秦艽愈伤组织缓慢生长保存及其生理指标研究△

目的:筛选秦艽愈伤组织缓慢生长保存的适宜方法,进一步研究保存后愈伤组织形态指标与生理指标之间的相关性。方法:向培养基中添加不同浓度生长抑制剂、高渗化合物及不同基本培养基保存秦艽愈伤组织,在室温下保存6个月后统计愈伤组织的形态学指标。测定不同浓度甘露醇、矮壮素和蔗糖处理中秦艽愈伤组织的生理指标。结果:1.0mg·L-1ABA和9%蔗糖处理中愈伤表面产生大量胚状体,生长良好。5%甘露醇和PEG处理中愈伤黄绿色,生长良好。PP333中愈伤生长一般,CCC中愈伤老化。9%蔗糖处理中可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白质含量明显高于其它浓度和甘露醇、矮壮素处理。结论:1.0mg·L-1ABA,9%蔗糖保存秦艽愈伤组织效果最好;5%甘露醇和PEG保存效果良好。可溶性糖、淀粉和可溶性蛋白质3个生理指标可以在一定程度上反映秦艽愈伤组织在延缓保存时的存活情况。     

当归愈伤组织诱导及植株再生研究

目的：探究当归愈伤组织诱导、增殖、胚状体分化和植株再生的条件,为当归工厂化育苗和转基因育种奠定基础。方法：以胚轴和子叶为外植体,1/2 MS或MS为基本培养基,添加不同浓度的蔗糖、不同种类和浓度的激素,诱导当归愈伤组织。研究不同的继代方法和次数、ABA、IBA及蔗糖浓度对愈伤增殖和胚状体分化的影响。结果：愈伤组织第1~5次的继代及胚状体分化培养基可采用1/2 MS+IBA 2 mg·L-1+3%蔗糖,愈伤组织第6次之后的继代和胚状体分化培养基可采用1/2 MS+IBA 2 mg·L-1+KT 02 mg·L-1+3%蔗糖培养基,愈伤组织生长良好,但胚状体的分化量还有待进一步提高。结论：建立了较为完善的当归胚状体再生植株的技术体系。     

不同培养基成分对金铁锁愈伤组织生长及皂苷含量积累的影响

目的 研究不同培养基成分对金铁锁愈伤组织生长和皂苷积累规律的影响.方法 改变培养基中碳源、氮源、磷酸盐、钙盐的浓度,比色法测定愈伤组织中皂苷的含量.结果 金铁锁愈伤组织生长和皂苷积累的最适培养基成分为蔗糖40 g·L-1,KNO3∶NH4NO3为(1.9:1.65)g·L-1,1 mmol·L-1KH2PO4,4.5 mmol·L-1CaCl2.结论 蔗糖作为碳源最有利于金铁锁愈伤组织生物量的积累和金铁锁皂苷的生物合成.混合氮源有利于金铁锁愈伤组织生长和皂苷含量的积累.     

夏枯草愈伤组织诱导和植株再生技术的研究

目的:探讨夏枯草愈伤组织诱导和植株再生条件。方法:采用正交试验法研究不同外植体、蔗糖、植物生长物质及其配比对夏枯草愈伤组织诱导和分化的影响。结果和结论:以叶片为外植体诱导愈伤效果最好,茎段次之,叶柄不能诱导出愈伤组织;6-BA是影响夏枯草愈伤组织形成的主要因素;诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+6-BA 3.0 mg.L-1+NAA 0.1mg.L-1+2,4-D 0.5 mg.L-1+蔗糖3%;宜于愈伤组织分化的培养基为1/2 MS+6-BA 3.25 mg.L-1+NAA1.25 mg.L-1+蔗糖2%;最佳生根培养基:MS+IBA 1.0 mg.L-1+蔗糖3%。     

影响黄芪愈伤组织生长和黄芪黄酮合成的因素

目的 研究培养基成分和光照对黄芪愈伤组织生长和黄酮类化合物形成的影响.方法 使用不同培养基并改变其中碳源、氮源、磷酸盐、钙盐的浓度,在黑暗和光照条件下进行黄芪愈伤组织培养,分光光度法检测愈伤组织中黄酮类化合物的含量.结果 黄芪黄酮积累的最佳条件是(24±1)℃暗培养,培养基为MS基本培养基(附加0.5mg·L-12,4-D和1.0mg·L-16-BA),其中含有80g·L-1蔗糖,NH NO3-为12(氮源总浓度为60mmol·L-1),1.5mmol·L-1KH2PO4,1.496 mmol·L-1CaCl2.结论 蔗糖作为碳源最有利于黄芪愈伤组织生长和黄芪黄酮的生物合成.混合氮源有利于黄芪黄酮类化合物的合成.     

皖贝母试管鳞茎诱导技术的研究

目的：研究离体条件下皖贝母试管鳞茎诱导的最佳培养条件。方法：以单块愈伤组织分化形成的鳞茎个数和鲜重为指标，考察蔗糖浓度、水杨酸、活性炭和5 ℃低温预培养对皖贝母试管鳞茎的形成和生长的影响。结果：50 g·L-1的蔗糖处理形成的鳞茎个数和鲜重都极显著高于其他处理，水杨酸对试管鳞茎的形成具有抑制作用，以 5 g·L-1的活性炭处理形成鳞茎个数和鲜重优于其他处理，5 ℃低温预培养30～40 d对试管鳞茎的形成和膨大效果最好。结论：低温预培养30～40 d的皖贝母愈伤组织，接种于MS+KT 2 mg·L-1+NAA 2 mg·L-1+50 g·L-1蔗糖+5 g·L-1活性炭的培养基中，鳞茎形成和生长发育效果最佳。     

秦艽愈伤组织的培养及其龙胆苦苷含量的研究

目的:为扩大和提高甘肃道地药材秦艽资源的利用效率。方法:以秦艽种子的萌发所获得的幼芽作为外植体,诱导形成愈伤组织;筛选诱导愈伤组织产生的不同培养基和培养条件,并继代培养;应用HPLC法测定龙胆苦苷的含量。结果:秦艽愈伤组织生长的最佳培养基为MS+2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.5 mg/L),最佳继代培养基为MS+2,4-D(1.0 mg/L)+6-BA(0.5 mg/L)+NAA(0.5 mg/L),最佳继代时间为30 d。龙胆苦苷积累量在指数生长后期(28～30 d)达最高,为0.78 mg/g DW。结论:筛选出了适宜的秦艽愈伤组织培养方法。秦艽愈伤组织在固体培养基上的生长曲线呈"S"型,且愈伤组织中龙胆苦苷的积累量随愈伤组织增殖而不断增加。     

龙脑樟愈伤组织的诱导及龙脑的产生

目的:优化龙脑樟愈伤组织的诱导条件。方法:采用植物组织培养方法和气相色谱方法进行。结果:MS培养基中添加不同浓度配比的激素,愈伤组织的诱导效果不同,愈伤细胞生长状况也不一样,其中在培养基上添加2,4-D4 mg.L-1+6-BA 0.2 mg.L-1愈伤组织的诱导率最高,细胞生长旺盛。同时,发现采用嫩叶为外植体诱导出的愈伤组织中含有龙脑,而采用茎为外植体诱导出的愈伤组织中不含龙脑。结论:龙脑樟愈伤组织诱导适宜的培养基为MS+2,4-D 4 mg.L-1+6-BA 0.2 mg.L-1,龙脑的生成则以嫩叶为外植体。     

黄芩愈伤组织培养及黄芩苷合成调控的研究

目的研究黄芩愈伤组织培养和黄芩苷合成调控的规律。方法采用植物细胞培养技术诱导愈伤组织;HPLC法测定黄芩苷的量。结果黄芩愈伤组织生长和黄芩苷积累的优势培养条件为在基本培养基MS中氮源浓度为60mmol/L(NH4 ∶NO3-为1∶1),KH2PO4浓度0.5~1.5mmol/L,附加80g/L蔗糖,0.3mg/LIAA,2mg/L6-BA和200mg/L蛋白胨,温度(25±1)℃,暗培养。培养40d后收获愈伤组织,生物量达28.7g/L,黄芩苷为167.4mg/g,明显高于野生黄芩的最高量。结论黄芩愈伤组织的生长和黄芩苷的积累并不同步,而是先生长后合成。蔗糖对黄芩苷的合成具有明显的调节作用,在蔗糖质量浓度小于3%时,能有效促进愈伤组织的生长,但对黄芩苷的合成没有刺激作用;当蔗糖质量浓度在3%~8%时,愈伤组织表现出明显的生长和次生代谢功能,黄芩愈伤组织的生长及黄芩苷合成明显增加;当蔗糖质量浓度在8%时,两者均达到最大值。     

氮源和碳源对冬凌草愈伤组织生长及迷迭香酸的积累的影响

目的 研究碳源、氮源对冬凌草愈伤组织生长及其内迷迭香酸积累的影响.方法 改变培养基中蔗糖浓度和碳源种类,考察不同碳源及其浓度对愈伤组织生长和迷迭香酸积累的影响.在总氮源不变的情况下改变NO3-/NH4+的比例,考察不同NO3-/NH4+比例对愈伤组织生长和迷迭香酸积累的影响.结果 蔗糖是冬凌草愈伤组织培养中的最佳的碳源,其浓度为3%时,有利于冬凌草愈伤组织的生长和迷迭香酸的积累;NO3-/NH4+比例为1∶1时,愈伤增值倍数最高;NO3-/NH4+比例2∶1时,迷迭香酸的积累量最大.结论 实验确定了冬凌草愈伤组织培养的最佳碳源种类、浓度及氮源比例,表明不同碳源、氮源对冬凌草愈伤组织生长和次生代谢物合成有显著影响.     

正交实验法优选秦艽中龙胆苦苷提取工艺

目的优选出秦艽中龙胆苦苷的提取最佳工艺。方法采用正交试验法,以龙胆苦苷含量为指标,考察了乙醇浓度、浸取时间、溶媒用量及提取次数对秦艽中龙胆苦苷提取率的影响,优选出合理的提取工艺。结果用乙醇浓度为70%,浸取时间为36 h,溶媒用量为药材的10倍,提取次数为3次为最佳。结论经验证性实验证明所优选条件可靠,适合秦艽中龙胆苦苷的提取工艺参考。     

不同产地秦艽的质量和遗传多样性研究

目的:对不同产地秦艽的质量和遗传多样性进行研究。方法:使用性状、显微鉴别方法进行鉴别研究,采用高效液相色谱法进行龙胆苦苷含量测定,利用RAPD技术对其遗传多样性和遗传结构进行研究。结果:表明不同产地秦艽的性状、显微特征具有差异,其有效成分龙胆苦苷的含量也具有一定的差异,各种群的遗传多样性水平依次为湟中种群(K)>环县种群(J)>子午岭种群(H)。结论:对不同地区秦艽药材的外部形态、内部构造、有效成分含量和遗传水平的顺序,为保护野生品种、确保引种栽培秦艽药材的质量提供了科学依据。     

西藏地产藏药大叶秦艽的抗溃疡病作用研究

目的观察西藏地产藏药大叶秦艽的抗溃疡病作用,同时研究其初步作用机理。方法采用预防性给药,观察大叶秦艽乙醇提取物(石油醚脱脂)组分对阿司匹林诱导大鼠胃溃疡模型及无水乙醇诱导大鼠胃粘膜损伤胃溃疡模型的作用。结果西藏地产藏药大叶秦艽乙醇提取物(石油醚脱脂)组分能明显缩小阿司匹林及乙醇诱导大鼠胃溃疡模型的溃疡面积,大剂量有减少胃液总量作用和胃蛋白总量分泌作用,与对照组相比有显著性差异。结论该提取物有预防溃疡病作用,其机理有待进一步研究。     

Inhibitory effects of the Gentiana macrophylla (Gentianaceae) extract on rheumatoid arthritis of rats

Acute treatment of rheumatoid rats with an extract from the roots of Gentiana macrophylla (Gentianaceae) produced a significant inhibitory effect on rheumatoid arthritis (RA). When rats were administered the Gentiana macrophylla extract orally at a daily dose of 100 mg/kg body weight, the prostaglandin E(2) (PGE(2)) levels in the inflammatory tissues, sole thickness, and ankle circumferences of feet were significantly decreased. The anti-inflammatory activity observed in Gentiana macrophylla is comparable to that observed in prednisone. These observations suggest that Gentiana macrophylla displays considerable potency in anti-inflammatory action and could be used as an anti-inflammatory agent in the control of inflammation of rheumatoid arthritis.     

藏药粗茎秦艽、蓝玉簪龙胆的生药学鉴定

采用原植物、性状、显微、薄层鉴定的方法对藏药粗茎秦艽、蓝玉簪龙胆进行系统的生药学鉴定,为其鉴别及应用提供科学依据。结果表明:通过原植物、性状、显微、薄层色谱图研究能够很好地鉴定原植物。     

超声提取秦艽中龙胆苦苷的工艺优选

目的:优选提取秦艽中龙胆苦苷的最佳工艺。方法:采用正交试验法,以龙胆苦苷含量为指标,考察了乙醇用量、提取时间、提取次数及提取温度对秦艽中龙胆苦苷提取率的影响,优选出合理的提取工艺。结果:以乙醇用量为30 ml、提取时间为20 min、提取次数为4次、提取温度为50℃最佳。结论:经验证性实验证明所优选条件可靠,适合秦艽中龙胆苦苷的提取工艺参考。     

Changes of Secondary Metabolites and Trace Elements in Gentiana macrophylla Flowers: A Potential Medicinal Plant Part

Objective To search for the potential medicinal plant part of Gentiana macrophyllabased on changes of secondary metabolites and trace elements in the flowers of G.macrophylla.Methods HPLC was used to detect the changes of the active constituents(longanic acid,sweroside,gentiopicroside,and swertiamarin)and ICP-AES was used for mineral nutrients in G.macrophylla during flower development.And soluble sugar,starch,crude protein,hemicelluloses,cellulose,and lignin were determined.Results Biomass of flower in full bloom(D2)phase was considerable during flower development,in which the contents of longanic acid and gentiopicroside were at the highest levels with 2.65 and 2.88 times higher than those recorded in Chinese Pharmacopoeia 2010,sweroside and swertiamarin in the flowers were reaching 6.06 and 1.25 times higher than those in roots.Florescence is the most valuable stage during flower development.The concentration of Fe,Mg,K,P,and B was higher in the flowers than that in roots.The accumulation of active constituents in the plant was influenced by the contents of metabolically linked carbon and nitrogen compounds.Conclusion The secondary metabolites,mineral nutrients,and physicochemical indicators are tightly regulated by flower organ development,D2 is an important stage for both biomass and extraction of active constituents such as longanic acid.The flowers of G.macrophylla could be used as a potential medicinal plant part for longanic acid at a high level.     

大叶秦艽HPLC指纹图谱研究

目的建立大叶秦艽药材HPLC指纹图谱分析方法,为其质量控制和药材鉴别提供依据.方法高效液相色谱法,色谱柱Shimadzu C18(150mm×4.6 mm, 5μm);洗脱条件甲醇-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱;检测波长230nm;柱温25℃;流速1.0mL/min.结果确定构成大叶秦艽药材指纹的5个共有峰,所测定的14批秦艽药材具有很高的相似度,劣质秦艽及伪品秦艽相似度较低.结论大叶秦艽药材的HPLC指纹图谱可用于药材鉴别和质量控制.     

家种及野生秦艽、麻花秦艽的rRNA基因间隔区PCR产物电泳图谱的初步研究

目的：分析甘肃不同地区家种及野生中药材秦艽Gentiana macrophylla、麻花秦艽G.straminea中提取的DNA中rRNA基因内转录间隔区PCR扩增产物的电泳图谱，为秦艽、麻花秦艽等不同品种鉴别和品质评价从分子水平提供依据。方法：提取中药材家种及野生秦艽、麻花秦艽的核基因组DNA，利用合成的特异性PC及引物对所提取的DNA中rRNA基因内转录间隔序列进行nPCR扩增，扩增产物行琼脂糖凝胶电泳以得到电泳图谱并进行分析。结果：琼脂糖凝胶电泳图谱显示不同秦艽DNA中rRNA基因内转录间隔区长度均在360bp左右，已具备足够的遗传信息量进行碱基序列分析。结论：不同秦艽DNA中rRNA基因内转录间隔区PCR扩增产物可作为从分子水平进行鉴别的标记之一。