大鼠单侧隐睾对侧睾丸的损害与抗氧化酶mRNA的表达

目的　从基因表达水平探讨单侧隐睾对侧睾丸损害机制。方法　 3 0只SD雄性大鼠分为对照组与隐睾组 ,每组各 15只。采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测对侧睾丸中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)、铜 /锌超氧化物岐化酶 (Cu/Zn SOD)、过氧化氢酶 (CAT)mRNA的表达 ;化学比色法测定丙二醛 (MDA)的含量 ;生物素 dUTP/酶标亲和素法检测睾丸生殖细胞的凋亡。结果　术后 2周 ,与对照组比较 ,隐睾组GSH PX和SODmRNA表达明显下降 ,MDA和生殖细胞凋亡明显升高 (P <0 .0 1) ,而CATmRNA表达无明显改变 (P >0 .0 5 )。结论　单侧隐睾对侧睾丸存在GSH PX和SODmRNA表达降低 ,氧自由基升高和生殖细胞过度凋亡。     

总抗氧化能力、一氧化氮、丙二醛对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的影响

目的 探讨一氧化氮(NO)、总抗氧化能力(T—AOC)对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的影响。方法 采用SD雄性健康大鼠20只，鼠龄22d时复制单侧隐睾模型。采用生物素—dUTP／酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡。采用化学比色法测定大鼠组织中丙二醛(MDA)、T—AOC。采用硝酸还原酶法测定睾丸组织中NO含量。结果 术后第7天，与对侧正常睾丸相比，隐睾侧睾丸发生凋亡的生殖细胞数显著增加(P＜0．01)；T—AOC显著下降；No和MDA含量显著上升(P＜0．01)。结论 大鼠隐睾可导致睾丸生殖细胞凋亡增加，且与睾丸组织中No和MDA升高及T—AOC下降密切相关。     

单侧隐睾大鼠对侧睾丸的损害与Bcl-2和Bax基因表达

目的:探讨单侧隐睾大鼠对侧睾丸生精细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因表达的关系。方法:20只健康SD雄性大鼠(22日龄)随机分成隐睾组和对照组,每组10只。通过手术建立单侧隐睾动物模型。术后90 d取对侧睾丸,采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测生精细胞凋亡,免疫组化SP法检测Bcl-2/Bax基因表达。结果:与对照组相比,隐睾组对侧睾丸生精细胞凋亡显著增多(P<0.01),重量显著减轻(P<0.01),Bax表达显著升高(P<0.01),Bcl-2表达显著降低(P<0.01)。凋亡细胞主要是初级精母细胞和圆形精子细胞。结论:单侧隐睾大鼠对侧睾丸的生精细胞凋亡增多与Bcl-2基因表达降低、Bax基因表达升高密切相关。细胞内Bc l-2/Bax比值是影响生精细胞凋亡的重要因素之一。     

黄芪注射液对大鼠扭转复位后睾丸组织的保护作用

目的:探讨黄芪注射液对雄性Wistar大鼠扭转复位后睾丸的保护作用。方法:30只大鼠随机分为假手术组(A组)、睾丸扭转复位组(B组)、黄芪注射液治疗组(C组),每组10只,Turner法建立单侧睾丸扭转复位模型,原位缺口末端标记法检测各组睾丸组织中生殖细胞凋亡,化学比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果:黄芪注射液治疗组与睾丸扭转复位组比较,SOD含量明显升高,MDA含量明显降低,生精细胞凋亡指数明显降低。睾丸扭转复位组、黄芪注射液治疗组与假手术对照组比较,SOD含量明显降低,MDA含量明显升高,生精细胞凋亡指数明显升高。结论:黄芪注射液可减少大鼠睾丸扭转复位后睾丸组织的双侧睾丸生殖细胞凋亡,对扭转复位后睾丸生殖细胞有保护作用。其机理可能与提高抗氧化酶活性及减少氧自由基的产生从而减轻大鼠睾丸扭转复位后的缺血再灌注损伤有关。     

低温对大鼠睾丸扭转复位后生殖细胞凋亡的影响

目的 探讨低温对大鼠睾丸扭转复位后生殖细胞凋亡的影响。方法 24只健康青春期SD雄性大鼠随机分为三组:A组为睾丸扭转组,B组为睾丸扭转加低温组,C组为对照组。建立单侧睾丸扭转模型。术后第14天采集睾丸。原位缺口末端标记法(TUNEL)检测其生殖细胞凋亡指数(AI),光镜下观察睾丸组织学变化。结果 B组AI明显低于A组(P<0.01),而高于C组(P<0.01)。结论 低温能够提高扭转睾丸耐缺血能力,减少睾丸扭转复位后生殖细胞凋亡。     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的保护作用

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的保护作用.方法用22 d SD雄性大鼠复制单侧隐睾模型.实验分假手术组、隐睾组、隐睾+L-NAME组[术后腹腔注射L-NAME,10 mg/(kg·d)],每组大鼠各10只.术后7 d,用生物素-dUTP/酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡,用硝酸还原酶法测定睾丸组织中NO含量,用化学比色法测定睾丸组织中NOS活性.结果术后第7 d,与假手术组睾丸相比,隐睾组睾丸发生凋亡的生殖细胞数显著增加,隐睾+L-NAME组睾丸发生凋亡的生殖细胞数比隐睾组显著减少(P＜0.01),隐睾+L-NAME组睾丸组织中NO含量及NOS活性与隐睾组相比显著降低(P＜0.01).结论隐睾组织中NO和NOS升高是隐睾生殖细胞凋亡增加的病理机制之一,L-NAME通过抑制NOS活性、减少NO的产生来降低睾丸组织生殖细胞的凋亡发挥其保护作用.     

低温联合地塞米松对大鼠睾丸扭转复位后eNOS表达及生精细胞凋亡的影响

目的:探讨低温联合地塞米松对睾丸扭转复位后的保护作用,以及对eNOS表达及生精细胞凋亡的影响。方法:将80只青春期SD大鼠随机分为4组,每组20只。4组大鼠分别扭转左侧睾丸720°2 h,建立单侧睾丸扭转模型,随后各组做如下处理,A组:常温+生理盐水、B组:低温+生理盐水、C组:低温+地塞米松、D组:常温+地塞米松;术后48 h采集睾丸,通过HE染色光镜观察睾丸组织病理学改变、免疫组化法检测eNOS表达、TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡。结果:HE染色光镜下见4组大鼠扭转侧睾丸组织均有不同程度损伤,其中A组睾丸损伤最明显,其余3组扭转侧睾丸得到不同程度保护;睾丸组织eNOS免疫组化检测结果:A组扭转侧(左侧)睾丸组织阳性细胞数及阳性细胞着色强度明显强于B、C、D 3组,差异具有显著性(P<0.05、P<0.01、P<0.01);凋亡细胞染色:细胞核呈深棕黄色或棕褐色,A组扭转侧(左侧)睾丸可见大量生精细胞凋亡,凋亡指数AI(31.12±4.68)明显高于B组(16.58±6.22)(P<0.05)及C(8.60±1.15)、D组(13.52±3.06)(P<0.01)。结论:睾丸扭转复位后的缺血再灌注损伤可导致生精细胞凋亡增加、睾丸生殖能力下降;应用低温联合地塞米松能显著增强睾丸组织的抗损伤能力,较好地保护了扭转复位后睾丸的生精功能。     

单侧隐睾睾丸组织中胰岛素样因子3基因表达

目的 研究单侧隐睾对睾丸组织胰岛素样因子3（Insl3）表达的影响。方法 通过建立隐睾大鼠动物模型获得A组单侧隐睾大鼠12只和B组双侧隐睾大鼠10只，C组空白对照正常大鼠10只。在大鼠8周龄时取睾丸组织用Tarazol法提取总RNA，Northern Blot方法检测各组睾丸组织中Insl3基因表达水平；同时提取各组睾丸组织蛋白，Westernblot检测Insl3蛋白多肽表达。结果 Insl 3 mRNA在单侧隐睾侧睾丸组织中表达量低于C组（P〈0．05），单侧隐睾大鼠对侧睾丸表达量低于C组（P〈0.05）；InSl3基因表达的蛋白多肽在隐睾侧睾丸组织中表达量较低（P〈0．05），对侧睾丸组织蛋白表达较C组低（P〈0．05），但较隐睾侧睾丸和B组明显增多（P〈0．05）。结论 单侧隐睾生精功能的损害可能是影响了隐睾侧睾丸Insl3基因表达，同时还抑制对侧睾丸的表达。     

一氧化氮合酶基因表达对实验性大鼠隐睾生殖细胞凋亡的影响

目的　研究诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)及其mRNA表达与实验性大鼠隐睾生殖细胞发育、凋亡的关系。方法　 (1)采用SD雄性健康大鼠 16只 ,日龄 2 2天时复制单侧隐睾模型。 (2 )采用生物素 dUTP/酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡。 (3)采用免疫组织化学方法检测大鼠睾丸生殖细胞中iNOS基因表达。 (4 )采用原位杂交法检测大鼠生殖细胞中iNOSmRNA的表达。结果　 (1)术后第 7天 ,与自身对侧正常睾丸相比 ,隐睾侧睾丸发生凋亡的生殖细胞数显著增加 (P <0 .0 1)。 (2 )单侧隐睾模型建立术后第 7天 ,在双侧睾丸的间质细胞、支持细胞和初级精母细胞中均可见iNOS蛋白及iNOSmRNA的弱阳性表达 ,在隐睾侧睾丸曲细精管中脱落的生殖细胞中可见iNOS蛋白及iNOSmRNA的强阳性表达。术后第 7天 ,与自身对侧正常睾丸相比 ,隐睾侧睾丸生殖细胞中iNOSmRNA表达显著增加 (P <0 .0 1)。结论　 (1)实验性大鼠隐睾可以导致睾丸生殖细胞凋亡增加。 (2 )iNOS蛋白及其mRNA的表达增加是隐睾生殖细胞凋亡增加的分子机制之一     

胶质细胞源性神经营养因子对大鼠单侧隐睾组织中干细胞因子及抗氧化酶活性的影响

目的:探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对大鼠隐睾睾丸组织中干细胞因子(SCF)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量的影响。方法:选取雄性SD大鼠左侧隐睾成功模型48只,体重(200±20)g,完全随机法分为4组,每组12只。A组为对照组,B组为GDNF 7 d组,C组为GDNF14 d组,D组为GDNF 21 d组。每组根据设定处理方式的不同分别进行处理,采集左侧睾丸并行生化指标(SOD、CAT活性及MDA含量)检测;TUNEL检测隐睾组织细胞调亡指数(AI);HE染色观察睾丸组织学形态;实时定量PCR法检测隐睾组织中SCF基因的表达情况,Western印迹检测各组隐睾组织中SCF蛋白表达情况。结果:与GDNF组相比,其中GDNF 14 d组中各项指标有明显变化;生精细胞凋亡明显减少,其中对照组、GDNF 7 d组、GDNF 14 d组、GDNF 21 d组AI分别为13.5±0.64、8.42±0.16、4.45±0.34、7.32±0.09。对照组与GDNF 14 d组相比差异有明显统计学意义(P<0.01),与对照组相比,各GDNF组生精细胞凋亡减少,SOD活性明显上升,MDA含量下降明显,SCF表达较对照组有明显增高,差异有明显统计学意义(P<0.01)。结论:GDNF对大鼠单侧隐睾组织生精功能具有保护作用,增强抗氧化酶系统的抗氧化能力,提高SCF表达含量,从而改善睾丸生育能力,其以GDNF 14 d时作用最明显。     

生殖股神经在单侧隐睾鼠对侧睾丸损害中的作用机制

目的：探讨生殖股神经在单侧隐睾鼠模型对侧睾丸损害中的作用机制。方法：建立单侧隐睾鼠模型（21d龄），切断该侧生殖股神经，120d后观察对侧睾丸的生精细胞凋亡及细胞乳酸含量变化。结果：切断生殖股神经后对侧睾丸生精细胞凋亡减少，乳酸含量降低，乳酸含量与细胞凋亡呈正相关。结论：单侧隐睾症对侧睾丸损伤可能与其神经传导反射性血流减少引起生精细胞凋亡有关。     

单侧隐睾大鼠生殖股神经在对侧睾丸损害中的作用机制研究

目的 :探讨单侧隐睾大鼠模型生殖股神经在对侧睾丸损害中的作用机制。　方法 :建立单侧隐睾大鼠模型 (2 1d龄 ) ,切断该侧生殖股神经 ,12 0d后观察对侧睾丸的生精细胞凋亡变化及组织乳酸含量变化。　结果 :切断生殖股神经后 ,对侧睾丸生精细胞凋亡为 (5 .76± 0 .76 ) % ,与对照组 (17.2 8± 1.36 ) %相比明显减少 (P <0 .0 5 ) ;乳酸含量也由 (2 .19± 0 .2 4 )mmol/L下降为 (1.70± 0 .31)mmol/L(P <0 .0 5 ) ,且乳酸含量与细胞凋亡呈正相关(P <0 .0 5 )。　结论 :单侧隐睾症对侧睾丸损伤可能与其神经传导反射性血流减少引起生精细胞凋亡有关     

Ν-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的保护作用

目的 :探讨一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂N 硝基 L 精氨酸甲酯 (L NAME)对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的保护作用。　方法 :用 2 2dSD雄性大鼠复制单侧隐睾模型。实验分假手术组、隐睾组、隐睾 +L NAME组 [术后腹腔注射L NAME ,10mg/(kg·d) ],每组大鼠各 10只。术后 7d ,用生物素 dUTP/酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡 ,用硝酸还原酶法测定睾丸组织中N0含量 ,用化学比色法测定睾丸组织中NOS活性。　结果 :术后第 7d ,与假手术组睾丸相比 ,隐睾组睾丸发生凋亡的生殖细胞数显著增加 ,隐睾 +L NAME组睾丸发生凋亡的生殖细胞数比隐睾组显著减少 (P <0 .0 1) ,隐睾 +L NAME组睾丸组织中NO含量及NOS活性与隐睾组相比显著降低 (P<0 .0 1)。　结论 :隐睾组织中NO和NOS升高是隐睾生殖细胞凋亡增加的病理机制之一 ,L NAME通过抑制NOS活性、减少NO的产生来降低睾丸组织生殖细胞的凋亡发挥其保护作用。     

FasL在大鼠隐睾中的表达

目的 :观察FasL蛋白在大鼠隐睾中的表达并探讨其意义。　方法 :将 2 2日龄SD雄性大鼠 2 4只随机分为隐睾组和假手术组各 1 2只 ,在日龄 1 1 0d时采血并处死。免疫组化 (SP法 )测睾丸组织中的FasL蛋白表达 ,ELISA法检测血清抗精子抗体 (AsAb)。　结果 :隐睾组大鼠的隐睾侧及对侧睾丸的FasL阳性表达率均显著高于假手术组大鼠的手术侧及对侧睾丸 (P <0 .0 0 1 ) ;隐睾组和假手术组的血清AsAb阳性率分别为 41 .7%和 0 ,差异有显著性 (P <0 .0 1 )。　结论 :单侧隐睾大鼠的双侧睾丸组织中都有FasL表达的上调 ,可能是睾丸对自身免疫的一种保护性反应     

Assessment of germ cell apoptosis in cryptorchid rats

Aim: To investigate the relationship between germ cell degeneration and apoptosis in cryptorchid rats. Methods: Thirteen 21-day-old Wistar rats were made unilaterally cryptorchid by closing the left inguinal canal. At day 30 (Group 1, n=6) and day 60 (Group 2, n=7) after operation, the testes were removed for histopathological examination. The controls (n=8) were sham operated and were sacrificed at day 60. Germ cell apoptosis was assessed by means of the TUNEL method. Results: Spermatogenesis was arrested and the testicular and seminiferous tubular diameters were significantly reduced In the unilateral undescended testes (UUTs) compared with the contralateral descended testes (CDTs) and the control rats. However, atrophic changes, pathological calcification, necrosis of seminiferous tubule, and absence or sloughing of germ cells were not found in all the animals. The spermatocytes were the main type of germ cells undergoing apoptosis in all the groups. In the UUTs, there was a significant and time-depe     

血管内皮细胞生长因子和内皮型一氧化氮合酶在大鼠单侧隐睾对侧睾丸损害中的表达

目的 探讨大鼠隐睾中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达与单侧隐睾对侧睾丸损害的关系.方法 将45只雄性SD大鼠(22 日龄)随机分成单侧隐睾并生殖股神经离断组(A组)、单侧隐睾组(B组)和假手术组(C组),每组15只.动物模型建立后(65日龄),苏木素-伊红(HE)染色观察睾丸生精上皮形态,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测对侧睾丸生精细胞的凋亡,免疫组织化学和Western blot方法检测对侧睾丸组织中eNOS和VEGF基因表达的变化.结果 B组相对于A组和C组对侧睾丸组织中生精细胞的凋亡率最高(t1=3.04,t2=3.94,t1,t2＞t28,P＜0.01),Western blot和免疫组织化学方法检测结果也显示B组eNOS和VEGF的表达含量较A组和C组都显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01),而A组和C组的各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 eNOS和VEGF的高表达和生殖股神经在单侧隐睾对侧睾丸的损害中起重要作用,而切断生殖股神经可以阻断这一损害过程.

Abstract：

Objective To study the relationship between the expression of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) and vascular endothelial growth factor (VEGF) with the damage of contralateral testis of unilateral cryptorchidism in the experimental rats. Methods Forty-five immature male Sprague-Dawley rats (aged 22 days) were randomly divided into the group A (unilateral cryptorchidism and the ipsilateral genitofemoral nerve division), group B (unilateral cryptorchidism), group C (sham operation), n = 15 in each group. When the rats were aged 65 days, all the rats were sacrificed and the testes were obtained. The morphological changes of the spermatogenic epithelium in the testes were observed, and the germ cell apoptosis was detected by the TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL) technique. The expression of eNOS and VEGF was detected by using Western blotting and immunohistochemistry in the testicular tissues.Results The germ cell apoptosis was increased significantly ( t1 = 3. 04, t2 = 3. 94, t1 ,t2 ＞ t28 , P ＜0. 01) , and the levels of eNOS and VEGF in the contralateral testes were also increased obviously in group B as compared with groups A and C ( P ＜ 0. 01) , but the entire indexes in groups A and C had no significant difference. Conclusion eNOS, VEGF and genitofemoral nerve play a important role in the damage of the contralateral testes of unilateral cryptorchidism, and the damage can be prevented by genitofemoral nerve division.