单克隆抗体亲和常数的测定

本文介绍了单克隆抗体亲和常数测定的意义、表达方式以及适合于一般实验室使用的几种测定与分析单克隆抗体亲和常数的方法。     

改良ELISA测定腹水中单克隆抗体的亲和常数

抗体亲和力对体内外免疫反应有重要影响,为阐明抗体亲和力在免疫学检测及疾病发生发展机理中的作用,需要建立简单准确的测定抗体亲和力的方法。本实验参照Friguet氏利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体亲和力的基本原理,建立了改良测定法,能准确且方便地直接测得腹水中单克隆抗体的亲和力常数。     

用非竞争性ELISA测定单克隆抗体的亲和力常数

本文采用Beatty报道的非竟争性ELISA结合双抗体夹心法测定了5株单克隆抗体的亲和力常数。直接采用杂交瘤的细胞培养上清,无需纯化抗体,无需对抗原精确定量。而且,方法简便、快速、重复性和准确度都较好,值得推广。     

单克隆抗体AU_（14－1）测定人血清宫颈癌抗原

本研究应用抗小鼠宫颈癌单克隆抗体ＡＵ_１４－１所建立的夹心ＥＬＩＳＡ法，测定了人血清宫颈癌抗原．以４０例正常妇女血清的Ａ４９０均值加３个标准差之和（０．２０Ａ４９０Ｕ）作为阳性阈值，对２５例宫颈癌、５２例宫颈炎和１２例其他妇科疾患病人血清进行检测，结果宫颈癌为２５／２５阳性，宫颈炎２／５２阳性（其中１例阳性者为重度宫颈糜烂），其他妇科疾患均为阴性．此外，１例卵巢癌腹水亦为阴性．经统计学分析，ＡＵ１４－１确定的宫颈癌抗原存在于宫颈鳞癌和腺癌病人血清中，其阳性率均为１００％，敏感性１００％，特异性９６．２％．与目前研究的宫颈癌血清标志物ＳＣＣ和ＣＡ—１２５比较，ＡＵ１４－１—ＥＬＩＳＡ对人血清官颈癌抗原的检测，具有较高的敏感性和特异性以及较好的临床应用前景，并进一步证明了肿瘤“进化抗原”的理论．     

胃癌组织匀浆中一组新肿瘤相关抗原MG-Ags的测定及其价值

作者应用5种抗胃癌单克隆抗体(MG5,MG7 MG9 MGb2和MGd1)的等量混合物,以间接ELISA测定了14例胃癌组织及癌旁组织匀浆中胃癌相关抗原MG-Ags、发现14例癌组织中MG-Ags的平均含量是癌分组织的5.2倍,其中有12例(85.7％)癌组织中MG-Ags高于癌旁组织,说明MG-Ags与胃癌组织具有明显关系。     

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

采用ELISA测定32株抗HFRS病毒McAb对该病毒两种粗制抗原的相对亲和力,发现每一株McAb对两种病毒抗原的亲和力相同或基本相同,而各株McAb对同一病毒抗原的亲和力则有所不同,有些差别很大。按50％最大结合浓度分析,可分为3组。1组13株McAb为0.003～0.8μg/ml,Ⅱ组9株McAb为0.1～8μg/ml,Ⅲ组10株McAb为50～300μg/ml。这一结果为选择应用这些McAb提供了依据。     

抗肿瘤单克隆抗体亲和常数的流式细胞术测定

亲和常数(Avidity)是抗原抗体反应中的重要参数之一,它关系到一个抗体的使用前景。对质地均一的单克隆抗体尤为重要。本文介绍的流式细胞术(Flow.Cytometry)测定抗肿瘤单克隆抗体的亲和常数方法是以3倍系列稀释的FITC标记的抗结肠癌(类CEA)     

影响抗肿瘤单克隆抗体导向作用的因素分析

肿瘤单抗在实验性导向诊治中已取得了令人鼓舞的成绩,但临床初试后不尽人意者颇多。究其原因,可能对影响导向作用的诸多因素尚待阐明。本文对有关单抗分子量、亲和力、内化作用、穿透力、给药方法和肿瘤方面的因素进行了分析并介绍了增强导向作用的新方法及应用前景。     

单克隆抗体相对亲和力和特异性的测定

在单克隆抗体的制备中,亲和力和特异性的测定是非常重要的。实验证明单抗的特异性不是绝对的,我们也发现在免疫酶组化染色过程中,当单抗浓度达到一定水平时会出现交叉反应,即抗3型(或7型)腺病毒单抗与7型(或3型)腺病毒出现反应。因此有必要测定单抗特异性,以便筛选高特异性的单抗。     

EPF单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文用纯化的早孕因子免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，通过鼠－鼠杂交瘤技术，成功地建立了２株分泌ＥＰＦ单克隆抗体的杂交瘤细胞。经检测，它们所分泌的抗体亚类均为ＩｇＧ１，毁交瘤染色体数目１００－１０６条，ＥＩＳＡ检测诱生腹水抗体效价为１：１．２８＊１０＾５，连续培养生物学性状稳定。抗ＥＰＦ抗原的单克隆抗体的建立，为深入研究ＥＰＦ的生物学性质、特征提供了有力的工具。     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体亲和力及抗原结合位点测定

应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）大鼠单克隆抗体（ＭｃＡｂ）进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白（ＮＰ）上６种不同抗原决定簇，并且表明ＮＰ上可能存在ＨＦＲＳＶ组、亚组、型或亚型抗原决定簇。ＭｃＡｂ亲和常数测定的高低排序结果为ＫＦ１２＞ＤＥ１１＞Ｘ１０＞ＣＨ１０＞ＩＧ４。     

抗人肿瘤细胞核单克隆抗体的制备及鉴定

根据Epstein等报告,肿瘤坏死部分的不溶性抗原可以作为放射免疫检测与治疗的靶部位。作者制备了抗人肿瘤细胞核单克隆抗体(McAbs),并对其性质进行了鉴定。放射性同位素标记的抗核McAds的初步生物分布试验表明,抗核McAds确可到达肿瘤坏死部位。     

恶性淋巴瘤单克隆抗体的制备和初步鉴定

采用人恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞作为免疫原免疫BALB/C小鼠, 按常规方法融合并经间接ELISA法筛选, 成功地制备了1株抗Raji细胞单克隆抗体(MAb), 命名为SZ138.用琼脂糖双扩散鉴定其为IgG1类, ELISA法测定其腹水效价为1:3.2×104.MAb流式细胞仪检测表明, 该抗体与Raji和Daudi呈阳性反应;与外周红细胞、白细胞(包括淋巴细胞和中性粒细胞)、未活化血小板、内皮细胞株ECV呈阴性反应.免疫组化SP法显示, MAb SZ138识别的抗原在胃肠道的腺体和肝脏有所表达, 而在心、脑、扁桃体、脾、脂肪组织、动脉血管壁、神经节、横纹肌、平滑肌等组织不表达或表达很低.Western blotting分析显示, MAb SZ138可特异识别还原条件下相对分子量为170kD的蛋白多肽.结果提示: MA SZ138对恶性淋巴瘤的诊断和治疗可能具有一定的临床意义.     

单克隆抗体亲和层析法纯化HFRS病毒血凝素抗原的初步研究

用蔗糖-丙酮法从HFRS病毒陈栋感染的乳小白鼠鼠脑中提取粗制血凝素,将此粗制血凝素通过抗HFRS病毒血凝素McAb 3G_1与Sepharose 4B偶联的免疫吸附柱,获得初步纯化的HFRS病毒血凝素抗原,经鉴定具有较高的血凝滴度和较好的免疫原性。用SDS-PAGE和Wes-tern-blot技木分析该纯化的血凝素抗原,并与同法纯化的正常鼠脑抗原比较,证明该特异性血凝素抗原分子量为5×10~4道尔顿。用2株抗HFRS病毒以及10株抗HFRS病毒血凝素McAb,以ELISA阻断试验分析纯化50K血凝素,结果有10株McAb可阻断McAb3 G_1与其结合,其抗原决定簇之间有部分相同或重叠,提示这些具有不同特性的抗原决定簇确实位于同一结构蛋白上。以上结果表明,该50k血凝素蛋白特性及结构均较复杂,尚待进一步研究。     

Monoclonal Antibodies Against a Sulfathiazole Derivative for the Immunochemical Detection of Sulfonamides

To prepare monoclonal antibodies (mAbs) against the generic part of sulfonamides, a sulfathiazole derivative was chemically linked to carrier proteins in such a way that the aromatic amino group, common to all sulfonamides, was distal to the proteins. Four mice were immunized with the sulfathiazole-protein derivatives. The spleen cells of one of the mice were fused with myeloma cells to produce hybridomas of which the supernatants were screened in an indirect ELISA (iELISA) for the presence of sulfathiazole antibodies. After cloning, positive supernatants were tested in a competitive iELISA (ciELISA) for inhibition with 18 sulfonamides. This resulted in four different mAbs (all IgG1 kappa light chain) which recognized several sulfonamides. By use of the best monoclonal (27G3) and an optimized ciELISA protocol, eight structurally different sulfonamides showed 50% inhibition at concentrations less than 100 ngml^- or 5 ng/well. However, other relevant sulfonamides (such as sulfadimidine, sulfatroxazole and sulfachloropyrazine) were detected at a high level only with this mAb. This means that the ciELISA (with the best Mab) showed a broad specificity for sulfonamides but the sensitivity towards the different sulfonamides varied too much to call it a generic sulfonamide ELISA.     

抗慢性B淋巴细胞白血病患者IgM单抗相对亲和力的分析

本文采用间接ELISA法检测了11株抗B-CLL患者IgM腹水和杂交瘤上清McAb的相对亲和力。结果提示,各株McAb结合抗原的相对亲和力不同。根据50％最大结合浓度分为两组。其中4株杂交瘤上清McAb与纯化腹水McAb测得结果基本吻合。实验结果为合理地选用这些单抗提供了重要依据。