雌激素受体α免疫阳性星形胶质细胞在阿尔茨海默病病人海马中分布的改变

目的:观察雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)免疫阳性星形胶质细胞在阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)病人组和老年对照组海马中的分布变化.方法:采用免疫荧光细胞化学双标方法和激光共聚焦扫描显微镜.结果:ERα免疫阳性星形胶质细胞主要分布在齿状回的门和海马的分子层、放射层及始层.GFAP(glial fibrillary acidic protein)免疫阳性细胞、ERα胞核染色的和ERα胞质染色的星形胶质细胞(number/mm2)在AD组的CA1均显著增加(P分别小于0.001,0.05,0.05),但其ERα核着色或质着色的星形胶质细胞占GFAP免疫阳性星形胶质细胞的百分数,在对照组(2.56%,n=13;16.68%,n=13)和AD病人组(2.15%,n=13;26.00%,n=13)之间无显著差异(P＞0.05).结论:这些结果表明,在AD的发病过程中雌激素可能通过ERα介导对海马星形胶质细胞的作用.     

雌激素受体α免疫阳性星形胶质细胞在阿尔茨海默病病人海马中分布的改变

目的 :观察雌激素受体α(estrogenreceptorα,ERα)免疫阳性星形胶质细胞在阿尔茨海默病 (Alzheimerdisease,AD)病人组和老年对照组海马中的分布变化。 方法 :采用免疫荧光细胞化学双标方法和激光共聚焦扫描显微镜。结果 :ERα免疫阳性星形胶质细胞主要分布在齿状回的门和海马的分子层、放射层及始层。GFAP (glialfibrillaryacidicprotein)免疫阳性细胞、ERα胞核染色的和ERα胞质染色的星形胶质细胞 (number/mm2 )在AD组的CA1均显著增加 (P分别小于 0 .0 0 1,0 .0 5 ,0 .0 5 ) ,但其ERα核着色或质着色的星形胶质细胞占GFAP免疫阳性星形胶质细胞的百分数 ,在对照组 (2 .5 6 %,n =13;16 .6 8%,n =13)和AD病人组 (2 .15 %,n =13;2 6 .0 0 %,n=13)之间无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :这些结果表明 ,在AD的发病过程中雌激素可能通过ERα介导对海马星形胶质细胞的作用。     

Ⅱ组代谢性谷氨酸受体阻断剂延缓痴呆大鼠学习记忆的减退过程

目的 探讨α-甲基-(4-四唑基-苯)甘氨酸[α-methyl-(4-tetrazolyl-phenyl)Glycine,MTPG]对老年痴呆大鼠学习、记忆功能的影响.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组、痴呆组与MTPG加痴呆组;首先进行凝聚肽Aβ 25-35大鼠左侧脑室注射建立AD大鼠模型,1周后行MTPG的右侧脑室注射,4周后用Morris水迷宫检测大鼠的学习、记忆能力.用免疫组化技术检测大鼠海马Cal区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达.结果 痴呆人鼠海马Cal锥体神经元密度明显降低,而MTPG加痴呆组海马Cal区锥体神经元密度明显改善.MTPG加痴呆组海马CAI 区GFAP阳性细胞的表达与痴呆组相比明娃减少,差异有统计学意义(P＜0.05).水迷宫测试,MTPG加痴呆组与痴呆组大鼠比较,学习记忆能力有明显提高(P＜0.05).将大鼠学习成绩与海马CAI区GFAP表达数目之间进行相关分析,二者间存在负相关关系.结论 海马星形胶质细胞的过度表达可能影响痴呆大鼠的学习记忆功能,而MTPG可延缓痴呆大鼠学习记忆功能的减退过程.     

钙／钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ-α在Alzheimer病老年斑的表达

目的　 探讨钙 /钙调素依赖的蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ ) α在Alzheimer病 (AD)老年斑形成中的作用。方法　 选择 10例女性AD患者及 10例年龄、性别等匹配的正常老年人的海马切片 ,进行CaMKⅡ α免疫组织化学和CaMKⅡ α与β 淀粉样蛋白 (Aβ)或胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)双标免疫荧光组织化学研究。 结果　CaMKⅡ α正常分布于神经元胞质、轴突 ,但在AD患者的海马 ,CaMKⅡ α沉积于神经元外并形成大小不等的斑块样结构。其中 ,大部分CaMKⅡ α斑块样沉积存在于主要由Aβ组成的老年斑中 ,只有那些很小的CaMKⅡ α沉积斑不含Aβ。在弥散型斑块中 ,CaMKⅡ α沉积撒落在未融合的Aβ沉积中。在经典型斑块中 ,交互出现的CaMKⅡ α和Aβ沉积围绕着均质融合的Aβ核心。老年斑周围反应增生性星形胶质细胞不过度表达CaMKⅡ α ,且与CaMKⅡ α沉积间无明确关联。结论　CaMKⅡ α沉积可能参与了AD患者老年斑形成 ,星形胶质细胞可能不参与CaMKⅡ α沉积。     

微小RNA调节与阿尔茨海默病的相关性研究

微小RNA(microRNA,miRNA)是一种内源性非编码蛋白RNA基因,近年来在研究阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发病机制中,发现miRNA在AD的血液、脑脊液中含量发生改变,有大量特殊的miRNA失调,参与AD关键基因的调节,表明这些微小RNA可能是AD的生物标志物.本文就miRNA调节与AD的关系作一综述. 1 AD概述 AD是老年人常见的神经系统变性疾病,病理特征为老年斑(neuritic plaque,NP)、神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFT)和神经元缺失.     

脑缺血对阿尔茨海默病模型大鼠认知功能的影响及其机制探讨

目的 探讨脑缺血对阿尔茨海默病(AD)病程进展的影响及其机制.方法 采用大鼠海马注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40建立AD模型,再于海马内注射ET-1建立脑缺血条件,观察脑缺血后AD样大鼠认知功能以及海马内Aβ沉积、神经元丢失和异常磷酸化tau表达的变化;采用免疫组化、原位杂交和RT-PCR法检测海马内星形胶质细胞数量和IL-1、TNF-α表达的变化.结果 脑缺血后AD样大鼠的认知功能明显下降,海马内Aβ沉积增加,神经元丢失增加,异常磷酸化tau表达增加.星形胶质细胞的数量以及IL-1和TNF-α的表达显著增加(均P＜0.01).结论 脑缺血加重了AD样大鼠的认知功能障碍和海马病理损伤,显著增加的星形胶质细胞及IL-1和TNF-α的表达参与了这一过程.防治脑缺血和抗炎治疗可能成为减缓AD进展的新途径.     

GFAP和Fos蛋白在戊四氮致痫大鼠前脑中的表达变化

目的 研究大鼠在戊四氮导致癫痫发作时前脑内星形胶质细胞和神经元的形态学反应及其相互关系。方法 应用免疫组织化学单标记法分别显示前脑内GFAP和Fos蛋白表达的时间规律，并用免疫组织化学双重标记显示GFAP和Fos蛋白表达的相互关系。结果 在戊四氮导致大鼠癫痫发作早期，前脑的星形胶质细胞被激活，细胞体积增大，突起粗大，GFAP表达阳性，随着存活时间的变化，星形胶质细胞的反应经历先逐渐升高后降低的过程。被激活的星形胶质细胞和神经元表达Fos蛋白阳性，也呈现逐渐升高又降低的变化；另外，GFAP阳性星形胶质细胞和Fos阳性神经元在前脑主要分布在大脑皮层、海马、杏仁核等部位，二者的分布特征基本一致。结论 星形胶质细胞可能和神经元一起参与了戊四氮所致癫痫发作的变化。     

大鼠海马星形胶质细胞对突触可塑性的影响

目的研究星形胶质细胞在神经系统发育成熟过程中对突触可塑性的调控规律.方法取健康初生、幼年和成年大鼠各10只,每只取脑切片,用免疫组织化学方法观察其海马CA1区的S100、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和P38免疫反应产物强度;HE染色法显示神经元胞体.结果初生大鼠海马CA1区中神经元大量存在,但S100、GFAP和P38表达均少,幼鼠的表达增加,但仍显著少于成鼠的表达(P＜0.01).结论大鼠海马CA1区星形胶质细胞增殖与突触出现时间、突触数目增加及功能成熟有关.     

阿尔茨海默病脑海马凋亡神经元发生率增高

通过对阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)和老年对照患者死后脑海马凋亡神经元的检测 ,探讨AD脑神经元丢失的可能机制。使用TUNEL(terminaltransferase mediateddUTP biotinnickendlabeling)法对 7例确诊的AD和 9例老年对照患者死后海马组织中的凋亡神经元进行标记 ,用生物图像分析系统对结果进行定量分析。AD和对照组间TUNEL阳性细胞数无显著性差异 ;AD组海马CA1和CA4区正常神经元数减少 ,其中CA1区减少具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;AD组海马CA1和CA4区凋亡神经元发生率高于对照组 ,其中CA1区具有显著性差异 (P <0 .0 5 )。AD组海马组织中凋亡神经元发生率明显增高 ,说明细胞凋亡可能参与了AD海马神经元退行性变的过程。     

阿尔茨海默病患者海马雌激素受体α和β共表达减少

目的　探测雌激素受体在阿尔茨海默病 (AD)患者海马中的变化。方法　运用免疫荧光细胞化学双标和激光共聚焦扫描显微镜 ,对 10例AD患者和 10例对照组海马进行观察 ,并进行统计分析。结果　在老年对照组和AD患者组中 ,雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)均主要在锥体层神经元中表达 ,而放射层和始层中稀少 ;且多分布于胞质 ,胞核较少。ERα和ERβ免疫荧光双标细胞可分为三种类型 :(1)胞质双标细胞 ;(2 )胞核双标细胞 ;(3)ERα核染色而ERβ质染色细胞。海马CA1区胞核双标神经元与ERα阳性神经元的比率或与ERβ阳性神经元的比率 ,AD组分别为2 6 %± 0 5 %和 1 7%± 0 3% ,均低于对照组 (分别为 5 0 %± 0 7%和 3 9%± 0 6 % ) ,均 (P <0 0 0 1)。结论　雌激素受体α和 β核双标细胞的减少可能在AD发病机制中起重要作用。     

大鼠癫痫持续状态后海马神经传递环路CB1R表达特征

目的 探讨癫痫持续状态后不同时间点,大鼠海马各区CB1R表达变化。方法 使用氯化锂-匹罗卡品诱导大鼠癫痫持续状态(SE),分别于SE后1 w、2 w、3 w、4 w,取大鼠海马切片,行大麻素1型受体(CB1R)免疫组化染色,测量CA1区放射层、CA3区透明层,以及分子层CB1R平均光密度值(MIOD),所有数值进行统计学分析。同时取SE后4 w海马切片,行Neu N和GFAP染色,观察SE后4 w,海马神经元和星形胶质细胞变化。结果在CA1区放射层,SE后各时间点CB1R表达均高于对照(P 0. 05),CB1R表达在SE后4 w,高于SE后1 w、2 w、3 w(P 0. 05);在CA3区透明层,SE后各时间点CB1R表达均高于对照(P 0. 05),CB1R表达在SE后4 w,高于SE后1 w(P 0. 05);在海马分子层,SE后各时间点CB1R表达均高于对照(P 0. 05),但是CB1R表达在SE后1 w、2 w、3 w、4 w之间无统计学差异(P 0. 05)。SE后4 w,CA1区锥体细胞层神经元明显丢失,并且星形胶质细胞增生肥大。结论 大鼠SE后4W具有硬化海马特征。SE后大鼠CA1区放射层、CA3区透明层,以及分子层CB1R表达增加,CA1区放射层和CA3区透明层CB1R在SE后4 w增加最明显,分子层CB1R在SE后1 w增加且趋于稳定。     

阿尔茨海默病脑海马凋亡神经元发生率增高

通过对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)和老年对照患者死后脑海马凋亡神经元的检测,探讨AD脑神经元丢失的可能机制.使用TUNEL(terminal transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling)法对7例确诊的AD和9例老年对照患者死后海马组织中的凋亡神经元进行标记,用生物图像分析系统对结果进行定量分析.AD和对照组间TUNEL阳性细胞数无显著性差异;AD组海马CAl和CA4区正常神经元数减少,其中CAl区减少具有显著性差异(P《0.05);AD组海马CAI和CA4区凋亡神经元发生率高于对照组,其中CAl区具有显著性差异(P《0.05).AD组海马组织中凋亡神经元发生率明显增高,说明细胞凋亡可能参与了AD海马神经元退行性变的过程.     

红藻氨酸诱发大鼠复杂部分性癫癎发作的海马神经元和星形胶质细胞反应及相互关系

目的:观察大鼠癫发作后海马内神经元与星形胶质细胞反应变化的时空效应及相互关系。方法:以红藻氨酸诱发的大鼠复杂部分性癫发作为模型,利用免疫组织化学法,在原位显示癫发作后153、0、60、901、20、180 min 6个时间点海马神经元Fos蛋白及星形胶质细胞内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化、相互关系及分布规律。结果:致后15 min海马内GFAP表达开始增多,60 min达高峰。Fos阳性神经元在癫诱发后30 min开始出现,120 min达高峰。海马内GFAP阳性细胞与Fos阳性神经元分布规律基本一致。结论:在癫病理状态下,海马内星形胶质细胞的反应略早于神经元,两者之间分布呈平行关系,它们之间可能存在着复杂的信息通讯,以复合体的形式共同对各种病理生理刺激作出反应。     

SE后各时间点CB1R表达均高于对照(P<0.05),

正2 w(0. 0326±0. 00264)、3 w (0. 0321±0. 00380)、4 w(0. 0334±0. 00427)之间无统计学差异(P0. 05)(见图2C)。2. 2大鼠SE后4W海马神经元和星形胶质细胞变化特征SE后4 w,海马锥体细胞层神经元排列紊乱,密度明显降低(见图3),星形胶质细胞增生肥大(见图4),因此,本研究建立的癫痫模型,具备海马硬化的两个基本特征,即神经元的大量丢失和星形胶质细胞增生、肥大[6]。     

红藻氨酸致痫大鼠海马Fos和GFAP的共同表达

目的 研究红藻氨酸（kainic acid,KA)诱导大鼠癫痫发作后海马（hippocampus,HI)内神经元和星形胶质细胞的时空效应性反应变化。方法 大鼠侧脑室内注射KA，用抗即刻早期基因Fos蛋白和抗胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的双重免疫荧光组织化学方法结合激光共聚焦显微镜技术，显示痫性发作后HI同一部位内反应性神经元与星形胶质细胞的分布。结果 KA诱导大鼠癫痫发作，HI内的Fos阳性神经元和GFAP阳性星形胶质细胞明显增多。两分布范围基本一致，且癫痫诱发30min后GFAP开始增多，1h达高峰；1h后Fos阳性产物开始增多；2h达高峰；部分Fos阳性神经元周围有GFAP免疫反应产物包绕，显示反应性神经元（Fos阳性）与反应性星形胶质细胞（GFAP阳性）之间关系密切。结论 HI内的神经元和星形胶质细胞与癫痫发作直接相关且存在相互关系。可能共同参与癫痫的发生及其调节。     

阿尔茨海默病海马CA1区p75NTR和磷酸化tau蛋白神经元的定量观察

目的观察阿尔茨海默病(AD)海马CA1区p5NTR的表达与磷酸化tau蛋白的关系.方法利用组织化学和免疫细胞化学方法分析由荷兰脑库提供的10例女性AD患者及年龄、性别等与之匹配的10例健康意外死亡对照者的脑组织标本海马CA1区神经元总数、p75NTR神经元数目的差异及AD患者p75NTR和Alz-50共存.结果AD患者海马CA1区神经元总数明显低于对照组,但p75NTR神经元占总神经元的百分比明显高于对照组(P值分别为0.0002、0.001);AD海马CA1区Alz-50阳性神经元(个/mm2)为87.5±29.2,p75NTR和Alz-50双标神经元为76.4±26.6,后者占前者的百分比为86.6%±5.0%,二者在CA1区的分布呈正相关(r=0.79、P=0.006).结论AD患者海马CA1区p75NTR主要产生死亡信号,参与AD神经病理的形成.     

脑室注射痴呆大鼠海马胶质纤维酸性蛋白表达与学习记忆能力的关系

目的探讨星形胶质细胞在老年性痴呆大鼠海马中的表达与老年性痴呆大鼠学习记忆能力减退的关系。方法雄性SD大鼠20只,随机分为痴呆组与假手术组;用Morris水迷宫检测大鼠的学习、记忆能力;用免疫组化技术定量检测大鼠海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;分析海马星形胶质细胞变化与学习、记忆能力的关系。结果假手术组海马CA1区锥体细胞排列紧密有序,细胞核大而圆、染色浅、核仁明显、未见明显胞浆浓染、核固缩等神经元变性受损征象。而痴呆大鼠海马CA1锥体神经细胞排列疏松、数目减少、细胞形态异常,许多细胞出现体积缩小、核浓染、核固缩;痴呆鼠海马CA1区GFAP阳性细胞数目明显增多,胞体肥大,突起增粗、变长现象明显,而假手术组海马CA1区仅见少量GFAP阳性细胞,突起较少、短,染色较淡。计数和测量海马CA1区GFAP阳性细胞数目、总面积、平均光密度,痴呆组与假手术组相比均明显增加,有显著意义(P<0.05);水迷宫测试显示痴呆组大鼠隐藏平台获得时间比假手术组明显延长,空间探索时间明显缩短,具有显著意义(P<0.05);显示痴呆组大鼠学习记忆能力与假手术组比较均明显下降;将痴呆大鼠学习成绩与海马CA1区GFAP表达数目之间进行相关分析,两者间存在负相关关系,认为星形胶质细胞参与了学习记忆过程。结论提示海马星形胶质细胞的过度表达可能影响痴呆大鼠的学习记忆能力。     

体外癫痫模型海马神经元中线粒体衔接蛋白Miro1表达的改变及其意义

目的探讨体外癫痫模型海马神经元中线粒体衔接蛋白Miro1表达的改变及其意义。方法原代培养新生24 h内的SD大鼠海马神经元,通过无镁细胞外液诱导体外癫痫模型。培养至14 d的海马神经元随机分为对照组(CON组)、无镁诱导组(AE组)、AE+对照腺病毒组(AE+r Ad组)、AE+sh RNA腺病毒组(AE+r Ad-Miro1-sh RNA组)。CON组及AE组分别用正常细胞外液和无镁细胞外液作用3 h后,更换为正常维持液。AE+r Ad组、AE+r Ad-Miro1-sh RNA组分别于无镁诱导48 h前转染对照腺病毒、靶向大鼠Miro1基因的sh RNA重组腺病毒真核表达质粒。各组分别于造模后24 h终止细胞培养。采用Western blot法检测细胞内Miro1、ND6蛋白的表达,免疫荧光法检测细胞内ND6蛋白的表达,比色法测定丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)的蛋白浓度。结果与CON组比较,AE组、AE+r Adv组大鼠海马神经元Miro1表达明显升高,AE+r Ad-Miro1-sh RNA组大鼠海马神经元Miro1表达明显降低(均P0.05);AE组、AE+r Adv组、AE+r Ad-Miro1-sh RNA组大鼠海马神经元ND6表达及GSH蛋白浓度明显降低,MDA蛋白浓度明显升高(均P0.05)。AE+r Ad-Miro1-sh RNA组大鼠海马神经元Miro1、ND6表达及GSH蛋白浓度明显低于AE组和AE+r Adv组,MDA蛋白浓度明显高于AE组和AE+r Adv组(均P0.05)。结论线粒体衔接蛋白Miro1可能对无镁致痫海马神经元有保护作用。抑制线粒体Miro1蛋白表达后,ND6、GSH蛋白表达减少,MDA蛋白表达增加,加重线粒体氧化应激损伤。     

脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制真核表达载体构建及最佳短发夹样RNA分子筛选

目的构建并筛选大鼠胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）表达抑制短发夹样RNA（shRNA）真核表达载体。方法针对GFAP基因全编码序列设计并合成三对9bp茎环结构、19bp干扰序列特异性shRNA模板，体外定向克隆构建特异性重组质粒真核表达载体；通过体外大鼠脊髓源星形胶质细胞GFAP表达抑制模型，脂质体介导RNA干扰分子转染，实时荧光定量RT—PCR及Wesem blot技术观察RNA干扰后原代星形胶质细胞GFAP表达抑制效果．筛选最佳GFAP表达干扰抑制真核表达载体。结果序列测定证实GFAP—shRNA重组质粒真核表达载体构建成功，三对shRNA模板在mRNA及蛋白表达水平抑制靶基因表达效率分别为81％、63％、56％。结论高效率的GFAP—shRNA真核表达载体在大鼠原代星形胶质细胞GFAP表达抑制模型中能高效抑制GFAP基因表达，为后续多靶点RNA干扰技术在脊髓损伤胶质瘢痕抑制基因治疗中的应用奠定了前期基础。     

红藻氨酸诱发大鼠复杂部分性癫痫发作的海马神经元和星形胶质细胞反应及相互关系

目的：观察大鼠癫痫发作后海鸟内神经元与星形胶质细胞反应变化的时空效应及相互关系。方法：以红藻氨酸诱发的大鼠复杂部分性癫痂发作为模型，利用免疫组织化学法，在原位显示癫痫发作后15、30、60、90、120、180min6个时间点海马神经元Fos蛋白及星形胶质细胞内胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达变化、相互关系及分布规律。结果：致痫后15min海马内GFAP表达开始增多，60min达高峰。Fos阳性神经元在癞痴诱发后30min开始出现，120min达高峰。海马内GFAP阳性细胞与Fos阳性神经元分布规律基本一致。结论：在癫痫病理状态下，海马内星形胶质细胞的反应略早于神经元，两者之间分布呈平行关系，它们之间可能存在着复杂的信息通讯，以复合体的形式其同对各种病理生理刺激作出反应。