肺孢子虫病实验与临床研究 Ⅱ．免疫印迹试验检测人血清肺孢子虫抗体

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析鼠源卡氏肺孢子虫包囊可溶性抗原呈现２０条以上多肽区带，主带分子量分别为＞１００、８５－９４、６７、５２和３４ｋＤａ。ＥＩＴＢ检测表明重庆地区健康人血清中存在识别１１０、１０５、８５、６７、５２和４６ｋＤａ的ＩｇＧ型抗体，抗体阳性率为５６．７％（５９／１０４）。其中８５ｋＤａ抗原能与抗人源肺孢子虫单克隆抗体２Ｇ２起反应。健康人血清抗８５ｋＤａ抗原的抗体阳性率为３７．５％（３９／１０４），但ＩｇＭ型抗体均为阴性。另外检测７例确诊的卡氏肺孢子虫病患者，４例血清ＩｇＧ型抗体阳性，其中３例抗８５ｋＤａＩｇＧ型抗体阳性。     

血清抗脂阿拉伯甘露聚糖及38kDa抗体的检测对涂阴肺结核及肺外结核诊断价

目的 评估血清抗脂阿拉伯甘露聚糖３８ｋＤａ抗体（ＬＡＭ－３８ｋＤａ－ＩｇＧ）检测对涂阴肺结核和肺外结核的诊断价值。方法 采用斑点免疫金渗滤法检测５７例涂阴肺结核，５２例肺外结核，３２例涂阳肺结核，２９例肺癌患者及３３例正常人血清中的ＬＡＭ－３８ｋＤａ－ＩｇＧ。结果 涂阴肺结核组ＬＡＭ－３８ｋＤａ－ＩｇＧ阳性率为７３．７％，其中痰结核杆菌涂（－）培（＋）组为８４．６％，涂（－）培（－）组为７０．５％；肺外结核组阳性率为７１．２％；涂（＋）肺结核组阳性率９３．８％；肺癌组假阳性率３１％；健康组假阳性率９．１％。结论 提示血清ＬＡＭ－３８ｋＤａ－ＩｇＧ测定对涂阴肺结核和肺外结核有一定的辅助诊断价值。     

18kDa抗原诊断泡型包虫病的评价

目的：评价１８ｋＤａ抗原在泡型包虫病（ＡＥ）诊断中的价值。方法：用免疫印渍法检测３３例泡型包虫病、６９例囊型包虫病（ＣＥ）、３０例囊虫病和８２例健康人血清对泡型棘球蚴（Ｅｍ）和囊型棘球蚴（Ｅｇ）原头节１８ｋＤａ抗原的抗体反应。同时用羊包囊液抗原常规ＥＬＩＳＡ法检测上述血清。结果：ＥＬＩＳＡ试验,ＡＥ血清阳性率为９３．９％、ＣＥ为８５．５％、囊虫病为５０％、健康人为６．１％。显示３种患者血清存在较强的交叉反应。免疫印渍试验,两种原头节的１８ｋＤａ抗原对ＡＥ血清阳性反应均为９０．９％、ＣＥ分别为１０．１％和１３％、囊虫病患者为１３．３％和１６．７％。与健康人血清不发生反应。结论：１８ｋＤａ抗原可以有效的鉴别两型包虫病。     

western blot 法诊断囊虫病的应用研究

目的：探讨四种猪囊尾蚴（Ｃｙｓｔｉｃｅｒｃｕｓｃｅｌｕｌｏｓａｅ）特异性抗原ｃＣ１、ｃＣ２、ｃＰ１、ｃＨ１（分子量分别为２８ｋＤａ、１８ｋＤａ、１４ｋＤａ、３４ｋＤａ）混合应用诊断人囊虫病的价值。方法：以猪囊尾蚴ｃＤＮＡ表达文库中筛选出的β－半乳糖苷酶－猪囊虫特异性抗原ｃＤＮＡ编码的融合蛋白（ｆｕｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＦＰ）为抗原，作简化的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ（ｉｍｐｒｏｖｅｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，ＩＷＢ）分析，检测１０７例囊虫病、４０例华支睾吸虫病、２４例包虫病和３４例健康人血清对融合蛋白的反应。同时应用粗制抗原（ｃｒｕｄｅａｎｔｉ－ｇｅｎ，ＣＡ）进行ＥＬＩＳＡ、ＩＨＡ对比检测。结果：在简化Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测中，ＦＰ被１０７例囊虫病患者血清中９４例（８７．９％）血清所识别，与华支睾吸虫病、包虫病患者及健康人血清无交叉反应，特异性为１００％。以粗制抗原作ＥＬＩＳＡ、ＩＨＡ检测囊虫病人血清中的ＩｇＧ抗体阳性率分别为８４．１％和７４．８％，与华支睾吸虫病患者血清存在交叉反应，假阳性率分别为２．５％、１２．５％；与包虫病患者血清存在交叉反应，假阳性率分别为８．３％、１６．７％；与健康人血清也存在交叉反应, 假阳性率分别为8. 8%、11. 8% 。结论: β－半乳糖苷酶2猪囊尾蚴FP 诊断囊虫病具有较高敏感性和高度的特异性。     

用免疫印迹法评价多房棘球蚴18kDa与16kDa抗原诊断…

目的：探讨多房棘球绦虫原头节１８ｋＤａ、１６ｋＤａ抗原（Ｅ．ｍ１８ｋＤａ和Ｅ．同６ｋＤａ）诊断泡球蚴病的应用价值。方法：应用免疫印迹法检测２４例泡球蚴病５５例囊型包虫病、３３例囊虫病和３０分健康人血清对Ｅ．ｍ．１８ｋＤａ和Ｅ．ｍ．１６ｋＤａ的抗体反应，同时用Ｅ．ｍ２－ＥＬＩＳＡ试剂盒对比检测上述血清对Ｅ．ｍ．２的抗体反应。结果：在免疫印迹试验中，Ｅ．ｍ．１８ｋＤａ和Ｅ．ｍ．１６ｋＤａ均能被所有２４     

重组日本血吸虫26kDaGST抗原免疫家兔后抗体动态观察

目的： 探讨重组日本血吸虫２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后抗体水平动态变化。方法： 家兔随机分为免疫组与佐剂对照组,免疫组用纯化重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原加福氏佐剂免疫;佐剂对照组用０．８５％ 盐水加福氏佐剂免疫。免疫后,每兔逐周取耳静脉血,采用酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 检测血清中特异性抗体水平。结果： 免疫组家兔从免疫后第４ ｗ ｋ 起血清中特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体升高,且维持在较高的水平达６５ ｗ ｋ。结论： 重组日本血吸虫 ２６ ｋ Ｄａ Ｇ Ｓ Ｔ 抗原免疫家兔后,特异性抗 Ｇ Ｓ Ｔ 抗体水平较对照组明显升高,且至少能维持 １ 年。     

部分肠道线虫病的免疫交叉反应研究

以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ酶联免疫印渍技术对蛔虫、钩虫、鞭虫及犬弓蛔虫的免疫交叉反应进行了研究。结果显示，钩虫病、鞭虫病及犬弓蛔虫病患者血清都与人、猪蛔虫可溶性成虫抗原发生较强的免疫反应。人蛔虫可溶性成虫抗原和猪蛔虫可溶性成虫抗原间无明显差别。人、猪蛔虫可溶性成虫抗原与钩虫病患者血清反应的主要抗原成份分子量为３５、４４、５２．５、６４和８５ｋＤａ。两种抗原与鞭虫病患者血清反应带位于２２．２ｋＤａ和２０５ｋ     

部分肠道线虫病的免疫交叉反应研究

以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ酶联免疫印渍技术对蛔虫、钩虫、鞭虫及犬弓蛔虫的免疫交叉反应进行了研究。结果显示，钩虫病、鞭虫病及犬弓蛔虫病患者血清都与人、猪蛔虫可溶性成虫抗原发生较强的免疫反应。人蛔虫可溶性成虫抗原和猪蛔虫可溶性成虫抗原间无明显差别。人、猪蛔虫可溶性成虫抗原与钩虫病患者血清反应的主要抗原成份分子量为３５、４４、５２．５、６４和８５ｋＤａ。两种抗原与鞭虫病患者血清反应带位于２２．２ｋＤａ和２０５ｋＤａ之间。两种抗原与犬弓蛔虫病患者血清反应形成多条反应带，其抗原分子量在３５．５ｋＤａ和１９５ｋＤａ之间。本研究表明，在某些线虫之间的确存在免疫交叉反应。     

日本血吸虫与华支睾吸虫和姜片虫之间的交叉抗原及其血清学反应性

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离ＡＷＡ、ＣＳＡ和ＦＳＡ三种抗原的组分蛋白后，再以酶联免疫印迹技术（ＥＬＩＢ）进一步鉴定其组分蛋白的特异性蛋白带，分别显示１２条、１９条和２１条，其分子量（ＭＷ）范围分别为１３～６４ｋＤｅ、１６～１９８．５ｋＤａ和１４～１５０ｋＤａ。ＡＷＡ组分蛋白与兔抗ＳＥＡ免疫血清出现３条交叉反应带．ＭＷ为１７ｋＤａ、１４ｋＤａ和１３ｋＤａ，与抗ＣＳＡ的兔血清及华支睾吸虫病人血清显示３条（３８ｋＤａ、１７．５ｋＤａ及１７ｋＤｅ）交叉反应带．与抗ＦＳＡ的兔血清及姜片虫病人血清呈现５条（６４ｋＤａ、５９ｋＤｅ、５３ｋＤｅ、１７．５ｋＤａ和１７ｋＤａ）交叉反应带。实验结果表明，日本血吸虫成虫不仅与其虫卵之间存有交叉抗原，而且与华支睾吸虫和姜片虫成虫之间也存有交叉抗原及血清学交叉反应性。本研究为今后制备特异的血吸虫病血清学诊断抗原，提供了科学依据。     

马来丝虫病特异性诊断抗原研究

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ技术分析马来丝虫成虫（ＭＡＡ）和微丝蚴（ＭＦＡ）可溶性抗原。马来丝虫成虫和微丝蚴采自感染沙鼠腹腔。分析结果表明，ＭＦＡ蛋白组分含有沙鼠腹腔液蛋白组分（６４－６７ｋＤａ和５６－５８ｋＤａ）。健康沙鼠血清与ＭＦＡ作ＥＬＩＢ，可见３条淡反应带（６０ｋＤａ、７４ｋＤａ和１００ｋＤａ），与ＭＡＡ无反应带可见。ＭＡＡ蛋白组分中的４２ｋＤａ和１４．５ｋＤａ可被感染６个月的阳性沙鼠血清识别，而不被阴性沙鼠血清识别。     

斑点免疫金银染色与Dot—ELISA检测抗弓形虫抗体的对比研究

为比较斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测弓形虫抗体的敏感性和特异性，本实验以弓形虫速殖子可溶性蛋白抗原为诊断用抗原，同时用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测６５份弓形虫感染者血清、１７６份其他寄生虫感染者血清和７６份对照血清。结果显示，用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测弓形虫感染者抗体阳性率分别为９８．４６％及９２．３１％，平均抗体滴度分别为１：３８４及１：     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的初步分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ），并与可溶性成熟卵抗原（ＳＥＡ）进行比较，二者主要蛋白区带存在明显差异，同时，ＥＬＩＢ结果表明，ＳＩＥＡ中感染血清和免疫血清所识别的６５ｋＤａ、６２ｋＤａ、５０ｋＤａ、２８ｋＤａ和和２６ｋＤａ等抗原组分不出现于ＳＥＡ，推测其在ＳＩＥＡ诱导宿主产生抗雌虫生殖及抗卵胚发育免疫应答方面起作用。     

COMPARATIVE STUDY ON DETECTION OF ANTI-TOXOPLASM A GONDII ANTIBODIES BY USING DOT-ELISA AND DOT-IMMUNOGOLD SILVER STAINING

为比较斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测弓形虫抗体的敏感性和特异性，本实验以弓形虫速殖子可溶性蛋白抗原为诊断用抗原，同时用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测６５份弓形虫感染者血清、１７６份其他寄生虫感染者血清和７６份对照血清。结果显示，用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测弓形虫感染者抗体阳性率分别为９８．４６％及９２．３１％，平均抗体滴度分别为１∶３８４及１∶２１８（１∶２０－１∶２５６０）。用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ检测，有２３份血清抗体滴度高于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，有８份低于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ。二种方法所测抗体滴度呈直线正相关关系（ｒ＝０．６０８，Ｐ＜０．０１）。二种方法检测其他寄生虫感染者和对照血清，假阳性率分别为５．９５％及１３．８９％。Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ操作流程和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ相似，但敏感性、特异性均优于Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，前者不使用对人体有害的底物，有较好的推广前景。     

原发性干燥综合征和系统性红斑狼疮患者血清中抗SSA/Ro抗体的研究

目的：分析原发性干燥综合征（ｐＳＳ）和系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）病人血清中抗ＳＳＡ／Ｒｏ抗体的类型。方法：对流免疫电泳抗ＳＳＡ／Ｒｏ阳性的血清经免疫印渍（ＩＢ）测定抗变性（ｄ）ＳＳＡ／Ｒｏ抗体和用重组人（ｒ）ＳＳＡ／Ｒｏ未经变性处理点杂交（ＤＢ）检测其抗天然（ｎ）ＳＳＡ／Ｒｏ抗体的阳性率。结果：抗ｄ５２ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ和抗ｄ６０ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ的阳性率５９例ｐＳＳ分别为７３％和２５％，４５例ＳＬＥ分别为３６％和２４％；仅抗ｄ５２ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ阳性者ｐＳＳＡ／Ｒｏ为５１％，ＳＬＥ为２０％；仅抗ｄ６０ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ阳性者ｐＳＳ（３７％）和ＳＬＥ（８９％）两者均较低（Ｐ＝０４１）。抗ｎ５２ｋＤｒＳＳＡ／Ｒｏ和抗ｎ６０ｋＤｒＳＳＡ／Ｒｏ抗体的阳性率ｐＳＳ分别为９３％和６３％，ＳＬＥ分别为６４％和３６％；抗ｎＳＳＡ／Ｒｏ双阳性者ｐＳＳ（６１％）明显高于ＳＬＥ（２９％）。结论：①抗ｄ５２ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ阳性不伴抗ｄ６０ｋＤＳＳＡ／Ｒｏ者不仅见于ｐＳＳ也常见于ＳＬＥ；②抗ｎ５２ｋＤ和ｎ６０ｋＤｒＳＳＡ／Ｒｏ同为阳性者ｐＳＳ较ＳＬＥ更多见。     

检测血清和脑脊液中囊尾蚴循环抗原诊断脑囊虫 …

目的：用抗血清检测脑囊虫病患者血清和脑脊液（ＣＳＦ）中囊尾蚴循环抗原（ＣＡｇ）诊断脑囊虫病。方法：用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ提纯的蛋白质分子量为６４ｋＤａ、５３ｋＤａ、３２ｋＤａ～３０ｋＤａ的囊尾蚴抗原分别免疫家兔,制备相应的抗血清,以双夹心ＥＬＩＳＡ 检测患者血清和ＣＳＦ中ＣＡｇ。结果：抗原体５３ｋＤａ抗原抗血清对３２例脑囊虫病活动型患者血清和ＣＳＦ中ＣＡｇ的检出率分别为９３．８％和９１．７％,１６例脑     

纯化31/32kDa抗原和成虫粗抗原诊断日本血吸虫病的比较

用纯化的日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原（Ｓｊ３１／３２）与成虫粗抗原（ＡＷＡ）对不同类型日本血吸虫病患者血清抗体进行检测，结果３种不同类型（急性、慢性和晚期）血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体水平（ＯＤ值）分别为２．７７±０．２５、２．６７±０．３０和２．４６±０．１９（Ｐ＜０．０１），抗ＡＷＡ抗体水平分别为３．２７±０．１６、３．２８±０．１６和３．２０±０．１７（Ｐ＞０．０５）。慢性血吸虫病患者血清抗Ｓｊ３１／３２抗体与每克粪便虫卵数（ＥＰＧ）之间有高度的相关性（ｒ＝０．９３），明显高于抗ＡＷＡ抗体与ＥＰＧ的相关性（ｒ＝０．４５）。结果表明，利用纯化Ｓｊ３１／３２诊断血吸虫病能较好地区别不同的感染类型和感染度。     

金标抗rSjc26GST多克隆抗体斑点免疫金渗滤法检测？…

目的 探索一种简捷的检查血吸虫循环抗原的方法。方法 应用抗日本血吸虫重组谷胱甘肽－Ｓ－转移酶（ｒＳｊｃ２６ＧＳＴ）的多克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清循环抗原的双抗体夹心斑点免疫金渗滤法（Ｓ－ＤＩＧＦＡ），并以Ｓ－ＥＬＩＳＡ作对比。结果 用Ｓ－ＤＩＧＦＡ和Ｓ－ＥＬＩＳＡ平行检测９５例慢性血吸虫病患者，阳性检出率分别为８１．０５％和８２．１１％；正常人血清１８０份，两者的假阳性率分别     

斑点免疫金银染色用于弓形虫病血清学诊断的研究

采用斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）和斑眯酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＩ．ＩＳＡ），以弓形速殡子可溶性蛋白抗原作为靶抗原检测６５例弓形虫感染者血清抗弓 虫ＩｇＧ，Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ和Ｄｏｔ－ＥＳＩＳＡ检测阳性率分别不９８．４６％和９２．４６％。血清平均滴度在Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ为１：３９４，在Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ为１：２１８。两法均一的有５９例，其中在两法中抗体滴度相同者２８例，Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ检测滴     

检测血清和脑脊液中囊尾蚴循环抗原诊断脑囊虫病的研究

目的：用抗血清检测脑囊虫病患者血清和脑脊液（ Ｃ Ｓ Ｆ）中囊尾蚴循环抗原（ Ｃ Ａｇ）诊断脑囊虫病。方法：用 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ提纯的蛋白质分子量为 ６４ ｋ Ｄａ、５３ ｋ Ｄａ、３２ ｋ Ｄａ～３０ ｋ Ｄａ 的囊尾蚴抗原分别免疫家兔,制备相应的抗血清,以双夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测患者血清和 Ｃ Ｓ Ｆ中 Ｃ Ａｇ。结果：抗５３ ｋ Ｄａ 抗原抗血清对 ３２ 例脑囊虫病活动型患者血清和 Ｃ Ｓ Ｆ中 Ｃ Ａｇ 的检出率分别为９３．８％ 和９１．７％ ,１６ 例脑囊虫病非活动型患者仅１ 例 Ｃ Ｓ Ｆ Ｃ Ａｇ 阳性。 Ｃ Ａｇ 检出率明显高于用抗６４ ｋ Ｄａ、３２ ｋ Ｄａ～３０ ｋ Ｄａ 囊尾蚴抗原抗血清检测的结果（ Ｐ＜ ０．０５）。结论：抗５３ ｋ Ｄａ 囊尾蚴抗原抗血清检测活动型脑囊虫病患者血清和 Ｃ Ｓ Ｆ中的 Ｃ Ａｇ 敏感性较高,特异性较强,可用于活动型脑囊虫病的诊断和疗效考核。     

抗Sa抗体在类风湿关节炎中的意义

目的测定自身免疫性结缔组织病中抗Ｓａ抗体的阳性率，着重分析抗Ｓａ抗体在类风湿关节炎（ＲＡ）中的意义。方法从人胎盘中提取Ｓａ抗原，采用免疫印迹法，测定了４０例健康人及４７８例各种自身免疫性结缔组织病患者血清中的抗Ｓａ抗体，并分析了该抗体与ＲＡ的某些临床及实验室指标的相关性。结果抗Ｓａ抗体在各组患者中的阳性率分别为：ＲＡ为３１．９％（６１／１９１），干燥综合征为３．０％（２／６７），系统性红斑狼疮为４．３％（２／４６），白塞病、肌炎／皮肌炎、其他自身免疫性结缔组织病及正常人中均为０。研究分析表明，抗Ｓａ抗体对ＲＡ的诊断敏感性为３１．９％，特异性为９８７％，阳性预报率为９３．８％，阴性预报率为７１．３％。与抗Ｓａ抗体阴性的ＲＡ患者相比，抗Ｓａ抗体阳性的患者在关节受累、晨僵、血沉、抗核抗体、Ｘ线分期和二线药物的使用方面有显著差异。结论我们在国内首次制备了Ｓａ抗原，并建立了Ｓａ抗体的检测方法，它是一种不同于类风湿因子、对ＲＡ诊断较为特异的新型自身抗体。该抗体与疾病的严重程度相关，能否有助于ＲＡ的早期诊断和分型尚需更多病例的积累和观察。