腺相关病毒介导绿色荧光蛋白基因体外转染人羊膜上皮细胞

背景:人羊膜上皮细胞易于获得,采集简单,是细胞移植和组织修复的理想种子细胞,目前国内外尚无关于标记、示踪体外培养的人羊膜上皮细胞的报道.目的:探讨腺相关病毒载体介导绿色荧光蛋白摹因对体外培养的人羊膜上皮细胞的转染效果.方法:取人羊膜标本,以胰蛋白酶消化法分离培养人羊膜上皮细胞,采用含绿色荧光蛋白的腺相关病毒进行转染,检测其转染效率.结果与结论:人羊膜上皮细胞可成功地在体外进行原代和传代培养,经含绿色荧光蛋白的腺相关病毒颗粒转染后,可稳定高效表达绿色荧光蛋白,转染效率达58%.     

艾滋病病人眼底荧光血管造影的防护

人类免疫缺陷病毒（HIV）感染主要是通过性传播或血液、体液暴露及母婴垂直传播，HIV病毒在眼部已发现存在于泪液、结膜上皮细胞、角膜上皮细胞中。虽还没有文献报道通过眼科检查和眼科设备会感染HIV或获得性免疫缺陷综合征（AIDS），但有研究发现AIDS病人中有30％～40％出现眼部并发症，2％病人以跟部为首发症状。所以，在跟科医疗护理工作中应采用一些必要的防护措施。2005年-2007年我科共为78例确诊为AIDS眼部有临床表现的病人行眼底荧光血管造影，总结出AIDS病人行眼底荧光血管造影的防护对策。现报告如下。     

基质细胞衍生因子1对转染CXCR4基因支气管上皮细胞的增殖和定向趋化作用

背景:早期的诱导替代物表面的气管黏膜上皮覆盖并恢复其功能,是气管替代物研究中的关键问题。基质细胞衍生因子1/CXCR4通路在加快组织修复中发挥重要作用。目的:观察基质细胞衍生因子1对转染CXCR4基因支气管上皮细胞的增殖和定向趋化作用。方法:构建CXCR4慢病毒表达载体并转染人支气管上皮细胞。实验分为3组,空白组:未感染任何病毒的细胞组;对照组:感染未转染CXCR4的慢病毒细胞组;实验组:转染CXCR4慢病毒表达载体的细胞组。将消化好的病毒浸染的人支气管上皮细胞和普通人支气管上皮细胞悬液以不同浓度基质细胞衍生因子1(1μmol/L,100nmol/L,10nmol/L,1nmol/L,0.1nmol/L,0nmol/L)处理。结果与结论:实验成功构建了CXCR4慢病毒表达载体。正常人支气管上皮细胞的CXCR4蛋白基础表达较低。转染CXCR4的人支气管上皮细胞中CXCR4 mRNA和蛋白都有较高水平的表达,且随着基质细胞衍生因子1浓度增加,其吸光度逐渐增加,并呈浓度依赖性(P<0.05)。提示基质细胞衍生因子1增强了转染其受体CXCR4基因支气管上皮细胞的增殖作用和定向迁移能力。     

荧光PCR检测HPV在宫颈病变诊断中的临床意义

人类乳头瘤病毒(HPV)是一种双链闭和环状DNA病毒,对人类黏膜上皮细胞具有特嗜性,感染后可导致多种上皮细胞良、恶性增殖性疾病。目前,根据基因片段多态性已鉴定出200余型HPV,依据其致病力的强弱又分为低危险组和高危     

成年男子多上皮细胞尿尿培养分析

泌尿系统感染,病原体主要为细菌,同时在尿中会出现上皮细胞增多,主要是移行上皮细胞和鳞状上皮细胞,成年男子正常尿液少见[本室调查成年男子晨尿尿沉渣鳞状上皮细胞或移行上皮细胞95%参考范围为:小于10个/每高倍视野(HPF)],我们对成年男子晨尿尿沉渣镜检有较多鳞状上皮细胞或移     

艾滋病专题讲座 第2讲 艾滋病的传播途径

艾滋病主要传播途径有性传播、血液传播与母婴传播。从感染者的血液、精液、于宫颈分泌液、尿、乳液、唾液、泪液、脑脊液、脑组织、淋巴结等均分离到人类免疫缺陷病毒（HIV），在传播疾病方面起主要作用的是精液、子宫颈分泌液及血液。1性传播性传播包括异性与同性性传播，它是传播艾滋病的主要方式。男性HIV感染者精液中的淋巴细胞含有大量HIV，病毒可以通过损伤的泌尿生殖道或直肠粘膜侵入性伴侣的血液而感染。直肠粘膜仅由单层上皮细胞组成，容易损伤而感染，这是艾滋病在同性恋者之间高患病率的原因。西方某国家的男性同性恋者将近…     

原代肾上皮细胞改良培养方法

背景:目前国内对上皮细胞的研究多采用细胞株的方式,但其离体时间长,细胞易产生变异,而原代培养则与体内状态更相近,希望能为组织工程肾脏相关研究提供肾上皮细胞来源.目的:探索原代肾上皮细胞培养的条件和方法.建立一套高效快捷的原代肾上皮细胞培养方案.设计、时间及地点:单一样本观察,开放性实验,于2007-12/2008-03在武汉大学病毒学国家重点实验室分子病毒与癌研究室完成.材料:新生2-4 d SPF级雄性SD大鼠鼠婴12只.方法:取SD大鼠,切取双侧肾脏组织,将其反复剪成约1 mm×1 mm×1 mm块,加入2.5 g/L的胰酶和0.4 g/L乙二胺四乙酸,放入37℃恒温水浴箱消化,30 min后移至200目钢网过滤,去除未消化组织块和细胞团,收集网下悬液1 000 dmin低温离心5 min,用DMEM(pH 7.2)培养基制成细胞悬液,以4×108L-1密度接种于培养瓶中,置CO2培养箱中培养.再将细胞悬液接种到一个培养瓶内,静止培养30min,镜下观察细胞部分贴壁,将培养液连同尚未J贴壁细胞一起吸到另一瓶内,继续培养,重复上述操作一次,纯化肾上皮细胞.主要观察指标:以4×108L-1密度接种于培养瓶中培养.用4 g/L锥虫蓝染色榆测肾上皮细胞的存活率,不着色者为存活细胞.并观察肾上皮细胞的形态学变化、贴壁率.结果:肾上皮细胞存活率为95.20%,4 h约60%的细胞贴壁,12 h 85%以上的细胞已经贴壁.24 h后肾上皮细胞伸出伪足呈梭形、多角形,具有胞核一两个,细胞大小均匀,生长迅速,三四天后形成细胞簇,最后肾上皮细胞连接成片生长.结论:该肾上皮细胞培养方法存活率、贴壁率高,是一种可靠的肾上皮细胞培养方法.     

二羧酸转运蛋白对细胞端粒长度的影响

目的：观察二羧酸转运蛋白对衰老细胞和不老细胞系端粒长度的影响。 方法：实验于2004-06／2005-07在南京大学医学院附属鼓楼医院中心实验室完成。在已构建的反转录病毒载体基础上，使用含有钠依赖二羧酸转运蛋白基因的反转录病毒液将二羧酸转运蛋白基因导入人胚肺二倍体成纤维细胞（WI-38）和肾小管上皮细胞中，并获得表达，①观察WI-38细胞传代数。②WI-38细胞端粒长度，用Southern blot检测端粒末端限制性片段的长度。③人肾小管上皮细胞端粒长度测定，Soutllern Rblot检测端粒末端限制性片段的长度。 结果：钠依赖二羧酸转运蛋白基因导入后，①WI-38细胞形态呈衰老细胞样变化，提前8-12代衰老。②WI-38／钠依赖二羧酸转运蛋白细胞（37代）端粒长度较中年细胞（37代）缩短[（6.08&;#177;0．10），（723&;#177;0．05）kb，P〈0．051。③人肾小管上皮细胞／钠依赖二羧酸转运蛋白细胞端粒平均末端限制性片段长度较人肾小管上皮细胞／neo细胞端粒平均末端限制性片段长度缩短[（4．85&;#177;0．18），（6．32&;#177;0．12）kb，P〈0．05]。 结论：钠依赖二羧酸转运蛋白可促进衰老细胞和不老细胞系端粒长度的缩短。     

红霉素干预对体外培养人鼻息肉上皮细胞凋亡基因表达的影响

目的：观察红霉素对上皮细胞凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响,进一步探讨上皮细胞凋亡在鼻息肉组织形成中的意义。方法：将30例鼻息肉组织及6例下鼻甲组织的上皮细胞均分成两组,其中一组加红霉素（红霉素组）,进行原代上皮细胞的培养,另一组加蒸馏水（对照组）,以免疫组化法检测细胞凋亡基因Bax、抑凋亡基因Bcl-2。结果：鼻息肉上皮细胞Bcl-2和Bax表达均显著强于下鼻甲（均P〈0.01）;培养3d后鼻息肉上皮细胞红霉素组Bax表达显著强于对照组（P〈0.05）,Bcl-2表达虽强于对照组,但差异无显著性;下鼻甲上皮细胞红霉素组与对照组的Bcl-2与Bax阳性表达差异均无显著性（P〉0.05）;红霉素干预5d后鼻息肉上皮细胞显示明显的促凋亡趋势（P〈0.05）。结论：红霉素能显著提高Bax蛋白的表达,有显著的促鼻息肉上皮细胞凋亡的作用。     

siRNA干扰下调DJ-1的表达对人支气管上皮细胞生物学行为的影响

目的 探讨DJ-1表达下调对人支气管上皮细胞(H B E细胞)生物学行为的影响.方法 构建DJ-1基因siRNA慢病毒载体,感染HBE细胞(DJ-1 siRNA组),并设置Control siRNA慢病毒载体对照(Control siRNA组)及空白对照(BC组),分别采用流式细胞术检测各周期细胞,四甲基偶氮唑盐(MT...