异基因造血干细胞移植后FOXP3动态监测的临床意义

目的 探讨FOXP3mRNA水平的动态变化在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)中的临床意义.方法 allo-HSCT患者27例,12例采用短程甲氨蝶呤联合环孢素A(MTX CsA)预防移植物抗宿主病(GVHD),15例加用抗CD25强化GVHD预防;发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)者11例.采用实时荧光定量PCR反应动态监测allo-HScT患者移植预处理前、移植当天、移植后1、2、4周及aGVHD发生时外周血FOXP3mRNA水平,分析FOXP3mRNA水平的变化与aGVHD发生的相互关系.结果 抗CD25对FOXIr3mRNA水平无影响;Ⅰ～Ⅱ度和Ⅲ～Ⅳ度aGVHD组发生aGVHD时FOXP3mRNA水平均较发生前降低,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 FOXP3是CD4 CD25 Treg细胞的特异性标志,对CD4 CD25 Treg细胞的发育和功能发挥起重要作用,对aGVHD的发生具有保护作用,可作为临床监测aGVHD发生的重要指标之一.     

供体CD+4CD+25T细胞及调控基因FOXP3在急性移植物抗宿主病中的作用

目的 探讨供体CD+4CD+25T细胞亚群、FOXP3调控基因的表达与受者移植物抗宿主病(GVHD)的相关性.方法 (1)30例异基因造血干细胞移植(allo-HSCT),采用免疫荧光标记和流式细胞术检测并比较供体粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员前外周血、动员后采集物CD+4CD+25T细胞亚群比例,随访异基因移植后GVHD的发生率和严重程度.(2)应用RT-PCR技术检测供体FOXP3基因表达情况,分析其与GVHD、疾病复发的相关性.结果 (1)所有患者均获造血重建,粒细胞绝对数(ANC)≥0.5×109/L的中位时间为14(12～15)d,PLT≥20×109/L为18(15～25)d.30例allo-HSCT,中位随访时间12.8(8～16)个月,Ⅰ～Ⅳ度急性GVHD分别为3、4、3、5例.慢性GVHD 6例.(2)供体G-CSF动员前外周血、动员后采集物CD+4CD+25T细胞亚群分别为(2.67±0.38)%、(5.01±1.33)%,两者相比差异无统计学意义(P＞0.05).(3)移植后无急性GVHD组、Ⅰ～Ⅱ度急性GVHD组、Ⅲ～Ⅳ度急性GVHD组供体CD+4CD+25T细胞亚群分别为(5.05±1.34)%、(4.17±1.73)%、(1.98±1.10)%.其中Ⅰ～Ⅱ度急性GVHD组与Ⅲ～Ⅳ度急性GVHD组相比差异有统计学意义(P=0.04),无急性GVHD组与Ⅲ～Ⅳ度急性GVHD组相比差异有统计学意义(P=0.002).(4)30例allo-HSCT,7例FOXP3基因表达阳性,5/7例移植后无急性GVHD,其中3例移植后复发,另2/7例移植后Ⅰ度急性GVHD,Ⅱ～Ⅳ度急性GVHD患者FOXP3均不表达.结论 (1)供体CD+4CD+25T细胞亚群比例与受者急性GVHD的发生具有一定的相关性,提高供体CD+4CD+25T细胞数量有望减低移植后急性GVHD发生率.(2)供体移植物FOXP3基因表达阳性,与移植后有无严重急性GVHD发生存在一定相关性.     

成人人类白细胞抗原全相合与不相合造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的临床特点与预后

 目的 比较成人人类白细胞抗原(HLA)全相合与HLA不相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的临床特点与疗效。方法 回顾性分析2010年1月至2011年12月于北京大学血液病研究所进行亲缘allo-HSCT患者的临床病历资料,分析不同类型移植后aGVHD的发病类型与特点以及临床疗效的差异。结果 544例患者中,HLA不相合移植后的aGVHD发生率为50.2%,明显高于HLA全相合移植(20.4%,P<0.001),且发生得更早,但Ⅲ°~Ⅳ° aGVHD的累积发生率两组之间差异并无统计学意义(4.5%比6.8%, P=0.066);全相合移植中肠道aGVHD发生率较高(31.1%),而在不相合移植中以皮肤aGVHD为主(66.5%),肠道和肝脏aGVHD发生率均较全相合移植低;全相合移植发生aGVHD时发热患者比例较不相合移植低(28.9% 比47.6%,P=0.028);全相合移植与不相合移植相比,aGVHD总体治愈率低,特别是Ⅲ°~Ⅳ° aGVHD最终疗效差,二线治疗后的完全缓解率低于不相合移植(88.9%比98.8%,P=0.006),aGVHD相关病死率高于不相合移植(11.1%比2.4%,P=0.024)。结论 HLA不相合移植后aGVHD发生率明显高于全相合患者,但重度aGVHD发生率两组间差异无统计学意义,两组患者一线治疗缓解率相近,但HLA不相合移植患者二线治疗后aGVHD总体缓解率更高。     

大肠癌手术前后外周血CEA蛋白、CEAmRNA的变化及临床意义

目的观察大肠癌手术前后外周血CEA蛋白、CEA mRNA的变化及临床意义。方法分别采用电化学发光免疫法和逆转录聚合酶链反应法检测42例大肠癌患者手术前后和50例健康对照者外周血CEA蛋白、CEA mRNA水平。结果大肠癌治疗前及治疗后CEA水平、CEA阳性率和CEA mRNA阳性率均明显高于正常对照组(P<0.05)。大肠癌治疗后CEA水平、CEA阳性率和CEA mRNA阳性率均明显下降(P<0.05)。治疗后CEA mRNA阳性组复发率均明显高于治疗后CEA mRNA阴性组(P<0.05),而治疗后CEA蛋白表达与复发无明显相关性(P>0.05)。结论外周血CEA蛋白、CEA mRNA在大肠癌患者中表达明显升高,并且治疗后明显下降,其中治疗后CEA mRNA阳性表达与大肠癌复发明显相关,对预测大肠癌的复发有重要意义。     

骨髓移植术后急性移植物抗宿主病肝酶学的异常特点

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)组与非aGVHD组肝酶学变化特点.方法 回顾性分析北京大学人民医院allo-HSCT患者肝脏酶学的变化情况及与aGVHD发生的关系.结果 371例接受allo-HSCT患者中共有158例(41.6%)发生Ⅰ～Ⅳ度aGVHD;中位时间为第29.5天.未发生aGVHD组,ALT、AST、GGT、LDH升高的中位时间均在移植后20 d之内,明显早于发生aGVHD组.发生aGVHD组,AST峰值明显升高,其余肝酶学峰值差异无统计学意义;发生aGVHD组,AST、GGT、LDH持续时间均显著长于未发生aGVHD组,ALT、ALP持续时间无差异;ALT、AST、ALP、LDH升高组,aGVHD发生的百分比明显高于未升高组,但只有ALT、LDH升高进入logistic模型;单纯ALT、LDH升高诊断aGVHD敏感度及准确性均较差;若为移植24 d后ALT及LDH同时升高且持续时间均超过22 d,则敏感度及准确性均较好.结论 肝酶学升高,尤其是ALT、LDH的升高与aGVHD发生相关,但作为aGVHD的诊断指标准确性欠佳;在排除药物性肝损伤的影响下,结合肝酶学的动力学特点,肝酶学的升高在诊断aGVHD仍有一定意义.     

移植前及预处理期间肝功能异常对异基因造血干细胞移植效果的影响

 目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者移植前和预处理期间肝功能异常的特征及其与肝脏合并症和预后的关系。方法 回顾性分析196例allo-HSCT治疗血液系统疾病患者,采集其移植前和预处理期间肝功能数据,观察其对造血重建、移植相关肝脏并发症、生存和移植相关死亡的影响。结果 196例患者中,38例移植前存在肝功能异常,159例预处理期间发生肝功能异常,28例(17.6%)出现3度肝损害,无4度肝损害出现。移植前和预处理期间肝功能异常对造血重建时间、肝静脉阻塞病(HVOD)、肝脏急性移植物抗宿主病(aGVHD)和慢性移植物抗宿主病(cGVHD)发生无显著影响。单因素分析显示年龄(P=0.022)、移植前疾病状态高危(P=0.003)、移植前AST(P=0.019)和TBil水平升高(P=0.015)、Ⅲ~Ⅳ度肝脏aGVHD(P=0.000)和HVOD(P=0.000)是影响总生存(OS)率的危险因素。多因素Cox回归分析显示移植前疾病状态为高危(P=0.002)、Ⅲ~Ⅳ度肝脏aGVHD(P=0.000)是影响OS率的独立危险因素,同时也是影响移植相关死亡(TRM)率的独立危险因素(P值分别为0.002和0.000),而移植前和预处理期间肝功能异常对OS率和TRM率无显著影响。结论 1~2度肝功能异常患者,在密切监测肝功能、充分保肝治疗及积极预防HVOD基础上,可考虑进行allo-HSCT。
        

同胞全相合异基因造血干细胞移植治疗95例骨髓增生异常综合征患者的临床分析

 目的 探讨同胞全相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗骨髓增生异常综合征(MDS)的疗效与时机。方法 回顾分析2003年1月—2012年12月采用同胞全相合allo-HSCT治疗MDS及MDS转急性髓性白血病(AML)95例。采用改良马利兰+环磷酰胺或氟达拉滨的预处理方案,行骨髓和/或外周血干细胞移植。结果 95例患者中93例白细胞植活,Ⅱ~Ⅳ度急性移植物抗宿主病(aGVHD)累计发生率为12.9%±3.5%;慢性移植物抗宿主病(cGVHD) 3年累计发生率为80.3%±4.9%。3年累计复发率(RR)为25.9%±4.7%,非复发死亡率(NRM)为16.1%±4.0%。3年预期总生存(OS)率及无病生存 (DFS) 率分别为69.9%±5.0%和58.0%±5.4%。多因素分析显示,发生Ⅱ~Ⅳ度aGVHD和不发生cGVHD是OS的独立危险因素;国际预后积分系统(IPSS)分组是DFS的独立预后因素。将难治性贫血伴原始细胞增多转化型(RAEB-t)及MDS转AML患者(31例)分为移植前未化疗、化疗未缓解、化疗缓解3组,3年OS率分别为33.9%、32.7%、100.0%,化疗缓解组OS率明显高于另外两组(P<0.05),DFS率、RR率差异无统计学意义。结论 同胞全相合allo-HSCT是治疗MDS的有效手段,IPSS可预测移植后疗效,对于移植前疾病进展的患者,争取缓解后行allo-HSCT可能提高疗效,但尚需进一步临床对照研究。
        

合并中枢神经系统受累的急性白血病患者接受异基因造血干细胞移植的预后分析

目的探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)能否克服合并中枢神经系统白血病(CNSL)患者的不良预后以及预防性鞘内注射的意义。方法回顾性队列研究。收集2012年9月至2018年3月在北京大学人民医院接受allo-HSCT且移植前合并CNSL病史的30例急性白血病患者(CNSL阳性组);以疾病类型、患者疾病状态和移植类型为因素按1∶3进行严格匹配, 从同期接受allo-HSCT的2 807例急性白血病且移植前无CNSL的患者中选择90例患者作为对照(CNSL阴性组), 利用Kaplan-Meier法、竞争分析法比较两组预后结局, 以及Cox回归模型筛选移植后CNSL发生的高危因素。结果 CNSL阴性组中位年龄大于CNSL阳性组(32岁比24岁, P=0.014), 两组移植时性别、疾病类型、移植时疾病状态、供受者关系、人类白细胞抗原相合度等基线资料差异无统计学意义。总体随访中位时间为568 d(范围21～1 852 d)。CNSL阳性组移植后4年白血病累积复发率高于CNSL阴性组(71.4%±20.9%比29.3%±11.5%, P=0.005), CNSL的4年累积发生率高于CN...     

多种细胞因子与急性移植物抗宿主病发病关系的研究

目的:探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者不同时期血清细胞因子(CK)水平与急性移植物抗宿主病(aGVHD)严重程度的关系。方法:于移植前、移植后2、4、8、12周用流式微球技术监测17例allo-HSCT患者血清细胞因子(TNF-α、IFN-γI、L-2I、L-4I、L-6及IL-10)水平的动态变化。结果:Ⅱ~Ⅳ度aGVHD患者组(5/17)与0~Ⅰ度aGVHD患者组(12/17)相比:移植后8、12周血清IFN-γ浓度(ng/L)前者较后者显著增高(13.66±1.16,14.10±0.42对比10.00±0.28,11.14±1.13)(P<0.05);移植后12周血清IL-6浓度(ng/L)前者较后者显著增高(10.17±1.07对比6.97±1.18,P<0.05);其余各时期细胞因子浓度对比无明显差异。结论:异基因造血干细胞移植后,发生Ⅱ~Ⅳ度aGVHD患者较0~Ⅰ度aGVHD患者血清IFN-γ与IL-6浓度较高,为炎性免疫反应加重表现;TNF-αI、L-2I、L-4及IL-10水平两组间无显著差异,很可能受aGVHD严重程度、免疫抑制剂应用、免疫细胞功能恢复延迟等多因素影响。     

异基因造血干细胞移植后单独胃肠道受累急性移植物抗宿主病的临床特征

目的 分析异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后患者发生单独累及胃肠道的急性移植物抗宿主病(aGVHD)的临床特征.方法 回顾性总结2007年11月至2008年12月在我院行allo-HSCT治疗的307例血液病患者的临床资料,分析单独胃肠道受累的aGVHD的临床特征、危险因素、治疗效果及预后.结果 307例患者中174例(56.7%)发生aGVHD,其中单独累及胃肠道的38例,占21.8%.单独累及胃肠道的aGVHD的发生与受者性别、年龄、供受者性别关系、供受者血型关系、基础疾病诊断及回输的单个核细胞均无关;但与移植类型相关,亲缘全相合组发生率高于亲缘不合组及非血缘组.单独累及胃肠道的aGVHD患者经糖皮质激素或抗CD25单克隆抗体治疗,仅有2例死于aGVHD未控制合并感染,总有效率达94.7%;发生Ⅱ～Ⅳ度aGVHD但非单独累及胃肠道的患者抗aGVHD治疗总有效率为85.2%;组间比较差异有统计学意义(P=0.015).单独累及胃肠道的aGVHD中有12例应用抗CD25单克隆抗体治疗,治疗均有效.结论 HSCT后单纯累及胃肠道的aGVHD并不少见,其发生率在亲缘全相合组高于亲缘不全相合组及非血缘组,单独累及胃肠道的aGVHD对抗aGVHD治疗效果好,可能与应用抗CD25单克隆抗体疗效较好有关.     

Blood dendritic cells are decreased in acute graft-versus-host disease

The recipients of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT) often develop acute graft-versus-host disease (aGVHD), which is closely related to morbidity and mortality. However, the essential part of the immune responses elicited in aGVHD remains largely unknown. We attempt to determine if peripheral blood dendritic cells (PBDCs) are altered in aGVHD, and find that the number of PBDCs (both myeloid and lymphoid DCs) is significantly decreased. Immunohistochemical staining of the biopsied skin from patients with aGVHD demonstrates that a number of fascin(+) cells with dendritic projections infiltrate the dermis of the skin. Based on these findings, we hypothesize that the PBDCs are recruited to the affected tissues and may thus play important roles in immune responses elicited in aGVHD.     

Impaired regulatory T cell reconstitution in patients with acute graft-versus-host disease and cytomegalovirus infection after allogeneic bone marrow transplantation

To elucidate the correlation between regulatory T cells (Tregs) and acute graft-versus-host disease (aGVHD) or cytomegalovirus infection following allogeneic bone marrow transplantation (allo-BMT), we evaluated either CD4?CD25(high) or FOXP3? Treg-enriched cells in peripheral blood (PB) from 20 patients who received allo-BMT, and in biopsies of skin with aGVHD. Proportions of CD4?CD25(high)FOXP3? cells in total lymphocytes, but not other types of T cells, were lower in patients who eventually developed grades II-IV aGVHD (n = 13) than in others (n = 7, P < 0.001). Proportions of CD62L? cells in CD4?CD25(high) cells at day +30 were lower (P < 0.01) in patients who eventually showed cytomegalovirus viremia (n = 6) than in others (n = 14). Incidence of aGVHD (P < 0.05) or cytomegalovirus viremia (P < 0.05) was higher in patients without these complications, but with lower proportions of PB CD4?CD25(high)FOXP3? cells at day +30 (n = 8) than in others (n = 8). However, in skin with aGVHD (n = 5), there was marked or slightly increased infiltration of CD8? cells (P < 0.001) or CD3?FOXP3? cells (P < 0.05), respectively, when compared with control (n = 5), resulting in threefold higher ratio of CD8?/CD3?FOXP3? cells in aGVHD relative to controls (P < 0.05). Thus, impaired reconstitution of Tregs may be associated with aGVHD and CMV infection. Moreover, imbalance of Tregs and CD8? cells may play a role in aGVHD tissue.     

乙型肝炎肝硬化患者外周血IL-35和IL-17的表达及意义

目的观察慢性HBV感染者外周血IL-35和IL-17的表达和临床指标的相关性。方法采集30例慢性乙型肝炎（CHB）患者、79例乙型肝炎肝硬化（LC）患者、14例慢性乙型重型肝炎（CSHB）患者、20例健康对照者的外周血,ELISA法测定外周血IL-35、IL-6、IL-17的浓度,分离制备外周血单个核细胞（PBMC）,实时定量PCR检测PBMC中EBI3、FOXP3、IL-17 mRNA的表达,Western印迹观察PBMC中EBI3、FOXP3、IL-17蛋白表达情况。所有病例及健康对照均进行肝功能检测。结果 LC、CHB和CSHB患者中EBI3、IL-17、FOXP3 mRNA表达水平均显著高于健康对照组,差异有统计学意义（P〈0.01或0.05）;LC组Child-Pugh不同分级患者之间EBI3、IL-17、FOXP3 mRNA表达水平差异明显,EBI3、FOXP3 mRNA随着肝硬化Child-Pugh分级的加重而表达下调;IL-17 mRNA随着肝硬化Child-Pugh分级的加重而上调;蛋白表达和血清浓度的变化趋势与mRNA一致。血清IL-17浓度水平与Alb呈负相关,IL-17浓度水平与TBil、ALT和Child-Pugh分级呈正相关,差异有统计学意义（P〈0.01）,IL-35浓度水平与Alb、Child-Pugh分级负相关,与ALT、TBil无相关性。结论 IL-35和IL-17可能是影响乙型肝炎肝硬化发病的重要因素之一。     

粉尘螨抗原对支气管哮喘患者外周血单个核细胞T-bet和GATA-3及FOXP3 mRNA表达水平的影响

目的 对支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血单个核细胞(PBMC)经粉尘螨刺激前、后T-bet mRNA、GATA-3 mRNA、FOXP3 mRNA的表达水平及相互关系进行研究.方法 选择25例哮喘患者和15名健康人为研究对象,每例受试者又分为变应原刺激组和未经变应原刺激的自体对照组,采用半定量-逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组受试者PBMC培养后T-bet mRNA、GATA-3mRNA、FOXP3 mRNA的表达水平.结果 哮喘患者PBMC中FOXP3、T-bet的表达水平分别为0.3±0.4、0.42±0.24,与健康人(0.4±0.3、0.39±0.37)比较差异无统计学意义(t值分别为0.78、0.38,P均＞0.05),哮喘患者GATA-3(1.0±0.3)的表达与健康人(0.8±0.3)比较差异有统计学意义(t=2.27,P＜0.05);健康人PBMC经变应原刺激后FOXP3的表达(0.72±0.61)与未经变应原刺激的自体对照组(0.27±0.21)比较差异有统计学意义(t=3.12,P＜0.01);而T-bet、GATA-3的表达分别为0.3±0.4、0.9±1.0,与未经变应原刺激的自体对照组(0.3±0.6、0.8±0.6)比较差异无统计学意义(t值分别为0.27、0.77,P均＞0.05);哮喘患者PBMC经变应原刺激后T-bet、GATA-3的表达分别为0.49±0.42、2.1±1.7,与未经变应原刺激的自体对照组(0.16±0.06、0.6±0.3)比较差异有统计学意义(t值分别为3.72、5.15,P均＜0.01);但哮喘患者PBMC中经变应原刺激后FOXP3的表达为0.5±0.4,与未经变应原刺激的自体对照组(0.4±0.4)比较差异无统计学意义(t=1.60,P＞0.05);经变应原刺激后哮喘患者PBMC中△T-bet、△GATA-3、△FOXP3的表达分别为0.33±0.39、1.58±1.44、0.11±0.32,与健康人(0.03±0.40、0.11±0.53、0.43±0.66)比较差异有统计学意义(t值分别为2.30、3.79、2.08,P分别＜0.05、＜0.01、＜0.05);哮喘患者△FOXP3与△GATA-3、△T-bet表达水平呈负相关(r值分别为-0.62、-0.46,P分别＜0.01、＜0.05).结论 哮喘患者经变应原刺激后,既存在Th2特定转录因子GATA-3的优势表达,也存在Th1特定转录因子T-bet的优势表达,同时还存在调节性T淋巴细胞(Treg)特定转录因子FOXP3的表达低下.     

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞DcR3 mRNA表达研究

目的研究凋亡相关基因诱骗受体3(DcR3)在系统性红斑狼疮患者(SLE)外周血单个核细胞(PBMCs)中的mRNA表达水平。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测38例SLE患者(21例活动期,17例缓解期)和15例正常人PBMCs中DcR3 mRNA的表达水平,分析其与狼疮活动指数(SLEDAI)的相关性。结果SLE患者PBMCs中,DcR3mRNA表达水平明显高于正常人(P<0.01),但疾病不同病期(活动期与缓解期)其表达水平无统计学差异(P>0.05);DcR3 mRNA表达与SLEDAI不相关(r=-0.024,P>0.05)。结论SLE患者PBMCs DcR3 mRNA表达增加,提示DcR3可能与SLE免疫细胞凋亡异常和免疫调节的紊乱有关,参与了SLE的发病过程。     

<Emphasis Type="Italic">FOXP3</Emphasis> expression in peripheral blood rapidly recovers and lacks correlation with the occurrence of graft-versus-host disease after allogeneic stem cell transplantation

CD4+CD25+ regulatory T-cells (Treg cells) that express Foxp3 protein play an important role in inducing and maintaining allogeneic tolerance and can inhibit graft-versus-host disease (GVHD) after allogeneic stem cell transplantation (SCT) in murine models. Thus, it is important to clarify the kinetics of Treg cell recovery and its correlation with the occurrence of GVHD in humans; however, whether there is a correlation between the frequency of Treg cells in peripheral blood and the occurrence of GVHD is controversial. We examined the recovery of Treg cells in peripheral blood after allogeneic SCT by quantitating FOXP3 messenger RNA (mRNA). Full donor chimerism was achieved within 1 month after SCT in all but 1 case. The ratios of the measured expression levels of FOXP3 mRNA to those of endogenous control genes rapidly recovered to the normal range as early as 1 month after SCT. Cross-sectional as well as longitudinal analyses revealed no significant correlation between the expression level of FOXP3 mRNA and the occurrence of acute and chronic GVHD. This study suggests that the level of FOXP3+ cells is normal relative to other cell types from the early period after SCT and that their frequency in peripheral blood relative to total leukocytes or T-cells is not indicative of the occurrence of GVHD.