肠出血性大肠杆菌O157：H7实验室诊断技术进展

肠出血性大肠杆菌O157：H7（E．coli O157：H7）是肠出血性大肠杆菌（EHEC）的一个血清型，主要引起人的食源性疾病，以突发性腹痛、腹泻、血便为主要症状，严重时并发肾功能衰竭，病死率高。E．coli O157：H7广泛分布于自然界，在生猪、猪肉、牛及牛肉及其粪便中分离率极高，对公众健康构成严重威胁。因此，早期发现及时治疗和预防是控制该病的关键。E．coli O157：1-17实验室诊断以细菌培养、分离及生化和血清鉴定为主。近年来出现的新型免疫学方法和聚合酶链反应（PCR）对E．coli O157：H7诊断具有较高的敏感性和特异性。本文就E．coli O157：H7检测技术的研究进展综述如下。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7疫苗研究进展

肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli．EHEC）是出血性肠炎的主要病原体．其主要血清型是O157：H7。该菌被确认为致病菌的20多年来世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHEC O157：H7感染可使人患腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC），还可在5％～10％的病例中引发溶血性尿毒综合征（hemolytic uremic syndrome，HUS）及血栓性血小板减少紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）等严重并发症，严重者可导致死亡。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7疫苗研究进展

肠出血性大肠杆菌(EnterohemorrhagicEscherichia co-li,EHEC)是出血性肠炎的主要病原体,其主要血清型是O157∶H7。该菌被确认为致病菌的20多年来世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHEC O157∶H7感染可使人患腹泻、出血性结肠炎(hemorrhagic colitis,HC),还可在5%~10%的病例中引发溶血性尿毒综合征(hemolyticuremic syndrome,HUS)及血栓性血小板减少紫癜(throm-botic thrombocytopenic purpura,TTP)等严重并发症,严重者可导致死亡。EHEC O157∶H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性以及抗生素治疗可能会加…     

肠出血性大肠杆菌生物学特性

肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhage E.Coli,EHEC）是大肠杆菌的一个亚型,EHEC分为157、26、111血清型,主要致病菌株为O157∶H7,可引起感染性腹泻,因能引起人类的出血性肠炎而得名。在1982年一次出血性结肠炎流行中被分离出。大肠杆菌是人和动物肠道中的正常菌群,一般对人无害。它有3种抗原结构,即菌体抗原（又叫O抗原）、包膜抗原（又叫K抗原）和鞭毛抗原（又叫H抗原）。     

O157:H7的分子生物学检测与分型研究进展

肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E．coli．EHEC）O157：H7是一种重要的人兽共患病病原菌．主要通过食物和水源传播，在人类能引起出血性结肠炎（HC）、溶血尿毒综合征（HUS）等严重疾病甚至死亡。自1982年美国首次分离出该菌以来，世界各地不断有散发和暴发的报告，因此快速、敏感、特异的检测与分型方法对于临床诊断和疫情控制是非常必要的。随着分子生物学技术的飞速发展使这种要求成为可能，本文就近年来EHEC O157：H7的分子生物学检测与分型研究进展综述如下。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗TccP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Western blotting法进行测定和分析。结果从EHEC O157∶H7 Sakai菌株中克隆出了1014bp的TccP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达;以TccP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体,Western blotting分析此抗体能与TccP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TccP基因,所获TccP具有良好的抗原性,为进一步研究TccP在EHEC O157∶H7致病机制中的作用奠定基础。     

O157:H7大肠杆菌感染的动物模型研究近况

O157：H7大肠杆菌是肠出血性大肠杆菌(EHEC)的一个主要菌型。其被确认为一种新型肠道致病菌。是近年来食品卫生及肠道感染领域最重要的研究进展之一。感染该菌可使人患腹泻、出血性结肠炎(HC),也可引发溶血性尿毒综合征(HUS)及血栓形成性血小板减少性紫癜(TTP)等严重并发症。O157：H7被发现以来的20余年,该菌引发的食物中毒在世界各地包括我国都有不同规模的暴发流行。如2000年5月份,江苏省丰县由O157：H7引起的Hc占腹泻病患者0．98％。6月份铜山县由O157：H7引起的HC患者占腹泻病患者5．89％。该菌长期驻留于牛、羊、猪、鸡等家     

肠出血性大肠杆菌O157 EspA的研究进展

肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157：H7曾多次在世界各地，特别是发达国家引起广泛的暴发流行。感染主要导致腹泻、出血性结肠炎（hemorrhagic colitis，HC），并经常伴发溶血性尿毒综合征（Hemolytic ruemic syndrome，HUS）、血栓形成的血小板减少性紫癜（thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP）并发症，严重威胁着人类的生命健康。人类感染此菌的途径主要是食用或接触污染的牛肉、蔬菜、水果及水源等。目前，对O157：H7感染尚缺乏有效的防治方法，只能给予对症治疗和适当的抗菌治疗，但研究证明抗菌药物可促使O157：H7大肠杆菌释放Vero毒素，从而使患者并发溶血性尿毒综合征（HUS）的危险性增加。     

肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7志贺毒素研究进展

肠出血性大肠杆菌（EHEC）0157：H7于1975年被首次分离，为革兰氏阴性杆菌，对酸耐受性强，在pH3～5条件下，可长期生存，能产生致死性志贺毒素（Shiga toxin，Stx），1982年被确认为严重致病菌。其感染具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等特点，已经成为全球性的公共卫生问题，对人们的健康构成了巨大威胁。据报道，美国每年感染STEC约有10万例．其中O157：H7感染约有7．3万例。近年来，美国、日本、加拿大、英国等发达国家EHEC O157：H7发病呈上升趋势，许多国家已把它列为法定报告传染病。我国江苏、安徽省曾于1999年暴发流行大肠杆菌O157感染性腹泻，患者超过2万例，死亡177例，流行时间7个月。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7Tir细胞骨架偶联蛋白（TeeP）基因，并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC0157：H7Sakai菌株基因组扩增TeeP基因，构建TeeP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后，免疫新西兰白兔，制备兔抗TeeP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Westernblotting法进行测定和分析。结果从EHECO157：H7Sakai菌株中克隆出了1014bp的TeeP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达；以TeeP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体，Westernblotting分析此抗体能与TeeP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TeeP基因，所获TeeP具有良好的抗原性，为进一步研究TeeP在EHECO157：H7致病机制中的作用奠定基础。     

5株产硫化氢大肠杆菌O157的分离鉴定

肠出血性大肠杆菌O157：H7是引起人类出血性肠炎的主要菌型，自1982年在美国首次被分离并确认为食物中毒新型致病菌以来，在世界范围内发生过多次暴发，并造成严重危害。尤其是1996年5～8月日本发生了由E．coli O157：H7引起的人类历史上大规模的暴发流行，引起世界普遍关注。我们自1999年开始开展了大肠杆菌O157：H7的监测，     

肠出血性大肠埃希菌O157∶H7环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用

目的肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7是一种重要的人畜共患病致病菌,主要通过被污染的食物传播,引起出血性结肠炎,建立其快速检测方法具有重要意义。方法基于EHEC O157∶H7保守的rfbE基因序列,设计4条引物,利用环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP),成功建立了EHEC O157∶H7LAMP快速检测方法 ,60min内即可完成致病菌检测。结果利用该LAMP方法对30种共38株细菌进行检测,所试EHEC O157∶H7均为阳性结果 ,说明该方法具有高度特异性。本方法对纯培养的EHEC O157∶H7检测限为12CFU/mL,污染食品中EHEC O157∶H7的检测限为18CFU/g。实践应用表明,对1121份进出口肉类、奶类制品及人工污染样品等进行检测,检出57份LAMP阳性,与采用AOAC标准检测结果的符合率为100%。结论该LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。     

抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗出血性大肠杆菌O157：H7(E．coli O157：H7)特异性单克隆抗体(MAbs)。方法福尔马林灭活的E．coli O157：H7免疫BALB／c小鼠，利用细胞融合技术建立分泌抗E．coli O157：H7 MAbs的杂交瘤细胞株，对配对较好的6株MAbs用ELISA法测定其免疫球蛋白类及亚类，用ELISA法、凝集法和Western blot鉴定MAbs的特异性。结果6株MAbs免疫球蛋白均为小鼠IgM。这些MAbs均能与27个E．coli O157：H7菌株发生凝集反应。与部分弗劳地杆菌发生凝集反应，与11株鼠伤寒沙门氏菌、7株伤寒杆菌、2株痢疾杆菌、致病性大肠杆菌、产毒性大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌、出血性大肠杆菌O26：H11和O111、肠集聚性大肠杆菌、42株非定血清型大肠杆菌、霍乱弧菌O1群和O139群不发生凝集反应；ELISA结果显示6株MAbs与粪链球菌、变形杆菌、粘质沙雷氏菌、肺炎克雷伯杆菌均无交叉反应；ELISA和Western blot结果显示。3株MAbs针对E．coli O157：H7酚相脂多糖。结论6株MAbs具有较高的特异性，有可能用于制备检测E．coli O157：H7的病原检测试剂。     

O157∶H7的分子生物学检测与分型研究进展

肠出血性大肠杆菌(EnterohemorrhagicE.coli,EHEC)O157∶H7是一种重要的人兽共患病病原菌,主要通过食物和水源传播,在人类能引起出血性结肠炎(HC)、溶血尿毒综合征(HUS)等严重疾病甚至死亡。自1982年美国首次分离出该菌以来,世界各地不断有散发和暴发的报告,因此快速、敏感、特异的检测与分型方法对于临床诊断和疫情控制是非常必要的。随着分子生物学技术的飞速发展使这种要求成为可能,本文就近年来EHEC O157∶H7的分子生物学检测与分型研究进展综述如下。1 O157∶H7的分子生物学检测1.1聚合酶链式反应(PCR)技术1.1.1传统PCR针对…     

天津地区环境样品中首次检出大肠杆菌O157:H7

肠出血性大肠杆菌是近年来新发现的可对人体健康产生严重危害的肠道致病菌，引起人腹泻、出血性肠炎、血栓性血小板减少性紫癜和溶血性尿毒综合征，在国外导致多起暴发流行，已成为威胁人类健康的重要公共卫生问题。EHEC O157：H7是一种以食物传播为主要传播途径的人兽共患疾病的病原菌，国内许多地方均已分离到，1999年江     

肠出血性大肠杆菌O157:H7感染

大肠杆菌O157:H7是肠出血性大肠杆菌(enterohaemorrhagic escherichia coli,EHEC)的一种主要血清型,可引起消化道传播的人畜共患病,临床表现为无症状感染、轻度腹泻、出血性结肠炎(hemorrhagic colitis,HC),溶血性尿毒综合症(hemolytic uremics syndrome,HUS),血栓性血小板减少性紫癜(thrombotic thromobocyto penicporpura,TTP).自1982年美国发生首起O157引起的小型暴发后,世界20多个国家有散发或流行的报道,已引起广泛关注.     

冷冻原肠中肠出血性大肠杆菌O157:H7的研究

目的 为了研究进出境冷冻原肠携带肠出血性大肠杆菌O157：H7的情况。方法 本研究对2010-2011年进境或国产的35份冷冻原肠样品进行了检测,其中包括19份冷冻羊原肠和16份冷冻猪原肠。根据细菌的培养特性、生化鉴定和血清学鉴定,同时设立标准菌株作为对照。结果 结果表明2份原肠样品检出肠出血性大肠杆菌O157：H7,检出率为5.71%。结论 进境和国产原肠均有可能携带肠出血性大肠杆菌O157：H7,应该进一步加强监测和研究。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7脂多糖抗原的制备及鉴定

目的提取纯化肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7脂多糖（LPS）抗原并对其鉴定,以探讨其应用于检测抗O157抗体的价值。方法应用热酚水法提取EHECO157：H7S型933株LPS抗原,并经超速离心纯化。提取物以蒽酮硫酸法、紫外光谱吸收法、考马斯亮蓝染色法及鲎试剂分别测定多糖、核酸、蛋白含量和尝试剂凝集活性。LPS抗原致敏醛化鸡血球,IHA法检测EHEC157：H7及其它肠道病原菌的抗血清。对凝集阳性的抗血清,经菌体抗原吸收、O157LPS抑制及去脂质多糖抗原抑制试验,确定抗血清与LPS的反应位置。结果纯化后的O157LPS抗原告多精,具鲎试剂凝集活性,未检出核酸,蛋白含量＜0．5％。O157LPSIHA检测O157多克隆和单克隆抗体均呈高效价凝集阳性反应,而大部分其它肠道病原菌抗血清均呈阴性反应,交叉反应仅见于沙门氏菌O30、EIECO144：K？及ESIECⅣ抗血清。EHEC157和沙门氏菌O30抗血清与O157LPS反应位置为多糖部分,而EIECO144：K？及ESIECⅣ抗血清的反应位置为脂质A部分。结论热酚水法提取的EHECO157LPS抗原纯度高、特异性强,可望应用于抗O157抗体的检测。O157LPS抗原的去脂质可进一步提高反应的特异性。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的制备及鉴定

目的提取纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7脂多糖(LPS)抗原并对其鉴定,以探讨其应用于检测抗O157抗体的价值.方法应用热酚水法提取EHEC O157∶H7 S型933株LPS抗原,并经超速离心纯化.提取物以蒽酮硫酸法、紫外光谱吸收法、考马斯亮蓝染色法及鲎试剂分别测定多糖、核酸、蛋白含量和鲎试剂凝集活性.LPS抗原致敏醛化鸡血球,IHA法检测EHEC O157∶H7及其它肠道病原菌的抗血清.对凝集阳性的抗血清,经菌体抗原吸收、O157 LPS抑制及去脂质多糖抗原抑制试验,确定抗血清与LPS的反应位置.结果纯化后的O157 LPS抗原含多糖,具鲎试剂凝集活性,未检出核酸,蛋白含量＜0.5%.O157 LPS IHA检测O157多克隆和单克隆抗体均呈高效价凝集阳性反应,而大部分其它肠道病原菌抗血清均呈阴性反应,交叉反应仅见于沙门氏菌O30、EIEC O144∶K?及ESIECⅣ抗血清.EHEC O157和沙门氏菌O30抗血清与O157 LPS反应位置为多糖部分,而EIEC O144∶K?及ESIECⅣ抗血清的反应位置为脂质A部分.结论热酚水法提取的EHEC O157 LPS抗原纯度高、特异性强,可望应用于抗O157抗体的检测.O157 LPS抗原的去脂质可进一步提高反应的特异性.     

濮阳市人畜禽粪便、食品中O157∶H7监测报告

EHEC为人畜共患病 ,自 1982年在美国首次报道了肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O15 7∶H7大肠杆菌引起的出血性肠炎以来 ,目前世界上许多发达国家和一部分发展中国家都发生了O15 7∶H7大肠杆菌感染的爆发流行 ,已成为世界性的公共卫生问题。我国已经从牛、羊、猪、鸡的粪便标本、苍蝇以及牛肉、鸡肉、鱼、腌菜等食品中分离到O15 7∶H7大肠杆菌。为了解O15 7∶H7在我市人畜禽新鲜粪便、食品中的存在情况 ,1998年至 2 0 0 2年对其进行了O15 7∶H7监测 ,现将监测结果报告如下 :1　材料与方法1 1　粪便的采集　以无菌的方法采集人畜新鲜大便。…