碱 +丹酚酸B ,用酶联免疫吸附试验检测各组内皮细胞培养上清液中血管内皮生长因子蛋白含量 ;用原位杂交检测血管内皮生长因子mRNA的表达。结果显示 ,培养的ECV30 4中未见血管内皮生长因子mRNA的表达 ,溶血磷脂酰胆碱刺激后可见血管内皮生长因子mRNA的高表达 ,加入丹酚酸B后阳性反应明显低于溶血磷脂酰胆碱组。酶联免疫吸附试验结果显示 ,溶血磷脂酰胆碱可使ECV30 4细胞条件培养基中血管内皮生长因子蛋白表达明显增加 ,丹酚酸B可明显降低其含量。以上结果提示 ,溶血磷脂酰胆碱能诱导ECV30 4表达高水平的血管内皮生长因子 ,丹酚酸B可明显降低其含量     

多烯磷脂酰胆碱对癫痫患者认知功能影响的临床疗效

目的明确临床上多烯磷脂酰胆碱（PPC）联合丙戊酸镁（VPA-Mg）改善癫痫后认知功能障碍的作用。方法将第四军医大学西京医院门诊收集的符合要求的42例癫痫患者随机分为VPA-Mg联合PPC治疗组（VPA-Mg＋PPC组,n=20）和单独使用VPA-Mg组（VPA—Mg组,n=22）。观察24周后,对两组资料进行分析。结果两组患者在病程、发作类型、月平均发作次数以及受教育程度等差异无统计学意义（P〉0．05）,具有可比性。VPA-Mg＋PPC组在访视1与访视4时的平均月发作频率之间差异具有统计学意义[（1．2±1．1）w（0．4±0．6）,P〈0．05];VPA—Mg组在访视1与访视4时的平均月发作频率差异亦有统计学意义[（1．5±1．4）VS（0．6±0．6）,P〈0．05],但两组间的疗效比较差异无统计学意义（P〉0．05）。VPA-Mg＋PPC组认知评定较VPA-Mg组改变明显,差异具有统计学意义（P〈0．05）。没有严重不良反应发生,但有轻度不良反应及实验室数据异常存在。VPA-Mg组胸闷1例,脱发1例,腹痛1例,谷丙转氨酶偏高2例。VPA—Mg＋PPC组在在整个试验过程中没有出现不良反应,且改善了伴有肝功能异常的病例。结论VPA-Mg与PPC联合治疗癫痫患者不仅可以控制癫痫发作,抵抗丙戊酸镁对肝脏方面的不良反应,而且可以明显改善癫痫患者的认知功能损害。     

不同剂量甲醛对人脐静脉内皮细胞一氧化氮含量的影响

目的观察不同剂量甲醛对人脐静脉内皮细胞一氧化氮含量的影响,分析甲醛诱导内皮细胞损伤在心血管疾病发病中的意义。方法将人脐静脉内皮细胞株分别与不同浓度甲醛(分别为0、5、10、20、40和80μmol/L)的DMEM培养基孵育,同时以过氧化氢(100μmol/L)为阳性对照组,抗氧化剂维生素C(100mg/L)为保护组。共培养24h后,分光光度法检测乳酸脱氢酶漏出量;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛浓度;硝酸还原酶法测定培养液中一氧化氮浓度;生化分析法测定内皮细胞一氧化氮合酶活性;免疫细胞化学法测定内皮型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶的蛋白表达;RT-PCR法测定内皮型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶的mRNA表达。结果不同浓度甲醛呈剂量依赖性地促进细胞乳酸脱氢酶漏出,促进内皮细胞上清液丙二醛和一氧化氮的产生;降低内皮型一氧化氮合酶的活性,抑制内皮型一氧化氮合酶在蛋白和基因水平的表达;增加诱导型一氧化氮合酶活性,促进诱导型一氧化氮合酶在蛋白和基因水平的表达。结论甲醛诱导人脐静脉内皮细胞损伤,机制可能与其抑制内皮型一氧化氮合酶的活性及表达,诱导诱导型一氧化氮合酶的活性及表达,从而诱导内皮细胞产生过多的一氧化氮有关;维生素C通过降低一氧化氮产生,减轻甲醛诱导的内皮细胞损伤。     

内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化

目的 探讨内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化在同型半胱氨酸致内皮细胞损伤中的作用机制.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞,加入0、50、100、200、500 μmol/L同型半胱氨酸和100 μmol/L同型半胱氨酸+维生素B12+叶酸的培养液中孵育72 h.MTT法检测人脐静脉内皮细胞的增殖活性;实时定量PCR测定内皮型一氧化氮合酶mRNA表达;化学比色法测定内皮型一氧化氮合酶活性;硝酸还原酶法检测一氧化氮生成量.巢式降落式甲基化特异性PCR法检测内皮型一氧化氮合酶基因启动子区DNA甲基化改变;同位素法检测DNA甲基化转移酶的活性.结果 人脐静脉内皮细胞与不同浓度同型半胱氨酸孵育72 h后,人脐静脉内皮细胞的增殖活性降低,内皮型一氧化氮合酶mRNA表达、内皮型一氧化氮合酶活性和一氧化氮的含量明显下降.内皮型一氧化氮合酶基因启动子序列DNA甲基化程度随同型半胱氨酸浓度的升高而增加,且DNA甲基化转移酶活性升高,而叶酸和维生素B12有一定拮抗作用,与对照组比较差异有显著性(P＜0.05和P＜0.01).结论 同型半胱氨酸可导致内皮型一氧化氮合酶基因启动子区序列高甲基化修饰,并出现相应的内皮型一氧化氮合酶基因表达下调,这可能是同型半胱氨酸致内皮细胞损伤的重要机制之一.     

丙丁酚对自由基损伤内皮细胞的保护作用与一氧化氮的关系

本文观察了抗氧化剂丙丁酚对外源性氧自由基损伤动脉内皮细胞的保护作用与其对一氧化氨合成释放的关系.结果显示:兔胸主动脉血管环和培养牛主动脉内皮细胞与黄嘌呤+黄嘌呤氧化酶孵育30min后,乙酰胆碱诱导的血管舒张百分率减少,内皮细胞释放一氧化氮的能力降低,脂质过氧化物含量升高。丙丁酚(40、80和120μmol·L(-1))均能保护内皮细胞免受黄嘌呤+黄嘌呤氧化酶损伤,且呈剂量依赖性。丙丁酚的作用可被一氧化氮灭活剂氧化血红蛋白阻断而不能被一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸阻断。血管内皮一氧化氮合成与效应抑制实验显示:N-硝基-L-精氨酸、氧化血红蛋白和一氧化氮效应拮抗剂美蓝均能使乙酰胆碱诱导的血管环舒张百分率降低。丙丁酚能对抗氧化血红蛋白和美蓝的作用,但对N-硝基-L-精氨酸的作用无影响。表明丙丁酚保护血管内皮细胞免受氧自由基损伤可能与保护内皮细胞释放的一氧化氮活性有关。     

雌激素减弱晚期糖基化终末产物对内皮型一氧化氮合酶的抑制作用

目的 研究晚期糖基化终末产物对内皮型一氧化氮合酶的作用,以及雌激素对该作用的影响和具体机制.方法 培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度的晚期糖基化终末产物和雌激素进行干预,用Western blotting方法检测细胞中内皮型一氧化氮合酶与Akt蛋白质水平的变化.结果 晚期糖基化终末产物以不同浓度(50、100和200 mg/L)单独作用于内皮细胞4 h后,内皮型一氧化氮合酶与Akt蛋白质水平明显降低.雌激素以不同浓度(10~(-9)、10~(-8)和10~(-7)mol/L)单独作用于内皮细胞24h后,内皮型一氧化氮合酶与Akt蛋白质水平均明显增加,而雌激素在10~(-8)mol/L的条件下,晚期糖基化终末产物100 mg/L对内皮型一氧化氮合酶抑制作用明显减弱,且Akt蛋白质水平受到抑制的程度也明显减弱.结论 晚期糖基化终末产物对内皮型一氧化氮合酶有显著的抑制作用,雌激素能有效减弱晚期糖基化终末产物的这种作用,这种对内皮型一氧化氮合酶的保护作用可能是通过调节其上游信号分子Akt的蛋白水平而实现的.     

前纤维蛋白1在糖基化终末产物介导内皮损伤中的作用

目的通过体外培养的人脐静脉内皮细胞,探讨糖基化终末产物对内皮细胞的损伤及与前纤维蛋白1的关系。方法在体外培养的内皮细胞,分别用不同浓度(100、200、400 mg/L)糖基化终末产物孵育不同时间(6、12、24、48 h),采用Western blot检测细胞前纤维蛋白1的表达,免疫荧光染色检测前纤维蛋白1的表达和F肌动蛋白形态及分布,同时检测细胞上清液非对称性二甲基精氨酸、一氧化氮、细胞间黏附分子水平和细胞内活性氧的水平。结果糖基化终末产物呈时间依赖性上调内皮细胞前纤维蛋白1的表达,以200 mg/L糖基化终末产物作用最为明显;对照组F肌动蛋白分布在细胞周边,分布均匀,细胞间连接紧密;200 mg/L糖基化终末产物处理24 h后,细胞内F肌动蛋白形态和分布发生明显改变,同时伴有胞浆中前纤维蛋白1的表达增高;200 mg/L糖基化终末产物孵育内皮细胞24 h可显著降低一氧化氮水平,升高非对称性二甲基精氨酸、细胞间黏附分子、活性氧水平,诱导内皮细胞损伤;用siRNA干扰前纤维蛋白1表达可显著抑制糖基化终末产物诱导的内皮损伤,表现为降低细胞前纤维蛋白1的表达,明显改善F肌动蛋白的结构和分布,增加一氧化氮的生成,降低非对称性二甲基精氨酸和细胞间黏附分子的水平。结论糖基化终末产物通过上调前纤维蛋白1的表达诱导血管内皮细胞损伤。     

Lysophosphatidylcholine regulates human microvascular endothelial cell expression of chemokines

The role of lysophosphatidylcholine (LPC) in the induction of MCP-1, IL-8 and RANTES, which are chemotactic factors to monocytes, neutrophils and lymphocytes, respectively, by human vascular endothelial cells (EC), was examined. LPC induced the expression of MCP-1 and IL-8 in a concentration- and time-dependent manner in microvascular EC (MVEC) and in large vessel EC from aorta, pulmonary artery and umbilical vein. LPC also induced RANTES in MVEC but not in large vessel EC. Signaling pathways responsible for LPC induction of chemokines were examined in MVEC. LPC and TNFalpha, a cytokine secreted in sites of inflammation, additively stimulated RANTES expression. LPC did not augment TNFalpha induction of MCP-1 or IL-8. A platelet-activating factor receptor antagonist (BN52021) failed to block LPC induction of MVEC chemokines, but the G(i)-protein inhibitor pertussis toxin partially blocked LPC induction of RANTES and IL-8. LPC activated multiple kinases in MVEC; it increased the phosphorylation of ERK1/2, AKT and p38 MAP kinase in a time-dependent manner. An inhibitor of the MAPK/ERK pathway, PD98059, blocked the phosphorylation of ERK1/2 and RANTES induction by LPC, but augmented IL-8 induction. LY294002, a specific inhibitor of phosphoinositide 3 kinase (PI3 kinase), blunted the phosphorylation of AKT and inhibited LPC induction of RANTES more strongly than IL-8. Inhibition of p38 MAP kinase pathway by SB202190 also blocked LPC-induced expression of IL-8 and RANTES. Our results suggest that LPC induction of chemokines in MVEC is distinct from that in large vessel EC, and required the activities of MAP kinases and PI3 kinase for the induction of RANTES and IL-8. We speculate that the presence of LPC, a bioactive lipid product of phospholipase A(2) (PLA(2)) and a constituent of oxidized low-density lipoprotein, can differentially influence the chemotaxis of particular leukocyte subpopulations during inflammation.     

L-精氨酸对高糖引起内皮功能失调的保护作用

目的通过研究L-精氨酸和N^G-硝基-L-精氨酸-甲基酯对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮和超氧阴离子的影响以探讨L-精氨酸对高糖引起内皮功能失调的保护作用。方法不同浓度L-精氨酸、N^G-硝基-L精氨酸-甲基酯、葡萄糖和胰岛素加入体外培养的人脐静脉内皮细胞，24h后分别测定细胞培养液中一氧化氮舍酶和超氧化物歧化酶活性及一氧化氮和超氧阴离子浓度。结果25mmol／L葡萄糖使内皮细胞一氧化氮合酶活性增高，一氧化氮产生增加，超氧化物歧化酶活性下降，超氧阴离子产生增加；L-精氨酸对一氧化氮舍酶、一氧化氮、超氧化物歧化酶的影响与对照组相比无显著性差异（P〉0．05）。但可以使超氧阴离子产生减少；25mmol／L葡萄糖＋L-广精氨酸使内皮细胞一氧化氮舍酶活性增强，一氧化氮产生增加，L-精氨酸可以改善高糖引起的超氧阴离子升高。不同浓度的胰岛素使内皮细胞一氧化氮合酶活性增高，一氧化氮产生增加，对超氧化物歧化酶活性和超氧阴离子产生无明显影响；不同浓度胰岛素＋L-精氨酸使内皮细胞一氧化氮合酶活性增强，一氧化氮产生增加，对超氧化物歧化酶活性无明显影响，但可以使超氧阴离子水平降低。100μmol／LN^G-硝基-L-广精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降，一氧化氮产生减少，对超氧化物歧化酶活性无明显影响，但使超氧阴离子产生增加；25mmol／L葡萄糖＋N^G-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降，一氧化氮产生减少，但对高糖引起的超氧化物歧化酶活性下降和超氧阴离子升高无明显影响。10mu胰岛素＋10μmol／L N^G-硝基-L-精氨酸．甲基酯和100mu胰岛素＋100μmol／L N^G-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降，一氧化氮产生减少，对超氧化物歧化酶活性无明显影响，但使超氧阴离子升高。结论L-精氨酸对一氧化氮合酶、一氧化氮、超氧化物歧化酶无明显影响，但可以使超氧阴离子产生减少；N^G-硝基-L-精氨酸-甲基酯使内皮细胞一氧化氮合酶活性下降。一氧化氮产生减少，对超氧化物歧化酶活性无明显影响，但使超氧阴离子产生增加。