血清LDL—VLDL—GGT测定及其影响因素的实验探讨

本文报道了血清中与LDL、VLDL 结合的γ-谷氨酰转肽酶(LDL-VLDL-GGT)活力的测定方法.以磷钨酸钢—MgCl_2沉淀血清中LDL-VLDL-GGT,采用Tris-双甘肽缓冲系统.γ-谷氨酰对硝基苯胺作底物。测定血清总GGT 与上清液GGT 活力,两者之差值即为LDL-VLDL-GGT 活力.本法重复试验CV6.7～10%.线性范围达474.2U/L.正常参考范围<13.6U/L,男女差异不显著.初步临床应用提示本法结果对肝癌鉴别诊断有一定价值.     

MPT-NAG测定N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的应用价值

目的 应用新型底物6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)建立检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的紫外动力学新方法,用于尿液中NAG活性测定.方法 基于NAG催化水解对硝基苯-N-乙酶-β-D-氨基葡萄糖苷生成有色的对硝基酚这一反应,对缓冲液离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了多种病尿样中NAG活活性.结果 该法最低检出限为1.5 U/L,线性范围可达250 U/L(r=0.998 9),批内CV为＜3%,批间CV＜5%,回收率为101.3%.结论 本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,且操作简便快速,适用于全自动生物化学分析仪操作.     

酶循环法测定血清总胆汁酸

目的　建立血清总胆汁酸 (TBA)测定的酶循环法。方法　基于用脱氢酶 辅酶体系循环底物的原理 ,建立了本法。结果　本法灵敏度 5 0 μmol/L ,A40 5nm ,1cm>0 .15 ;线性达 180 μmol/L ;批内CV <1.87% ,日间CV <2 .94 % ,总CV <3 .64% ;与普通酶显色法比较 :Y =0 .92 1X - 1.4 2 6,r=0 .9982 ,n =64。胆红素 <85 0 μmol/L、血红蛋白 <5 g/L、抗坏血酸 <2 .84mmol/L、乳酸 <2 4mmol/L、乳酸脱氢酶 <10 0 0 0U/L时 ,对结果无显著干扰。结论　本法灵敏度高 ,线性、精密度好 ,几乎无干扰 ,是一种理想的TBA测定方法。     

2-氯-4-硝基苯-α-L-岩藻糖苷测定α-L-岩藻糖苷酶及性能评价

目的 应用2-氯-4-硝基苯-α-L-岩藻糖苷(CNP-AFU)建立检测α-L-岩藻糖苷酶(AFU)活力的动力学法,用于血清中AFU活性测定.方法 基于动力学反应特点,对缓冲液离子强度、pH值、底物浓度等最佳反应条件及各种实验参数进行研究.用该法在AU400全自动生化分析仪上进行相应的性能分析研究.结果 该法最低检出限为2.5 U/L,线性范围可达250 U/L(r=0.999 4),批内CV＜3%,批间CV＜5%,回收率为101.3%.结论 本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,且操作简便快速,适用于全自动生化分析仪操作.     

血清γ—谷氨酰移换酶连续监测法

本文参照IFCC推荐的GGT测定参考方法,用γ-L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(Glu CANA)作供体底物,对连续监测法的实验条件进行了探讨。Glu CANA 水溶性好,非酶水解程度小,试剂稳定,易保存.应用RSM 对GGT 的最适测定条件进行分析,确定Glu CANA(A)和双甘肽(B)的最适浓度分别为6mmol/L 和150mmol/L。最适pH7.90(30℃).K_m~A=0.73mmol/L.K_m~B=16.2mmol/L。5-氨基-2-硝基苯甲酸ε_(410nm)=791.66m~2·mol~(-1).实验表明,100mmol/L Tris 对GGT 活性有轻度抑制.OCV=1.72～3.1%,RCV=2.85～4.43%。酶活性在460U/L 内呈线性关系.132名健康成人血清GGT 结果(x±S,30℃)男性(n=70)为16.94±7.9U/L。女性(n=62)为11.57±6.88U/L。男女两组均值差异显著.     

L-吡咯烷酮酰-4-硝基苯胺的合成及其临床应用

[目的]制备L-吡咯烷酮酰-4-硝基苯胺，用吡咯烷酮芳胺酶（PYRase）法快速检出链球菌等病原菌。[方法]采用L-谷氨酸与水加热生成焦谷氨酸，再与对硝基苯胺反应制得L-吡咯烷酮酰-4-硝基苯胺；将其制成酶底物纸片，对底物浓度、最适pH、反应温度及时间进行了探讨，确定了实验的最佳条件。[结果]本法底物最佳浓度为2mg／ml，最适pH7．2，反应温度37℃，反应时间10min。以此条件用自制底物与进口品进行比较其效果完全一致。鉴定了标准菌株9株，临床分离菌株154株。正确率达100％。[结论]本法可代替常规检验方法提前2～3d报告结果，为链球菌等鉴定提供了一种快速、简便、准确的新方法。     

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的方法学研究

本文研究了甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)的最佳测定条件。最适pH8.6,Km 值为1.91±0.08mmol/L,选用158mmol/L Tris、64mmol/L 双甘氨肽、10 mmol/L 底物。酶促反应速度在70分钟内呈线性,酶活力在600U/L 内呈线性。高、中,低活力标本批内变异1.7～3.1%,批问变异3.8～6.7%,标本置4℃一周,结果无明显变化。168例健康者GPDA 为150.1±49.8(2SD)U/L,同时研究了测定管、底物空白、对硝基苯胺的光学吸收特性,观察了GPA 试剂在不同pH 和不同时间的变化规律。     

尿酶NAG改良速率法测定及其临床应用

目的对尿酶NAG速率法[2]测定进行改良,以求克服底物不溶解现象和提高底物缓冲液的稳定性,进而提高本法的灵敏度。方法用冠醚(0.2%)改进底物的溶解度;用NAGase酶直接配制的校正液和质控液,且将其定值按国内通用的参考值进行修正,以保证定值的正确性和实用性。结果改良后的试剂克服了底物不溶解现象,底物缓冲液的稳定性从一天增加到五天。新试剂的精密度为CV2.9～5.2%;回收率94.1～107%;线性范围0～150U/L,高活性尿样的等速反应时相大于10分钟。本法参考值范围为<21.6U/L。结论126例临床应用证明本法虽未能按文献报导说明一些肾病的早期发现方面的灵敏性(由于收集的病种所限),但仍足以说明本法对常见肾病的检出能力。     

尿酶NAG改良速率法测定及其临床应用

目的对尿酶NAG速率法[2]测定进行改良,以求克服底物不溶解现象和提高底物缓冲液的稳定性,进而提高本法的灵敏度.方法用冠醚(0.2%)改进底物的溶解度;用NAGase酶直接配制的校正液和质控液,且将其定值按国内通用的参考值进行修正,以保证定值的正确性和实用性.结果改良后的试剂克服了底物不溶解现象,底物缓冲液的稳定性从一天增加到五天.新试剂的精密度为CV 2.9～5.2%;回收率94.1～107%;线性范围0～150U/L,高活性尿样的等速反应时相大于10分钟.本法参考值范围为＜21.6U/L.结论126例临床应用证明本法虽未能按文献报导说明一些肾病的早期发现方面的灵敏性(由于收集的病种所限),但仍足以说明本法对常见肾病的检出能力.     

以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性

目的 评价以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MNP-NAG)为底物的全液体试剂两点终点法测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性.方法 尿样中NAG作用于底物MNP-NAG水解产生游离MNP,其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果 该法显色最大吸收波长为505 nm,试剂1和试剂2最适pH值分别为4.6和10.2,最适底物浓度为16 mmol/L,线性范围达198 U/L,批内变异系数(CV)和批间CV分别为2.2%和3.8%.166例健康体检者尿样NAG活性参考范围为:(6.21±4.53)U/gCr((x)±1.96 s).结论 MNP-NAG底物法测定尿NAG灵敏度高,操作简便,结果可靠,适合临床应用.     

血清血管紧张肽-转换酶简易的酶法测定

本文作者介绍了一种简单的动力学酶法测定血管紧张肽-转换酶(ACE)活性的方法。首先,ACE与底物质马尿酰-甘氨酰-甘氨酸(Hip-Gly-Gly)反应释出Gly-Gly,接着在γ-谷胺酰转移酶(GGT)催化反应中,Gly-Gly作为受体底物从供体底物L-γ-谷胺酰-3-羧基-4-硝基替苯胺(GGCN)转移γ-谷胺酰基团。反应中释放的3-羧基-4-硝基替苯胺可于410nm测定。反应式如下:     

尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶连续监测法试剂盒性能评估

本文就国产尿液 NAG活力连续监测法试剂盒进行了评价。该试剂盒酶促反应延迟时间应选为 3m in,监测时间选择 6 0 s。线性 0～ 15 0 U / L ,r=0 .9998,线性误差小于 7%。重复实验 ,水平 批内为 2 6 .3± 1.1U / L ,CV4.2 % ,随机误差 8.2 % ;批间 s 1.77U / L ,CV 6 .7% ,随机误差 13.2 %。水平 批内 91.3U / L± 2 .43U / L ,CV2 .6 % ,随机误差 5 .2 % ;批间 s 4.44 U / L ,CV 4.9% ,随机误差 9.5 %。平均回收率 99.5 %。测定体检健康者尿样 6 0例 ,经统计学分析 ,结果呈偏态分布 ,男女间差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,单侧 95 %上限为 2 .4U / mm ol Cr(37℃ )     

淀粉酶亚乙基-对硝基酚-麦芽庚糖法动力学研究

目的观察影响α-淀粉酶对底物亚乙基-对硝基酚-麦芽庚糖催化的实验条件。方法观察不同温度、pH、底物浓度、酶量和无机离子对酶促反应速度的影响。结果选择25℃、37℃及56℃观察对酶活性的影响,以37℃为合适的反应温度;在pH 6.8,7.2,7.8和8.4反应条件下,pH 7.2时为酶的最适pH;反应速度与酶的浓度成正比例关系;N aC l,M gSO4为诱导剂,N aF为抑制剂;底物浓度对反应速度的影响,底物浓度低于0.625 mm ol/L的反应呈一级反应,高于5 mm ol/L的反应呈零级反应。以林氏方程图解:-1/Km=-3,换算成Km=0.33 mm ol/L;1/Vm=0.0065;换算成Vm=153.8IU/m inL。结论观察到温度、pH、底物浓度、酶量与无机离子等实验条件影响淀粉酶亚乙基-对硝基酚-麦芽庚糖法测定结果。     

单一酶试剂快速测定血清鸟嘌呤脱氨酶

本文介绍用单一酶试剂测定血清鸟嘌呤脱氨酶,并进行了实验探讨.批内CV 为2.14～2.72%,批间CV 为4.81～5.01%,Km 为1.2×10~(-2)mmol/L.本法采用0.27mmol/L 的底物浓度为Km 的22.5倍.最适pH8.0,光吸收峰为550nm 波长.76名正常成年人血清乌嘌呤脱氨酶活性(?)±SD 为4.28±1.87U/L.32例早期急性肝炎患者血清鸟嘌呤脱氨酶活性除2例正常外,其他均显著高于正常人,(?)±SD 为33.72±11.87U/L(P<0.001)。     

连续监测法测定血清丙氨酸氨基肽酶

目的　建立血清丙氨酸氨基肽酶 (AAP)连续监测法。方法　以丙氨酰对硝基苯胺 (Ala pNA)为底物 ,研究AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP水平。结果　酶反应最适pH8 0 ,Tris HCl缓冲液的最佳浓度 15 0mmol/L ,Ala pNa浓度以 3mmol/L为宜 ,米氏常数 (Km) 0 74mmol/L ,在 8min观测时间内吸光度变化与时间成比例 ,线性范围可达 180 0U/L ,平均批内、批间CV分别为 1 0 4%和 2 0 2 %。 2 0mmol/L甘油三酯、2g/L血红蛋白、340 μmol/L胆红素对酶活力测定无干扰 ,正常成年人群参考范围 ( x± 2s) 4 1～ 77U/L。肝胆疾病组血清AAP明显高于健康对照组。结论　血清AAP活力是鉴别诊断肝胆疾病的一项特异、灵敏的指标 ;连续监测法适用于各种类型的自动化分析仪 ,便于临床推广     

血清胰弹性蛋白酶-I连续监测法实验探讨

目的　建立简便、快速、准确的方法检测血清胰弹性蛋白酶 I(pancreaticelastase I,PE I)。方法　选择高敏感底物琥珀酰 (L 丙氨酸 ) 3对 硝基苯胺 (Suc Ala 3pNA) ,在 4 0 5nm处测定产物吸光度的变化 ,得出PE I的活性。结果　最适底物浓度为5 .0mol/L ,Km为 0 .4 6mmol/L ,最适pH为 8.0 ,批内CV 2 .81 % ,批间CV 4 .5 9% ,线性可达 30 0U/L。 30例健康体检者此酶活性为 (1 3± 3)U/L ,2 6例临床已确诊轻型胰腺炎 (单纯水肿型 )和 1 8例重型胰腺炎 (出血坏死型 )此酶活性分别为 (78± 31 )U/L和(1 39± 4 5 )U/L ,胰腺炎各组与对照组比较均有显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,单纯水肿型和出血坏死型胰腺炎比较有显著性差异 (P<0 .0 1 )。PE I诊断急性胰腺炎敏感性 85 % ,特异性 93% ,阳性预期值 94 % ,阴性预期值 85 %。结论　该方法简便、快速、准确、灵敏 ,可用于自动化分析     

F-DAOS色原的酶法测定血清肌酐试剂盒的评价

目的根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)相关文件,评价N-乙基-N-(2-羟-3-磺丙)-3,5-二甲氧-4-氟苯胺(F-DAOS)酶法肌酐(Cr)试剂盒.方法采用F-DAOS酶法试剂盒测定血清Cr,并对精密度、线性范围、干扰因素及相关性进行分析.结果精密度批内变异系数(CV)为1.24%～2.15%,批间CV为2.33%～3.95%,总CV为2.52%～4.27%,线性达2 870 μmol/L,r=0.996.与Roche同类试剂对照,r=0.989 4.上海市临床检验中心质控血清测定偏差值≤2.06%.胆红素＜684 μmol/L、血红蛋白＜5.0g/L、维生素C＜500 mg/L时对本法无干扰.参考值男性为55.8～136.2μmol/L,女性为36.8～111.2 μmol/L.结论采用F-DAOS色原的酶法测定血清Cr的方法特异性好,精密度高,结果准确,有一定推广价值.     

血清脂肪酶速率比浊法

本文报道了适合国内条件的血清脂肪酶(LPA)速率比浊法。用纯化橄榄油作底物,浓度为273.6μmol/L,缓冲液pH9.8,去氧胆酸钠浓度为1g/L.两份血清作重复测定,CV 为4.68～5.2%,精密度优于国内报道的快速比浊法.在不加昂贵的辅脂肪酶的条件下,基本解决了正常血清用固定时间的快速比浊法几乎测不出LPA 活性的问题。测定103例(男52例,女51例)献血员血清,LPA 活性全距为0～39.7U/L;百分位数法求得95%上限30.75U/L;男女之间无显著差别(P>0.9)。本法简单快速,反应在5分钟内完成,能满足急诊需要。     

液体单试剂酶法测定血清碳酸氢根

目的建立一种稳定的单试剂酶法测定血清碳酸氢根(HCO3-)。方法利用自配单试剂建立了两点法的检测方法,可满足全自动和手工测定,用Bayer 1650生化仪对本方法进行方法学评价。结果本法的线性范围可达50 mmol/L,批内变异系数(CV)为2.48%,批间CV为3.24%,平均回收率102.8%,与血气分析仪(X)相关良好,Y=1.019X-0.745,r=0.990 3,黄疸、脂血、溶血标本对结果几乎无影响,健康人静脉血HCO3-浓度为21.5~32.3 mmol/L。结论本法操作简便、反应特异、灵敏准确、试剂较稳定,适用临床检测。     

改良血清单胺氧化酶测定法及临床应用

目的建立一种新的血清单胺氧化酶（MAO）测定法,以提高检测MAO活力的特异性和准确性。方法用3-甲基-N-乙基（β-羟乙基）苯胺（MEHA）为色原系统进行患者血清MAO活力测定。结果对缓冲液最适浓度、pH和种类的选择非常重要,可提高灵敏度,线性范围为0～250U／L,正常值范围为30U／L内,回收率为92．4％～102．6％,精密度：批内CV=2．5％～4．0％,批间CV：3．3％～4．5％。与二硝基苯肼比色法比较,相关性良好（r=0．986）。结论本法具有高度的特异性和准确性,操作简便,灵敏快速,标本用量少,结果稳定,对肝硬化的诊断有非常重要的作用。