地塞米松对哮喘大鼠肺组织NF-κB和MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的:探讨哮喘大鼠肺组织中核因子鄄κB(NF鄄κB)与基质金属蛋白酶鄄9(MMP鄄9)及金属蛋白酶组织抑制因子鄄1(TIMP鄄1)的关系以及地塞米松对NF鄄κB、MMP鄄9和TIMP鄄1的作用。方法:建立大鼠哮喘模型,采用免疫组化法观察肺中NF鄄κB活化及MMP鄄9、TIMP鄄1的蛋白表达,用逆转录-聚合酶联反应技术(RT鄄PCR)测定肺中MMP鄄9、TIMP鄄1mRNA的表达。结果:哮喘组NF鄄κB的活化及MMP鄄9、TIMP鄄1蛋白在气道黏膜上皮的表达明显高于对照组(P<0.01)和地塞米松组(P<0.05),哮喘组MMP鄄9、TIMP鄄1在肺组织的mRNA表达也高于对照组(P<0.01)和地塞米松组(P<0.01)。MMP鄄9的表达与NF鄄κB的活化呈显著正相关(rs=0.8071,P<0.01)。TIMP鄄1的表达与NF鄄κB的活化无明显相关(rs=0.4716,P>0.05)。结论:地塞米松可能抑制气道壁NF鄄κB活化和减少MMP鄄9的表达、调节MMP鄄9/TIMP鄄1之间的失衡,对MMP鄄9的抑制作用可能部分通过抑制NF鄄κB活化而实现的。     

间质胶原酶及其抑制因子-1不平衡表达与肝纤维化的关系

目的观察实验性肝纤维化过程中间质胶原酶（MMP－13）及其组织金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP－1）基因表达的不平衡性。方法建立CCl4中毒性大鼠肝纤维化模型,采用SABC免疫组化方法和逆转录定量PCR方法测定MMP-13和TIMP－1的表达情况。结果MMP-13和TIMP－1在正常大鼠肝组织中有表达,在肝纤维化发生发展过程中MMP-13表达无显著性变化,而TIMP－1的表达则逐渐增强,在肝硬化阶段达到最高值。结论MMP-13和TIMP-1在肝纤维化过程中的不平衡表达可能是肝硬化形成的重要决定因素。     

肝灵对大鼠胆汁淤积性肝硬化的抗肝纤维化作用

目的探讨肝灵对大鼠胆汁淤积性肝硬化的抗肝纤维化作用。方法利用胆总管结扎术(bile duct ligation,BDL)制备大鼠胆汁淤积性肝硬化模型,于造模第4周起ig肝灵8g/(kg·d),检测相关的血液生化指标、血液流变学、肝匀浆中SOD活性、丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HyP)的含量以及肝脏病理组织学的改变。结果肝灵不仅能明显降低肝、脾指数、血浆ALT以及肝组织中的HyP含量,同时使肝硬化大鼠的肝组织SOD活性和总蛋白(TP)明显升高,而且明显降低四种不同切变率(1/200s、1/30s、1/5s、1/s)的全血黏度值、全血高切和低切相对黏度以及血浆黏度值,显著减少肝硬化大鼠的腹水量以及明显增加24h尿钠、钾的排泄量,病理组织学结果显示,可使间质炎细胞浸润减少,能减轻胆汁淤积性肝硬化大鼠的肝细胞损伤和肝纤维化程度。结论肝灵对胆总管结扎所致大鼠胆汁淤积性肝硬化及其并发症腹水有明显的治疗作用,可能与其抗炎、抗氧化、活血化淤、排钠排钾等机制有关。     

黄芪提取物对大鼠全脑缺血再灌注损伤后NFκBp65、ICAM-1和TNF-α表达的影响

目的探讨黄芪提取物(EA)对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法用四动脉阻断法,制备大鼠全脑缺血再灌注模型;采用Western blot检测大鼠全脑缺血再灌注6h后脑皮层组织NFκBp65和IκBα的表达;采用免疫组化(SP法)检测大鼠全脑缺血再灌注24h后脑皮层组织ICAM-1、TNF-α的表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠全脑缺血再灌注后脑皮层组织核蛋白NFκBp65(107.1±24.18vs313.09±23.35,P<0.05)表达明显增多,而胞浆蛋白NFκBp65(221.72±19.44vs125.82±25.07,P<0.05)、IκBα(382.98±55.21vs184.37±20.40,P<0.05)表达明显减少;EA可升高大鼠全脑缺血再灌注后脑皮层组织胞浆蛋白NFκBp65、IκBα表达、降低核蛋白NFκBp65表达;同时可降低脑皮层组织ICAM-1、TNF-α的表达。结论EA的脑保护机制可能与抑制大鼠全脑缺血再灌注后NFκBp65活化及降低脑皮质中ICAM-1、TNF-α的表达有关。     

扛板归对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-1基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶抑制剂-1表达的影响

目的:研究中药扛板归对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化大鼠肝组织中MMP -1,MMP -2及TIMP -1蛋白表达的影响.方法:用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,不同浓度扛板归干预后,取肝脏常规制片并HE染色,观察各组大鼠肝组织病理学改变,免疫组织化学方法检测各纽大鼠肝组织MMP -1,MMP -2及IMP -1蛋白表达的情况.结果:扛板归高、中剂量组中大鼠肝组织MMP -2及TIMP -1蛋白表达较模型组明显降低(P＜0.05),扛板归高、中剂量组中大鼠肝组织MMP-1蛋白表达较模型纽明显升高(P＜0.05).结论:扛放归具有显著的抗肝纤维化作用,其机制可能通过提高MMP -1表达,降低TIMP -1,MMP -2蛋白的表达而调控细胞外基质的代谢.     

黄芪对肝纤维化大鼠NF-κB的调节作用

目的通过观察NF-κB表达情况,探讨黄芪抗肝纤维化机制。方法45只SD大鼠随机分为正常对照组、CCl_4诱导肝纤维化模型组和黄芪干预组。HE染色评价各组肝纤维化程度,免疫组化方法检测NF -κB在肝组织中表达,利用单因素方差分析法研究其表达水平与肝纤维化关系。结果HE染色结果显示,肝纤维化模型组的肝纤维化分级明显高于正常对照组(P<0.01),黄芪组肝纤维化分级与肝纤维化模型组比较明显降低(P<0.01);肝纤维化模型组大鼠肝组织NF-κB表达显著高于正常对照组(P<0.01),而黄芪组NF-κB表达较模型组显著降低(P<0.01)。结论黄芪可以显著抑制CCl_4诱导的肝纤维化,对NF-κB信号转导通路相关分子的调控可能是其机制之一。     

NF-κBp65在肝癌血管生成中的作用

目的本实验通过对肝细胞癌(HCC)组织、癌旁组织、肝硬化组织及正常肝组织中NF-κBp65蛋白表达和微血管密度(MVD)进行检测,探讨NF-κBp65的蛋白表达与HCC新生血管生成的关系,初步阐述NF-κBp65在HCC血管生成中的机制。方法选用45例肝细胞癌组织和32例癌旁肝组织、15例肝硬化组织、10例正常肝组织标本作对照,采用免疫组化法(SABC)检测NF-κBp65的表达和MVD值,并结合患者的临床病理指标进行统计学分析。结果NF-κBp65在HCC中的表达及MVD值显著高于癌旁肝组织、肝硬化组织和正常肝组织(P<0.05);HCC组织中NF-κBp65阳性表达组显著高于阴性表达组(P<0.05);血管侵犯组显著高于无血管侵犯组(P<0.05)。结论NF-κBp65在HCC组织中的表达高于癌旁肝组织、肝硬化组织和正常肝组织;HCC中NF-κBp65的表达与肝癌血管生成有关。     

免疫印迹法检测肝纤维化组织基质金属蛋白酶抑制因子-1表达水平

目的 观察实验性肝纤维化过程中金属蛋白酶组织抑制因子－1（TIMP－1）蛋白表达水平的动态变化。方法 建立四氯化碳中毒性大鼠肝纤维化模型,采用免疫印迹方法（Western blot法）,测定肝纤维化不同阶段TIMP－1的蛋白表达水平。结果 正常大鼠肝组织可见TIMP－1的蛋白表达。在肝纤维化的发生、发展过程中,TIMP－1蛋白表达逐渐增强,到肝硬化阶段达到高峰。结论 TIMP－1可能是促进和影响肝纤维化、肝硬化形成的重要因素。     

肝纤维化组织中MMP1、TIMP1的表达及其临床意义

目的 :检测肝纤维化组织中基质金属蛋白酶 1 (MMP1 )、基质金属蛋白酶组织抑制因子 1 (TIMP1 )的表达 ,为肝纤维化的诊治提供重要的分子生物学指标。 方法 :采用链霉菌抗生物蛋白 -过氧化酶联接法 (S- P法 )检测70例肝纤维化组织中 MMP1 、TIMP1 的表达。结果:(1) TIMP1 蛋白阳性表达随肝纤维化程度的加重而增强 ,并且呈正相关关系 (r=0 .92 74 ,P <0 .0 1)。 (2 ) MMP1 蛋白阳性表达随肝纤维化程度的加重无明显变化 ,无相关关系(r =0 .2 181,P >0 .0 5 )。 结论:TIMP1 与肝纤维化的发生、发展密切相关 ,随纤维化发生、发展阳性表达增强。从分子水平对肝纤维化、肝硬化病变进行评估 ,为早期诊治肝纤维化和判断预后提供依据。     

大鼠中晚期纤维化肝组织NF-κB、TGF-β1及其Ⅰ型受体表达的改变

目的探讨肝纤维化中、晚期大鼠肝组织核转录因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)表达的改变.方法采用12.5% CCl4 诱导的大鼠肝纤维化模型,分别于造模的第8、13周末处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片,免疫组化S-P法检测NF-κB p65、 TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达,原位杂交检测TGF-β1及TβRⅠmRNA的表达,并用MetaMorph图像分析系统对免疫组化及原位杂交结果进行定量分析.结果第8、13周纤维化肝组织NF-κB p65蛋白、TGF-β1及TβRⅠ蛋白和mRNA的表达均较正常组显著增强(P《0.01),其表达相互间均呈正相关(P《0.01).结论中晚期肝纤维化中,TGF-β1及TβR Ⅰ mRNA水平的增高是其蛋白表达上调的主要机制,NF-κB、TGF-β1及TβR Ⅰ共同作用促进肝纤维化发展.     

氧化苦参碱对肝纤维化大鼠保护机制的研究

目的 探讨氧化苦参碱抗肝纤维化作用及其机制,为临床应用中药防治肝纤维化和肝硬化提供实验依据.方法 40只SD大鼠随机分为对照组、CCl4诱导肝纤维化模型组和氧化苦参碱干预组,免疫组化方法检测NF-κB、IκBα及Ⅰ型胶原在各组肝组织中的表达.结果 在正常对照组、氧化苦参碱组和肝纤维化模型组肝组织中Ⅰ型胶原表达的平均密度值分别为0.087、0.130、0.311,肝纤维化模型组与正常组比较差异均有显著性(P<0.01);氧化苦参碱组较肝纤维化模型组Ⅰ型胶原表达明显减少(P<0.01);肝纤维化模型组肝组织NF-κB、IκBα表达均显著高于对照组(P<0.01);而氧化苦参碱组NF-κB表达较模型组显著降低(P<0.01),IκBα表达较模型组明显升高(P<0.05).结论 氧化苦参碱可以减轻CCl4诱导的肝纤维化,对NF-κB信号转导通路相关分子的调控可能是其主要机制.     

保肝复功水煎剂对大鼠肝纤维化TGFβ1、TIMP1、MMP1表达的影响

目的:为了探讨保肝复功水煎剂抗肝纤维化的作用机理。方法:通过四氯化碳致小鼠肝损伤模型,利用基因芯片技术研究TGFβ1、MMP1及TIMP1在肝组织中的表达情况。结果:保肝复功水煎剂干预性治疗使实验组大鼠肝组织MMP1表达上调,TIMP1、TGFβ表达下调。结论:保肝复功水煎剂在肝组织中具有明显使MMP1表达上调,TIMP1、TGFβ表达下调的作用,从而促进了胞外基质的降解,抑制发挥肝纤维化的作用。     

三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB/IκB表达的影响

目的 观察三七时酒精性大鼠肝组织的防治及时NF-κB/IκB表达的影响.方法 SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组、三七高、低剂量组和硫普罗宁组,连续14周建立酒精性肝病模型.在模型制备同时,每天下午分别灌服给药,连续14周.ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α).常规HE及Masson染色,光镜观察肝组织的脂肪变、炎症及纤维化程度;免疫组化法检测肝组织中NF-κBp65/IκBα蛋白的表达.结果 酒精性肝病模型组大鼠肝组织脂肪变及炎症程度计分、血清TNF-α水平明显增高(P＜0.01).三七高、低剂量组,硫普罗宁组大鼠肝组织脂肪变及炎症程度、血清TNF-α水平较模型组明显减轻(P＜0.01,P＜0.05).酒精性肝病模型组大鼠肝组织NF-κBp65和IκBα均较正常组明显升高(P＜0.01);三七高、低剂量组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα表达较模型组明显降低(P＜0.01,P＜0.05).相关分析显示,肝组织NF-κBp65表达与肝组织炎症程度计分呈正相关(r=0.63,P＜0.01),与血清TNF-α水平呈正相关(r=0.43,P＜0.01);肝组织IκBα表达与肝组织炎症程度计分呈正相关(r=0.36,P＜0.05),与血清TNF-α水平呈正相关(r=0.44,P＜0.01);血清TNF-α水平与与肝组织炎症程度计分呈正相关(r=0.60,P＜0.01).结论 用白酒-玉米油-吡唑混合液灌服大鼠14周可成功制作ALD模型.三七可明显减轻酒精性肝病大鼠肝组织脂肪变和炎症程度.三七能显著抑制肝组织中NF-κBp65/IκBα的过度表达,降低血清TNF-α水平,这可能是其有效防治酒精性肝病的发生发展的重要机制之一.     

护肝片对纤维化肝组织TGF-β1表达的抑制作用

目的:探讨护肝片对中、晚期纤维化肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白及mRNA表达的影响.方法:采用125 g/L CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,自模型复制之日起,大鼠分组灌胃给药(护肝片921 mg/kg)或溶媒,每日1次,直至8,13周末,分别处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片.免疫组化S-P法检测大鼠肝组织TGF-β1蛋白的表达;原位杂交检测TGF-β1 mRNA的表达.用MetaMorph图像分析系统对TGF-β1蛋白及mRNA的表达量进行定量分析.结果:①模型复制8周和13周,模型组的肝损伤及其纤维化分级均明显高于正常组(P<0.01),护肝片组的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组.②模型复制8周和13周,模型组TGF-β1及mRNA的表达均较正常组显著增多(P<0.01);且其蛋白和mRNA的表达相互间呈显著正相关(P<0.01).③护肝片显著抑制8,13周纤维化肝组织TGF-β1蛋白及mRNA的表达(P<0.01).结论:护肝片可减轻肝组织的损伤及其纤维化程度,它可能在蛋白及mRNA双重水平上抑制TGF-β1的表达,从而发挥抗肝纤维化作用.     

喉鳞癌中NFκBp65和PTEN的表达及临床意义

目的:探讨核因子κ8p65(Nuclear factor-κB p65,NFκB p65)和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosometen,PTEN)在喉鳞癌组织中的表达及意义.方法:采用免疫组化法检测52例喉鳞癌组织及30例癌旁正常组织中NFκB p65和PTEN的表达.结果:喉鳞癌中NFκB p65表达明显高于癌旁正常组织(P<0.01),NFκB p65的表达水平与喉鳞癌的T分期、淋巴结转移及临床分期密切相关(P<0.05).喉鳞癌中PTEN表达明显低于癌旁正常组织(P<0.01),PTEN的表达水平与喉鳞癌的T分期、淋巴结转移及临床分期密切相关(P<0.05). NFκB p65和PTEN蛋白在不同年龄、不同性别、不同临床分型及不同病理分级的喉鳞癌组织中表达差异无统计学意义(P>0.05). NFκB p65和PTEN在喉鳞癌中的表达呈负相关(r_s=-0.580,P<0.01).结论:NFκBp65的高表达及PTEN的缺失表达与喉鳞癌的发生、发展有关,二者有可能成为判断喉鳞癌侵袭能力及预后评估的参考指标.     

NF—κBp 65和HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨宫颈鳞癌组织中NF-κBp65、HIF-1α的蛋白表达水平及临床病理意义。方法采用免疫组织化学（PowerVision TM）二步法对56例宫颈鳞癌和25例正常宫颈组织进行NF—κBp65、HIF-1α蛋白检测。结果宫颈鳞癌组织NF—κBp65、HIF-1α的表达均高于对照组正常宫颈组织（P〈0．01）。NF—κBp65的蛋白表达与患者的病理分级及有无淋巴转移存在相关性（P〈0．05）；HIF-1α的蛋白表达与患者的临床分期及有无淋巴转移存在相关性（P〈0．05）。NF—κBp65和HIF-1α的蛋白表达呈正相关（r=0．439，P〈0．01）。结论联合检测NF—κBp65和HIF-1α蛋白表达对诊断宫颈鳞癌的意义优于单纯检测NF—κBp65或HIF-1α蛋白表达。     

金属蛋白酶及其抑制剂在大鼠正常及纤维化肝脏中的表达

目的：了解膜型基质金属蛋白酶1（MT1－MMP）、基质金属蛋白酶2（MMP2）、基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP1）在大鼠正常及纤维化肝脏中的表达。方法：用60％CCl4加5％乙醇制作大鼠肝纤维化模型,利用原位杂交及免疫组化的方法检测MT－MMP,MMP2,TIMP1的表达并与正常对照组比较。结果：在纤维化肝脏中,MT1－MMP,MMP2,TIMP1主要表达在成纤维细胞、肌成纤维细胞中,以纤维间隔及汇管区最明显,血管内皮细胞有低水平表达。而正常组中仅有内皮细胞有低表达,明显弱于肝纤维化组。结论：在肝纤维化中,成纤维细胞及肌成纤维细胞是MT1－MMP、MMP2、TIMP1表达的主要细胞。     

螺内酯体内外抗大鼠肝纤维化的作用

目的:探讨螺内酯对实验性肝纤维化的影响及其作用机制. 方法: 雄性Wistar大鼠24只,随机分为3组,每组8只. 模型组:CCl4 油2.5 mL/kg SC,3次/wk;螺内酯组:CCl4 油注射的同时每日予以螺内酯20 mg/kg灌胃,1次/d;对照组:橄榄油SC. 于4 wk取材,VG染色检测大鼠肝组织学改变. Western印迹法检测肝组织TGF-β1的表达. EMSA检测肝组织NF-κB的活性. 酶图法测定MMP-2, 9的活性. 另培养大鼠HSC-T6,分别予醛固酮(Aldo) 1 μmol/L、螺内酯1 μmol/L(预处理60 min,再予Aldo刺激1 h)和TNFα 100 μg/L处理1 h,设立阴性对照组. EMSA检测NF-κB DNA结合活性;Western印迹检测胞质内IκBα的表达. 结果: 体内4 wk,螺内酯组纤维化分级小于模型组(螺内酯组vs模型组,P<0.01);模型组TGF-β1的表达明显高于螺内酯治疗组(模型组vs螺内酯治疗组,P<0.05). 模型组NF-κB结合活性显著增强(模型组vs对照组,P<0.01),螺内酯可抑制肝组织NF-κB结合活性(螺内酯组vs模型组,P<0.05). 模型组MMP2,9活性显著增强(模型组vs对照组,P<0.01),螺内酯可抑制MMP2,9活性(螺内酯组vs模型组,P<0.05). 体外Aldo和TNFα干预1 h后, NF-κB DNA结合活性增强(Aldo处理组vs对照组,P<0.01),螺内酯可抑制NF-κB DNA结合活性(螺内酯 Aldo处理组vs Aldo处理组,P<0.05). Aldo可减低胞浆内IκBα表达(Aldo处理组vs对照组,P<0.05). 螺内酯则抑制胞质蛋白中IκBα表达的减低(螺内酯 Aldo处理组vs Aldo处理组,P<0.05). 结论: 螺内酯可抑制实验性肝纤维化形成,其抗肝纤维化作用与抑制肝组织TGF-β1的表达以及NF-κB和MMP2,9的活性有关.     

柔肝冲剂对血瘀型肝纤维化大鼠纤溶酶原激活抑制因子-1影响

目的:探讨柔肝冲剂对血瘀型肝纤维化大鼠纤溶酶原激活抑制因子-1的调控作用。方法:将大鼠随机分为正常组、血瘀组和柔肝组。用酶联免疫吸附法、免疫组化、免疫印迹法等检测血中、肝组织中纤溶酶原激活抑制因子-1(PAI-1)的表达。结果:通过酶联免疫吸附双抗体法、免疫组化、免疫印迹等发现PAI-1在各组大鼠血液中、肝组织中均有表达。PAI-1表达在血瘀组较正常组为高(P<0.01);经柔肝冲剂治疗后PAI-1的表达均有下降(P<0.01)。结论:PAI-1在正常大鼠肝组织中有表达,血瘀型肝纤维化时其在肝组织中蛋白表达增高,柔肝冲剂可降低其表达。柔肝冲剂可能通过影响纤溶酶原激活抑制因子-1起到抗肝纤维化作用。     

核转录因子-κB与大鼠肝纤维化关系的实验研究

目的　探讨核转录因子 -κB (NF -κB)与大鼠肝纤维化的关系。方法　用四氯化碳 (CCL4)制备大鼠肝纤维化模型 ,同时以能够抑制NF -κB激活的N -乙酰 -L -半胱氨酸 (NAC) ( 10 0mg/kg ,ip)作为对照。在造模的第 12周末处死大鼠 ,观察大鼠肝脏NF -κBP65的表达 ,测定血清丙氨酸转氨酶 (ALT)、天冬氨酸转氨酶 (AST )、白蛋白(ALB)水平及ALB与球蛋白 (GLO)比值 ,并进行肝脏病理学检查。结果　模型组大鼠肝脏表达NF -κB亚单位P65较正常大鼠明显增强 ,ALT、AST水平增高 ,ALB和ALB/GLO下降 ,肝脏炎症和纤维化评分显著升高 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。NAC则抑制NF -κB激活 ,降低了ALT、AST ,提高了ALB和ALB/GLO ,肝脏炎症和纤维化明显减轻 (P <0 .0 5～0 .0 1)。结论　NF -κB参与了大鼠肝纤维化过程 ,具有促炎、促纤维化作用