诱导细胞凋亡的抗hDR5单抗的研究

目的 研制能诱导肿瘤细胞凋亡的抗人DR5单克隆抗体（McAb）。方法 以可溶性人死亡受体（death receptor，DR）5胞外段免疫小鼠，采用杂交瘤技术制备抗人DR5的McAb；MTT方法筛选分泌有细胞毒活性McAb的杂交瘤细胞；亲和层析方法纯化McAb；夹心ELISA法测定McAb亚型；Western blot和斑点ELISA法检测McAb的抗原表位类型；间接ELISA法检测McAb的特异性；流式细胞仪检测FITC-annexinⅤ／PI双色标记的Jurkat细胞的凋亡率；DNA琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞的DNA片段化。结果 获得1株杂交瘤细胞，其分泌的McAb命名为mDRA-6，为IgG1；其抗原表位类型为构象表位；其特异性识别hDR5，与hFas、hDR4等无交叉反应。mDRA-6对Jurkat细胞具有细胞毒作用；经McAb mDRA-6处理后，Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂，并导致Jurkat细胞中的DNA片段化。结论 mDRA-6是一个具有诱导细胞凋亡活性的新的抗人DR5功能性抗体，在以TRAIL／DR5系统进行肿瘤治疗和探讨DR5的功能结构域研究方面具有广泛应用前景。     

分泌抗脲酶单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用

用脲酶(Urease)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞用PEG融合。ELISA法筛选分泌抗脲酶单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,建立起6株杂交瘤细胞。细胞分泌抗体滴度高、亲和力强、特异性好,长期传代稳定。     

抗人红细胞膜中3-磷酸甘油醛脱氢酶杂交瘤细胞株的建立和鉴定

应用正常人红细胞膜提纯的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPD)免疫 BALB/c 小鼠的脾细胞与 SP2/O 小鼠骨髓瘤细胞在50%(W/V)PEG 1,000作用下融合。经三次克隆后,获得一株分泌抗正常人红细胞膜中 GAPD 杂交瘤细胞株(简称9C_6)。经被动血凝实验,生物化学酶抑制试验以及酶联免疫电泳转移试验证明此杂交瘤细胞株所分泌的单克隆抗体(McAb)属小鼠 IgM,对正常人红细胞膜 GAPD 是特异的。此 McAb 可用于 GAPD 的纯化、人红细胞膜中 GAPD 活性的测定以及对阵发性夜间性血红蛋白尿症病因的探讨。     

孕酮单克隆抗体的制备及抗体筛选方法的改进

近年来利用Kohler和Milstein创建的杂交瘤技术研制甾体激素类McAb已显示出巨大潜力。本文报道应用孕酮免疫BALB/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,用辣根过氧化物酶标记的孕酮(以下简称E-孕酮)结合法筛选抗体,获得了3株分泌抗孕酮单克隆     

^125I标记McAb BAC5在荷瘤裸鼠移植瘤的分布研究

用放射性核素标记单克隆抗体(McAb)进行肿瘤的放射免疫显像,是诊断肿瘤的重要手段之一,也是近年来受人关注的动向之一。我们在进行抗低分化鼻咽癌单杭BAC5在荷瘤裸鼠体内分布研究中,发现标记McAb BAC5在肿瘤中央坏死部位与肿瘤周边未坏死部位的分布随时间而改变。时间愈长,坏死处浓集愈高,现将结果报告如下。 材料和方法 一、McAb BAC5:抗低分化鼻咽癌杂交瘤细胞     

抗人IgG单克隆抗体的研究Ⅳ.酶标试剂的实际应用

<正> 我们在建立8株分泌抗人IgG单克隆抗体(以下简称McAb)的细胞,并对所得McA’进行了特异性、结合力和鼠Ig亚类等对比分析的基础上,选择其中三种由不同杂交瘤细胞诱生的小鼠腹水,经纯化和用辣根过氧化物酶标记,作为第二抗体试用,获得满意的结果,现简报如下。     

单克隆抗体的简易酶标记技术

自从kohler和Milstein 1975年建立杂交瘤技术以来,我国已建立了针对不同抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞系百余种。由这些细胞系分泌的单克隆抗体(McAb)是均一的蛋白质。目前McAb在临床上主要用于疾病诊断和了解人类疾病的发病机理。近年来许多学者进行了这方面的探讨。实验表明,纯化后的McAb不易标记酶和荧光素,往往采用标记第二抗体进行间接法检测,因而使实验研究和临床应用受到一定的限制。最近,我们直接用腹水型单克隆     

大鼠杂交瘤技术的特点及应用的研究

作者成功地引建了大鼠杂交瘤技术体系,以此技术获得分泌大鼠抗辣根过氧化物酶(HRP)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤株。并制备了HRP-大鼠抗HRP(PAP)复合物,在细胞及组织切片上染色效果良好,背景清晰。为促进这一技术体系的推广应用提供有利条件。     

分泌抗骨肉瘤单克隆抗体杂交瘤细胞建株研究

用人体骨肉瘤细胞株HOS-8603脾内一次性免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞 NSO融合,经ELISA和 FIA筛选,获得2株分泌抗人体骨肉瘤单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株(OS-MAb_1)和OS-MAb_2)。用ABC 免疫酶标法检测发现(OS-MAb_1)杂交瘤细胞所分泌的 McAb,除对人体骨肉瘤组织呈阳性反应外,对部分骨巨细胞瘤、软骨肉瘤和尤文氏肉瘤组织呈阳性反应,而对其它肿瘤组织和正常成人及胎儿组织呈阴性反应。同位素~(125)I标记该抗体,在荷人骨肉瘤裸鼠体内定位,发现72小时起到96小时肿瘤放射性影像清晰,放射性积聚高于其他部位。显示OS-MAb_1株所分泌的抗人体骨肉瘤McAb作为定位诊断和导向治疗载体的可能性。     

大鼠杂交瘤技术的特点及应用的研究

作者成功地引建了大鼠杂交瘤技术体系．以此技术获得分泌大鼠抗辣根过氧化物酶(HRP)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤株，并制备了HRP-大鼠抗HRP(PAP)复合物，在细胞及组织切片上染色效果良好．背景清晰，为促进这一技术体系的推广应用提供有利条件。     

四种抗人IgA单克隆抗体的特性研究

<正> 杂交瘤技术自1975年建立以来就引起了广泛的关注。目前抗免疫球蛋白的单克隆抗体(McAb)已是实验与临床研究的重要试剂,其中抗人IgA McAb国内外已开展了一定的工作。夏恺等报道,建立了四株分泌抗人IgA McAb的杂交瘤细胞系,并应用于鼻咽癌的早期诊断等。国外也有报道,应用其于巨细胞病毒感染的诊断及B细胞发育分化的研究等。 作者建立了二林分泌抗人IgA McAb的杂交瘤细胞系,5A6和2F7,其分泌抗     

适于标记的HFRSV组特异性McAb的建立及其应用

本研究用陕西81-14A株HFRSV,免疫BALB/c小鼠,取该鼠牌细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得分泌抗HFRSV抗体的C_4株杂交瘤细胞系。C_4株McAb与我国各地的28株及朝鲜的76～118株,Seoul株HFRSV均产生免疫反应,表明是HFRSV组特异性抗体,并适用于荧光素及辣根过氧化物酶标记、经初步应用效果满意。     

抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的研制和初步应用

本文采用体细胞杂交瘤技术和酶联免疫吸附试验筛选技术,获得了6株持续分泌抗人甲状腺球蛋白 McAb 的杂交瘤细胞系。这6种 McAb 对人 T_3/T_4、及家兔、小牛、大鼠的甲状腺球蛋白均无交叉反应,但其中4种 McAb 对狗甲状腺球蛋白有不同程度的交叉反应,包括2种 McAb对人甲状腺微粒体也有交叉反应,余2种 McAb 均无交叉反应。将所得杂交瘤细胞接种 BALB/c鼠腹腔,获得高效价的腹水 McAb。本文还以这些 McAb 用免疫组化法,研究和检测病理甲状腺组织中甲状腺球蛋白的可能性进行了初步探索,并讨论了其临床意义。     

血管内皮细胞生长因子受体KDR胞外配基结合区单抗对内皮细胞增殖及血管形成的抑制

目的　研制能封闭血管内皮生长因子 (VEGF)受体KDR的单克隆抗体 (McAb) ,探讨其抑制VEGF诱导的体内外活性。方法　以原核表达的KDRⅠ～Ⅳ区融合蛋白免疫BALB/c小鼠 ,用杂交瘤技术制备抗KDRⅠ～Ⅳ的McAb ,并用免疫双扩、ELISA和Western免疫印迹鉴定其亚类和抗原结合特异性 ,用VEGF刺激内皮细胞增殖及鸡胚血管形成实验检测该抗体的中和活性。结果　通过筛选和鉴定获得了 2株KDRⅠ～Ⅳ区McAbs(3G9、1E4) ,其分泌抗体亚类分别为IgG1和IgM。 2株McAb均能明显抑制VEGF诱导的内皮细胞 (EC)增殖 ,经纯化的McAb 3G9能明显抑制经VEGF刺激的鸡胚血管形成。结论　KDRⅠ～Ⅳ区McAb可能通过封闭内源性KDR而抑制VEGF活性 ,McAb 3G9具有潜在治疗肿瘤的应用前景。     

表面表位包埋法制备肿瘤表面抗原P185neu/c-erbB-2单克隆抗体及其性质研究

目的 :细胞表面表位包埋法 (SEM)是一种选择细胞表面特定的表达分子制备单克隆抗体的新途径。由于P185 neu c erbB 2 是乳腺癌及其他肿瘤的一个重要表面标志 ,这个研究旨在应用SEM法制备特异性好 ,灵敏度高的P185单克隆抗体并分析其特性以便于临床。方法 :采用细胞表面表位包埋法免疫BALB C小鼠 ,常规杂交瘤技术进行细胞融合 ,ELISA法测定 ,有限稀释法克隆化。结果 :筛选得到 3株能稳定分泌抗人癌基因erbB 2产物P185蛋白的McAb杂交瘤细胞。经间接免疫过氧化物酶染色和流式细胞术分析证明该McAb特异性与P185阳性细胞膜结合 ,而不与结构类似的EGFR膜阳性细胞结合。免疫印迹实验证明这些McAb特异地与P185蛋白结合 ,病理切片免疫组化结果证明该单抗对乳腺癌组织呈特异膜阳性反应。结论 :SEM法制备的肿瘤表面抗原P185的McAb杂交瘤具有很好的用于临床诊断肿瘤抗原P185的价值及工程化改造的前景。     

传统的ELISA方法不宜于用来筛选杂交瘤培养上清液中的小鼠单克隆抗体

最常用来筛选分泌特异性McAb杂交瘤的方法是将抗原固定在塑料板表面,加入杂交瘤培养上清与之反应,而后用标记同位素或标记酶(ELISA)的抗小鼠Ig来检测与固相抗原结合的McAbs.作者用此种ELISA方法筛选,制备了抗人肌酸激酶(CK)和抗人乳酸脱氢酶(LDH)的McAbs.当用液相RIA(~(125)I标记抗原与待测McAbs共育,用偶联有羊     

抗乙醇诱导的大鼠肝脏微粒体细胞色素P-450单克隆抗体的制备及特性鉴别

从乙醇处理的大鼠分离细胞色素P-450(EtOH-P-450)。纯化后免疫BALB/c雌鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓癌细胞制备杂交瘤。应用固相放射免疫法筛选单克隆抗体(McAb)产生杂交瘤。试验中使用~(35)[S]蛋氨酸标记的大鼠抗小鼠k链McAb作为第二抗体(Yelton,D.E,etal:HYbriboma 1。5-11。1981)。分离31个单独的产生一种单一鼠免疫球蛋白     

抗AFP单克隆抗体对荷肝癌鼠γ-照相的研究

通过杂交瘤技术获得抗AFP McAb。用放射性核素~(125)I,采用改良的氯胺丁法标记AFP McAb(IgG)。 采用裸鼠人肝癌模型和化学致癌剂诱发的大鼠肝癌模型,尾静脉注入~(125)I-AFP McAb     

抗入巨细胞病毒极早期抗原单克隆抗体的制备(文摘)

作者用杂交瘤技术制备出抗人巨细胞病毒(HCMV)极早期抗原的单克隆抗体(McAb),探讨HCMV感染的早期临床诊断。 作者将HCMV用moiI法感染人胚肺纤维母细胞(HEL)后分离细胞核,与Freund氏佐剂一起免疫BALB/c小鼠,每隔2周追加免疫一次,共4个月。腹腔内追加注入后,将脾细胞和鼠骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附法筛选,经过克隆化获得杂交瘤细胞纯株后,     

两株鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步研究

目的　研制鼠抗人GL5 0分子单克隆抗体并对其生物学特性进行初步研究。方法　以天然高表达人GL5 0分子的Daudi细胞为免疫原 ,人GL5 0 L92 9转基因细胞为目的单克隆抗体(McAb)的筛选细胞 ,采用B淋巴细胞杂交瘤技术 ,获得分泌特异性鼠抗人GL5 0分子McAb的杂交瘤细胞株 ;免疫荧光标记和流式细胞术分析McAb识别GL5 0的表达 ;Westernblot检测抗体对特异性细胞膜蛋白的识别 ;台盼蓝 (Trypanblue)染色细胞计数法和MTT法检测McAb对Daudi细胞体外生长的抑制作用 ;3 H TdR法检测抗体对GL5 0 L转基因细胞介导的活化T细胞体外增殖的效应。结果　成功制备 2株分泌特异性抗人GL5 0抗体的杂交瘤细胞株 12B11和 11C4 ;两者皆为IgG2a亚型 ;腹水效价皆在 1∶10 0 0以上 ;12B11、11C4特异性地识别GL5 0分子。 11C4McAb可以明显抑制Daudi细胞在体外的生长 ,并可抑制GL5 0 L转基因细胞介导的活化T淋巴细胞的体外增殖效应。结论　成功获得了 2株特异性鼠抗人GL5 0抗体 ,其中 11C4McAb具有诱导表达GL5 0分子的B淋巴瘤细胞Daudi的体外生长抑制作用 ;在T淋巴细胞体外增殖反应中发挥了重要的调节作用。