胰淀素对大鼠糖代谢和胰岛素分泌功能的影响

观察了连续静脉注射胰淀素是否改变大鼠糖耐量以及胰淀素对高糖刺激离体胰岛细胞分泌胰岛素的影响。结果表明,高浓度胰淀素(26mg·kg~(-1)/h)可引起动物血糖水平明显升高。用10μmol胰淀素温育胰岛细胞,可使高糖刺激的胰岛素分泌量明显减少。     

大蒜素对自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞钙电流的作用

目的:观察大蒜素(Gar)对自发性高血压大鼠(SHR)肠系膜动脉平滑肌细胞L-型钙电流(LCa,L)的影响。方法:利用双酶-两步法消化得到单个大鼠肠系膜动脉血管平滑肌细胞,用全细胞膜片钳记录钙电流。在细胞池中灌流含Gar的细胞外液,观察药物对LCa,L的作用和门控机制及门控动力学参数的改变。结果:1Gar对ICa,L的抑制效应呈浓度依赖性和电压依赖性特征。刺激电位0 mV时,200μmol/L Gar可使ICa,L峰值密度由(-8.4±0.4)pA/pF降低为(-6.1±0.3)pA/pF;2药物可使ICa,L半激活电压V1/2右移,半失活电压左移及失活后恢复动力学减慢等环节可减少通道的开放和重复开放,从而减少ICa,L峰值密度和窗口电流。结论:Gar可能通过减少细胞的钙电流发挥降压效应。     

二十二碳六烯酸对低氧性肺血管收缩的影响及机制

目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠低氧性肺血管收缩的影响及电生理机制.方法 12只雄性SD大鼠随机分为两组:低氧组和低氧+DHA组.将大鼠三级肺动脉制备成去除内皮的血管环,急性缺氧溶液诱导血管环收缩后用二十二碳六烯酸处理血管环,测定其舒张血管的作用.建立大鼠肺动脉平滑肌细胞全细胞膜片钳法并观察二十二碳六烯酸对肺动脉平滑肌细胞膜上钾离子通道的作用.结果 二十二碳六烯酸(1 μmol/L、10μmoL/L)可显著舒张急性缺氧诱发的血管收缩(P＜0.05,n=6),最大舒张率为48.63％±9.16％.二十二碳六烯酸可显著激活总钾离子电流(P＜0.01).在指令电位+60 mV时,细胞外给予10μmol/L二十二碳六烯酸后,该电流由121.52±17.43 pA/pF增加至209.81±12.57 pA/pF.该钾电流为混合电流,能被蝎毒素和4-氨基吡啶部分阻断.二十二碳六烯酸(10μmol/L)对肺动脉平滑肌细胞大电导钙激活的钾离子通道可产生显著激活作用(P＜0.05,n=6),指令电压+60 mV时的增加率是125.21％±5.62％;对电压门控钾通道可产生显著抑制作用(P＜0.05,n=6),指令电压+60 mV时的抑制率是63.21％±7.32％.结论 二十二碳六烯酸可通过开放大电导钙激活的钾离子通道而舒张急性缺氧引起的肺血管收缩.     

生长抑素及质子泵抑制剂对大鼠胰腺腺泡细胞慢活化电压依赖性钾离子通道的影响

目的 通过检测慢活化电压依赖性外向钾离子通道电流(Iks)的变化,探讨生长抑素及质子泵抑制剂(PPI)对胰腺腺泡细胞慢活化电压依赖性钾离子通道及胰腺外分泌的影响.方法 分离SD大鼠胰腺组织,取得胰腺腺泡细胞悬液,用EPC10膜片钳放大器记录电压钳制下的不同组别胰腺腺泡细胞Iks的电流值并比较其间差异.分组如下:冲洗液处理为对照组,5μmol/L和20μmol/L 293B组,5 nmol/L促胰液素组,5 nmol/L促胰液素+100 nmol/L或10 nmol/L或1 nmol/L生长抑素组,0.3 mmol/L 8溴—环单磷酸腺苷(8Br-cAMP)组,0.3 mmol/L 8Br-cAMP+100 nmol/L生长抑素组,1 μmol/L乙酰胆碱(Ach)组,1μmol/L Ach+100 nmol/L生长抑素组,5 nmol/L促胰液素+10-5mol/L或10-6mol/L或10-7mol/L奥美拉唑组,1μmol/L Ach+10-5 mol/L或10-6 mol/L或10-7 mol/L奥美拉唑组.组间比较采用单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 大鼠胰腺腺泡细胞静息膜电位为(-40±0.8)mV,当去极化至+10 mV时,对照组的Iks为(420.0±3.2) pA.经5 μmol/L和20 μmol/L 293B作用后,大鼠胰腺腺泡细胞Iks减少为对照组的(60.4±4.2)％和(30.2±3.1)％(F=6.87,P＜0.05).5 nmol/L促胰液素刺激后,Iks增加为(823.0±2.2)pA,分别加入100 nmol/L、10 nmol/L和1 nmol/L生长抑素,Iks降低至(510.0±3.2)pA,(584.0±2.8)pA和(789.0±6.9)pA(F=5.67,P＜0.05);分别加入10-5 mol/L、10-6 mol/L和10-7mol/L奥美拉唑后,Iks峰值未见明显变化,分别为(806.5±3.6)pA,(814.8±3.2) pA和(816.3±2.9) pA (P＞0.05).1 μmol/L Ach刺激后,Iks的峰值为(966.0±3.2) pA;加入100 nmol/L生长抑素后,Iks峰值为(942.0±6.3)pA;分别加入10-5 mol/L,10-6 mol/L和10-7 mol/L奥美拉唑后,其Iks峰值未见明显变化,分别为(956.3±10.3) pA,(957.5±8.6)pA和(960.0±8.4)pA (P＞0.05).结论 生长抑素能抑制胰腺腺泡细胞慢活化电压依赖性钾离子通道的开放,PPI对该通道没有明显抑制作用.     

肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物对胰岛素表达和分泌的影响

目的探讨肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物(HGS)对胰岛素表达和分泌的影响。方法检测HGS,胰岛素和胰升血糖素在小鼠胰岛中的分布。检测不同浓度葡萄糖(5.5、11.1及16.7mmol/L)培养24h后NIT-1细胞HGS表达水平和胰岛素的分泌。观察siRNA沉默HGS表达后48h NIT-1细胞胰岛素的表达和分泌的变化。结果 HGS免疫阳性细胞特异性分布于小鼠胰腺的胰岛,并与胰岛素共定位于胰岛β细胞中,未见HGS和胰高血糖素阳性荧光双标细胞。不同浓度葡萄糖培养NIT-1细胞24h,5.5mmol/L组为(25.07±0.93)μIU/mg,11.1mmol/L组为(32.28±0.93)μIU/mg,16.7mmol/L组为(41.77±1.39)μIU/mg,NIT-1细胞分泌胰岛素水平逐渐增加(P0.01)。各组HGS蛋白水平也随葡萄糖浓度增加而逐渐增加(P0.05)。siRNA沉默HGS表达后NIT-1细胞内胰岛素的表达水平无明显变化,但胰岛素分泌水平减少(P0.05)。结论 HGS选择性表达于胰岛β细胞中,并调节胰岛素的分泌。     

丹参酮Ⅱ-A对大鼠心肌细胞L-型钙通道的影响

目的研究丹参酮Ⅱ-A对大鼠心肌细胞L-型钙通道的影响。方法采用酶解法制备大鼠心肌细胞,应用全细胞膜片钳技术检测大鼠心肌细胞L-型钙通道的电流密度和动力学。结果丹参酮Ⅱ-A对L-型钙通道有抑制作用。在0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L丹参酮Ⅱ-A作下,L-型钙通道的峰值电流密度分别为-13.34±1.06pA/pF、-10.46±0.75pA/pF、-7.62±0.50PA/pF和-4.69±0.18PA/pF,其抑制率分别为28.40%、52.14%和73.50%（n=8,P〈0.05）。结论丹参酮Ⅱ-A抑制大鼠心肌细胞L-型钙通道,降低L-型钙通道的电流密度,呈浓度依赖性。     

丹酚酸B对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流和L型钙电流的阻滞作用

目的研究从丹参中分离提取的药物单体——丹酚酸B对大鼠心肌细胞上的瞬时外向钾电流(Ito)、内向整流钾电流(IK1)和L型钙电流(ICa,L)的电生理学作用。方法用酶解法分离大鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录Ito、IK1和ICa,L。每个细胞采用加药前后自身对照,用含100μmol/L丹酚酸B的细胞外液灌流心室肌细胞,记录加药前、后的电流,所有数据均在细胞破膜后20min内完成。结果 100μmol/L的丹酚酸B对Ito和ICa,L具有抑制作用,使Ito和ICa,L最大激活峰值电流密度下降,电流密度-电压曲线下移;且丹酚酸B主要抑制Ito的快速电流成分Itof,而对Ito的缓慢电流成分Itos无明显作用。在60mV测试电压下,Itof的最大激活峰值电流密度从23.51±3.29pA/pF降为16.85±2.36pA/pF,抑制率为28.31%±10.6%(n=8,P0.05)。在-10mV测试电压下,100μmol/L丹酚酸B作用后ICa,L的最大激活峰值电流密度从-8.66±-2.40pA/pF降为-5.91±-2.14pA/pF,抑制率为31.84%±10.23%(n=11,P0.05)。丹酚酸B使Ito通道失活后的恢复减慢,但不改变ICa,L的通道动力学。丹酚酸B对IK1无显著作用。结论丹酚酸B对Ito和ICa,L具有阻滞作用,而对IK1无显著作用。     

胰淀素受体在胰淀素抑制胰岛β细胞功能中的作用

目的分析胰淀素受体在胰淀素抑制胰岛β细胞功能中的作用。方法胰淀素、胰淀素受体拮抗剂AC253单独及联合短时间作用于大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞后,ELISA及RT-PCR检测葡萄糖刺激胰岛素分泌及mRNA转录情况,共聚焦显微镜下观察高糖、磺脲类药物及KCl刺激下细胞内Ca2+浓度的变化,RT-PCR检测胰淀素短时间作用对胰淀素受体成分受体活性修饰蛋白(RAMP)mRNA表达的影响。结果胰淀素短时间孵育高糖刺激下胰岛素分泌由(2.08±0.35)ng/ml降至(0.73±0.24)ng/ml(P0.01),mRNA转录由(1.00±0.12)降至(0.39±0.09)(P0.01),加用AC253后胰岛素分泌升至(1.41±0.32)ng/ml,mRNA转录升至(0.62±0.08),与单用胰淀素组比较,差异有统计学意义(P0.05)。AC253可缓解胰淀素对高糖刺激下Ca2+升高的抑制作用,Ca2+总体变化水平和峰值由(650.155±4.818)和(1.154±0.011)升至(769.795±4.956)和(1.589±0.013)(P均0.01),同样AC253也可缓解胰淀素对磺脲类药物及KCl刺激下细胞内Ca2+升高的抑制作用。胰淀素短时间孵育未改变RAMP mRNA的表达。结论胰淀素受体可能参与了胰淀素抑制胰岛β细胞的胰岛素分泌、合成及对细胞内Ca2+浓度的调节。     

肺动脉平滑肌细胞钾电流记录方法的建立

目的 在肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)上建立钙离子激活钾通道(calcium-activated potassium channel,KCa)电流、电压门控钾通道(voltage-gated potassium channel,Ky)电流和内向整流钾通道(Inward rectifier channel,Ku)电流的记录方法 .方法 用急性酶解的方法 分离出单个大鼠PASMC,利用全细胞膜片钳方法 记录钾电流.结果 ①急性酶解分离得到高质量的单个大鼠PASMC,呈梭形,边界清楚,胞浆均匀透亮.②Kv电流可以被5 mmol/L4-AP明显抑制,使电流-电压关系曲线明显下移,在55 mV时,Kv电流密度从(133.86±7.36)pA/pF减少到(59.09±3.35)pA/pF(n=6,P<0.05).③1 mmol/L TEA对KCa电流有明显抑制作用,使电流-电压关系曲线明显下移,在55 mV时,KCa电流密度从(9.03±1.42)pA/pF减少到(2.12±0.52)pA/pF(n=7,P<0.05).④KATP电流可以被10 μmol/L尼可地尔激活,使电流-电压关系曲线明显上移,在50 mV时,Kv电流密度从(29.08±5.90)pA/pF增加到(88.90±7.98)pA/pF(n=10,P<0.05).结论 在肺动脉平滑肌细胞上成功地建立了KCa、Kv和Kir电流的记录方法 ,可以为肺动脉相关疾病的发病机制和治疗方案的探索,提供有效的细胞模型基础.     

人参皂苷Rb1对大鼠心室肌细胞L型钙电流和瞬时外向钾电流的调控作用

目的 研究参松养心胶囊的药物单体-人参皂苷Rb1对大鼠心室肌细胞L型钙电流(Ica,L)和瞬时外向钾电流(Ito)的调控作用.方法 Langendroff灌流装置、胶原酶和蛋白酶混合急性分离大鼠心室肌细胞,用含40μmol/L的人参皂苷Rb1的细胞外液灌流心室肌细胞,每个细胞采用给药前后自身对照,标准的全细胞膜片钳技术记录Ica,L,Ito,所有数据均在细胞破膜后20min内完成,观察人参皂苷Rb1对Ica,L和Ito通道电流的影响.结果 40 μmol/L的人参皂苷Rb1对Ica,L和Ito均有抑制作用.在-10mV测试电压下,40 μmol/L的人参皂苷Rb1可使Ica,L的最大激活峰值电流密度从(- 11.423±-3.125)pA/pF下降至(-5.786±-2.976)pA/pF,抑制率为49.34％±9.78％(n=7,p＜0.05),电流密度-电压(I-V)曲线上移,但不改变激括电位、峰电位、反转电位以及曲线的形状;在+60mV测试电压下,40μ mol/L的人参皂苷Rb1 可使Itof的最大激活峰值电位从 35.342±3.126pA/pF下降至26.783±4.153pA/pF,抑制率为24.21％±8.35％ (n=8,p ＜0.05),I-V曲线下移.两通道电流经Boltemann方程拟合的稳态激活曲线给药前后无明显影响,但药物可使稳态失活增快以及失活后恢复减慢(n=7,p＜ 0.05),且人参皂苷Rb1主要抑制Ito的快速电流成分Itof(峰电位),对慢电流成分Itos(维持电位)无明显影响.结论 人参皂苷Rb1对Ica,L和Ito通道的电流有显著抑制作用,但不改变Ica,L的通道动力学.     

胰淀素对大鼠胰岛素分泌的影响及其机理的探讨

目的　为研究胰淀素（ Ａｍｙｌｉｎ） 对大鼠胰岛细胞分泌胰岛素的影响和机理。方法　用放免和荧光方法分别检测经不同浓度胰淀素温育的大鼠胰岛细胞的胰岛素分泌量、细胞内 Ｃａ 《及ｃ Ａ Ｍ Ｐ 含量。结果　在胰淀素１０μｍｏｌ／ Ｌ 组中高糖刺激下的胰岛素含量、细胞内 Ｃａ 《含量，细胞内ｃ Ａ Ｍ Ｐ 含量分别为０ ．８９ ±０ ．２１ｎｇ／ ｍｌ、６３ ±１０ｎｍｏｌ／ Ｌ、２９ ．３ ±３ ．３ｐｍｏｌ／１ ×１０６ 细胞与对照组（１ ．７５ ±０ ．４２ｎｇ／ｍｌ、１３５ ±１０ｎ ｍｏｌ／ Ｌ、３６ ．３ ±７ ．４ｐｍｏｌ／ Ｌ） 比较，其中胰岛素分泌量、细胞内 Ｃａ 《含量均明显降低， Ｐ＜ ０ ．０１ ，细胞内ｃ Ａ Ｍ Ｐ 含量有减少趋势。结论　高浓度的胰淀素抑制了胰岛细胞内 Ｃａ 《升高和／ 或细胞内ｃ Ａ Ｍ Ｐ 形成，可能是胰岛素分泌减少的原因之一。     

胰淀素对优降糖刺激大鼠胰岛素分泌作用的影响及其机制

目的研究胰淀素对磺脲类降糖药刺激大鼠胰岛细胞分泌胰岛素作用的影响和机制。方法用放免和荧光方法分别检测经不同浓度胰淀素温育后再行优降糖刺激试验的胰岛细胞胰岛素分泌量、细胞内Ｃａ２＋含量。结果在胰淀素５μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ组中,３ｎｍｏｌ／Ｌ优降糖刺激下的胰岛素分泌量分别为（３８±１０）μｇ／Ｌ、（２１±１０）μｇ／Ｌ,均比对照组（４９±０９）μｇ／Ｌ低（ｔ＝２３１３,Ｐ＜００５;ｔ＝５８８７,Ｐ＜００１）;细胞内Ｃａ２＋含量为（２７０±１５）ｎｍｏｌ／Ｌ、（１３０±１５）ｎｍｏｌ／Ｌ,均显著低于对照组（３３０±１８）ｎｍｏｌ／Ｌ,并呈剂量相关性（ｔ＝７２４３,Ｐ＜００１;ｔ＝２４１４３,Ｐ＜００１）。结论高浓度的胰淀素抑制优降糖刺激胰岛β细胞内Ｃａ２＋浓度增加可能是胰岛素分泌减少的机制之一。     

丹参素对豚鼠心室肌细胞L-型钙通道的影响

目的　研究丹参素对豚鼠心室肌细胞膜L 型钙通道的影响 ,探讨丹参素在离子通道水平的药理机制。方法　急性酶解法获得豚鼠的单个心肌细胞 ,用标准的全细胞膜片钳技术记录钙电流。结果　在保持电位 (Holdingpoten tial,HP)为 - 80mV ,预先去极化至 - 4 0mV ,再去极化至0mV ,波宽为 30 0mS的刺激参数下 ,可记录到一具有电压和时间依赖性内向的电流 ,当用含 1μmol/L硝苯地平的台氏液灌流时该电流被迅速消除 ,在灌流液中加入丹参素 1mg/mL和 10mg/mL ,1mg/mL组对钙电流无明显改变 (P >0 0 5 ,n =5 ) ,10mg/mL组使钙电流减少 [- (7 76± 0 85 )pA/pFvs - (2 6 2 6± 0 5 9)pA/pFP <0 0 5 ,n =8],并使心肌细胞钙电流 -电压曲线上移 ,原有的电流 -电压依赖特征不变。结论　丹参素浓度依赖性地抑制心肌L 型钙通道     

辛伐他汀抑制大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌的机制研究

目的 观察辛伐他汀对大鼠胰岛β细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)的抑制作用及其机制.方法 8周龄健康雄性Wistar大鼠60只,体重250～300 g,饲养1周内分批处死.采用胆管注射胶原酶法提取大鼠胰岛,将新鲜分离或经24 h培养的大鼠胰岛按体积大小分为对照组(胰岛数=60)和辛伐他汀组(胰岛数=60),对照组给予Kreb-Ringer碳酸氢盐缓冲液,辛伐他汀组以100μmol/L辛伐他汀水浴30 min或过夜培养24 h.两组经2.8、5.5、11.1、16.7、25.0 mmol/L葡萄糖刺激后,采用37 ℃水浴法观测胰岛β细胞GSIS变化,选用生物化学发光法测定腺苷三磷酸(ATP)含量.两组间数据比较采用t检验.结果 100 μmol/L辛伐他汀水浴30 min后,在25.0 mmol/L葡萄糖刺激下,胰岛β细胞ATP含量较相应对照组明显下降[(9.2±1.6)vs(12.1±1.9)pmol/胰岛,t=2.97,P＜0.05],GSIS较相应对照组明显减少(2.31±0.38 vs 3.19±0.41,t=3.154,P＜0.05).100μmol/L辛伐他汀过夜培养24 h后,在11.1 mmol/L葡萄糖刺激下,胰岛β细胞ATP含量较相应对照组明显降低[(9.2±1.4)vs(11.9±2.0)pmol/胰岛,t=2.514,P＜0.05];在2.8 mmol/L葡萄糖刺激下,胰岛素分泌即已明显受到抑制(0.28±0.03 vs 0.47±0.05,t=2.460,P＜0.05).辛伐他汀浓度超过30 μmol/L时,可剂量依赖性地抑制GSIS(2.49±0.21 vs 3.17±0.23,t=2.445,P＜0.05).结论 高浓度辛伐他汀可能通过抑制胰岛β细胞ATP生成而抑制GSIS.     

电压依赖性钾通道在京尼平苷调控大鼠胰岛素分泌中的作用

目的研究电压依赖性钾(Kv)通道在京尼平苷调控大鼠胰岛素分泌机制中的作用。方法采用放免法检测大鼠胰岛组织的胰岛素分泌情况,膜片钳技术记录胰岛β细胞Kv电流和动作电位时程(APD)。结果在8.3 mmol/L葡萄糖条件下,京尼平苷(0~100μmol/L)可剂量依赖性地增加胰岛素分泌含量,在10μmol/L时基本达最大促分泌效应,低糖(2.8 mmol/L)情况下则没有作用。膜片钳实验数据表明,京尼平苷剂量依赖性地(0~100μmol/L)降低Kv通道电流密度,并在10μmol/L的浓度下发挥最大抑制作用,并明显延长了动作电位时程。结论京尼平苷在胰岛β细胞中通过抑制Kv、延长APD发挥促胰岛素分泌作用。     

卡维地洛对老龄大鼠心房肌细胞起搏电流的作用

目的研究卡维地洛（Car）对大鼠心房肌细胞起搏电流（If）的影响，探讨其降低心房颤动的机制。方法选择22～24月龄SD大鼠分离心房肌细胞，利用全细胞膜片钳技术记录If。结果Car可明显降低老龄大鼠心房肌细胞的超极化激活起搏电流，在-150mV时，1．0μmol／L Car使If的电流密度从（3．2±0．4）pA／pF降至（2．4±0．3）pA／pF（P％0．01）。Car的抑制电流效应呈电压依赖性，即随着超极化电位的增加，Car的效应也增加。在0．1～30．0μmol／L的范围内，Car以浓度依赖性方式阻滞起搏电流，其IC50为1．37μmol／L（95％可信限为1．96～0．57μmol／L）。进一步，Car可以使If的稳态激活曲线向超极化方向移动，使半激活电压从（-87．5±2．3）mV移至（-96．2±4．7）mV。从而使电流激活减慢，这可能是其减少，If的主要原因。结论卡维地洛可明显降低老龄大鼠心房肌细胞起搏电流密度。     

糖毒性对TC1-6细胞胰升糖素分泌的影响

目的 探讨长期糖毒性对胰岛α细胞胰升糖素分泌的影响及其与α细胞胰岛素抵抗的关系.方法 TC1-6细胞(α细胞株)分别培养于含低浓度(5.5 mmoL/L)、中浓度(11.1 mmol/L)和高浓度(25 mmoL/L)葡萄糖的培养基中1～5天,检测胰升糖素分泌及其mRNA表达;加入不同浓度胰岛素6 h后,观察对培养5天的TC1-6细胞胰升糖素分泌的影响并以Western印迹检测高糖对TC1-6细胞Akt磷酸化的影响.结果 (1)与低糖培养相比,中、高浓度葡萄糖培养1天和3天的TC1-6细胞胰升糖素分泌无明显改变,而高糖培养5天时TC1-6细胞的胰升糖素分泌明显增高[(136.80±10.94 vs 78.62±4.72)ng/106细胞,P<0.05];另外,培养5天时胰升糖素mRNA的表达较1天时明显升高(P<0.05);(2)10-7mol/L胰岛素抑制低糖组TC1-6细胞胰升糖素的分泌[(21.59±1.30 vs 55.12±3.86)ng/106细胞],但仅能轻微抑制高糖组胰升糖素的分泌[(106.58±8.53 vs 117.18±10.55)ng/106细胞];当胰岛素增至10-5mol/L时,高糖组胰升糖素的分泌也受到抑制[(46.55±3.72 vs 118.61±10.68)ng/106细胞];(3)加入10-5mol/L胰岛素2h后,两组TC1-6细胞磷酸化Akt水平分别升高180%和70%,但高糖组明显低于低糖组,给予磷脂酰肌醇3激酶抑制剂后两组TC1-6细胞磷酸化Akt水平在低糖组抑制率明显高于高糖组.结论 高糖可增加TC1-6细胞胰升糖素的分泌,其可能的机制与TC1-6细胞胰岛素抵抗有关.     

KV通道对大鼠胰岛素分泌作用的研究

目的：研究电压依赖性钾通道（KV）在大鼠胰岛素分泌中发挥的作用,为糖尿病的治疗提供理论依据。方法用胶原酶P消化胰腺,经过 Histopaque 1077梯度离心后,在体式显微镜下分离得大鼠胰岛。用吖啶橙碘化丙啶（AO/PI）染色和胰岛素分泌实验来验证胰岛活性与功能,通过膜片钳技术记录KV电流和动作电位（AP）时程对大鼠胰岛素分泌的作用机制。结果分离获得的胰岛95%被AO/PI染成绿色;2.8mmol/L、8.3mmol/L葡萄糖情况下胰岛素分泌量分别是：（6.4±0.5）μIU/mL、（13.7±2.0）uIU/mL;TEA、MDL 12330A在8.3 mmol/L葡萄糖的基础上进一步增加了胰岛素分泌,抑制了 KV 电流,延长了 AP 时程,而在同样条件下 H89对胰岛素分泌、KV电流、AP时程均没有影响。结论采用胶原酶 P 消化法及 Histopaque 1077分离液离心分得的胰岛活性、功能良好,通过抑制β细胞KV电流延长 AP时程,增加胰岛素分泌。     

胰淀素抑制高糖刺激INS-1细胞内钙离子浓度升高的作用机制

 目的 分析阐明胰淀素短时间作用于INS-1细胞、抑制高糖刺激的细胞内钙离子浓度（［Ca²⁺］_i）升高的机制。方法 采用钙离子荧光指示剂Fluo-4/AM负载细胞后,激光共聚焦显微镜下连续动态观察INS-1细胞经胰淀素孵育前后在葡萄糖、KCl、咖啡因和卡巴胆碱存在条件下［Ca²⁺］_i荧光强度变化。结果 （1）单纯16.7 mmol/L葡萄糖刺激使细胞内钙离子荧光强度变化的曲线下面积（AUC）为990±16;0.5 μmol/L胰淀素使16.7 mmol/L葡萄糖刺激的胞内荧光强度有所下降（AUC为831±10）, 1.0、5.0、10.0 μmol/L胰淀素均可使细胞内荧光强度显著降低（AUC分别为555±9、535±6、531±5）,与单纯葡萄糖刺激组比较差异有统计学意义,且呈现剂量依赖趋势。（2）10.0 μmol/L胰淀素可使30 mmol/L KCl刺激的荧光强度明显减低,与单纯KCl刺激组相比（AUC：168±5比311±11）差异有统计学意义。（3） 10.0 μmol/L胰淀素预处理后咖啡因和卡巴胆碱刺激的胞内荧光强度与单纯咖啡因和卡巴胆碱刺激组相比差异无统计学意义。结论 高浓度胰淀素的短时间作用对INS-1细胞经咖啡因和卡巴胆碱刺激的内质网鱼尼丁受体(ryanodine receptor,RyR)、三磷酸肌醇(IP₃)钙库释放没有影响,但可使高糖及KCl刺激的胞内荧光强度降低。推测胰淀素短时间作用使 ［Ca²⁺］_i减少的现象,主要是通过影响膜上钙通道实现的,与胞内钙库的释放无直接相关性。     

溶血磷脂酰胆碱对心室肌细胞T型钙离子通道电流的影响及机制探讨

目的研究溶血磷脂酰胆碱(LPC)对心肌细胞T型钙通道电流(ICa,T)的影响并探讨其机制。方法新生大鼠心室肌细胞由酶法消化分离获得后,使用全细胞膜片钳技术记录LPC(10μmol/L)处理前后的搏动频率及ICa,T。表达人类心脏T型钙通道CaV3.1和Cav3.2亚基的人胚肾(HEK)293细胞通过传代培养获得。各种蛋白激酶抑制剂或蛋白激酶C(PKC)亚型特异抑制剂预处理1 h后,用全细胞膜片钳测定分别记录LPC处理前后的CaV3.1和Cav3.2 T型钙离子通道电流。结果 LPC显著提高了新生大鼠心室肌细胞的自律性(61±7次/分vs 40±6次/分,n=6)和ICa,T(4.4±0.5 pA/pF,n=12 vs 3.7±0.4 pA/pF,n=15)。在HEK293细胞中,LPC对ICaV3.1无显著影响;但显著增加了ICav3.2[LPC处理前:36.7±2.2 pA/pF(n=20);10μmol/L时:42.3±3.0 pA/pF(n=12);50μmol/L:47.5±3.8 pA/pF(n=8)]。只有PKC抑制剂(白屈菜红碱,5μmol/L)显著减弱了LPC的作用[LPC组:增大58.5%±14.2%;PKC预处理+LPC组:增大20.4%±10.4%(P<0.05)];PKCα特异性抑制剂Ro-32-0432(30 nmol/L)模拟了白屈菜红碱对ICav3.2的作用[白屈菜红碱:12.7±2.6 pA/pF(n=8);Ro-32-0432:12.9±2.3pA/pF(n=9)],而PKCβI、PKCβII特异性抑制剂并没有影响LPC对ICav3.2的作用。结论 LPC可能通过激活PKCα途径增强ICa,T,从而增加心室肌细胞的自律性。