八肽缩胆囊素对脂多糖诱导血管内皮细胞诱生型一氧化氮合酶表达变化的抑制作用

目的探讨八肽缩胆囊素（CCK-8）对脂多糖（LPS）诱导血管内皮细胞诱生型一氧化氯合酶（iNOS）表达变化的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞。用0．01、0．1和1mg／L LPS处理2～24h，用生理盐水、10mol／LCCK-8和0．1mg／L LPS＋10^-8、10^-7、10^-8mol／L CCK-8处理16h；用比色法检测培养液中一氧化氮（NO）含量、细胞NOS活性，免疫细胞化学及蛋白质免疫印迹法检测iNOS蛋白表达。结果与生理盐水处理的对照组比较，LPS诱导培养液NO含量增多、细胞NOS活性增高、iNOS蛋白表达上调；CCK-8剂量依赣性抑制LPS的上述效应。而单独作用对iNOS蛋白表达、NOS活性和NO含量均无明显影响。结论CCK-8可以明显抑制LPS引起ECV-304细胞iNOS蛋白表达上调。减少NO生成。     

八肽缩胆囊素调节脂多糖诱导ECV-304细胞核转录因子-κB表达的受体机制研究

目的探讨八肽缩胆囊紊（CCK-8）调节脂多糖（LPS）诱导血管内皮细胞核转录因子-κB（NF—κB）表达的受体机制。方法培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304；用溶剂（生理盐水）、LPS、CCK-8、CCK受体（CCK—R）非特异性拮抗剂丙谷胺、CCK—A受体（CCK—AR）特异性拮抗剂CR-1409、CCKB受体（CCK—BR）特异性拮抗剂CR-2945分别或联合刺激ECV-304细胞1h。用蛋白质免疫印迹法（Western blot）榆测NF-κB p65蛋白表达；用免疫细胞化学技术榆测NF—κB p65蛋白核移位。结果与溶剂对照组比较，LPS可诱导ECV-304细胞NF-κB p65蛋白核移位，且其表达明显上调；CCK-8可呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的核移位及表达上调；CCK受体拮抗剂可翻转CCK-8的上述抑制效应，其中CR-1409、CR-2945、丙谷胺作用依次增强。结论CCK-AR和CCKBR参与介导了CCK-8对LPS诱导ECV-304细胞NF—κB表达的抑制作用，其中CCK—BR的作用比CCK—AR稍强。     

八肽胆囊收缩素对脂多糖攻击小鼠抗炎症细胞因子表达的影响

目的观察脂多糖（LPS）攻击小鼠白细胞介素-4（IL-4）、IL-10的动态变化规律，以及八肽胆囊收缩素（CCK-8）对其表达的影响。方法随机将小鼠分组，每组7只。腹腔注射LPS10mg／kg，于攻击后0、2、4、6和12h检测血清、肺组织IL-4和IL-6表达高峰的时间。对照组腹腔注射生理盐水0．2ml；LPS组腹腔注射LPS10mg／kg；LPS＋CCK-8组在注射LPS前30min腹腔注射CCK-8 60μg／kg；CCK-8组腹腔注射CCK-8 60μg／kg。用酶联免疫吸附法（ELISA）及逆转录-聚合酶链反应（PT—PCR）方法检测各组小鼠血清和肺组织中IL-4、IL-10的含量及其mRNA的表达情况。结果LPS攻击后2h血清及肺组织IL-4、IL-6均显著升高，血清IL-4、IL-6于4h和6h达高峰；肺组织IL-4、IL-6则均于6h达高峰。说明LPS攻击可使小鼠血清及肺组织中IL-4、IL-10的蛋白及mRNA表达均增加；预先注入CCK-8可使IL-4和IL-10的蛋白以及mRNA表达均进一步增加（P均〈O．01）；而单独注射CCK-8对血清、肺组织IL-4、IL-10的表达无明显影响。结论CCK-8可能通过进一步增加LPS攻击小鼠IL-4、IL-10的表达参与抗炎反应过程，从而减轻LPS引起的肺组织炎症反应。     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导肺动脉内皮细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨八肽胆囊收缩素（CCK－8）对脂多糖（LPS）诱导培养的肺动脉内皮细胞（BPAEC）凋亡的影响。方法：培养的BPAEC用LPS、CCK－8、CCK－8非特异性受体阻断剂丙谷胺分别或共同处理后,继续培养24小时。用流式细胞术和核荧光染色方法检测细胞凋亡,用生物化学方法检测培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）含量,用流式细胞术定量检测过氧亚硝基阴离子（ONOO^-)含量。结果：LPS可诱导BPAEC凋亡和坏死明显增多,培养上清中MDA含量增高;CCK－8抑制BPAEC凋亡和MDA含量的增高,此作用为CCK－8受体非特异性阻断剂丙谷胺翻转;CCK－8可抑制LPS诱导BPAEC生成ONOO^-增多;CCK－8和丙谷胺对LPS诱导的BPAEC坏死无明显影响。结论：CCK－8可抑制LPS诱导的BPAEC凋亡,此作用由其受体介导,并与CCK－8的抗氧化功能有关。     

血管内皮细胞生长因子及受体在乳腺癌组织的表达研究

目的 探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体在乳腺癌组织中表达的意义.方法 使用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及计算机条带分析半定量方法检测了VEGF异构体及受体mRNA在乳腺癌组织及癌周组织的表达水平.对VEGF121 mRNA及KDRmRNA表达水平和肿瘤大小,淋巴结转移及绝经前后的关系进行统计学分析.结果 在乳腺癌组织及癌周组织均检测到VEGF121和KDR,flt-1的mRNA表达,VEGF121和KDR在癌组织表达水平明显高于癌周组织,在癌组织及癌周组织,VEGF121 mRNA表达和KDR121 mRNA表达之间有明显直线正相关及回归依存关系,VEGF121,KDR的mRNA表达在肿瘤≥2cm;淋巴结阳性及绝经前组病人明显高于淋巴结阴性、肿瘤＜2cm和绝经后组病人.结论 VEGF、KDR在乳腺癌组织的表达水平明显高于癌周组织,VEGF积极参与乳腺癌的新生血管增殖过程.     

八肽胆囊收缩素与血管紧张素Ⅱ在拮抗大鼠吗啡镇痛中的协？…

以往的研究表明，八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）和血管紧张素Ⅱ（ＡⅡ）均为有效的抗阿片物质。大鼠脑室（ｉ．ｃ．ｖ．）注射ＣＣＫ－８或ＡⅡ均能拮抗吗啡的镇痛作用。本研究的目的是观察ＣＣＫ－８与ＡⅡ在拮抗吗啡镇痛时是否相互协同。在给大鼠皮下注射吗啡１０ｍｉｎ后，再ｉ．ｃ．ｖ．单独注射ＣＣＫ－８或ＡⅡ，或同时注射二者不同剂量不和同比例的混合物。结果表明，联合应用ＣＣＫ－８ＡⅡ所产生的拮抗吗啡镇前的作用明显大     

八肽胆囊收缩素对家兔内毒素休克时主动脉及肺动脉反应性改变的影响

目的 观察八肽胆囊收缩素（CCK-8）对脂多糖（LPS）引起的家兔内毒素休克（ES）时肺循环，体循环血压变化以及离体主动脉，肺动脉反应性变化的影响。方法 健康新西兰大耳白色雄性家兔，体重2.0-2.1kg，乌拉坦静脉麻醉（1g/kg bw)，随机分为5组（每组8只），生理盐水组（对照组）；LPS组；LPS8mg/kgi.v复制家兔ES模型；LPS CCK组：CCK-815μg/kgi.v.15min后注入LPS；LPS 丙谷胺（Pro)组；Pro1mg/kgi.v,15min后注入LPS；CCK组；CCK-815μg/kgi.v，利用多导生理记录仪持续监测肺动脉压（PAP）和平均动脉压（MAP）的变化；5h后放血处死，制备主动脉环（TARs)和肺动脉环（PARs)。应用血管张力测定技术，检测离体主动脉，肺动脉反应性。结果 （1）CCK-8在ES时可部分逆转MAP降低，完全翻转肺PAP增高；而Pro加剧ES的上述效应。（2）在离体实验中，LPS组的PARs对苯肾上腺素（PE）的收缩反应增强，PE（10^8-10^-5mol/L)剂量反应曲线左移；对乙酰胆碱（ACh)内皮依赖性舒张反应降低，ACh(10^-8-10^-5mol/L)剂量反应曲线右移；CCK-8逆转子LPS的上述作用，CCK-8对正常肺动脉舒缩反应无明显影响。在实验条件下，各组的TARs对PE的收缩反应无明显差异。可能与本实验整体观察时间较短有关，对ACh的舒张反应各组有所差异。结论 CCK在整体水平时ES发病时肺循环，体循环血压具有调节作用，并从离体水平揭示了CCK可通过对肺动脉，主动脉反应性改变的影响来调节ES时的肺循环，体循环血压。     

血管内皮细胞生长因子及其受体与血管形成的研究进展

业已证明 ,血管形成在胚胎发育、子宫内膜周期性增殖、创伤愈合、肿瘤发生和转移及增殖性视网膜病变等生理和病理状态中有着极其重要的作用。近年来的研究发现 ,血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth fac-tor,VEGF)与血管形成紧密关联 ,被认为是影响血管形成的关键性因素 ,现将有关该方面的研究综述如下。1　血管形成相关的几个概念血管形成分为血管发生 (vasculoge-nesis)、血管生成 (angiogenesis)及动脉生成 (arteriogenesis)〔1〕。血管发生是指在胚胎期 ,来源于中胚层的干细胞增殖和分化 ,形成内皮细胞 ,进而与其…     

脑内八肽缩胆囊素水平与提高针刺镇痛疗效的机制研究

目的:探讨八肽缩胆囊素(CCK-8)对抗电针对大鼠尾核中痛反应神经元放电和测量甩尾潜伏期(TFL)痛阈的同时影响。方法:本实验以大鼠尾核中痛兴奋神经元(PEN)和痛抑制神经元(PIN)电变化及辐射热照大鼠尾所引起TFL三者为指标,观察了电针、CCK-8对同时记录PEN或PIN电活动和TFL的影响。结果:①辐射热照大鼠尾可使63个PEN平均放电的净增值(NIV)增加了(285.89±11.58)%或42个PIN平均放电NIV下降了(81.60±8.14)%的同时发生甩尾反射,表现出辐射热致疼痛效应。②电针双侧“足三里”15min后,19个PEN平均放电的抑制率为66.30±10.82%,而平均TFL的延长率是(76.74±9.93)%或12个PIN的平均抑制时程(ID)缩短了(51.45±9.58)%,同时使TFL延长了(77.68±11.38)%,即呈现出电针的镇痛效应。③脑室注射CCK-8(10ng)能同时对抗电针所引起PEN放电的抑制或PIN的ID缩短和TFL的延长作用。结论:CCK-8的抗电针镇痛作用在中枢痛反应神经元电活动和整体行为反射水平上是协同一致的。提示PEN和PIN的电活动作为疼痛和镇痛指标是确实可行的。     

脑内八肽缩胆囊素水平与提高针刺镇痛疗效的机制研究

目的：探讨八肽缩胆囊素(CCK-8)对抗电针对大鼠尾核中痛反应神经元放电和测量甩尾潜伏期(TFL)痛阈的同时影响。方法：本实验以大鼠尾核中痛兴奋神经元(PEN)和痛抑制神经元(PIN)电变化及辐射热照大鼠尾所引起TFL三者为指标，观察了电针、CCK-8对同时记录PEN或PIN电活动和TFL的影响。结果：①辐射热照大鼠尾可使63个PEN平均放电的净增值(NIV)增加了(285．89&;#177;11．58)％或42个PIN平均放电NIV下降了(81．60&;#177;8．14)％的同时发生甩尾反射，表现出辐射热致疼痛效应。②电针双侧“足三里”15min后，19个PEN平均放电的抑制率为66．30&;#177;10．82%，而平均TFL的延长率是(76．74&;#177;9．93)％或12个PIN的平均抑制时程(ID)缩短了(51．45&;#177;9．58)％，同时使TFL延长了(77．68&;#177;11．38)％，即呈现出电针的镇痛效应。③脑室注射CCK-8(10ng)能同时对抗电针所引起PEN放电的抑制或PIN的ID缩短和TFL的延长作用。结论：CCK-8的抗电针镇痛作用在中枢痛反应神经元电活动和整体行为反射水平上是协同一致的。提示PEN和PIN的电活动作为疼痛和镇痛指标是确实可行的。     

小檗碱对HL-60细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体2表达的影响

本研究旨在观察小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)表达的影响。选用HL-60细胞体外培养,在不同浓度的小檗碱(6-96μg/ml)作用下,应用CCK-8法检测小檗碱对HL-60细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡水平及细胞周期的分布;用RT-PCR及Western blot分别检测VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白表达的变化。结果显示,小檗碱能抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,呈浓度和时间依赖关系。随着小檗碱浓度增加,G1期细胞增多,S期细胞减少,同时VEGFR2 mRNA和VEGFR2蛋白表达减少。结论:小檗碱可抑制HL-60细胞增殖,促进细胞凋亡,改变HL-60细胞周期,下调VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白的表达。     

Budesonide/formoterol decreases expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and VEGF receptor 1 within airway remodelling in asthma

INTRODUCTION: Angiogenesis and microvascular remodelling may play a vital role in the chronic inflammatory process within asthma. One of the most important factors involved in angiogenesis is vascular endothelial growth factor (VEGF). In this study we hypothesised that an increased expression of VEGF may be involved in airway remodelling in asthma patients. To this end, we compared the histology and expression levels of VEGF and one of its receptors (VEGFR1) in bronchial tissues of patients with asthma compared with control patients. We also investigated the effect of treatment with budesonide/formoterol (Symbicort(R); AstraZeneca, Lund, Sweden) in the relationship between VEGF and airway remodelling. METHODS: Bronchial tissues were obtained from patients attending the West China Hospital from April to November 2006. Thirteen patients were diagnosed with moderate asthma and 10 others were treated as control. Histological and immunohistochemical comparisons between asthmatic and control patients were made at baseline, and (for asthmatic subjects) following 6 months of treatment with budesonide/formoterol. RESULTS: Compared with control patients, asthmatic patients had significantly decreased respiratory parameters, including forced vital capacity (FVC) and forced expiratory volume in 1 second (FEV(1)) (% predictive). Furthermore, patients with asthma had submucosal gland hyperplasia, increased smooth muscle mass, increased subepithelial fibrosis and neovascularisation. Asthmatic patients also exhibited increased expression of VEGF and VEGFR1 within epithelial cells. The increased expression of VEGF and its receptor correlated well with airway remodelling, airflow obstruction and airway hyper-responsiveness. After treatment with budesonide/formoterol for 6 months, the expression of VEGF and VEGFR1 was decreased, with correlatory decreased airway remodelling in patients with asthma. CONCLUSION: The increased expression of VEGF and VEGFR(1) in asthmatic patients is accompanied by an increased number and size of blood vessels in asthmatic airways, as well as airway remodelling. Budesonide/formoterol therapy for 6 months can decrease the expression of VEGF and VEGFR(1) alongside airway remodelling in asthma. The inhibition of VEGF and its receptor may be a good therapeutic strategy for asthma.     

Molecular imaging of vascular endothelial growth factor receptor 2 expression using targeted contrast-enhanced high-frequency ultrasonography.

OBJECTIVE: The aim of our study was to investigate the use of targeted contrast-enhanced high-frequency ultrasonography for molecular imaging of vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2) expression on tumor vascular endothelium in murine models of breast cancer. METHODS: Highly invasive metastatic (4T1) and nonmetatstatic (67NR) breast cancer cells were implanted in athymic nude mice. Tumors were examined in vivo with targeted contrast-enhanced high-frequency ultrasonography using a scanner with a 40-MHz probe. Randomized boluses of ultrasound contrast agents (UCAs) conjugated with an anti-VEGFR2 monoclonal antibody or an isotype control antibody (immunoglobulin G) were injected into the animals. Sonograms were analyzed by calculation of the normalized video intensity amplitudes caused by backscatter of the bound UCA. After ultrasonography, the tumor samples were harvested for analysis of VEGFR2 expression by immunoblotting and immunocytochemistry. RESULTS: The mean video intensity amplitude caused by backscatter of the retained VEGFR2-targeted UCA was significantly higher than that of the control UCA (mean +/- SD: 4T1 tumors, 15 +/- 3.5 versus 7 +/- 1.6 dB; P < .01; 67NR tumors, 50 +/- 12.3 versus 12 +/- 2.6 dB; P < .01). There was a significant difference in VEGFR2-targeted UCA retention between 4T1 and 67NR tumors (normalized video intensity amplitudes, 15 +/- 3.5 and 50 +/- 12.3 dB, respectively; P < .001), and this correlated well with relative VEGFR2 expression in the two tumor types. CONCLUSIONS: Targeted contrast-enhanced high-frequency ultrasonography may enable in vivo molecular imaging of VEGFR2 expression on the tumor vascular endothelium and may be used for noninvasive longitudinal evaluation of tumor angiogenesis in preclinical studies.     

RT-PCR检测白血病细胞VEGF异构体及其受体基因

目的 建立逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测白血病细胞血管内皮生长因子(VEGF)异构体及其受体基因的方法。方法 用TRIZOL试剂提取体外培养的细胞系总RNA,M—MLV逆转录酶生成模板cDNA,PCR扩增VEGF异构体基因以及VEGF受体Flt-1基因,扩增产物用含溴化乙锭的2％琼脂糖凝胶电泳后,直接分析电泳结果。结果 白血病细胞(K562和HL-60)出现3条VEGF条带(516bp、588bp、648bp),分别代表VEGF3种异构体(VEGF121,VEGF145,VEGF165)的基因扩增产物,而人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)无VEGF条带出现;此外,2种白血病细胞都可以测出VEGF的Flt-1受体基因,与Flt-1阳性细胞ECV304相似。结论 RT-PCR可用于白血病细胞VEGF多种异构体及其Flt-1受体基因的检测。     

丰富环境对脑梗死大鼠梗死灶周围血管内皮生长因子受体的影响

目的:研究丰富环境对大鼠局灶性脑梗死后梗死灶周围血管内皮生长因子受体的影响。方法:采用开颅电凝法制作SD大鼠右侧大脑中动脉缺血(MCAO)模型,术后第24小时随机分为丰富环境(EE)组和标准环境(SE)组。以免疫组织化学法检测血管内皮生长因子受体Flt-1及Flk-1的表达。结果:大鼠大脑中动脉闭塞后,缺血区神经元变性、坏死,Flt-1和Flk-1在缺血周边区表达明显增加,经丰富环境干预后,血管内皮生长因子受体表达大量增加。结论:丰富环境可促使血管内皮生长因子受体表达上调,进而促进微血管新生,有利于脑损伤修复。     

血管内皮生长因子对人骨髓和脐带间充质干细胞中内皮细胞组分的影响

本研究旨在比较人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)和脐带间充质干细胞(UC-MSC)中的内皮细胞(EC)比例,并探讨血管内皮生长因子(VEGF)对MSC中EC比例的影响。利用流式细胞术检测EC标志CD34+CD133+和vWF+CD31+双阳性细胞的比例,用瑞氏染色观察经VEGF作用的MSC细胞形态变化,免疫荧光技术观察CD34、CD133、CD31、VWF的表达,最后采用实时荧光定量PCR检测VEGF对EC标志性基因表达的影响。结果表明:BM-MSC和UC-MSC中存在少量EC及内皮祖细胞(EPC),经VEGF 10 ng/ml作用24 h后,MSC的长宽比变大,EC比例上升而EPC比例下降,EC相关标志基因Tie-2和ecNOS等的表达均上调,其中UC-MSC对VEGF的反应更明显。结论:BM-MSC和UC-MSC中存在少量的EC及EPC,VEGF可以提高EC的比例和细胞功能。     

血管内皮生长因子受体1及孕激素受体在子宫肌瘤中的表达

目的研究血管内皮生长因子受体1(VEGF-R1)、孕激素受体(PR)在子宫肌瘤组织中的表达及其相关性,探讨二者在子宫肌瘤发生发展中的作用。方法采用免疫组化的SP法,检测60例子宫肌瘤及肌瘤周围正常组织,正常子宫组织中PR及VEGFR1的表达,并用图象分析法测定二者的表达强度。结果60例子宫肌瘤组织中PR及VEG-FR1的表达阳性率分别为88·33%及75%,其表达均高于相应的瘤旁正常组织及正常子宫组织(P<0·01),相关性分析PR及VEGFR1表达之间存在明显关联性(P<0·01)。结论子宫肌瘤组织中PR及VEGFR1均高表达,说明二者均参与子宫肌瘤的发生发展。二者表达呈正相关,说明孕激素(P)与肌瘤内高浓度的孕激素受体(PR)结合可能通过诱导VEGF-R1的合成增加,使肌瘤血管内皮细胞对VEGF敏感性增强,促进肌瘤中血管生长,增加肌瘤血运,从而促进肌瘤生长并产生肌瘤的各种临床症状。     

乳腺癌中血管内皮生长因子受体KDR的表达及其意义

目的 研究乳腺癌中血管内皮生长因子受体（vascular endothelial growth factor receptor2，VEGFR2）KDR的表达情况及其与微血管密度（microvessel density，MVD）关系。方法对98例乳腺癌患者的病理标本应用CDM，KDR分别进行免疫组化染色。双盲法计数热点内血管测定MVD，并进行统计学分析。结果乳腺癌KDR在血管周围的肿瘤细胞质呈较强阳性表达，在部分血管内皮细胞质内表达呈弱阳性，KDR表达与MVD有统计学意义（P＜0．05）。结论KDR在乳腺癌细胞的高度表达可能参与乳腺癌的发病机制，为乳腺癌的治疗提供新的思路。     

人髓性白血病细胞VEGF及其受体的检测

目的 建立人髓性白血病细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体KDR和Flt-1在基因转录和蛋白质水平上的检测方法,为临床判断白血病患者的预后提供技术支持。方法 用RT-PCR测定K562和HL-602种白血病细胞VEGF及其受体mRNA表达,免疫组织化学染色法检测VEGF及其受体蛋白表达;ELISA法检测细胞上清液中VEGF的分泌水平。结果 2种髓系白血病细胞均检测到VEGF的基因转录和蛋白表达。HL-60细胞同时表达Fh-1和KDR2种受体,而K562细胞仅有受体Flt-1的表达,未见受体KDR的mRNA和蛋白表达。细胞培养上清液中检出VEGF的高分泌。结论 VEGF及其受体在髓性白血病细胞表达增高,但不同细胞系VEGF受体表达有差异。VEGF及其受体在白血病的发生、发展中可能起重要作用。