交感神经刺激对大鼠急性心肌缺血时连接蛋白43和室性心律失常的影响

目的 探讨急性心肌缺血时交感神经刺激对缝隙连接蛋白43(Cx43)及对室性心律失常的影响.方法 结扎大鼠冠状动脉前降支制备急性心肌缺血模型后分组,心肌缺血组(25只,MI)、缺血+交感神经刺激组(25只,MI-SNS)、交感神经刺激预处理+缺血组(25只,pSNS-MI)和假手术组(20只,SO).心电图监测室性心律失常的发生.蛋白质印迹法检测缺血心肌Cx43的磷酸化蛋白及总量表达.RT-PCR分析Cx43 mRNA的表达.免疫荧光观察Cx43表达分布情况.结果 MI-SNS组室速/室颤发生率(80.0%)较MI组(52.0%)明显增加(P＜0.05),而pSNS-MI组室速/室颤发生率(20.0%)显著降低(P＜0.05).冠脉结扎30 min后,与MI组相比(46.7%±6.3%),pSNS-MI组(71.2%±7.0%)和MI-SNS组(73.4%±6.7%)磷酸化Cx43的比例均明显增加(均P＜0.05).MI组(1.29±0.14)和pSNS-MI组(1.25±0.13)蛋白总量均与SO组(1.30±0.10)无明显区别(均P＞0.05),但MI-SNS组(0.73±0.12)蛋白总量较SO组明显减少(P＜0.05).结论 交感神经刺激能够促进缺血性室性心律失常的发生,这可能与其促进了Cx43的降解有关;交感神经刺激预处理能够抑制缺血性室性心律失常的发生,其机制可能与交感神经刺激预处理阻止了Cx43的脱磷酸化有关.     

缺血后处理对大鼠缺血再灌注心律失常的影响

目的 观察缺血后处理对缺血再灌注心律失常的影响,进一步探讨其可能的机制. 方法 建立大鼠心肌缺血再灌注模型,设假手术组(n=8)、缺血再灌注组(n=8)及缺血后处理组(n=8).全程监测心电图,再灌注结束后,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测各组Cx43 mRNA的表达水平,并用室性心律失常评分来评价室性心律失常的发生率.结果 RT-PCR显示,缺血再灌注组与假手术组比较,Cx43mRNA的表达水平显著降低(P<0.01),缺血后处理组与缺血再灌注组比较,Cx43 mRNA的表达水平显著增高(P<0.01);监测心电图显示,与假手术组相比,缺血再灌注组的室性心律失常评分显著升高(P<0.01),与缺血再灌注组相比,缺血后处理组的室性心律失常评分显著降低(P<0.01). 结论 缺血后处理能抑制由缺血再灌注导致的心室肌Cx43 mRNA降解,从而减少再灌注心律失常的发生.     

迷走神经刺激对老年大鼠缺血性室性心律失常的影响

目的：探讨急性心肌缺血时迷走神经刺激对老年大鼠缺血性室性心律失常的影响及其潜在的作用机制。方法：雄性SD大鼠80只,结扎大鼠冠状动脉前降支制备急性心肌缺血模型分为：（1）成年组：心肌缺血组（MI组,陀=15）、心肌缺血＋迷走神经刺激组（MI—Vs组,乃=15）和假手术组（sO组,n=10）;（2）老年组：心肌缺血组（MI组,儿=15）、心肌缺血＋迷走神经刺激组（MI．VS组,凡=15）和假手术组（S0组,n=10）。心电图监测各组室性心律失常的发生,并进行比较。结果：结扎冠状动脉30min内,老年MI组室速和室颤发生率较成年MI组显著增加（P〈0．05）;老年MI．VS组与老年MI组室速和室颤发生率无明显变化（P〉0．05）,老年MI—VS组不可逆性室颤发生率较老年MI组明显减少（P〈0．05）。结论：老年大鼠缺血性室性心律失常发生率明显增加,而迷走神经刺激的抗缺血性室性心律失常的效应却明显减弱。     

Cx30.2和Cx45在急性心肌梗死大鼠心脏结区组织中的表达

目的探讨急性心肌梗死大鼠心脏结区组织中连接蛋白(Cx30.2、Cx45)的表达。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型,随机分为模型组(MI组,n=10)和假手术组(只穿线不结扎,SH组,n=10)。术后4周取心脏标本,采用免疫组化和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测心脏结区组织中Cx30.2和Cx45蛋白及mRNA的表达。结果术后4周MI组Cx30.2和Cx45蛋白表达增加,分布不均,无规则,与SH组相比,蛋白表达差异有高度统计学意义(P=0.00);Cx30.2和Cx45 mRNA在MI组的表达量亦增加,与SH组相比,差异有高度统计学意义(P=0.00);Cx30.2和Cx45 mRNA的表达具有明显正相关(r=0.938,P<0.05)。结论急性心肌梗死后心脏结区组织中Cx30.2和Cx45表达增加,二者mRNA表达呈正相关。     

美托洛尔对大鼠心肌梗死周边区缝隙连接蛋白43的影响

目的:探讨美托洛尔对大鼠心肌梗死(心梗)后梗死周边区缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响。方法:80只大鼠随机分为假手术组(20只)、心梗组(30只)和美托洛尔组(30只),用结扎冠状动脉左前降支的方法制备心梗模型,美托洛尔组给予美托洛尔5mg/(kg.d)灌胃,心梗组给予安慰剂。手术8周后,测量梗死周边区心室颤动阈值(室颤阈值)。用蛋白印记分析和RT-PCR分别观察心梗后梗死周边区缝隙连接蛋白43(Cx43)磷酸化的蛋白质及总量表达和mRNA表达的变化;免疫荧光法观察梗死周边区Cx43的分布。结果:8周后,美托洛尔组室颤阈值高于心梗组[(11.0±2.65)V比(7.1±4.1)V,P<0.05],美托洛尔组Cx43磷酸化的蛋白质及总量均显著高于心梗组,Cx43mRNA的表达也明显高于心梗组。Cx43的密度和分布均显著高于心梗组。结论:美托洛尔能显著改善梗死周边区缝隙连接重构,这可能是美托洛尔能够抑制心梗后室性心律失常的一个机制。     

生脉注射液联合血塞通注射液对心肌梗死大鼠室颤阈值和心肌连接蛋白43表达的影响

目的：探讨益气活血中药（生脉注射液联合血塞通注射液）对心肌梗死（myocardial infarction,MI）大鼠室颤阈值、心脏大小、心肌梗死百分比及心肌缝隙连接蛋白43（connexin43,Cx43）表达的影响。方法：将100只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血组和卡托普利组,采用结扎冠状动脉前降支的方法建立MI模型,假手术组只穿线,不结扎。于造模成功后第2天开始给予相应药物治疗,疗程为1个月。治疗结束后,采用在体心脏电刺激法检测心脏室颤阈值,称取全心质量后计算心脏质量指数（全心质量/体质量）,图像分析测量左室内径和心肌梗死百分比,实时荧光定量聚合酶链式反应检测心肌Cx43mRNA的表达,免疫组织化学法检测心肌Cx43蛋白的表达。结果：与假手术组比较,模型组大鼠室颤阈值显著降低,心脏质量指数和左室内径明显增大,心肌Cx43mRNA及蛋白表达均明显降低（P〈0.01）。与模型组比较,益气活血组和卡托普利组室颤阈值显著提高,心脏质量指数、左室内径和心肌梗死百分比均明显减小（P〈0.05或P〈0.01）。益气活血组Cx43mRNA和蛋白的表达水平均显著提高（P〈0.05或P〈0.01）,而卡托普利组仅Cx43蛋白表达的光密度均值和综合光密度均值有明显的提高（P〈0.05）。益气活血中药提高MI大鼠心肌Cx43mRNA和蛋白表达的作用优于卡托普利（P〈0.05）。结论：生脉注射液联合血塞通注射液能提高MI大鼠心脏室颤阈值,其机制与改善MI后心脏结构重构和减轻心肌Cx43的表达有关。     

脑利钠肽对兔心肌梗死后缝隙连接蛋白重构及炎症因子的影响

目的探讨脑利钠肽对兔急性心肌梗死后梗死周边区缝隙连接蛋白43（Cx43）及炎症因子的影响。方法通过结扎冠状动脉前降支的方法制备兔心肌梗死模型,随机分为假手术组（Sham组）,心肌梗死组（MI组）,心肌梗死后人重组脑利钠肽（recombinan human brain natriuretic peptide）干预组（rh BNP组）。rh BNP组自术后即刻给予rh BNP 0.01μg/kg/min持续静脉泵入24 h;MI组、Sham组给予同等剂量的生理盐水静脉泵入。术后8周行电生理实验,并通过RT-PCR方法检测IL-1β、TNF-αmRNA的表达水平;用免疫荧光结合激光共聚显微镜技术检测Cx43的分布及表达。结果 MI组心肌细胞有效不应期（ERP）明显延长,且室性心律失常诱发率明显高于Sham组;脑利钠肽干预后室性心律失常诱发率降低。MI组梗死灶周IL-1βmRNA、TNF-αmRNA水平均较Sham组相应部位均明显增高（P〈0.01）,rh BNP组较MI组IL-1βmRNA、TNF-αmRNA水平减低（P〈0.05）。Sham组的Cx43荧光斑分布较均匀,MI组Cx43的数量较Sham组明显减少,且分布紊乱,rh BNP组较MI组梗死灶周Cx43数量增加,不均一分布的程度减轻。结论脑利钠肽可能对心梗后心肌的急性炎症过程产生影响,部分逆转缺血对缝隙连接的损伤作用,抑制心肌梗死后室性心律失常的发生。     

脑利钠肽对心肌梗死兔缝隙连接蛋白43的影响

目的探讨脑利钠肽对兔心肌梗死后梗死周边区缝隙连接蛋白43(Cx43)重构的影响。方法通过结扎冠状动脉前降支的方法制备兔心肌梗死模型,随机分为假手术组(Sham组),心肌梗死组(MI组),心肌梗死后人重组脑利钠肽(recombinan human brain natriuretic peptide)干预组(rh BNP组)。rh BNP组自术后即刻给予rh BNP(0.01μg/kg/min)持续静脉泵入24 h;MI组、Sham组给予同等剂量的生理盐水持续静脉泵入。术后8周行超声心动图检查;进行电生理实验;用免疫荧光结合激光共聚显微镜技术检测Cx43的分布及表达。结果 MI组较Sham组左室射血分数(LVEF)明显减低(P<0.01),rh BNP组较MI组LVEF提高(P<0.05)。MI组较Sham组QT离散度明显延长(P<0.01),rh BNP干预后QT离散度缩短(P<0.05)。Sham组的Cx43荧光斑分布较均匀,MI组梗死灶周Cx43的数量较Sham组明显减少,且分布紊乱,rh BNP组梗死灶周Cx43数量增加,不均一分布的程度减轻。结论脑利钠肽能够改善心肌梗死后Cx43的重构,这可能是脑利钠肽抑制心肌梗死后室性心律失常发生的一个机制。     

缝隙连接蛋白43在缺血预处理心肌保护中的作用

目的 探讨缝隙连接蛋白43(Connexin 43,Cx43)在缺血预处理心肌保护中的作用和地位.方法 将48只SD大鼠分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IP组)和5-羟基癸酸+缺血预处理组(5-HD+IP组),测定各组的心律失常评分和心肌梗死面积,采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测各组心肌Cx43的表达水平.结果 IR组和5-HD+IP组的心律失常发生多于IP组,评分明显高于IP组(P<0.01);IR组和5-HD+IP组的IS/AAR比值明显大于IP组(P<0.01);与IR组和5-HD+IP组比较,IP组Cx43 mRNA的表达明显增强(P<0.01).IP可以减少心律失常发生,减小心肌梗死面积,增强Cx43的表达,5-羟基癸酸可以阻断IP的心肌保护作用.结论 IP通过开放线粒体ATP敏感性钾通道保持Cx43磷酸化,进而实现心肌保护.     

新生猪缺氧后心肌连接蛋白Cx43表达的变化

目的探讨新生猪缺氧后心肌连接蛋白Cx43 mRNA和蛋白含量的变化。方法对照组(C组):新生猪6头,未吸入低氧;缺氧组(H组):新生猪6头,吸入低氧(FiO2=0.1)维持1 h。于缺氧结束后5 h,免疫荧光染色检测心肌组织细胞缝隙连接蛋白Cx43蛋白的表达,实时荧光定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测心肌组织Cx43 mRNA的表达。结果H组心肌组织Cx43蛋白的表达显著低于C组(P<0.01),但两组心肌组织Cx43 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论缺氧可导致心肌Cx43蛋白的表达或分布发生变化。     

Effects of sympathetic nerve stimulation on ischemia-induced ventricular arrhythmias by modulating connexin43 in rats

BACKGROUND: Increased cardiac sympathetic nerve activity is thought to contribute to ventricular tachyarrhythmias during acute myocardial ischemia (MI). However, the mechanism is not completely understood. This study investigated the effects of sympathetic nerve stimulation (SNS) on ventricular tachyarrhythmias and connexin43 (Cx43) during acute MI in rats. METHODS: Ninety five male Wistar rats were randomly assigned into four groups receiving the following treatments: myocardial ischemia with sympathetic nerve stimulation (MI-SNS, n = 25), sham-operation treated with sham stimulation (SO, n = 20), myocardial ischemia with sham stimulation (MI, n = 25), myocardial ischemia pretreated with sympathetic nerve stimulation (pSNS-MI, n = 25). RESULTS: During the 30-min ischemia, the incidence of ventricular tachyarrhythmias, i.e., ventricular tachycardia or ventricular fibrillation (VT/VF) was increased in the MI-SNS group and decreased in the pSNS-MI group compared to that in the MI group (p <0.05 for both). The total amount of Cx43 protein was significantly decreased in the MI-SNS group but not in the MI group and the pSNS-MI group. The amount of phosphorylated Cx43 in the MI-SNS group was significantly lower compared to that in the SO group and the MI group (p <0.05). However, the amount of phosphorylated Cx43 was significantly increased in the pSNS-MI group compared to that in the MI group and the MI-SNS group (p <0.05). CONCLUSIONS: SNS promoted the degradation of Cx43 protein, especially the phosphorylated Cx43 protein, whereas pSNS inhibited the ischemia-induced loss of phosphorylated Cx43 during acute MI. These changes may be related to the pro- or anti-arrhythmic effect of SNS or pSNS during acute MI.     

柴胡三参胶囊对缺血性心律失常大鼠心肌细胞Cx43的影响

目的：探讨柴胡三参胶囊对缺血性心律失常大鼠心肌细胞间缝隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）表达和分布的影响,为柴胡三参胶囊的临床应用提供实验依据。方法大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、柴胡三参胶囊（青蒿组）、柴胡三参胶囊（常山组）、胺碘酮组、稳心颗粒组,每组各10只。相应干预10 d后,除空白组和对照组外,其余各组采取大鼠左冠状动脉前降支高位结扎法制作心肌缺血性心律失常模型,再用免疫组织化学S-P法检测Cx43蛋白在各组大鼠心肌中的表达水平及分布情况。结果柴胡三参胶囊（青蒿组）与柴胡三参胶囊（常山组）Cx43免疫组化灰度值比较差异无统计学意义（P>0.05）;与模型组比较,柴胡三参胶囊心律失常评分降低（P<0.05）、死亡率降低、Cx43平均灰度值增高（P<0.05）及分布紊乱得到改善。结论柴胡三参胶囊（青蒿）与柴胡三参胶囊（常山）均能够改善心肌缺血时Cx43的表达及分布,保护心肌,从而减少缺血性心律失常的发生,且柴胡三参胶囊（青蒿）临床安全性更高。     

通心络对大鼠心肌梗死后神经重构和室颤阈值的影响

目的探讨通心络(TXL)对大鼠心肌梗死(MI)后神经重构和室颤阈值的影响。方法应用结扎冠状动脉前降支的方法制备大鼠MI模型,将大鼠随机分为3组:假手术组、MI组和TXL组(n=8),第6周应用超声心动图测定心脏结构和功能后进行室颤阈值测定;免疫组化法研究大鼠心室肌中生长相关蛋白43(GAP43)和酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经纤维的分布和密度。结果与假手术组相比,MI组心室肌神经分布紊乱,神经纤维密度明显增高(P<0.05),室颤阈值明显降低(P<0.05);TXL组较MI组神经纤维密度明显降低(P<0.05),室颤阈值明显升高(P<0.05),并接近假手术组。结论TXL能改善MI后神经重构反应,提高室颤阈值,有预防MI后室性快速心律失常的潜在作用。     

大鼠早期心肌缺血干燥综合征抗原B基因及其蛋白的表达

目的 探讨干燥综合征抗原B基因（SSB）及其蛋白在大鼠早期心肌缺血组织中的表达。方法 健康SD大鼠随机分为手术组、非手术对照组和假手术组,根据缺血时间分为0 min、15 min、30 min、60 min、120 min和240 min亚组,依据缺血部位将手术组又分为心肌缺血组和心肌非缺血组。手术组每亚组6只大鼠,非手术对照组及假手术组中的每亚组4只。通过实时荧光定量PCR测定每个样本SSB基因的表达水平,运用Western blot和免疫荧光技术检测SSB蛋白的表达。结果 SSB基因表达在急性心肌缺血早期呈下调趋势,心肌缺血120 min组SSB mRNA 表达降低,与0 min组及非手术对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）;与心肌缺血0 min组相比,SSB蛋白在心肌缺血60 min组的组织中的表达降低（P<0.05）;心肌缺血60 min和120 min,SSB蛋白在非缺血组中的表达高于缺血组（P<0.05）。缺血心肌组织中,SSB蛋白主要位于心肌细胞核,胞浆及部分心肌细胞的细胞膜上也有少量表达。结论 SSB在急性心肌缺血后呈现差异性表达,可能参与早期缺血心肌的病理生理过程。     

通心络胶囊改善压力超负荷大鼠心肌肥厚和缝隙连接蛋白Cx43重构的研究

目的 探索通心络胶囊对压力超负荷大鼠心肌肥厚和QT离散度以及缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响。 方法 随机均分45只雄性SD大鼠成3组:对照组(control,C),模型组(model,M),治疗组(treatment,T),腹主动脉缩窄手术建立压力超负荷大鼠模型,予通心络胶囊[1.5 g/(kg·d)]干预12周后,以多普勒超声心动图检测,同时测定大鼠QT离散度,大鼠处死后取左室心肌组织行HE染色,以免疫组化方法检测Cx43的表达及分布,RT-PCR法检测Cx43 mRNA的表达。 结果 M组大鼠心脏多普勒结果与C组比较显示IVSs、VPWs、LIVSd和LVPWd均有增加(均P<0.01);而T组和M组比较,以上检测参数则得以改善。与C组相比,M组QT离散度明显延长(P<0.01),与M组相比,T组QT离散度明显缩短(P<0.01)。同时HE染色显示:与C组相比,M组心肌细胞肥大明显(P<0.01),呈无序排列,T组与M组比较,心肌肥大及排列均较其改善(均P<0.01)。RT-PCR及免疫组化检测结果均显示:与C组相比,M组Cx43 mRNA和蛋白的表达均有明显下调(均P<0.05),而T组与M组相比,Cx43 mRNA和蛋白的表达有所上调(均P<0.05)。 结论 通心络胶囊在改善压力超负荷大鼠心肌肥厚的同时也缩短QT离散度及上调Cx43的表达。      

常压高浓度氧治疗对脑缺血-再灌注大鼠星形胶质细胞活性的影响

目的 观察常压高浓度氧治疗(normobaric hyperoxia, NBO)对脑缺血-再灌注大鼠星形胶质细胞活化的标志物——胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)以及缝隙连接蛋白43(connexin 43, Cx43)表达的影响,初步探讨其作用机制。方法 将健康成年雄性SD大鼠15只(280~320 g)采用数字表法随机分为假手术组(Sham)、正常氧浓度组(Normoxia)和NBO组,应用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血1.5 h 再灌注24 h。Sham组和Normoxia组术后呼吸普通空气,NBO 组于缺血后5 min至再灌注前呼吸100%常压氧气。采用免疫荧光染色和Western blotting检测方法,研究NBO治疗对脑缺血皮质和基底节区星形胶质细胞GFAP和Cx43表达的影响。结果 免疫荧光结果显示:与Normoxia组相比,NBO组缺血侧皮质GFAP阳性细胞数目明显减少,细胞突起减少、荧光强度减弱。Western blotting法分析结果显示:与Normoxia组相比,NBO组皮质和基底节区GFAP水平均有所降低,其中皮质著降低(P<0.05),表达变化与免疫荧光结果一致;与Sham组相比,Normoxia组缺血侧皮质和基底节区Cx43水平均有所降低,其中缺血侧皮质Cx43表达显著减少(P<0.01);与Normoxia组相比,NBO组缺血皮质Cx43蛋白显著升高(P<0.01),NBO组缺血基底节区Cx43蛋白水平差异无统计学意义。结论 NBO治疗可能通过调节缺血侧皮质缝隙连接蛋白Cx43的表达水平来抑制脑缺血星形胶质细胞过度活化,从而实现脑神经保护作用。     

大鼠连接蛋白30．2在急性心肌梗死大鼠的表达及阿尔马尔对其的影响

目的探讨急性心肌梗死（AMI）大鼠连接蛋白30．2（Cx30．2）的表达和阿尔马尔药物治疗对其影响。方法将大鼠随机分为心肌梗死组（MI组）、阿尔马尔治疗组（A组）、假手术组（SH组）和正常对照组（N组）。前两组大鼠结扎冠状动脉左前降支（LAD）建立AMI模型,SH组只穿线不结扎。A组给予阿尔马尔（O．91mg／kg）,2次／d,灌胃治疗4周,其余三组给予等量生理盐水。4周后处死大鼠取出心脏,采用免疫组化法检测Cx30．2蛋白,RT—PCR法检测Cx30．2mRNA的表达。结果免疫组化检测Cx30．2蛋白为MI组、A组较N组增高（P〈0．05）,MI组较A组高（P〈0．05）,N组和SH组表达差异无统计学意义（P〉0．05）。RT—PCR检测Cx30．2mRNA的表达与Cx30．2蛋白的表达一致。结论心肌梗死后Cx30．2的表达增加,阿尔马尔可调节其表达进而减少心律失常的发生。