大鼠心肌偶联的G6P酶细胞化学研究

心肌肌膜系统与连接肌浆网之间接触的特殊结构称为心肌偶联,它广泛地存在于哺乳类动物心肌细胞内。韩氏等首先用内质网标志酶G6P酶观察了大鼠心肌细胞的偶联结构,证实了横小管与连接肌浆网形成内部倡联以及肌膜与肌膜下池构成周围偶联。本文应用细胞化学G6P酶技术对大鼠心房和心室的心肌偶联作进一步观察。现报道如下:     

大鼠心肌细胞的肌浆网与闰盘间偶联的电镜观察

本实验对大鼠心房心肌细胞的肌浆网与閏盘间的关系进行了超微结构观察。结果表明,肌浆网与閏盘的非特化肌膜存在偶联,为区别于一般的周围偶联,而将它们之间的偶联称为閏盘偶联。它具有周围偶联及内部偶联的形态结构特征,即(1)在偶联区域内存在胞浆间隙,宽约11～18nm;(2)在胞浆间隙内有连接突或连足;(3)肌浆网腔内含有电子致密物质。在偶联区域,肌浆网膜不仅与閏盘的非特化肌膜形成偶联,而且与线粒体外膜紧密并置。此外,心肌缝隙连接与肌浆网可形成缝隙连接-肌浆网偶联,其超微结构特点与心肌偶联相同。本文对肌浆网与閏盘的偶联的功能意义进行了讨论。     

骨骼肌胞浆Ca2+稳态与肌疾病

骨骼肌胞浆内Ca~(2+)稳态是Ca~(2+)转运系统对Ca~(2+)释放和Ca~(2+)摄取保持动态平衡的结果。本文将从细胞和分子水平 讨论肌浆网(SR)钙转运系统的分子基础以及某些肌疾病的发病机制。1 胞浆Ca~(2+)的来源 骨骼肌兴奋-收缩偶联过程中有两个因素,即肌膜的去极化和胞浆内大量的Ca~(2+)快速聚集。前者通过二氢吡啶受     

胃粘液腺癌分泌细胞器电镜酶细胞化学研究

利用酶细胞化学方法对胃粘液腺癌细胞葡萄糖-6-磷酸酶(G6-Pase)焦磷酸硫胺素酶(TPPase)和酸性磷酸酶(AcP)进行了光、电镜 水平的定位观察。作者发现胃粘液腺癌G6Pase、TPPase反应较弱,AcP反应多明显增强;电镜下呈弱G6Pase反应的内质网常被挤至细胞周边部或夹于粘液颗粒之间,呈“点彩”状;TPPase反应除见于高尔基体扁平膜囊外,还见于一些未成熟分泌颗粒内,提示分泌颗粒的加工和分泌加速;癌细胞溶酶体数量增加,泌噬作用活跃,AcP反应明显.作者认为胃粘液腺癌分泌功能异常活跃与其畸形分化过程有关;溶酶体的大量增加为其易于转移提供了必要的形态学基础。     

人胃粘膜细胞器标志酶电镜细胞化学研究

应用电镜酶细胞化学方法对15例人体正常胃粘膜细胞碱性磷酸酶(AlP)、酸性磷酸酶(AcP)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)、焦磷酸硫胺素酶(TPPase)及细胞色素氧化酶(CCO)进行了超微结构水平的研究,并与光镜结果进行了对比观察。发现正常胃粘膜上皮细胞无AlP反应;AcP仅见于主细胞的胞溶酶体及分泌溶酶体内;TPPase定位于胃粘膜表面上皮细胞及主细胞高尔基体反面第1～3层膜囊、GERL及少数内质网中;G6Pase和CCO见于所有胃粘膜上皮细胞内,但G6Pase反应以主细胞显著,CCO反应以壁细胞显著,与其细胞功能相一致。作者认为电镜酶细胞化学研究能更真实地反映出细胞的功能活动和代谢状态。     

大鼠心肌细胞葡萄糖—6—磷酸酶活性的超微结构定位

本实验对大鼠心房及心室的心肌细胞葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)活性进行了电镜观察,G-6-Pase反应产物见于肌浆网(SR)和核被膜内。我们发现心肌细胞内G-6-Pase活性呈现异质性分布,周围连接肌浆网(PJ-SR)和内部连接肌浆网(IJ-SR)内的G-6-pase反应产物较多,核被膜内含量较少,而网状肌浆网(N-SR)则含量稀少,或者缺乏。本文对心肌细胞内G-6-Pase的可能功能意义进行了讨论。     

骨骼肌兴奋-收缩偶联超微结构瞬时变化研究

目的：从毫秒级功能变化水平实时观察骨骼肌在潜伏期内的细胞超微结构形态变化。方法：采用双向红外线探测器-计算机控制的电刺激与超低温快速冷冻固定同步技术，对电刺激后的蟾蜍腓肠肌组织作快速冷冻固定，采用透射电镜对该肌在电刺激后0.8,5.6,8.4ms及静息期的超微结构变化进行对比研究。结果：骨骼肌组织处于静息期时，其肌膜与肌纤维的间隙较宽，受电刺激后0.8ms开始至8.4ms，肌膜与肌细胞间的间隙大大变窄。并发现骨骼肌组织在电刺激后0.8，5.6及8.4ms时肌浆网前端的膜产生两个圆孔，而当骨骼肌处于静息期时肌浆网膜并无此形态结构。结论：当骨骼肌兴奋-收缩偶联发生时，肌膜在产生去极化的同时产生位移，并与肌纤维的间距发生改变；骨骼肌收缩时肌浆网膜出现小孔。     

双氢青蒿素体外抗卡氏肺孢子虫电镜细胞酶化学研究

目的　观察双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫虫体的酸性磷酸酶 (AcPase)、葡萄糖 6 磷酸酶 (G 6 Pase)和腺苷三磷酸酶 (ATPase)等 3种代谢酶的影响。方法　将Pc接种于有支持细胞的 5 0ml培养瓶中 ,4h后 ,试验组每瓶加入DHA 5 0μmol·L- 1 ,同时作对照组。用药后 12h ,作电镜酶细胞化学 ,观察上述 3种酶的定位及用药后各种酶超微结构水平上的变化。结果　AcPase反应产物用药组与不用药组无明显变化。G 6 Pase、ATPase反应产物用药组明显减弱。酶的阴性对照组无酶产物产生。结论　双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫细胞内的AcPase无影响。双氢青蒿素对PcG 6 Pase、ATPase的活性有明显的抑制 ,可能是影响Pc细胞的代谢功能 ,最终抑制其增殖的原因之一。     

心肌缺血再灌注损伤肌浆网钙泵活性变化电镜酶细胞化学研究

目的研究心肌缺血再灌注损伤肌浆网、肌膜钙泵(Ca2+-ATPase)功能变化.方法采用大鼠离体心脏模型应用电镜酶细胞化学及生化技术,研究缺血再灌注心肌肌浆网、细胞膜原位钙泵分布及活性变化.结果心肌细胞钙泵以高电子密度颗粒主要分布于肌浆网、肌膜等膜结构,缺血30min钙泵反应产物显著减少,再灌注30min及60min酶进一步减少或缺失.生化钙泵活性测定显示心肌缺血30min时为(0.048±0.010)μmol/mg·h     

家兔骨骼肌钙释放通道放射配基分析法的建立

为建立骨骼肌肌浆网 (SR)钙释放通道的检测方法 ,探索在骨骼肌中建立钙释放通道放射配基分析的最适宜条件 ,采用蔗糖梯度离心提取骨骼肌肌浆结合的最适宜条件。结果发现 ,37℃水浴下 ,在 0～ 6 0 min内 ,[3H]ryanodine与骨骼肌肌浆网的结合量迅速增加 ,90 min时基本达到平衡 ,90～ 12 0 min内基本无变化。匀浆蛋白在 0 .4～ 0 .6 g/ml、[3H]ryanodine在 1～ 30nmol/L 最适宜 [3H]ryanodine与骨骼肌肌浆网钙释放通道的结合。家兔骨骼肌钙释放通道放射配基分析法的建立@吴乐$南京医科大学!南京210029 @张缪佳$南京医科大学!南京210029 …     

大鼠动情周期和妊娠早期子宫内膜组织化学的研究

实验观察了大鼠动情周期和妊娠第3、6、8天子宫表面上皮和腺上皮中糖原、脂类、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、非特异性酯酶、琥珀酸脱氢酶和3-β-羟基甾体脱氢酶等的组织化学反应。将糖原、脂类和酶活性的反应强度分为4级。结果发现:在间期,酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶和非特异性酯酶活性最低。糖原和脂类的含量也较低。在动情期的表面上皮中,非特异性酯酶、酸性磷酸酶和琥珀酸脱氢酶的活性增强。提示动情期内膜的糖代谢和脂类代谢开始旺盛。妊娠期,特别是妊娠第6天,糖原和脂类的含量以及酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、非特异性酯酶的活性都明显增强,提示胚胎植入所需要的营养物质可能主要来源于子宫表面上皮的糖代谢和脂类代谢。在妊娠第6天表面上皮和腺上皮中碱性磷酸酶活性最低。另外还发现大鼠子宫表面上皮中含有3-β-羟基甾体脱氢酶,其意义有待探讨。     

黄曲霉毒素B_1致肝癌作用短期体内实验模型的酶表型研究

观察了 GGT、ATPase、G6Pase 在 AFB_1致大鼠肝癌短期体内实验模型中 AHF 和结节内的表达情况。结果显示,在 AHF 和结节内以 GGT、ATPase 组合表型的灶数及灶面积发生率最高,分别为48. 95%和61. 44%。单独 G6Pase 者最低,分别为0. 2%及0. 38%。各单项酶变异灶中,GGT 阳性表达而 ATPase 及 G6Pase 阴性表达的百分率分别为73. 22%、78. 64%及5. 12%。而 GGT 或(和) ATPase 发生率高达99. 80%。提示,应用 GGT和 ATPase 二种酶几乎可以完全反映本实验模型中 AHF 和结节发生情况,而 G6Pase 在本模型中应用价值不大。     

混合稀土常乐对大鼠肝脏酶组织化学活性的影响

目的：探讨在不同剂量农用混合稀土常乐的作用下,大鼠肝脏酶活性的变化及作用机理。方法:以Wistar大鼠为研究对象,连续用生理盐水和20.0、5.0 、2.0 mg•kg^-1常乐灌胃3个月,每日1次。应用酶组织化学技术,观察大鼠肝脏的琥珀酸脱氢酶（SDHase）、葡萄糖6磷酸酶（G-6-Pase）及三磷酸腺苷酶（Ca2+-ATPase）的变化。结果：与对照组比较,5.0和2.0 mg•kg^-1组酶活性颗粒变化不明显,20.0 mg•kg^-1组SDHase、G-6-Pase和Ca2+-ATPase酶活性颗粒均明显减少。 结论：给予不同剂量的混合稀土常乐,对大鼠肝脏酶活性有影响,其中以20.0 mg•kg^-1组变化显著。     

Evidence for a raised concentration of a circulating sodium transport inhibitor in essential hypertension

A cytochemical technique that measures the ability of plasma to stimulate guinea-pig renal glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) activity in vitro, which is a marker of its ability to inhibit Na+-K+-adenosine-triphosphatase (Na+-K+-ATPase), was used in 19 patients with essential hypertension and 23 normotensive, healthy subjects. The ability of plasma to stimulate G6PD was significantly greater in the hypertensive patients when they were taking their normal sodium diet than in the normotensive subjects, and was significantly correlated with blood pressure. The ability of plasma to stimulate G6PD was inversely correlated with plasma renin activity in the hypertensive patients and increased with age and sodium intake in the normotensive subjects. These results support the hypothesis that essential hypertension, and also perhaps the increase in blood pressure with age in communities that consume large quantities of salt, is in part due to an increase in a circulating concentration of an inhibitor of Na+-N+-ATPase.     

同型半胱氨酸对小鼠糖异生作用的影响

目的研究高同型半胱氨酸血症中肝脏组织葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）的表达,探讨
同型半胱氨酸对糖异生作用的影响。方法50 只小鼠随机分为高同型半胱氨酸血症（HHcy）组和正常对照组,每组25 只;含
1.5%的蛋氨酸饮水3个月制造高同型半胱氨酸动物模型。3个月后,各组测定空腹血糖、空腹胰岛素,计算胰岛素抵抗指数;利
用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blot方法检测肝脏的G6Pase和PEPCK表达的变化。结果与正常对照组比较,HHcy组空腹
血糖、空腹胰岛素和胰岛素抵抗指数增加（P<0.05）;RT-PCR发现HHcy组肝脏的G6Pase和PEPCK的mRNA水平明显增加（P<
0.05）;Western blot表明HHcy组肝脏的G6Pase和PEPCK的蛋白质表达水平明显增加（P<0.05）。结论同型半胱氨酸可能通过
增强糖异生作用,导致肝糖的输出增多,与胰岛素抵抗的发生有关。
     

Enzymatic Histochemistry of Retina with Experimental Intraocular Pressure Elevation in Rabbits

ＥｎｚｙｍａｔｉｃＨｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＲｅｔｉｎａｗｉｔｈＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＩｎｔｒａｏｃｕｌａｒＰｒｅｓｓｕｒｅＥｌｅｖａｔｉｏｎｉｎＲａｂｂｉｔｓＹＡＮＧＺｈｉ－ｋｕａｎ（杨智宽）；ＤＵＳｕ－ｈｕａ（杜蜀华）（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎ...     

衍生物Fla-CN的抗糖尿病作用及其作用机制研究

目的:体内外研究黄酮衍生物Fla-CN的抗糖尿病作用及其机制。方法:体外实验以人肝HepG2细胞为研究对象,不同浓度Fla-CN孵育后,利用荧光标记 2-脱氧葡萄糖（2-NBDG）,通过检测HepG2 细胞内2-NBDG的荧光强度,观察Fla-CN对肝细胞葡萄糖摄取的影响;采用硫酸-蒽酮比色法检测HepG2细胞内糖原含量;通过检测一定时间内葡萄糖生成量,观察Fla-CN对肝细胞糖异生过程的影响。体内实验采用2型糖尿病模型db/db小鼠为研究对象,给予Fla-CN和二甲双胍干预4 周后,测定db/db小鼠空腹血糖、糖耐量以及胰岛素耐量,计算糖耐量、胰岛素耐量实验血糖-曲线下面积（AUC）。通过Western印迹法检测化合物干预后小鼠肝组织中磷酸化AMP活化蛋白激酶 (AMPK)、糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）及转录调控因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ协同刺激因子1α（PGC-1α）的表达。进一步通过Western 印迹检测AMPK抑制剂Compound C或AMPK激动剂AICAR 与Fla-CN联用后,HepG2细胞内PEPCK、G6Pase、PGC-1α的蛋白表达。结果:Fla-CN能够促进HepG2细胞对葡萄糖的摄取（F=33.50,P<0.01）和糖原合成（F=93.63,P<0.01）,抑制糖异生（F=44.19,P<0.01）。同时,Fla-CN显著降低2型糖尿病db/db小鼠空腹血糖以及时间-血糖曲线下面积（F=98.40,P<0.05）。Western印迹显示Fla-CN能够激活db/db小鼠肝组织中 AMPK,抑制PEPCK、G6Pase 以及PGC-1α 的表达,并呈现一定剂量依赖性。Compound C能在一定程度上阻断Fla-CN对AMPK的激活和对PEPCK、G6Pase 以及PGC-1α的抑制作用。结论:黄酮衍生物Fla-CN通过激活AMPK,有效调节肝 HepG2 细胞糖代谢,抑制肝糖异生,降低2型糖尿病db/db小鼠空腹血糖,改善其受损的糖耐量,提高胰岛素敏感性。