S100A4 siRNA对人胰腺癌BxPc-3细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的观察利用小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）技术下调人胰腺癌BxPc-3细胞中钙结合蛋白S100A4表达后对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法设计合成针对S100A4的特异性siRNA,转染至人胰腺癌BxPc-3细胞,以Western印迹检测转染前后S100A4蛋白表达变化;克隆形成率实验检测转染前后BxPc-3细胞增殖能力;Transwell小室模型检测转染前后BxPc-3细胞迁移和侵袭能力变化。结果 Western印迹结果显示BxPc-3细胞转染S100A4siRNA48h后,S100A4蛋白表达明显下调;Transwell小室验证转染S100A4siRNA后细胞的迁移和侵袭能力明显降低。结论本研究结果表明,S100A4表达下调后可抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,提示S100A4可以作为一个潜在的肿瘤治疗靶标。     

RNA干扰沉默cyclin D1基因表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭力的影响

 目的 利用RNA干扰技术下调cyclin D1基因表达,探讨其对乳腺癌细胞体外侵袭和迁移能力的影响,了解cyclin D1在肿瘤细胞转移的作用.方法 设计cyclin D1基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段siRNA51和siRNA52,脂质体介导转染入乳腺癌MDA-MB-231细胞株.应用Western印迹法检测转染前后cyclin D1表达水平;通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化,Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭力.结果 乳腺癌MDA-MB-231细胞株转染cyclin D1的siRNA后,cyclin D1蛋白水平明显下调,细胞的迁移及侵袭能力明显减弱.结论 利用RNA干扰技术能够特异阻断cyclin D1基因表达;cyclin D1基因表达下调能够明显抑制乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力.     

人重组蛋白DKK1对口腔鳞癌干细胞迁移及侵袭能力作用

目的探讨DKK1通过靶基因调节Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞癌干细胞迁移及侵袭能力的作用。方法培养并鉴定口腔鳞癌干细胞,并将细胞分为3组,分别为空白对照组(A组),未转染siRNA;阴性对照组(B组),转染Stealth~(TM) RNAi的阴性对照;DKK1 RNAi组(C组),转染DKK1 Stealth~(TM) Select RNAi。利用实时定量PCR(RT-PCR)检测3组的转染效率及口腔鳞癌干细胞中Wnt3a、Pitx2、Oct4 mRNA的表达情况。运用划痕实验和Transwell侵袭实验检测DKK1对口腔鳞癌干细胞迁移和侵袭的影响。结果流式细胞仪检测CD44及CD133表达量分别为88.0%及92.8%,提示所培养细胞为口腔鳞癌干细胞。瞬时转染后,应用RT-PCR检测提示,C组Wnt3a、Pitx2及Oct4 mRNA表达量较A组分别下降59.8%、70.7%和66.0%(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,A、B、C组24 h的划痕愈合率分别为(54.32%±3.21%)、(49.46%±3.75%)和(14.13%±1.96%),组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell实验结果显示,A、B、C组中穿透细胞膜的细胞数目分别为(115.6±14.3)个、(131.2±19.5)个和(37.3±6.8)个,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DKK1可以通过抑制Wnt3a,从而调控Wnt/β-catenin信号通路,进而抑制口腔鳞癌的转移及侵袭。     

ING5基因对乳腺癌细胞Bcap-37恶性表型的影响

目的 研究生长抑制因子5(ING5)基因对人乳腺癌细胞Bcap-37增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响.方法 稳定转染pEGFP-N1-ING5真核表达载体和pEGFP-N1空载体至Bcap-37细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR方法筛选ING5高表达细胞株.将Bcap-37-ING5细胞作为实验组,Bcap-37-GFP细胞为空载体组,Bcap-37为空白对照组.采用MTT法检测ING5对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移情况.结果 稳定转染后获得稳定表达GFP标记的ING5蛋白的Bcap-37细胞株.ING5过表达可以抑制乳腺癌Bcap-37细胞增殖并导致G2期阻滞,诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移(P<0.05).结论 ING5过表达可逆转乳腺癌Bcap-37细胞的恶性表型,可作为乳腺癌预后判断和基因治疗的分子靶标.     

过表达迁移侵袭抑制蛋白基因对人巨细胞病毒转染U87细胞特性影响

目的探讨过表达迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因对人巨细胞病毒(HCMV)感染的神经胶质母细胞瘤U87细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法采用过表达的MIIP基因慢病毒转染HCMV感染的U87细胞,通过Western-blot检测其转染效率,并将细胞分为为实验组(U87+HCMV/MIIP)、对照组(U87+HCMV/CMV4)和空白组(U87+HCMV)。采用CCK-8检测过表达的MIIP基因对HCMV转染的U87细胞增殖情况的作用;采用Transwell迁移实验检测对细胞迁移情况的影响;采用Transwell体外侵袭实验检测对细胞侵袭能力的影响。结果实验组细胞的MIIP蛋白表达量与对照组和空白组比较,明显上调(P<0.05);细胞的增殖能力与对照组和空白组比较,明显降低(P<0.05);细胞的侵袭力与对照组和空白组比较,明显减弱,且细胞数显著下调(P<0.05);迁移能力与对照组和空白组比较,显著降低(P<0.05)。结论 HCMV感染的U87细胞在MIIP基因过表达后增殖、侵袭及迁移能力均受抑制。     

岩白菜素通过下调PI3K-AKT-mTOR通路抑制恶性胶质瘤的恶性生物学行为

目的 探究岩白菜素对恶性胶质瘤细胞的抑制作用及可能机制。方法 常规培养U251和U87细胞,以一定浓度梯度（0、0.5、1、2、4、8μM）的岩白菜素与U251和U87细胞共孵育,MTT法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测集落形成能力,Transwell小室迁移和侵袭实验检测纵向迁移能力,划痕愈合实验检测横向迁移能力,Hoechst细胞凋亡检测试剂盒检测凋亡,免疫印迹检测PI3K-AKT-mTOR通路的变化,MTT检测与PI3K抑制剂共孵育后岩白菜素对U251细胞抑制作用的变化。同时利用MTT评估岩白菜素对正常人脑胶质HEB细胞的细胞毒性。结果 与一定浓度梯度的岩白菜素共孵育后,MTT法检测发现U251和U87细胞的增殖能力以时间依赖性和浓度依赖性下降,平板克隆形成实验检测发现U251和U87细胞的集落形成能力浓度依赖性下降,Transwell小室迁移和侵袭实验检测发现U251细胞的纵向迁移和侵袭能力浓度依赖性下降,划痕愈合实验发现U251细胞的横向迁移能力浓度依赖性下降,Hoechst细胞凋亡检测试剂盒检测发现与一定浓度的岩白菜素共孵育后凋亡细胞增多,免疫印迹检测发现,总PI3K...     

长链非编码RNA DRAIC调控miR-181通过STAT信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA）DRAIC调控miR-181通过STAT信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR检测lncRNA DRAIC和miR-181在卵巢癌细胞株中的表达差异;双荧光素酶实验检测lncRNA DRAIC和miR-181之间的关系;平板克隆细胞实验和Transwell侵袭实验分别检测lncRNA DRAIC对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭行为的影响;裸鼠皮下成瘤实验检测lncRNA DRAIC对卵巢癌细胞成瘤能力的影响;Western Blot实验检测lncRNA DRAIC对JAK1/STAT2信号通路激活的影响。结果 SKOV3中lncRNA DRAIC的表达（2.51±0.26）高于COC1（2.31±0.21）,CAOV3（1.03±0.13）和A2780（1.93±0.12）细胞株（P<0.05）;SKOV3中miR-181的表达（2.55±0.31）高于CAOV3（0.76±0.11）和A2780（1.62±0.13）细胞株（P<0.05）,稍低于COC1细胞株（2.72±0.24）;DRAIC-siRNA转染卵巢癌细胞后,miR-181-WT的表达水平明显降低[（1.02±0.11）vs（0±0.05）,P<0.05],而miR-181-MUT的表达水平变化不大[（1.02±0.11）vs（0.96±0.08）,P>0.05];转染DRAIC-siRNA 48、60 h后,SOKV3细胞的增殖能力明显低于对照组;Transwell侵袭实验显示DRAIC-siRNA组的侵袭细胞数目[(186.4±12.4) vs (73.6±8.6),P<0.05]显著降低;划痕愈合实验显示DRAIC-siRNA组的细胞迁移距离比例[(2.53±0.24) vs (1.21±0.09),P<0.05]显著降低;裸鼠成瘤实验显示DRAIC-siRNA组平均肿瘤体积明显小于对照组[(1.135±0.09)cm3 vs (2.13±0.13)cm3, P<0.05],DRAIC-siRNA组平均肿瘤重量也显著低于对照组[(1.52±0.12)g vs (1.89±0.21)g,P<0.05];Western Blot实验显示DRAIC-siRNA组的磷酸化p-JAK1和p-STAT2蛋白表达水平相应下调,而同时过表达miR-181-mimic后,磷酸化p-JAK1和p-STAT2蛋白表达水平相应的恢复。结论 LncRNA DRAIC通过调控miR-181的表达激活JAK1/STAT2磷酸化进而影响卵巢癌细胞的恶性生物学行为的发生。     

NCAPH基因敲除对胰腺癌细胞增殖迁移及侵袭能力的影响

目的 探究NCAPH基因敲除对胰腺癌PANC细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 利用Oncomine数据库分析NCAPH在胰腺癌及其他癌组织中的表达水平;Kaplan-Meier plotter数据库分析NCAPH高低表达与胰腺癌患者预后的相关性;使用CRISPR/Cas9技术构建NCAPH基因敲除慢病毒建立NCAPH基因敲除细胞株;通过CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验及划痕实验检测敲除NCAPH基因对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,Western blotting检测MEK及ERK等蛋白的表达。结果NCAPH在胰腺癌、胃癌、结直肠癌及结肠癌组织中的表达均显著上调。Kaplan-Meierplotter数据库分析显示,NCAPH高表达组胰腺癌患者的预后不良(P<0.05);Western blotting检测结果显示,CRISPR/Cas9基因编辑技术能有效敲除胰腺癌PANC细胞系的NCAPH基因,从而抑制NCAPH蛋白的表达。CCK-8实验及克隆形成实验结果显示,与对照组相比,NCAPH敲除明显抑制了PANC细胞在48、72、96及120 h的增殖能力(0...     

过表达miR-26b-5p抑制HMGA1参与卵巢癌细胞上皮间质转化的机制

 目的 探究microRNA-26b-5p(miR-26b-5p)介导高迁移率族蛋白组A1(high-mobility group A1,HMGA1)基因参与卵巢癌上皮间质转化的机制。方法 对miR-26b-5p靶基因进行预测。qRT-PCR检测组织中miR-26b-5p和HMGA1的表达量。卵巢癌细胞分组转染后,qRT-PCR和Western Blot检测细胞中相关因子的mRNA和蛋白的表达量;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭,细胞划痕实验检测迁移能力。结果 卵巢癌组织中miR-26b-5p表达降低,HMGA1的表达升高(均P＜0.05)。miR-26b-5p mimic及sh-HMGA1组HMGA1和Vimentin表达降低而E-cadherin表达上调,且细胞侵袭和迁移降低(均P＜0.05);共转染miR-26b-5p inhibitor和sh-HMGA1,sh-HMGA1处理对上皮间质转化及细胞侵袭和迁移的抑制作用被逆转(均P＜0.05)。结论 过表达miR-26b-5p可抑制卵巢癌细胞中HMGA1和Vimentin表达并促进E-cadherin表达,降低细胞侵袭和迁移能力,从而抑制卵巢癌细胞上皮间质转化。     

DDX5基因表达下调对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭影响

目的探讨DDX5基因表达下调对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用慢病毒介导的DDX5-shRNA下调人胃癌HGC-27细胞中DDX5的表达。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹(Western blot)法验证下调效果。CCK8和平板克隆检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力的改变。结果 DDX5-shRNA可有效下调人胃癌HGC-27细胞中DDX5的mRNA和蛋白质表达。DDX5表达下调后,人胃癌HGC-27细胞的增殖受到抑制,24、48、72 h细胞增殖能力较转染了control-shRNA的细胞分别降低25.0%、33.3%和44.6%;转染了control-shRNA的细胞和转染了DDX5-shRNA的细胞克隆形成的数目分别为(162.6±10.3)个和(68.7±11.2)个,两组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);转染了control-shRNA的细胞和转染了DDX5-shRNA的细胞24 h迁移数目分别为(153.7±9.2)个和(78.0±6.7)个,两组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);转染了control-shRNA的细胞和转染了DDX5-shRNA的细胞24 h侵袭数目分别为(83.7±12.8)个和(40.2±7.6)个,两组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DDX5表达下调可明显抑制人胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移及侵袭,其有可能成为胃癌的治疗靶点。     

长链非编码RNA双特异性磷酸酶5假基因1对三阴性乳腺癌细胞生物学行为的作用

目的 探讨长链非编码RNA （long non-coding RNA,lncRNA）双特异性磷酸酶5假基因1（dual-specificity phosphatase 5 pseudogene 1,DUSP5P1）对三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）细胞生物学行为的作用。方法 采用实时荧光定量PCR法检测TNBC细胞系MDA-MB-231、4T1、MDA-MB-468及正常人乳腺导管上皮细胞MCF-10A中lncRNA DUSP5P1的表达水平;将MDA-MB-231细胞系分为对照组、sh-vector组和sh-DUSP5P1组,分别不感染慢病毒、只感染空载质粒及感染sh-DUSP5P1-慢病毒（lentivirus,lenti）。采用MTT实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力,Western Blot实验检测上皮标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin、Snail的表达。结果 TNBC细胞系MDA-MB-231、4T1及MDA-MB-468中lncRNA DUSP5P1的表达水平均明显高于正常人乳腺导管上皮细胞系MCF-10A（F=65.10,P<0.05）。细胞培养12、24、48、72 h后,sh-DUSP5P1组吸光度值（OD490值）明显低于对照组和sh-vector组（分别F=33.62,90.72,41.17,77.94;均P<0.05）。细胞培养7 d后,与对照组和sh-vector组比较,sh-DUSP5P1组克隆形成数明显下降（F=575.1,P<0.05）。敲减DUSP5P1后,TNBC细胞系MDA-MB-231侵袭和迁移能力明显下降（分别F=933.30,160.20;均P<0.05）,上皮标志物E-cadherin明显上升（F=6.21,P<0.05）,间质标志物Vimentin和Snail明显下降（分别F=100.11,227.37;均P<0.05）。结论 LncRNA DUSP5P1可能通过上皮间质转化过程促进TNBC细胞侵袭和迁移。     

Wortmannin抑制PDK信号通路对人甲状腺滤泡癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的 利用特异性PI3K抑制剂wortmannin抑制P13K信号通路,研究其对人甲状腺滤泡癌细胞CGTHW-1迁移和侵袭能力的影响,并初步探索其作用机制.方法 培养CGTHW-1细胞,用MTT法筛选wortmannin最佳作用浓度及时间.将细胞分为实验组和对照组(分别在血清饥饿和含血清两种条件下培养).对照组细胞未给予任何处理,实验组细胞用wortmannin进行处理.通过划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别观察wortmannin对细胞迁移及侵袭能力的影响.利用FITC标记的鬼笔环肽进行微丝免疫荧光染色,观察在wortmannin作用下细胞的形态学变化.免疫细胞化学SP法及半定量RT-PCR法检测wortmannin对细胞Racl蛋白、mRNA表达的影响.结果 在含血清培养液培养条件下,经wortmannin处理后,划痕伤口愈合速度减慢,CGTHW-1细胞侵袭至小室下层细胞数(13.8±3.03个)明显低于对照组(41.6±6.95个,P<0.01);wortmannin显著降低Racl蛋白及mRNA的表达(P<0.05).而在血清饥饿条件下,两组细胞迁移均受抑制,侵袭细胞数组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 wortmannin能有效抑制人甲状腺癌细胞迁移侵袭,其作用机制可能是通过抑制PI3K下游分子Racl,从而引起细胞骨架重构.PI3K及Racl可能成为抑制甲状腺癌转移的关键性分子.     

lncRNA GAS5通过下调miR-223的表达提高结肠癌细胞的放射敏感性

目的 探究生长特异抑制物5（lncRNA growth arrest-specific 5,lncRNA GAS5）通过靶向调控miR-223的表达对结肠癌细胞的放射敏感性的影响。方法 采用荧光定量PCR（qPCR）检测多种结肠癌细胞系中lncRNA GAS5的表达量,选择表达量较低的作为后续研究对象;细胞克隆实验检测过表达lncRNA GAS5对结肠癌SW480细胞放射敏感性的影响;通过生物信息学数据库starBase以及双荧光素酶报告基因实验预测以及验证lncRNA GAS5的靶基因miR-223;qPCR检测miR-223在多种结肠癌细胞系中的表达量,以及过表达lncRNA GAS5对SW480细胞中miR-223表达量的影响。结果 与人正常结肠上皮细胞（NCM460）相比,lncRNA GAS5在结肠癌SW480、LOVO、HT-29、SW620细胞系中的表达量显著降低（t=15.25、8.69、14.42、11.62,P<0.05）,其中在SW480细胞中的表达量最低;过表达lncRNA GAS5或者下调miR-223显著降低细胞的存活分数（8 Gy时lncRNA GAS5：t=13.51,P<0.05;anti-miR-223：t=14.93,P<0.05）,促进凋亡（lncRNA GAS5：t=8.30,P<0.05;anti-miR-223：t=7.32,P<0.05）,增加结肠癌细胞放射敏感性;生物信息学分析显示,lncRNA GAS5 3''端序列中包含与miR-223的结合位点,过表达/下调lncRNA GAS5后,miR-223的表达量下降/上升。结论 lncRNA GAS5通过靶向调控miR-223的表达促进结肠癌细胞凋亡、抑制其存活,从而提高结肠癌细胞的放射敏感性。     

Ras同源物基因家族成员B对肾透明细胞癌细胞生长及迁移能力的影响

目的研究干扰Ras同源物基因家族成员B（Ras homolog gene family member B,RhoB）表达后对肾透明细胞癌（renal clear cell carcinoma,RCCC）细胞生长及迁移能力的影响。方法检测RhoB在RCCC细胞中的蛋白表达水平,采用脂质体转染方法转染RhoB真核表达载体pcDNA3.0-Flag-RhoB和沉默RhoB的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）即si-RhoB序列及相应空载体和对照序列,应用Western Blot法检测转染后RhoB的蛋白表达情况,通过3-（4,5-二甲基吡啶-2-基）-5-（3-羧基甲氧基苯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,MTS]法、平板克隆和Transwell小室细胞迁移实验检测细胞生长和细胞迁移能力的变化。结果RhoB在RCCC细胞中表达降低。与转染空载体组比较,转染pcDNA3.0-Flag-RhoB重组质粒组RhoB的蛋白表达水平明显上调;与转染对照组比较,si-RhoB转染组RhoB的蛋白表达水平明显下调。在RCCC细胞786-O和Caki-1中,上调RhoB的表达后,在4、5、6 d经MTS法测定光密度值明显降低（P＜0.05）;在786-O细胞中上调RhoB表达后细胞克隆数明显减少;转染48 h后Transwell细胞迁移数明显减少（P＜0.05）。而下调RhoB表达后,细胞生长和Transwell细胞迁移数没有明显变化。在相对高表达RhoB的正常人肾小管上皮细胞中下调RhoB表达后细胞生长和细胞迁移数明显增多。结论过表达RhoB后明显抑制RCCC细胞生长和迁移能力。     

YAP1基因促进人甲状腺癌细胞生长与迁移

目的 构建带myc标签的人Yes相关转录调节蛋白1(YAP1)基因的真核表达载体,探讨YAP1对甲状腺癌BCPAP细胞增殖和迁移的影响.方法 采用聚合酶链反应(PCR)扩增YAP1的编码区序列,将其插入到pXJ40-myc载体中,构建pXJ40-myc-YAP1重组质粒并鉴定;质粒转染人甲状腺癌BCPAP细胞,Western印迹鉴定融合蛋白表达,细胞增殖实验(CCK-8法)、克隆形成实验、划痕实验检测细胞的生长、增殖和迁移能力的变化.结果 pXJ40-myc-YAP1质粒构建成功;转染BCPAP细胞后重组融合蛋白表达成功;细胞增殖实验、克隆形成及划痕实验证明YAP1可促进甲状腺癌细胞BCPAP的增殖和迁移.结论 带myc标签的人YAP1基因能在人甲状腺癌BCPAP细胞中表达,且可促进该细胞的增殖和迁移,为进一步研究YAP1在甲状腺肿瘤中的功能奠定了基础.     

透明质酸介导运动受体真核表达载体的构建及其对乳腺癌增殖和迁移的影响

目的 构建透明质酸介导运动受体(HMMR)真核表达重组质粒并在乳腺癌ZR75-1细胞中转染和鉴定,探究HMMR对乳腺癌细胞生长、增殖和迁移的影响.方法 采用PCR技术以人乳腺文库为模板扩增HMMR基因并与pcDNA3.0-FLAG载体在EcoR V和Xho Ⅰ酶切位点进行连接,构建真核表达载体(pcDNA3.0-FLAG-HMMR),并转染乳腺癌ZR75-1细胞;通过Western印迹法、CCK8实验和克隆形成检测HMMR基因表达对ZR75-1生长的影响,划痕实验验证真核表达载体对ZR75-1细胞迁移的影响.结果 经酶切鉴定及序列测序验证真核重组表达载体构建成功,并在ZR75-1细胞中表达;并且发现HMMR对ZR75-1细胞的增殖和迁移具有显著的促进作用.结论 构建的真核表达载体转染至ZR75-1细胞后,明显促进ZR75-1增殖和迁移,这为研究HMMR基因在乳腺癌发生发展机制奠定了基础.     

赖氨酸羟化酶2在原发性肝癌组织中表达及其对肝癌细胞迁移、侵袭影响

目的 探讨赖氨酸羟化酶2(PLOD2)在原发性肝癌（HCC）组织中的表达,以及抑制该基因对肝癌细胞HepG2迁移、侵袭的影响。方法 选取自2017年5月至2019年5月于鄂东医疗集团黄石市中心医院行手术治疗的93例HCC患者的癌组织及癌旁组织为研究对象。免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织PLOD2蛋白表达。分析HCC组织PLOD2蛋白表达与临床指标的相关性。培养肝癌细胞HepG2并分为PLOD2干扰组（转染PLOD2干扰序列）、阴性对照组（转染阴性对照序列）和空白组（不作任何处理）。实时荧光定量PCR检测PLOD2 mRNA表达,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 HCC组织PLOD2蛋白表达阳性率为77.42%(72/93),高于癌旁组织的33.33%(31/93),差异有统计学意义（P<0.05）。PLOD2蛋白阳性表达率与分化程度、TNM分期、淋巴结转移和微血管侵犯有关（P <0.05）。PLOD2干扰组PLOD2 mRNA相对表达量、24 h时划痕愈合率、侵袭细胞数低于阴性对照组和空白组,差异有统计学意义（P<0.05）。结...     

死亡相关蛋白激酶C末端对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用研究

目的 观察死亡相关蛋白激酶(DAPK)蛋白C-末端多肽(DCTP)对谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的作用,探讨DCTP抑制DAPK功能的机制.方法 采用PCR法扩增DCTP核酸片段,定向连接至质粒pEGFPN1、pIRES2-EGFP和pcDNA3.1(-),将重组质粒[pEGFPN1-DCTP、pIRES2-DCTP-EGFP和pcDNA3.1(-)-DCTP]转染至SH-SY5Y细胞中,筛选稳定细胞株.分析pEGFPN1-DCTP的表达产物在细胞中的定位.建立稳定表达DCTP的SH-SY5Y细胞.用MTT法、Hoechst33258染色法和流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞对谷氨酸的敏感性,用Western blotting检测细胞内DAPK的表达量以及磷酸化DAPK(p-DAPK)水平的变化.结果 谷氨酸对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用具有浓度依赖性,40mmol/L的谷氨酸对细胞的抑制率为51.7%.流式细胞仪检测结果显示,40mmol/L谷氨酸处理后细胞的凋亡率和坏死率分别为26.1%和27.7%,而正常培养细胞分别为0.08%和0%.谷氨酸诱导细胞凋亡时,p-DAPK表达下降.荧光显微镜观察可见DCTP定位于细胞质.用40mmol/L谷氨酸分别诱导转染pcDNA3.1(-)-DCTP和pcDNA3.1(-)质粒(对照质粒)的SH-SY5Y细胞,流式细胞仪检测结果显示,前者凋亡率为43.7%,而后者凋亡率为62.2%.Western blotting检测结果显示,在谷氨酸诱导下,与转染pIRES2-EGFP质粒(对照质粒)的SH-SY5Y细胞相比,转染pIRES2-DCTP-EGFP质粒的细胞内DAPK和p-DAPK水平均无明显变化.结论 DCTP基因的表达产物定位于SH-SY5Y胞质.DCTP可以抵抗谷氨酸诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡,但并不影响DAPK的磷酸化及其表达水平.     

XAV939对卵巢癌细胞侵袭迁移的影响及Wnt/β-catenin信号的抑制作用

目的 探讨XAV939对卵巢癌细胞侵袭转移方面的影响及其对Wnt/3-catenin信号转导途径的抑制作用.方法 采用MTT法检测XAV939对卵巢癌细胞活力的抑制作用,划痕实验观察XAV939对细胞迁移能力的影响,Transwell细胞迁移实验检测XAV939对卵巢癌细胞侵袭转移的影响,Western blot方法检测wnt1、β-catenin、TCF4蛋白以及基质金属硫蛋白9 (Metallothionein matrix protein,MMP9)的表达水平.结果 XAV939作用48 h后,抑制率明显上升,尤其浓度达到8μmol/L(31％±1％,P =0.034)、16 μmol/L(51％±4％,P=0.028),且划痕和Transwell实验结果显示XAV939能抑制卵巢癌的侵袭和转移.此外,western blot结果显示,wnt1、β-catenin、TCF4、MMP9的表达水平均有所降低.结论 XAV939通过Wnt/β-catenin信号通路来抑制卵巢癌细胞的侵袭和迁移.