用短膜虫酶联免疫吸附试验(CL-ELISA)检测抗天然脱氧核糖核酸抗体(AnDA)的实验报告

鉴于检测血中AnDA对系统性红斑狼疮(SLE)等有重要临床意义,常规放免法及免疫荧光法还未能普遍应用,而ELISA方法相对简便,所以本文对用CL-ELISA检测AnDA的效果进行了研究。 CL-ELISA:短膜虫底片由生研所提供。待检血清用PBS(0.01 M pH 7.6)1/5稀释,取20μl滴在虫斑上,经孵育、PBS洗泡、甩干,滴加0.0125mg(Ab)/12.5 ml的辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG抗体(E/Ab=1,生研所1984.1批,最佳工作稀释度经方阵试验选择)20μl,再孵育洗泡甩干,滴加0.1ml含0.003％H_O_2的Karnovsky液染色7～8分钟,用Tris-HCI缓冲液(0.05 M,pH 7.6)     

尿白蛋白液相酶免疫测定方法

尿白蛋白(ALB)测定在临床上具有重要意义。测定尿中微量ALB一般采用RIA。为了克服RIA的一些缺点,我们用HRP标记ALB建立尿ALB液相酶免疫竞争测定法。方法:用改进的过碘酸钠法联接ALB和HRP。6mgHRP溶于1ml蒸馏水,加入0.2ml新配制的0.1MNaIO_4,冰浴避光缓慢搅拌20分钟,对0.001MpH4.4醋酸缓冲液透析过夜后,用0.1M碳酸盐缓冲液(pH9.5)调溶液pH为9～9.5,并立即加入0.5ml0.01M PBS(pH7.4)溶解的6mgALB,冰浴避光反应2h后,加入新鲜配制的0.1mlNaBH_4(4mg/ml),     

用化学发光法测定辣根过氧化物酶几种体系的研究

作者采用四种体系,确定了用化学发光法测定辣根过氧化物酶(HRP)的最佳测定条件和操作步骤。用鲁米诺-H_2O_2(NaOH)可以方便地测定0.05～4pmol HRP,绝对检测限16fmol。用邻苯二酚-H_2O_2(pH6.5)体系可测定0.1～100pmol HRP,绝对检测限3～17fmol。用鲁米诺-H_2O_2-对碘苯酚(pH8.5)体系,可由1分钟时的光强度测定10～50fmol HRP,绝对检测限10fmol。用对羟基联苯代替对碘苯酚,测1或3分钟时的光强度可测定6～40fmol HRP,绝对检测限6.5或3.3fmol.     

毛冬青、银杏叶、冠心2号方剂的制作方法——治疗冠心病心绞痛用药

(1)毛冬青注射液[处方]毛冬青提取物(按含黄酮量计算配制)亚硫酸氢钠 0.1%苯甲醇 1%[注射液配制]取毛冬青提取物,加入苯甲醇及亚硫酸氢钠,搅拌均匀后,用2NNaOH溶液调节PH在6.5左右,加入注射用水至足量,用布氏漏斗粗滤后,再以3号玻璃漏斗过滤。灌封于2毫升安瓿中。100℃灭菌30分钟。[规格]本品为棕黄色澄明灭菌水溶液。每支2毫升内含黄酮40毫克(相当于生药8     

急性白血病与体液免疫的关系

近几年来,由于免疫学的飞速发展,白血病与体液免疫的关系,受到许多学者的关注。我院于1979年应用免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM),对38例急性粒细胞型白血病,急性淋巴细胞型白血病进行了体液免疫功能的初步观察,总结如下: (一)材料与方法: 1)、所用免疫球蛋白板Ig(G、A、M)系北京生物制品研究所供应。批号79—5。 2)、方法按供应单位说明使用。正常值:对50例正常献血员进行了免疫球蛋白G、A、M检测,其值为: IgG:11.6—14.6mg/ml平均值:13.1±1.6mg/ml(毫克/毫升) IgA:1.7—3.9mg/ml平均值:2.79±1.08mg/ml(毫克/毫升)。 IgM:0.86～1.5mg/ml平均值:1.18±0.32mg/ml(毫克/毫升)。 (二)检测对象和结果: 在检测的38例临床标本中,急性淋巴细胞型白血病20例,完全缓解者5例,急性粒细胞型白血病10例、部分缓解者3例。     

胰岛素及重碳酸钠治疗糖尿病性酸中毒

病人及方法研究标准:诊断为糖尿病,有酮尿,及严重酸中毒(血pH低于7.2,血浆重碳酸盐低于每立升12毫克当量) 最初疗法:静脉注射0.9%氯化钠液或林格氏乳酸液。当血糖降至每100毫升250毫克以下时,用含糖溶液。当病儿排尿时(通常于治疗后2～3小时内),加入钾(约为每天每公斤体重3毫克当量)。均皮下注射使用结晶胰岛素。静脉注射7.5%重碳酸钠液(每50毫升含44毫克当量)。通常将半量加入最初补液中,于20～30分钟给予。其余在以后2小时随补液给予     

抑制酶活性的中药有效成分的研究

本文报道以抑制磷酸二酯酶(PDE)作为指标,筛选中药的有效成分。其方法如下:~3H-cAMP(5×18~8M,2×10~4dpm)、MgCl_2(10~(-3)M)、Tris-HCl缓冲液(5×10~(-2)M,pH7.5)、牛血清(250微克)、PDE(牛心,25微克)、中药提取物(0.1毫升、10~(-4)～10~(-5)克/毫升),加水到0.5毫     

用甲基纤维素分离、瑞氏～姬姆沙染色作淋巴细胞卫星核检查及其临床应用

我们采用甲基纤维素分离有核白细胞,以瑞氏、姬姆沙染色检查卫星核,不仅操作简便,且阳性率比较高。现将方法和临床应用介绍如下。一方法:(1)抽静脉血1毫升注入盛有0.1毫升肝素试管内,摇匀,加1％甲基纤维素生理盐水0.5毫升,混合后放37℃温箱30分钟。(2)吸取上层液体(吸至与红细胞交界面)于另一试管,以1,500转/分离心10分钟。(3)弃去上清液,留下少许液     

椎旁注射双氢鏈霉素引起严重呼吸衰竭一例

病儿,女,13岁,于1964年8月15日我院诊断为脊椎结核(T_(12)～L_2),每周2次椎旁注射链霉素。10月16日复诊,门诊常规操作,以0.5％普鲁卡因2毫升局麻下,距脊柱左5厘米处,用24号针头将一克双氢链霉素(溶于2毫升注射用水)自椎旁注入。十余分钟后,病儿感觉畏寒不适,四肢无力。口唇及四肢末梢发绀,呼吸急促,意识不清。注射0.1％肾上腺素0.3毫升,50％葡萄糖60毫升后未见好转,并出现蹩气现象,即予吸氧,注山梗茶碱及考地松类药物靜脉滴注。2小时后,体溫39.8℃,血压120/75,呼吸呈叹息状,每1～2分钟一次,瞳孔     

用微量ELISA双抗体夹心法检测HAV—IgM体会

1989年9月份,安阳县发生了肝炎流行,我们用微量 ELI SA 双抗体夹心法检测 HAV—IgM,取得较满意的结果,现报告如下:材料和方法:1、材料:羊抗人 U 链抗体,甲肝抗原HAAg,酶标记 HA V—IgG,抗 HA V—IgM 阳、阴性血清.2.方法:抗 U 链抗体用 P H9.6 0.05M碳酸盐缓冲液稀释后加到聚苯乙烯板中,每孔100微升4℃过夜,用 PBS—Tween20洗一次甩千;加1%牛血清白蛋白 PBS—Tween20,每孔100微升37℃温育2.5小时,P     

健康孕妇外周血和胎儿脐血中T_S和T_H细胞分布情况的观察

据文献报道,健康孕妇外周血和胎儿脐血中抑制细胞有增高的现象,认为T_S细胞的增高可能对安全妊娠有一定的关系。我们检测了28例健康孕妇,同育龄未妊娠妇女外周血和14例胎儿脐血的T细胞、T_S细咆和T_H细胞的分布情况,现将结果报告如下: 检查对象 28例健康孕妇,年龄22～42岁;同育龄未妊娠妇女20例,年龄22～45岁;14例胎儿脐血于分娩后10小时以内检测。每例取血约2毫升,加肝素抗凝(0.1％肝素0.1毫升)立即检测。     

抗菌素敏感试验滤纸片的制备

1.取普通滤纸用打孔机制成直径6毫米大小的圆形小片,每100片封装于一洁净的青霉素小瓶中,高压灭菌15磅30分钟。2.先把各种抗菌素溶液用生理盐水配成下列浓度的溶液:磺胺类药物100毫克/毫升。青霉素1,000单位/毫升,其他各种抗菌素(链霉素、氯霉素、金霉素、新霉素、红霉素、卡那霉素、杆菌肽、呋喃西林等)10毫克/毫升。3.在已高压灭菌的装有滤纸片的小瓶内分别加丙酮1毫升,再各加上述浓度抗菌素溶液0.1毫升,充分混合均匀,在室温浸泡2小时。4.将浸泡后的滤纸片和抗菌素溶液一起倒到无     

血清丙种球蛋白微量比色测定法

丙种球蛋白与机体免疫性及其它保护性反应有关。测定丙种球蛋白对于许多疾病诊断、治疗效果评价均具有很大意义。目前常用的测定方法繁复而需时较长,为此作者推荐了经改良的Scala氏血清丙种球蛋白微量比色测定法。试剂配制(氏):取1.5克5个结晶水的硫酸铜和6.0克酒石酸钾与酒石酸钠的混合物溶于500毫升蒸镏水中,充分混和后再加入300毫升1％无碳酸盐的苛性钠溶液,并加水至1,000毫升。方法:于离心管中放0.9毫升生理盐水,加0.1毫升受检血清,然后再逐滴加入0.5毫升饱和硫酸铵(pH=2)。在8,000-9,000转/分条件下离心5-17分,所得沉淀物中加入1.0毫升生理盐水溶解之。取此溶解液0.5毫升,再加入1.25毫升氏试剂,60分钟后在-52型微量比色计上比色,用     

M2型巨噬细胞在糖尿病小鼠同种异体胰岛移植中的抗排斥作用

目的：探讨腹膜腔来源的M2型巨噬细胞对糖尿病小鼠同种异体胰岛移植的抗排斥作用。方法：体外分 离诱导C57BL/6小鼠腹膜腔M2型和M0型细胞,流式细胞术鉴定巨噬细胞表型。链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导 C57BL/6雄性小鼠的糖尿病模型作为受体,分离BALB/c小鼠胰岛细胞移植于C57BL/6糖尿病小鼠左肾包膜下。将移植 后糖尿病小鼠随机分为3组,每组8只。于胰岛移植术后1,3,7 d分别经尾静脉输注PBS(islet+PBS组)、2.5×106个M0型 巨噬细胞(islet+M0组),2.5×106个M2型巨噬细胞(islet+M2组)。移植术后取尾静脉血监测受体血糖水平的变化,记录 胰岛存活时间,并于移植后10 d每组随机抽取2只小鼠处死取左肾做病理学检查,观察移植物形态结构和胰岛素表达 水平。结果：Islet+PBS组、islet+M0组和islet+M2组移植物的中位存活时间分别为6.5(4~10),7.5(4~10)和24(>15) d;与 islet+PBS组和islet+M0组比较,islet+M2组移植物调节血糖正常水平时间和中位存活时间明显延长(P<0.01)。病理学检 查结果显示islet+M2组胰岛移植10 d后移植物结构完整,胰岛素染色阳性;而islet+PBS组和islet+M0组胰岛移植物均被 排斥,胰岛素染色阴性,局部见大量淋巴细胞浸润。结论：腹膜腔来源的M2型巨噬细胞能减轻受体对胰岛移植物的 免疫排斥反应,延长胰岛移植物的存活时间,从而提高受体对血糖的耐受能力。     

血清肌酸磷酸激酶(SCPK)改良测定法

取二管分别标明“测定”及“空白”,各管中加入血清0.05ml及0.01M半胱氨酸0.2ml。然后“测定”管中加入反应底质液(每升pH9.0Tris缓冲液中各物最后浓度为ATP0.072M,硫酸镁0.006M,肌酸0.076M)1.0ml,混和后即放入37℃水浴中准确30分钟,取出,放入冰浴中。同时将“空白”管也放入冰浴中,然后加入反应底质液1.0ml,混和。于“测定”及“空白”管中随加随摇加入显色试剂(4.2％钼酸铵盐酸液2份 0.2％孔雀石绿水溶液0.1份 1.5％吐温601份,临用前混合)各3.0ml。1小时后在分光光度计上,用660mm波长,以“空白”管调节光密度为零,读取“测定”光密度,查标准曲线即得肌酸磷酸激酶浓度(单位/升)。     

免疫亲和层析提纯肾综合征出血热病毒蛋白

本文应用免疫亲和层析从感染肾综合征出血热病毒（HFRSV）细胞中提纯了HFRSV蛋白。其最适条件；细胞混悬于磷酸盐缓冲生理盐水（PBS）－1％Tritonx-100,1%脱氧胆酸钠（DOS），0．1％十二烷基硫酸钠（SDS）,1mM氟化磺酰苯甲烷（PMSF），超声波粉碎2分钟，5万r.p.m.1小时，离心上清液作为亲和层析的样品。亲和层析柱予先用PSB－1%Tritonx-100平衡，样品流经柱内亲和吸附后，再依次用PSB－1％Tritonx-100,PBS-0.1%Tritonx-100,PBS洗柱，最后用0.1M,pH11碳酸盐缓冲液洗脱。在上述条件下病毒蛋白得率高（91－97％），并保持其免疫活性。     

计算输液时、速的简便公式

<正> 编辑同志: 关于静脉输液滴速的计算,在1985年11月出版的全国中等卫生学校护士专业教材《基础护理学》一书中介绍了如下方法:输液总量÷输液时数=每小时输入毫升数;根据每小时输入量计算每分钟毫升数;再根据每分钟毫升数计算出每分钟滴数(按每毫升相当于15滴计算)。教学中,我们感到这种计算方法繁琐费时、不便记忆,而设计     

红霉素注射剂静滴的溶媒问题

红霉素注射液在 pH 6～8时较稳定,不宜加入葡萄糖注射液中静滴。红霉素在 pH4.2时28分钟可分解10％,pH4.8时81分钟可分解10％,pH5.3时16小时才分解10％。我院配制的5％葡萄糖注射液的 pH 在3.7～4.0,注射用生理盐水 pH 在5.8～6.0。所以红霉素加入生理盐水中静滴较妥。当遇有忌盐者,则可在葡萄糖注射液中加入5％碳酸氢钠注射液使 pH 达5.5以上进行静滴。笔者用100毫升5％葡萄糖注射液加入5％碳酸氢钠注射液0.1毫升,pH 值可由3.8上升为6.6。     

用吖叮橙显示动脉粥样硬化灶中溶酶体的方法

用吖叮橙显示动脉粥样硬化灶中的溶酶体,国外已有报导,但其方法不详;国内尚未见报导。我们在进行家兔实验性动脉粥样硬化的研究中,试用吖叮橙显示溶酶体,获得较为满意的结果,现介绍如下。 用M/15磷酸缓冲液(PBS),pH5.0～6.0,将吖叮橙配成1%原液,贮于冰箱(4℃)备用。用时取其上述PBS液将原液稀释成1％或1‰溶液进行染色。     

注射当归引起过敏性休克1例报告

吴某,女,21岁,因慢性腰痛来我院接受治疗,肾俞穴注射当归注射液2毫升(安徽省阜阳专区制药厂出品,批号71311,每安瓿2毫升含原药0.1克)。注射后约5分钟,患者自学胸闷气紧,呛咳,全身紫绀,随即昏迷,呼吸快且微弱,心音听不到,脉搏测不出。当即肌注肾上腺素1毫克,3分钟后仍未见好转,继而肌注苯海拉明、可拉明各