丝裂霉素C对膀胱肿瘤细胞株HSP70的诱导作用

目的研究丝裂霉素C对膀胱肿瘤细胞株TBC-1 HSP70的诱导作用。方法丝裂霉素C作用与TBC-1于2h后,观察在不同时间点0、8、24、48、72hTBC-1的HSP70的表达情况。结果丝裂霉素C化疗TBC-1后不同时间点0、8、24、48、72h的HSP70的表达OD值分别为0.306±0.005、0.255±0.009、0.203±0.018、0.237±0.029、0.239±0.020。正常TBC-1的HSP70表达OD值为0.247±0.022。结论丝裂霉素C可以诱导膀胱肿瘤细胞株TBC-1的HSP70的表达增高。     

HSP70对组织细胞的保护

1962年科学家Ritossa在研究果蝇唾液腺的染色体中首次发现了热休克蛋白（heatshockprotein，HSP）。HSP是指所有生物细胞在应激原诱导下所产生的高度保守的一组蛋白质，根据其分子量大小可将HSP分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60和sHSP等5个家族。其中最重要的家族之一是HSP70，在正常生理状态下HSP70表达水平很低，而理化刺激（热、重金属、辐射和药物等）、病理刺激（感染、氧化应激、肿瘤、心脑血管系统疾病和神经系统疾病等）和生理刺激（细胞分裂生长、分化、组织器官发生和饥饿）等应激原均能显著诱导其表达，提高细胞应激能力，保护细胞不被刺激损伤。目前认为HSP70在应激中具有诸多作用，是一种非特异性组织细胞保护蛋白，对各脏器组织细胞均有保护作用。     

应激及其损伤时HSP70表达及调控机制

<正>应激反应及应激保护是近年来应激损伤领域研究的热点。热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一类广泛存在于动植物体内的,在进化上高度保守的蛋白家族。由应激诱导的热休克蛋白可以保护细胞免受由应激所致的损伤。在细胞受到应激刺激或其损伤时,能够迅速合成,对生物体细胞起到一定的保护作用。HSPs家族按其分子量及等电点可分为五个家族:低分子量HSP家族,中等分量HSP家族,HSP70     

HSP70在垂体腺瘤中的表达及其与肿瘤侵袭性关系的研究

目的分析HSP70在垂体腺瘤中的表达,探讨HSP70与垂体腺瘤侵袭性之间的关系,研究以HSP70的表达水平作为判断垂体腺瘤侵袭性和预后指标的可能性.方法取经手术切除且病理诊断为垂体腺瘤、具有完整内分泌资料的患者50例,根据Hardy-Wilson及Knosp分级、分期标准,结合病理活检判断其肿瘤侵袭性,用免疫组化方法分别检测每例肿瘤HSP70的表达水平.结果50例病人中HSP70蛋白表达的阳性率为86.0%(43/50),PRL腺瘤和无功能腺瘤之间的HSP70蛋白表达阳性率在统计学上无显著性差异(P＞0.05), HSP70蛋白表达水平与垂体腺瘤侵袭性之间的关系在统计学上存在正相关关系(P＜0.05).结论HSP70的表达水平与垂体腺瘤侵袭性有关,其表达水平有可能作为判断垂体腺瘤侵袭性和预后的指标.     

采用组织芯片技术研究鼻咽癌组织中HSP70的表达及意义

目的:探讨使用组织芯片技术,观察热休克蛋白在鼻咽癌组织中的表达及临床意义。方法:以50例鼻咽癌患者鼻咽部存档石蜡标本为观察研究对象,采用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测鼻咽癌组织中HSP 70的表达。结果:50例鼻咽癌组织中HSP70阳性表达为72%(36/50),与采用常规制片方法进行免疫组织化学染色片对比,阳性率、阳性表达强度结果基本一致,鼻咽癌中颈淋巴结转移阳性组的HSP70表达高于阴性组,差异具有显著性,P<0.01。结论:HSP70表达与鼻咽癌相关,HSP70可作为评价鼻咽癌患者预后的指标。使用自制组织芯片进行HSP70免疫组织化学染色分析,效果良好,显示了组织芯片技术应用于临床病理免疫组织化学染色和实验分析的良好前景。     

HSP70单克隆抗体诱导宫颈癌细胞凋亡的实验研究

目的:体外培养宫颈癌细胞株,免疫化学方法检测阻断HSP70前后的表达;方法:TUNEL技术观察不同浓度热休克蛋白70单抗对细胞生长的影响.探讨热休克蛋白70(HSP70)单抗对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用;结果:经不同浓度热休克蛋白70单抗后,免疫化学方法检测HSP70的表达显著受到抑制.TUNEL技术检测出细胞凋亡;结论:表明热休克蛋白70单克隆抗体明显诱导宫颈癌细胞调亡.     

PCNA、HSP70在星形胶质细胞瘤中的表达及其临床意义

目的:研究增殖细胞核抗原(PCNA)、热休克蛋白70(HSP70)在星形胶质细胞瘤中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法对43例人脑胶质瘤石蜡标本中PCNA、HSP70进行检测。标本均为星形胶质细胞瘤,病理级别为Ⅰ~Ⅳ级。观察其与胶质瘤临床病理分级的关系及其相关性。结果:PCNA和HSP70在脑星形细胞瘤中的表达程度明显增高,并且发现二者表达的阳性率随着胶质瘤病理级别的升高而升高,不同级别之间存在显著性差异,二者呈正相关。结论:检测脑胶质瘤组织中PCNA、HSP70表达能够快速、准确地反映肿瘤细胞的增殖状态及评价预后,对判定胶质瘤的恶性程度及指导治疗有一定意义。     

腹部手术病人术后血清细胞因子和HSP70水平的变化

目的 比较上腹部和下腹部手术病人血清细胞因子白细胞介素6（IL-6）和IL-10及热休克蛋白70（HSP70）水平变化的趋势及差异。方法 27例ASAⅠ～Ⅱ级病人随机分为两组：Ⅰ组,下腹部硬膜外神经阻滞麻醉下行择期子宫切除术病人（n=12）;Ⅱ组,上腹部静脉全麻下行择期胃癌根治术的病人（n=15）。所有病人术后均以曲马多静脉自控镇痛。观察麻醉前、手术后2、24、48和72h五个时点病人血清细胞因子IL-6、IL-10和HSP70水平的变化。结果两组病人血清IL-6、IL-10和HSP70水平从术后2h起均显著升高（P〈0．05）,至术后72h,除Ⅰ组血清IL-10恢复到麻醉前水平外,余各组血清IL-6、IL-10及HSP70值仍处于较高的水平（P〈0．05）。术后24h,Ⅰ组血清IL-6和IL-10水平低于Ⅱ组（P〈0．01）;术后48h和72h,Ⅰ组血清IL-6和HSP70水平显著低于Ⅱ组（P〈0．01）。结论 下腹部手术病人术后血清IL-6、IL-10及HSP70水平上升幅度小于上腹部手术病人,提示上述变化的差异与手术创伤大小有关。     

葛根素对急性脑缺血模型大鼠脑细胞损伤后HSP70及Fas蛋白表达的干预作用研究

目的:探讨葛根素对急性脑缺血模型大鼠脑细胞损伤后热休克蛋白70(HSP70)及Fas蛋白表达的干预作用机制。方法:将12只急性脑缺血模型大鼠随机分为单纯缺血组(生理盐水)和葛根素干预组,各6只,每只大鼠再分别按缺血侧(实验组)和非缺血侧(对照组)进行自身对照,用HE染色及免疫组织化学SP法测定HSP70表达情况;另将脑缺血模型大鼠随机分为对照组(生理盐水、缺血侧)、葛根素干预组(缺血侧)、正常组(非缺血侧),各6只,用HE染色及免疫组织化学SP法测定Fas表达情况。结果:单纯缺血对照组及葛根素干预对照组HSP70呈阴性或弱阳性表达,而在单纯缺血实验组及葛根素干预实验组中HSP70均表达增强(P<0.01),葛根素干预实验组的表达则明显强于单纯缺血实验组(P<0.01);Fas蛋白在各组中均有不同程度的表达,阳性细胞绝大部分为神经元,以锥体细胞表达强度最强,各组间阳性细胞数均无显著差异(P>0.05);HE切片中,对照组和葛根素组死亡细胞数均明显多于正常组(P<0.01),且对照组明显多于葛根素组(P<0.01)。结论:葛根素对急性脑缺血损伤具有保护作用,主要通过上调HSP70的表达来实现,而与Fas蛋白的表达及细胞凋亡等相关不强。     

人脑星形胶质瘤HSP70的表达与肿瘤恶性程度关系

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)表达与脑胶质瘤增殖及凋亡的关系。方法 利用免疫组化方法,观察HSP70与肿瘤恶性程度的关系及阻断HSP70表达后对肿瘤细胞生长的影响。结果 28例人脑胶质瘤手术标本中25例有HSP70表达,表达强度与肿瘤恶性程度成正相关。结论 人脑星形胶质瘤广泛存在HSP70过度表达,HSP70可以作为判断肿瘤恶性程度及预后的一个参考指标。HSP70可作为肿瘤实验治疗的一个靶指标。     

Pharmacokinetic and Tissue Distribution Mechanism of Mouse Recombinant Heat Shock Protein 70 in Mice

No HeadingPurpose. To investigate the in vivo pharmacokinetics and uptake mechanisms of recombinant mouse heat shock protein 70 (Hsp70) by hepatocytes in mice.Methods. The tissue distribution and intrahepatic localization of Hsp70 were determined after an intravenous injection of ¹¹¹In-Hsp70 (¹¹¹In-Hsp70) into mice. Ligands of CD91 or scavenger receptors were injected prior to Hsp70 to examine the involvement of these molecules on the distribution of ¹¹¹In-Hsp70. The uptake of ¹¹¹In-Hsp70 by primary mouse hepatocytes was also examined.Results. After intravenous injection, ¹¹¹In-Hsp70 was rapidly eliminated from the circulation and taken up mainly by the liver. The hepatic uptake was significantly inhibited by preinjection of ligands for CD91 or scavenger receptors. The separation of liver-constituting cells revealed a major contribution of hepatocytes to the overall hepatic uptake of ¹¹¹In-Hsp70. The uptake of ¹¹¹In-Hsp70 by cultured hepatocytes was inhibited by a CD91 ligand or anti-CD91 anibody. In addition, after subcutaneous injection, ¹¹¹In-Hsp70 gradually disappeared from the injection site and accumulated in primary lymph nodes.Conclusions. These results indicate for the first time that intravenous Hsp70 is, at least partially, recognized by CD91 and eliminated by hepatocytes, whereas subcutaneous Hsp70 is efficiently delivered to regional lymph nodes.     

重组人粒细胞集落刺激因子热稳定性研究

采用凝胶排阻HPLC、SDS-PAGE非还原电泳、生物学活性、蛋白含量等检测方法对两种保护缓冲体系中的重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)稳定性进行研究。在40℃(加速试验)、25℃(室温留样)、2～8℃(贮藏温度)、冻溶一次条件下检测了两种保护缓冲体系中rhG-CSF稳定性。结果rhG-CSF原液于2～8℃保存下,外观、含量、纯度及生物学活性较为稳定,有效期可暂定为三个月,40℃、25℃存放产品不稳定;rhG-CSF保存原液于2～8℃保存下,外观、含量、纯度及生物学活性相当稳定,有效期可暂定为十八个月,40℃存放产品不稳定。RhG-CSF原液及rhG-CSF保存原液均不可冻融。保存原液中的甘露醇(5%)、吐温-80(0.004%)对rhG-CSF具有显著的保护作用。     

IL-2基因工程菌的发酵及其包含体制备工艺的初探

本文对IL-2基因工程菌的发酵及其包含体制备工艺进行了研究.结果表明在发酵过程中pH的稳定(7.0)、糖的补充(3%)、O_2的及时供给(<10PSIG持续泵入)和发酵密度的控制(OD_(550)=1.9),对提高发酵产量至关重要(12g/L).在包含体制备及溶解工艺中,以4mol/L脲去除脂质及杂蛋白,1%SDS溶解包含体,可获最大IL_2活性单位(2.35×10~7u/ml,即相当于5L发酵可获3.53×10~9u).     

热休克蛋白70单抗诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨HSP70单抗对人胰腺癌细胞株BXPC-3的生长抑制作用和凋亡的诱导作用及可能的作用机制。方法MTT法检测HSP70单抗对人胰腺癌细胞株BXPC-3增殖的影响,流式细胞仪检测HSP70单抗诱导凋亡作用。结果MTT法检测24h,48h不同浓度HSP70单抗作用后实验组与对照组吸光度（A）值比较差异有统计学意义（P〈0.05）,48h的抑制率高于24h的抑制率。流式细胞仪分析显示HSP70单抗作用48h后细胞发生凋亡,且随单抗浓度的增加细胞凋亡率增高。结论HSP70单抗可以抑制BXPC-3细胞的增殖并且可以诱导其凋亡。     

加热对肿瘤细胞热休克蛋白70产生的影响及意义

目的探讨加热对肿瘤细胞热休克蛋白70产生的影响,为热疗治疗肿瘤提供理论依据。方法对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721进行加热,42℃,2h,用超声细胞破碎仪破碎已经加热的SMMC-7721细胞,高速离心,用SDS-PAGE和Western blot方法对上清中HSP70的表达进行鉴定。结果加热42℃,2h的肝癌细胞热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）有较高表达。结论经加热42℃,2h的肝癌细胞热休克蛋白70（HSP70）有较高表达,为热疗治疗肿瘤提供了实验数据。     

重组人胰岛素样生长因子1的制备

目的：建立人胰岛素样生长因子1(IGF—1)基因大肠杆菌高效表达系统及rhIGF—1的初步纯化方法。方法：将人IGF—1基因克隆人原核表达质粒载体pBV220，重组质粒转化大肠杆菌DH5α，温度诱导表达，Western Blot对表达产物进行鉴定。超滤离心纯化rhIGF-1，纯化产物行高效液相色谱分析。H^3-TdR掺人法测定所制备rhIGF—1的促细胞增殖活性。结果：成功构建了重组质粒pBV—IGF—1，聚丙烯酰胺凝胶电泳可见与预期7．5ku大小相符的蛋白条带，Western Blot证实该条带即为rhIGF—1。超滤离心一步纯化后rhIGF—1纯度即可达95％以上。H^3-TdR结果显示，所制备的rhIGF—1可促进体外培养成肌细胞增殖。结论：成功建立了rhIGF-1的制备及纯化方法，表达产物经体外试验证实具有促细胞增殖的生物活性。     

重组人睫状神经营养因子脂质体制备及性质

目的制备重组人睫状神经营养因子（recombinant human ciliary neurotrophic factor,rhCNTF）脂质体,提高rhCNTF穿透血脑屏障能力。方法采用薄膜超声法制备rhCNTF脂质体,测定包封率。分别用rhCNTF原液、rhCNTF脂质体及生理盐水尾静脉注射Balb/C小鼠,0,2,6,12,24 h后测小鼠脑组织中rhCNTF含量。结果制得的rhCNTF脂质体形态圆整,平均直径为85.0 nm,包封率为93.14%。用ELISA法测定小鼠脑组织中rhCNTF的含量,rhCNTF原液组和rhCNTF脂质体组存在显著差异。结论制备的rhCNTF脂质体能提高rhCNTF穿越血脑屏障的能力,为rhCNTF的进一步应用和研究提供了依据。     

与热休克蛋白70相关的抗病毒药物研究进展

热休克蛋白70(Hsp70)是一类结构上高度保守的应激蛋白,对细胞起重要保护作用.Hsp70在许多DNA病毒和RNA病毒(如HIV、流感病毒、鼻病毒、多瘤病毒和乳头状瘤病毒等)的感染中均呈现高表达.Hsp70诱导剂及协诱导剂(如环戊烯酮类前列腺素、甘草酸等)的抗病毒作用机制不同于已有的抗病毒药物,可以通过诱导或增强Hsp70的合成而表现出抗病毒活性.本文对Hsp70与病毒复制或感染之间的关系以及与之相关的具抗病毒活性化合物的研究进展进行综述.