扶正化瘀方对二甲基亚硝胺大鼠纤维肝原代贮脂细胞形态…

制备二甲基亚硝胺大直纤维化模型，体内给予扶正化瘀方治疗后，分离培养纤维肝原代贮脂细胞，通过相关显微镜、「＾３Ｈ」ＴｄＲ掺入、「＾３Ｈ」Ｐｒｏｌｉｎｅ掺入及胶原酶消化法等观察方对纤维肝贮脂细胞形态及细胞增殖、活力与胶原生成率等功能的影响。结果表明，该方对纤维肝贮脂细胞形态及活动无明显影响，而显著抑制其细胞及胶原生成率。提示该方抗肝经的主要作用机理之一在于抑制贮脂细胞的病理学增生及其细胞外基质生成。     

扶正化瘀方对大鼠肝贮脂细胞增殖的影响

采用灌胃给药、分离血清体外作用培养细胞的血清药物学方法，探讨扶正化瘀方对大鼠贮脂功能的影响。结果表明：该血清无明显细胞毒性，能抑制细胞增殖，其作用与体内给药剂量、药物血清浓度等有一定关系；该实验方法较为稳定可靠；扶正化瘀药物血清对贮脂细胞的增殖有抑制作用，可能是该方肝纤维化的作用机制之一。     

扶正化瘀方对贮脂细胞胶原生成的影响

目的:观察扶正化瘀方对贮脂细胞胶原生成的影响。方法:①用扶正化瘀方药物血清加入正常传代贮脂细胞中,以正常血清作对照。用~3H—pro掺入、胶原酶消化法计算细胞内、外胶原生成率与胶原生成抑制率。并以PAP法测定细胞内胶原与LN;②DMN造模后用扶正化瘀方体内给药,生理盐水作对照,连续7天后处死.分离细胞,以同样方法计算纤维肝原代贮脂细胞细胞内、外胶原生成率与胶原生成抑制率。结果:①药物血清能明显减少正常传代贮脂细胞细胞外胶原生成率,抑制细胞Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原与LN的表达;②体内给药后DMN纤维肝原代贮脂细胞细胞内、外胶原生成率均明显抑制。结论:扶正化瘀方能抑制贮脂细胞的胶原合成。     

扶正化瘀方抑制大鼠肝贮脂细胞增殖及胶原生成的血清药理学研究

以传代培养的大鼠肝贮脂细胞(FSC)增殖为参数。观察扶正化瘀(FZHY)方灌胃给药后药物血清的生物学效应。FZHY 0．46g／kg体重(0．46g)剂量一次给药后2小时的药物血清可抑制FSC增殖，但不显著；一次给药2小时后以同剂量再次给药，其后1小时、2小时及3小时的药物血清均能显著抑制FSC的增殖。再次给药后1小时药物血清对FSC增殖的抑制效果随给药剂量及血清浓度的提高而增强；药物血清对细胞形态无明显影响，尚能提高细胞的活力。不同剂量再次给药后1小时药物血清对细胞内、外的胶原生成率均有抑制作用，0．46g药物血清的作用与秋水仙碱相近，其抑制效果同样随着药物血清浓度的提高而增强，提示抑制FSC增殖及其胶原生成可能是FZHY方抗肝纤维化的主要作用机制之一。     

扶正化瘀方对大鼠CCl4损伤肝Kupffer细胞功能的影响

目的：探讨扶正化瘀方对大鼠急性ＣＣｌ４损伤肝Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞功能的影响。方法：体外分离培养大鼠急性ＣＣｌ４损伤肝Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞,制备扶正化瘀方药物血清对其进行干预,观察药物对其ＰＤＧＦ和ＴＧＦβ活性以及对Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞线粒体呼吸功能的影响。结果：药物组ＰＤＧＦ和ＴＧＦβ活性均显著降低（Ｐ〈０．０５）;药物组闰体呼吸功能明显降低（Ｐ〈０．０５）。结论：扶正化瘀方对大鼠急性ＣＣｌ４损伤肝Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞活化有抑制作用,可能抑制肝星状细胞旁分泌激活,是该方抗肝纤维化的作用机理之一。     

肝贮脂细胞与肝纤维化

贮脂细胞是肝间质细胞中兼有肌细胞、成纤维细胞及脂肪细胞性质的细胞,它在肝纤维化中的地位日益瞩目,本文就贮脂细胞的性质及其与肝纤维化的关系综述如下。 一、贮脂细胞的一般性质及分离培养 肝脏贮脂细胞(Lipocyte,Fat-storing Cell,FSC)又称Ito细胞,VitA贮存细胞、窦膜(周皮)细胞(Pericyte)、窦状隙星形细胞等。最初由Ito等(1952)描述,Wake用金浸渗法将之与肝枯否氏细胞区别。肝贮脂细胞是机体贮存VitA的主要场所,体内90％的视黄醇类物质以视黄酯,主要是棕榈酸视黄酯脂滴的形式贮存于贮脂细胞,贮脂细胞亦富含细胞视黄醇结合     

扶正化瘀方对肝纤维化大鼠不同病理阶段肝组织蛋白质组变化的影响

目的探讨四氯化碳（CCl4）大鼠肝纤维化形成及消减不同时期肝组织蛋白质组的动态变化及扶正化瘀方的干预作用。方法40％CCl4-橄榄油溶液皮下注射法制备CCl4大鼠肝纤维化模型，治疗组给予扶正化瘀方灌胃，在第4、8、12和第16周末分批处死大鼠，观察各组大鼠肝组织病理学、羟脯氨酸（Hyp）含量变化，并提取肝组织蛋白质进行二维电泳，运用PDQUEST 2-DE软件对蛋白质图谱进行分析，以MALDI—TOF—MS鉴定差异表达的蛋白质。结果（1）二维电泳结果：模型大鼠特有蛋白质和表达量差异的蛋白质从第4周始出现，第12周达顶峰，（2）质谱鉴定的蛋白质多数在第4周出现，四个时间段均出现的有10个，其中有8个是正常组所没有的，（3）扶正化瘀方对表达差异的蛋白质调节表现在：第4、8周对上调的蛋白质降低作用显著，在第8、12、16周对下调的蛋白质的升高作用较显著，模型大鼠特有的蛋白质经扶正化瘀方干预后，通过降解、下调表达量等形式，趋向正常表达。结论（1）蛋白质表达改变是肝纤维化整体病变的物质基础。表达异常的蛋白质涉及机体的物质代谢、神经内分泌、细胞增殖凋亡等系统，（2）扶正化瘀方在抗细胞增生、促进正常蛋白质合成等方面有综合优势，通过对多个蛋白质、多途径的综合调节达到抗肝纤维化的效果。     

细胞因子对贮脂细胞的肝纤维化

在肝纤维化的发病过程中，贮脂细胞发挥重要的作用。ＦＳＣ的增殖、活化及其合成细胞外基质等作用涉及到诸多因素的参与，其中细胞因子对其的调控作用可能最为重要。     

扶正化瘀方及其拆方对肝星状细胞活化的影响

目的:观察扶正化瘀方抗肝纤维化的不同药物配伍的药效作用。方法:分离培养大鼠肝星状细胞,将扶正化瘀方拆方为扶正、化瘀、丹参、虫草、丹参 虫草等组,制备其大鼠药物血清,温育星状细胞。~3H-TdR掺入法测定细胞增殖,ELISA法测定细胞上清Ⅰ型胶原含量,并测定细胞层总蛋白含量以校正胶原含量。RT-PCR法观察前胶原α_2(1)mRNA的表达。结果:全方组及各拆方组对星状细胞的增殖、胶原蛋白分泌及α_2(Ⅰ)前胶原mRNA表达均有不同程度的抑制作用。化瘀组对细胞增殖抑制作用最强,扶正组对胶原生成及基因表达抑制作用最强,而全方组介于两者之间。结论:扶正化瘀方及各拆方对星状细胞的活化功能有不同的作用影响,全方组有整体优势,其抗肝纤维化的主要作用机理可能在于抑制星状细胞的活化。     

扶正化瘀方对大鼠肝星状细胞旁分泌活化途径的抑制作用

肝星状细胞 (ＨＳＣ)活化是一复杂过程 ,涉及到细胞 细胞、间质 细胞间相互作用 ,其中旁分泌活化途径是ＨＳＣ活化启动的关键因素 ,库普弗细胞 (ＫＣ)是活化这一途径的主要细胞之一。我们观察中药扶正化瘀方 (319方 )对ＫＣ激活ＨＳＣ这一旁分泌活化途径的干预。材料与方法一、材料雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,ＳＰＦ级。体重 2 0 0～ 30 0ｇ ,分离ＫＣ用 ;体重 30 0～ 40 0 ｇ ,制备药物血清用 ;体重 40 0～ 45 0ｇ ,分离ＨＳＣ用 ,均由上海中医药大学动物中心提供。链霉蛋白酶Ｅ、Ⅳ型胶原酶、Ｎｙｃｏｄｅｎｚ及鼠尾Ⅰ型胶原标准品 ,均为Ｓｉ…     

扶正化瘀方对骨髓细胞在纤维化肝脏中迁移与分化的干预作用

[目的]探究扶正化瘀方(Fuzheng Huayu recipe,FZHY)对骨髓细胞在肝纤维化形成中向肝脏迁移与分化的干预作用.[方法]以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记的供体ICR小鼠的骨髓细胞移植入受体ICR小鼠,8周后进行受体外周血GFP鉴定,并分为移植后对照组与移植后模型组,移植后模型组予二甲基哑硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)诱导肝纤维化,4周后移植后模型组进一步分为移植+DMN组、移植+DMN+肝细胞生长因子(hepatocyte growth-promotting factors,pHGF)组与移植+DMN+ FZHY组,pHGF与FZHY分别给药8周后,免疫荧光检测肝组织的GFP、白蛋白(Albumin,Alb)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及CD32的表达.[结果]移植8周末受体外周血涂片可见大量GFP;给药12周末,移植+DMN+ FZHY组纤维间隔与肝实质区均可见GFP,实质区可见Alb,未见GFP+/Alb+,纤维间隔内可见GFP+/α-SMA+,但与移植+ DMN组相比明显减少,窦状隙可见CD32+,可见明显GFP+/CD32+.[结论]在本实验建立的骨髓细胞移植后受体肝纤维化形成的体内微环境下,FZHY给药后,骨髓细胞有向肝实质区迁移的趋向,未能向肝细胞分化,可逆转其向肌成纤维细胞的分化失衡,可部分转分化为肝窦内皮细胞.     

扶正化瘀胶囊治疗日本血吸虫病肝纤维化的临床疗效观察

目的:探讨扶正化瘀胶囊治疗日本血吸虫病肝纤维化的疗效。方法:临床观察日本血吸虫病肝纤维化患者48例,随机分为试验组(基础护肝治疗联合扶正化瘀胶囊)和对照组(基础护肝治疗),每组24例,患者均在护肝及抗纤维化治疗前1个月给予吡喹酮驱虫治疗,治疗前后观察患者临床症状和体征的改善,肝功能、血清肝纤维化指标的复常以及影像学指标的改变。结果:治疗24周后,两组患者临床症状和体征与治疗前比较均有明显改善,尤其肝区不适症状的缓解,试验组优于对照组(P<0.05);两组患者治疗后血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)水平均有显著改善(P<0.05);试验组血清透明质酸(HA)﹑Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平在治疗12周、24周较治疗前均显著下降(P<0.05),下降幅度均显著优于对照组(P<0.05);治疗24周患者血清层粘连蛋白(LN)﹑Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量与治疗前比较两组均有显著改善(P<0.05),且试验组改善优于对照组(P<0.05);治疗24周患者肝门静脉主干内径、脾脏厚度的改变,试验组明显优于治疗前(P<0.05),且与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:扶正化瘀胶囊治疗日本血吸虫病肝纤维化可明显改善患者临床症状和体征,促进肝脏功能恢复,有效地减轻肝脏纤维化。     

CCl4大鼠肝纤维化形成与消减过程中肝组织蛋白质组的动态变化及扶正化瘀方的干预作用

目的:通过大鼠纤维化肝组织高亲水性蛋白质分子差异展示及扶正化瘀方干预作用,寻找与扶正化瘀方治疗肝纤维化相关的蛋白质分子.方法:通过皮下注射大鼠CCl4,分别持续4、8、12周,对大鼠肝纤维化过程进行动态观察,并在不同时期进行扶正化瘀方干预,治疗从第12周始至16周止.采用蛋白质分步抽提方法,提取肝组织蛋白质,分别进行二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离、凝胶银染,显示各组蛋白质分子的差异表达的蛋白质分子.结果:在各组银染凝胶图谱上,可辨识的蛋白质斑点达1 000～1 400个左右,蛋白质表达中除有肝组织看家蛋白质,模型组也有特异蛋白质表达,且在不同时期蛋白质分子表达也有差异,特异表达蛋白质分子为100至300多个不等,在不同阶段表达是不相同的,经质谱鉴定确定了有几类功能不同的蛋白质分子.结论:扶正化瘀方抗肝纤维化作用机制是多方面的,其干预作用与多种蛋白质分子相关.     

Seropharmalogical effects of Fuzheng Huayu decoction on rat Ito cell morphology and function in culture

AIM: To investigate the mechanisms of anti-liver fibrosis actions of Fuzheng Huayu (FZHY) decoction, which acts to strengthen the body’s resistance and promote blood circulation.METHODS: Ito cells were isolated from rats and cultured. Serum samples were collected from healthy (normal) rats after administration of FZHY decoction and added to the subcultured cells. The effects of FZHY decoction on the Ito cells were investigated by contrast microscopy (to observe cell morphology), [³H]Pro incorporation assay (cell viability), [³H]TdR incorporation and MTT colorimetric assay (cell proliferation), and [³H]Pro incorporation and collagenase digestion (collagen synthesis rate).RESULTS: The rat sera samples from rats treated with FZHY decoction had no influence on Ito cell morphology, but improved cell viability and markedly inhibited cell proliferation and collagen synthesis. The magnitude of these effects showed dependence on treatment dosage and drug concentration in serum.CONCLUSION: The seropharmalogical method can be efficiently used to investigate the pharmacological mechanism of anti-fibrotic traditional Chinese herbs and formulae. Inhibition of Ito cell proliferation and collagen synthesis may be two of the major mechanisms underlying the anti-fibrosis actions of the FZHY decoction.     

扶正抗癌方药物血清对人肝癌细胞增殖的影响

目的:阐明扶正抗癌方的抗癌机制。方法:以不同剂量灌胃给药后,不同时间采集大鼠血清,处理体外培养的人肝癌细胞SMMC_(7721),用MTT法和氚标胸腺嘧啶(~3H-TdR)掺入法观察细胞增殖能力。结果:扶正抗癌方(1.6g/kg,8.0g/kg)2次给药后1小时和2小时药物血清处理细胞,MTT转化率和~3H-TdR掺入率明显下降。结论:扶正抗癌方具有明显的抑制人肝癌细胞增殖作用。     

Effects of Fuzheng Huayu 319 recipe on liver fibrosis in chronic hepatitis B

ＥｆｅｃｔｓｏｆＦｕｚｈｅｎｇＨｕａｙｕ３１９ｒｅｃｉｐｅｏｎｌｉｖｅｒｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｃｈｒｏｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓＢＬＩＵＰｉｎｇ１,ＬＩＵＣｈｅｎｇ１,ＸＵＬｉｅＭｉｎｇ１,ＨｕＹｉＹａａｎｇ１,ＸＵＥＨｕｉＭｉｎｇ１,ＬＩＵＣｈ...     

Effects of Fuzheng Huayu 319 recipe on liver fibrosis in chronic hepatitis B

AIM To investigate clinic effects of Fuzheng Huayu 319 recipe (319 recipe) on liver fibrosis in chronic hepatitis B.METHODS Ninety-five patients with chronic hepatitis B were divide into the treated (63 cases) and control (32 cases) group, and orally administrated with 0.5g 319 capsule or 0.5g Dahuang Zhachong pill tid for 3 months, respectively. The liver functions and serological fibrotic markers were observed before and after treatment, 12 cases in the treated group were examined with liver biopsy.RESULTS Three hundreds nineteen recipe could remarkably decreased serum ALT level and total bilirubin and significantly improve serum albumin and A/G ratio. Its effects were better than Dahuang Zhachong pill. Before treatment, patients' serum monamine oxidase activities, tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP)-1, procollagen type Ⅲ and laminin were all higher than those of health peoples. These levels decreased remarkably after treatment, and urine hydroxyproline level increased significantly (P＜0.001-0.05). Compared with the control, the improvement in treated group was better than that in the control except TIMP-1. According to the scoring system for staging of chronic hepatitis, the fibrotic extents of 7 cases among 12 cases examined by liver biopsy decreased remarkably (1 case decreased by 3 scores, 5 by 2 scores, 1 by 1 score).CONCLUSION Fuzheng Huayu 319 recipe had good therapeutic effects on chronic hepatitis B, it could reverse the development of liver fibrosis to some extent. In general its effects were better than that of Dahuang Zhachong pill.     

扶正化瘀方调节差异微小RNAs表达的抗肝纤维化的作用机制

目的筛选出扶正化瘀方(FZHY)调控的差异微小RNAs(miRNAs),并对这些差异miRNAs进行生物功能分析,部分揭示FZHY抗肝纤维化的作用机制。方法 CCl4皮下注射制备小鼠肝纤维化模型,分为正常组、模型组及FZHY组;自造模前3 d开始给药,1次/d,共8周。天狼星红染色及羟脯氨酸(Hyp)含量测定观察肝组织胶原沉积。应用miRNAs芯片检测各组小鼠肝脏miRNAs表达谱。基于miRNAs表达谱筛选出正常组、FZHY组与模型组具有相同变化趋势的差异miRNAs,即FZHY调控的miRNAs,并以qRT-PCR进行验证。采用Target Scan及PITA数据库对miRNAs靶基因进行预测,并采用DAVID数据库对这些预测的靶基因进行功能分析及信号通路分析,发现其调控的显著性功能及信号通路。多组间比较采用方差分析,miRNA差异基因筛选采用随机方差模型的t检验。结果 FZHY可明显降低纤维化肝组织Hyp含量,减轻胶原沉积。miRNAs芯片分析共发现3个FZHY调控的miRNAs,分别为:mmu-miR-322、mmu-miR-342-3p和mmu-miR-296-5p。信号通路分析共得到32条这些miRNAs可能调控的信号通路,其中趋化因子信号通路、黏着斑、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、肌动蛋白细胞骨架调节、间隙连接、细胞外基质蛋白相互作用、Wnt信号通路、Jak-STAT信号通路等与肝纤维化密切相关;功能富集分析共得到32项显著性功能,其中三磷酸尿苷(GTP)酶活性调节、细胞连接、凋亡调节、Ras蛋白信号转导调节及小GTP酶活性调节等与肝纤维化密切相关。结论下调miR-322,miR-342-3p及miR-296-5p表达,从而调节这些miRNAs对应的相关功能,如MAPK信号通路、Wnt信号通路、凋亡调节及Ras蛋白信号转导调节等可能是扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制,值得进一步研究。     

恩替卡韦联合扶正化瘀胶囊对代偿期慢性乙型肝炎肝硬化患者炎性因子及纤维化指标的影响

目的观察恩替卡韦(ETV)联合扶正化瘀胶囊对代偿期慢性乙型肝炎肝硬化患者的疗效。方法收集2013年1月-2015年12月在青岛市第六人民医院就诊的代偿期慢性乙型肝炎肝硬化患者142例,随机分为治疗组(n=71)和对照组(n=71)。两组均给予保肝、对症等常规治疗,在此基础上,对照组接受恩替卡韦0.5 mg/d治疗,治疗组在对照组治疗基础上联合扶正化瘀胶囊1.5g,口服,2次/d,两组患者均治疗12个月。观察两组患者炎性因子及纤维化指标的变化情况。计量资料组间比较采用t检验,计数资料组间比较采用χ~2检验。结果治疗12个月后,治疗组与对照组血清HBV DNA阴转率分别为91.5%(65/71)和90.1%(64/71),两组之间差异无统计学意义(χ~2=0.005,P=0.771);治疗组治疗12个月后血清透明质酸、层黏连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、AST、ALT、肝脏硬度值、TNFα、IL-6、IL-8和超敏C反应蛋白(hs-CRP)与对照组相比均明显下降(t值分别为16.187、5.343、13.697、17.121、7.409、27.371、7.973、5.471、7.885、9.057、8.171,P值均0.001)。结论 ETV联合扶正化瘀胶囊治疗相对于单独用ETV治疗代偿期慢性乙型肝炎肝硬化患者能更好的抗纤维化,抑制炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8和hs-CRP的释放。