药物防护电磁脉冲所致海马神经元损伤的可能性

背景：电磁脉冲照射可引起实验大鼠学习记忆能力下降，并可造成离体海马神经元的胞内钙超载，进而发生坏死和凋亡，物理屏蔽可减轻电磁辐射对实验动物的损伤，但缺乏在细胞模型上进行的药物防护研究。 目的：观察药物防护电磁脉冲致离体海马神经元损伤的可能性。 设计：随机对照动物实验。 单位：承德医学院基础部。材料：实验于2004—01／2005-01分别在军事医学科学院和承德医学院完成。实验动物选用Wistar乳鼠若干只。 方法：断头取脑分离海马组织，进行海马神经元原代培养与鉴定，原代培养的海马神经元经MK801（N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂）和尼非地平（L型钙离子通道阻断剂）预处理后进行电磁脉冲照射。电磁脉冲照射条件为6&;#215;10^4V／m，脉冲上升时间20ns，脉宽30μs，频率2．5脉冲／min，作用2min。将培养在特殊培养皿的细胞分为正常对照组、电磁脉冲照射组、MK801 20μmol／L组和MK80 120μmol／L＋尼非地平1μmol／L组。采用MTT法对细胞活力进行测定；FACS法检测细胞凋亡率；Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca^2＋]i。 主要观察指标：各组细胞内钙超载、细胞活力、细胞调亡的情况比较。 结果：①电磁脉冲组在照射后即刻的[Ca^2＋]i荧光强度显著高于正常对照组，差异有显著性意义[（107．34&;#177;26．14），（54．93&;#177;16．08），P〈0．051；MK80 120μmol／L组比电磁脉冲照射组的[Ca^2＋]i荧光强度有所下降（81．29&;#177;19．96，P〈0．05），而MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol/L组的[Ca^2＋]i荧光强度呈进一步下降趋势（69．82&;#177;25．54，P〈0．05）。但两个给药组的[Ca^2＋]i荧光强度仍高于正常对照（P〈0．05）。②MK801 20μmol／L组和MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol／L组反映细胞增殖活力的吸光度值分别为0．25&;#177;0．06和0．27&;#177;0．07，明显高于电磁脉冲照射组（0．17&;#177;0．08，P〈0．05），但仍低于正常对照组（0．33&;#177;0．08，P〈0．05）。③电磁脉冲照射组在照后即刻的细胞凋亡率显著高于正常对照组，差异有显著性意义[（68．63&;#177;9．04）％，（20．14&;#177;4．34）％，P〈0．011；MK801 20μmol／L组比电磁脉冲照射组的细胞凋亡率有所下降（62．12&;#177;11．08）％。MK801 20μmol／L＋尼非地平1μmol／L组的细胞凋亡率呈进一步下降趋势[（53．69&;#177;13．60）％，P〈0．05）1，但两个给药组的细胞凋亡率仍高于正常对照组（P〈0．01）。 结论：MK801和尼非地平预处理可部分阻断电磁脉冲所致的海马神经元损伤；细胞内钙超载在电磁脉冲损伤机制中发挥重要作用。     

电磁脉冲对海马神经元的损伤及其对[Ca2+]i的影响

背景:电磁脉冲照射可影响实验大鼠的学习记忆功能,并造成大鼠海马组织损伤和超微结构改变。目的:观察电磁脉冲对离体培养的海马神经元的损伤效应及其对[Ca2 ]i的影响,以深入分析电磁脉冲致脑损伤的可能机制。设计:随机对照动物实验。单位:承德医学院病理教研室。材料:Wistar乳鼠若干只,雌雄各半。电磁脉冲辐射源:高场强电磁脉冲模拟源。方法:实验于2004-03/12分别在军事医学科学院和承德医学院完成。Wistar乳鼠若干只,麻醉下断头取脑,分离海马组织,调整细胞悬液浓度至5×108L-1接种。分组:①培养细胞分为对照组和照射组,于照射后即刻(0h)收集细胞进行形态学观察和胞内游离钙离子浓度测定;②另培养细胞分为对照组和照射后0h组和12h组,进行细胞凋亡和坏死率的测定。(培养细胞用量:每项检查每组1个培养瓶,重复3次。)电磁脉冲辐射条件为6×104V/m,脉冲上升时间为20ns,脉宽为30μs,频率为2.5脉冲/min,作用2min。原代培养的海马神经元经电磁脉冲辐射后,倒置相差显微镜下观察照射前后神经元形态学变化;FACS法检测细胞凋亡和坏死;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。主要观察指标:神经元形态学变化;细胞凋亡率和坏死率;胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。结果:①电磁脉冲辐射后即刻,神经细胞逐渐发生液化,神经元突起回缩、变性。②电磁脉冲辐射后12h凋亡率较辐射后即刻有所恢复,但与对照组相比均显著增加[(59.27±1.27)%,(72.17±6.21)%,(17.45±5.63)%,P<0.05]。③在辐射后即刻和12h坏死率比对照组升高,但差异无统计学意义[(13.71±2.31)%,(11.96±1.04)%,(8.45±0.67)%,P>0.05]。④电磁脉冲辐射后即刻[Ca2 ]i荧光强度显著高于对照组(107.34±26.14,54.93±16.08,P<0.05)。结论:电磁脉冲致海马神经元形态学损伤、坏死与凋亡率增加,神经元内的Ca2 荧光强度明显增加。     

川芎嗪对原代培养大鼠海马神经元L型钙通道电流和胞浆内钙浓度的影响

目的研究川芎嗪(TMP)对海马神经元细胞膜L型钙通道电流(Ica.L)作用和对神经细胞内钙([Ca2 ]i)的影响.方法取新生24h内大鼠进行原代海马神经元培养,使用全细胞膜片钳技术联合激光扫描共聚焦显微镜观察TMP对神经元Ica.L和[Ca2 ]i的影响.结果①膜片钳证实, 10、30、100 μmol/L的TMP组能显著抑制Ica.L峰值,分别与对照组的(454.2±31.4)pA比较降至(276.4± 17.1、209.3±14.2和(135.8±16.0 pA,P＜0.05),使I-V曲线上移,且具有浓度依赖性,但对最大激活电位无明显影响.②激光扫描共聚焦显微镜测量发现,细胞外液有钙液时,10、30和100μmol/L TMP组能显著抑制60 mmol/L的KCL引起的细胞内钙荧光峰值(Fi)增加,与对照组的(1749.4±61.0)比较降至(1227.1±36.2、998.2±23.9和745.9±20.6,P＜0.05);在细胞外液无钙时,30 μmol/L TMP组也能显著抑制60 mmol/L KCL引起的[Ca2 ]i)库释放,与对照组(965.3±82.5)比较降至(789.6±75.6,P＜0.05).结论TMP具有对海马神经元钙通道Ica.L和[Ca2 ]i库释放的双重抑制作用,使[Ca2 ]i水平降低,这可能是其神经保护机制原因之一.     

电磁脉冲对海马神经元的损伤效应及其对［Ca2+］i的影响

目的观察电磁脉冲(EMP)对海马神经元的损伤效应及其对[Ca2+]i的影响,以深入探讨EMP致脑损伤的机制. 方法 EMP辐射条件为6×104V/m,脉冲上升时间为20 ns,脉宽为30 μs,频率为2.5脉冲/min,作用2 min.原代培养的海马神经元经EMP辐射后,采用MTT法对细胞活力进行测定;FACS法检测细胞凋亡和坏死;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度,即[Ca2+]i. 结果细胞被EMP辐射后0～6 h活力明显下降(P<0.05),12 h开始回升,24 h基本接近正常水平;EMP辐射后0～12 h细胞凋亡率显著升高,坏死也有增加;EMP辐射后即刻引起神经元内的Ca2+荧光强度明显增加. 结论 EMP致海马神经元活力下降、凋亡增加、胞内钙超载.     

L型钙通道在"李氏方"水提液保护神经元过程中的作用及该水提液最佳剂量

目的:观察L型钙通道在“李氏方”保护神经元中的作用,并找出“李氏方”水提液最佳作用剂量。方法:实验于2004-09/2005-08在南方医科大学神经生物学教研室完成。①用MTT法观察不同质量浓度0(对照组),0.0625,0.125,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0g/L“李氏方”(主要成分有龟甲、地龙、石菖蒲、当归及酸枣仁等)水提液分别作用正常条件下培养了9d的新生大鼠海马神经元24h的细胞成活率;用Hoechst33258荧光染料标记凋亡的细胞,镜下数三四个视野的总细胞及凋亡细胞数,计算细胞凋亡率(凋亡细胞数占细胞总数的百分比)。②借助于共聚焦显微镜和钙荧光指示剂Fluo-3/AM,在海马神经元细胞培养至第8天加处理因素[单纯加入5μmol/L的L型钙通道阻断剂尼氟的平;单纯加入不同质量浓度的“李氏方”水提液及尼氟的平(5μmol/L) 不同质量浓度“李氏方”水提液共同作用]继续培养24h用于实验和细胞培养至第9天观察干扰因素的急性作用。用钙成像技术测定培养的神经元胞浆的荧光值(用30mmol/L的氯化钾诱导细胞内钙的变化)及钙浓度。③借助于膜片钳全细胞记录技术,观察“李氏方”水提液对L型钙电流的影响。④计量资料差异性比较采用方差分析中的LSD和SNK分析。结果:①0.0625～2g/L的质量浓度范围“李氏方”水提液明显提高正常培养下的海马神经元的成活率,浓度为0.5g/L细胞成活率增加最大。经5μmol/L的尼氟的平预处理后,“李氏方”水提液增加神经元成活率的效应明显降低。②“李氏方”水提液明显增加L型钙电流,经尼氟的平预处理后,“李氏方”水提液增加L型钙电流的效应显著降低。③正常培养条件下的海马神经元胞浆游离钙浓度在(75.67±8.65)nmol/L(对照组)。“李氏方”水提液作用24h后,细胞内游离钙浓度提高到(126.35±9.35)nmol/L,明显高于正常培养条件下的(P<0.05)。经尼氟的平作用24h,游离钙降到(40.65±5.65)nmol/L,明显低于正常培养条件下的(P<0.05)。“李氏方”水提液与尼氟的平共同作用24h后,细胞游离钙浓度降到(90.75±10.15)nmol/L,明显低于单纯“李氏方”水提液作用(P<0.05)。④对正常培养的细胞负载Fluo-3/AM45min后,加尼氟的平预处理10min,30mmol/L的KCl导致的荧光强度比尼氟的平预处理前明显降低,而“李氏方”水提液预处理10min,30mmol/L的KCl导致的荧光强度比“李氏方”水提液预处理前明显升高。尼氟的平预处理10min后,“李氏方”水提液再预处理10min,30mmol/L的KCl导致的荧光强度比“李氏方”水提液预处理的降低,与单纯“李氏方”水提液预处理比较,差异明显(P<0.05)。结论:“李氏方”水提液可通过增加L型钙通道活动,导致胞浆游离钙增加而促神经元的成活,且效果最佳的浓度为0.5g/L。     

丙泊酚联合利血平对再灌注损伤PC12细胞保护作用的研究

目的 观察丙泊酚与利血平单用或合用对缺血/缺氧及再灌注致中枢神经元细胞损伤的保护作用及其可能机制.方法 用大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆化细胞株(PC12细胞)建立缺血/缺氧及再灌注损伤的细胞模型.实验分为缺血/缺氧及再灌注损伤(IR)组、丙泊酚(P)组、利血平(R)组、丙泊酚与利血平合用(PR)组.通过测定乳酸脱氢酶(LDH)含量及应用噻唑蓝(MTT)比色法测定存活细胞在波长570 nm处的吸光度(A)值用以判断细胞损伤程度,并观察两药单独或合用对损伤PC12细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]I)的影响.结果 与IR组比较,丙泊酚和利血平单用或联用组均可使LDH释放量明显降低,A值升高(P<0.05或P<0.01).合用利血平(40μmol/L)后,不同浓度丙泊酚(12.4、37.3和112.0μmol/L)组LDH释放量进一步降低,A值则增高(P均<0.05).12.4μmol/L和37.3μmol/L丙泊酚以及40μmol/L利血平均可减轻由于缺血/缺氧及再灌注损伤引起的细胞内钙超载[(279.66±18.00)nmol/L比(219.41±12.53)nmol/L,(279.66±18.00)nmol/L比(210.50±11.03)nmol/L,(279.66±18.00)nmol/L比(254.82±10.45)nmol/L,P<0.05或P<0.01];12.4/μmol/L和37.3μmol/L丙泊酚分别与40μmol/L利血平合用时,[Ca2+]I进一步降至(1 91.19±10.36)nmol/L和(183.82±9.83)nmol/L,与相同浓度丙泊酚组比较差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 丙泊酚和利血平均对缺血/缺氧及再灌注损伤PC12细胞产生一定的保护作用,合用时保护作用更明显;其保护作用可能与减轻细胞内钙超载有关.     

酪氨酸激酶和磷酸酶及蛋白激酶C在As2O3调控NB4细胞和皮层神经元凋亡中的作用

目的　研究蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶及蛋白激酶C(PKC)在三氧化二砷 (As2O3 )调控白血病细胞和人脑皮层神经元凋亡中的作用 ,观察As2 O3 对人脑皮层神经元和白血病细胞的胞浆游离钙 ([Ca2 ]i)浓度的影响。方法　用Fluo 3/AM荧光探针标记人白血病细胞和人脑皮层神经元[Ca2 ]i,激光共聚焦显微镜实时测定不同浓度As2 O3 干预后 [Ca2 ]i的变化并观察蛋白酪氨酸激酶和磷酸酶抑制剂对 [Ca2 ]i变化的影响。磷基转移法测定细胞膜和胞浆的PKC活性。琼脂糖凝胶电泳法观察细胞DNA的片段化。结果　 1μmol /L的As2 O3 使NB4细胞的 [Ca2 ]i明显增高 ,而对人脑皮层神经元 [Ca2 ]i影响不明显。 2 μmol /L以上的As2 O3 引起两种细胞 [Ca2 ]i增高 ,此作用被磷酸酶抑制剂钒酸盐呈浓度依赖性促进 ,被蛋白酪氨酸激酶抑制剂金雀异黄素呈浓度依赖性抑制 ,2 ,5 ,10μmol/L钒酸盐作用 2 4 0s时NB4细胞的 [Ca2 ]i总增加率分别为 (6 .5± 2 .3) % ,(2 1.7± 2 .1) %和 (4 9.2± 2 .5 ) % ;人脑皮层神经元为 (6 .7± 2 .1) % ,(19.4± 2 .5 ) %和 (5 2 .3± 2 .7) % ;2 ,5 ,10 μmol/L金雀异黄素作用 2 4 0s时NB4细胞的总抑制率分别为 (6 .7± 2 .9) % ,(2 5 .6± 2 .5 ) %和 (5 2 .2± 3.5 ) % ;人脑皮层     

如何建立成年大鼠心肌细胞钙超载模型

目的探讨建立成年大鼠心肌细胞钙超载模型的方法。方法Langendorff灌流,分离钙耐受成年大鼠心肌细胞,采用不同浓度钙离子导入剂-伊屋诺霉素(ionomycin)作用心肌细胞1小时,用荧光分光光度计测定心肌细胞内的游离钙浓度。结果1.分离的活性心肌细胞比率约70~80%,杆状、横纹清晰。2.实验组1(iono-mycin0.5μmol/L)心肌细胞[Ca2 ]1明显高于对照组(282.07±25.19vs115±21.21nmol/L,P<0.05);实验组2(ionomycin1.0μmol/L)心肌细胞[Ca2 ]1(376.35±29.44)显著高于正常对照组(P<0.05)。结论通过本方法可以建立成年大鼠心肌细胞钙超载模型。     

布地奈德对沙丁胺醇抑制平滑肌内游离钙浓度升高快速影响

目的观察布地奈德(Budesonide,BUD)对沙丁胺醇(Albuterol,ALB)抑制气道平滑肌细胞内游离钙(Ca2+[i])浓度升高的快速影响作用。方法取原代培养豚鼠气道平滑肌细胞,通过共聚焦显微镜下荧光强度检测,比较不同浓度BUD(1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L)与ALB联合作用10 min ALB抑制胞内Ca2+[i]释放和胞外Ca2+内流作用的快速影响,同时应用米非司酮(Mifepristone,RU486)及放线菌酮(Cycloheximide,CHX)作为阻断剂进行实验,排除上述反应中的基因组效应。结果组胺引起胞内Ca2+[i]释放实验中,阳性对照组、ALB对照组、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L及1×10-8mol/L BUD联合ALB组荧光强度峰值分别为89.6±27.1、63.6±23.4、44.3±18.0、51.9±22.8及59.2±22.8;外源性Ca2+内流实验中,阳性对照组、ALB对照组、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L及1×10-8mol/L BUD联合ALB组荧光强度峰值分别为77.3±23.1、56.4±18.7、40.1±14.9、47.0±20.8和53.7±23.5。此两组实验中,1×10-6mol/L和1×10-7mol/L BUD联合ALB组Ca2+[i]荧光强度峰值与ALB对照组比较差异具有统计学意义(P0.01或P0.05)。而在胞内Ca2+[i]释放及外源性Ca2+内流实验条件下,RU486组及CHX组Ca2+[i]荧光强度峰值与1×10-6mol/L BUD联合ALB组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论哮喘急性发作时,联合应用BUD能够增强ALB减轻细胞收缩强度的作用,快速改善气道痉挛症状,且此作用不能被糖皮质激素受体拮抗剂和蛋白合成抑制剂所阻断。     

盐酸氟桂嗪对同型半胱氨酸诱导的正常人脐静脉内皮细胞株胞内钙离子和细胞活性的影响

目的:观察盐酸氟桂嗪对同型半胱氨酸诱导的正常人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)胞质内钙离子浓度和细胞活性的影响。方法:实验于2005-02/08在西京医院神经内科实验室完成。①分组:将ECV-304分为3组,正常对照组仅予空白RPMI-1640培养基培养;同型半胱氨酸组分别加入终浓度为100,200,500,1000μmol/L的同型半胱氨酸培养;盐酸氟桂嗪组加入终浓度为10μmol/L盐酸氟桂嗪及终浓度分别为100,200,500,1000μmol/L的同型半胱氨酸共培养。②细胞活性检测:用四唑盐法检测,各组细胞加入不同浓度药物培养24h后,测定各孔吸光度值A。③细胞质中[Ca2 ]i的测定:各组细胞加入不同浓度药物培养20min后,利用Ca2 指示剂Flu-3AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的细胞,共聚焦技术检测细胞内荧光强度的变化。结果:①同型半胱氨酸浓度为200,500,1000μmol/L时各组的反映细胞活性A值低于对照组(0.156±0.009,0.148±0.010,0.134±0.007,0.177±0.011,P<0.01),也低于含同浓度同型半胱氨酸的盐酸氟桂嗪组(0.168±0.011,0.160±0.009,0.148±0.007,P<0.05,0.01)。且随着同型半胱氨酸浓度的增加,A值逐渐降低。②在同型半胱氨酸组中,随同型半胱氨酸浓度增加反映细胞质中[Ca2 ]I的平均荧光强度也逐渐增强。同型半胱氨酸各浓度组平均荧光强度均高于对照组(P<0.01);也高于含相同浓度同型半胱氨酸的盐酸氟桂嗪组(P<0.01)。结论:①同型半胱氨酸对血管内皮细胞有损伤作用,其作用与胞内钙离子浓度升高密切相关。②盐酸氟桂嗪能减轻同型半胱氨酸所诱导的细胞损伤,可能与其直接抑制由同型半胱氨酸所诱导的Ca2 的内流,减轻细胞质钙超载有关。     

离体海马脑片CA1区锥体细胞缺氧期间电生理指标变化与N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂MK801干预后的变化

背景海马CA1区锥体细胞是对缺血缺氧性损伤最为敏感的神经元,缺血缺氧后海马CA1区锥体细胞膜电位表现为缺氧早期细胞膜的超极化,随着缺氧时间的延长,细胞膜发生缓慢去极化及快速去极化,引起神经元不可逆性损伤.目的应用细胞内记录技术,观察N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂MK801对离体海马脑片CA1区锥体细胞缺氧期间电生理指标的变化.设计观察对比实验.单位解放军第九七医院,徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室,Healthy-Science Center,State University of New York.材料实验于2002-09/2003-02在美国纽约州立大学医学中心完成.选择成年雄性SD大鼠5只,预吸纯氧3 min后以体积分数为0.02的异氟醚麻醉,快速断头取脑,制备离体海马脑片.方法大鼠海马脑片随机分为单纯缺氧组和MK801组,每组10个.单纯缺氧组海马脑片给予10 min缺氧;而MK801组的海马脑片在缺氧前10 min及10 min的缺氧期间分别应用100 μmol/L的MK801.所有脑片均给予60 min的复氧.应用细胞内记录技术记录海马CA1区神经元缓慢去极化及快速去极化的时间、快速去极化的幅度.在复氧末,应用细胞内注入电流及经Schaffer通路刺激,观察神经元对刺激的反应.主要观察指标①两组海马CA1区锥体神经元缓慢去极化速率.②两组海马CA1区神经元的快速去极化时间.③两组海马CA1区神经元的快速去极化幅度.④MK801对海马CA1区神经元功能恢复的影响.结果①海马CA1区锥体神经元缓慢去极化速率单纯缺氧组显著高于MK801组[(0.20±0.05)mV/s,(0.08±0.03)mV/s,(P＜0.05)].②海马CA1区神经元的快速去极化时间MK801组显著高于单纯缺氧组[(537±139)s,(261±26)s,(P＜0.05)].③海马CA1区神经元的快速去极化的幅度MK801组显著小于单纯缺氧组[(4±13)mV,(53±7)mV,(P＜0.05).④在复氧末期,MK801组的10个神经元中,9个神经元恢复对刺激的反应.结论N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂MK801可以显著降低缺氧引起的神经元缓慢去极化速率,延缓神经元快速去极化的发生及降低快速去极化的幅度,说明N-甲基-D-天冬氨酸受体阻断剂可显著减轻神经元的缺氧性损伤,促进复氧后神经元功能的恢复.     

电磁脉冲对大鼠脑海马N-甲基-D-天冬氨酸受体活性的影响

背景电磁脉冲是一种高能非电离辐射,它涵盖的频谱极宽,对电子仪器具有极强的破坏力,并具有一定的生物损伤效应.本课题组前期实验发现,电磁脉冲可造成实验大鼠学习记忆能力的显著下降,并且影响其海马长时程增强效应的形成.目的观察电磁脉冲照射对大鼠海马组织中氨基酸类神经递质含量和N-甲基-D-天冬氨酸受体的影响.设计随机对照的实验,方差分析.单位军事医学科学院放射与辐射医学研究所.材料实验于2004-01/03在军事医学科学院放射与辐射医学研究所完成.实验选用雄性Wistar大鼠32只,随机分为电磁脉冲组26只和对照组6只.方法电磁脉冲组大鼠经电磁脉冲照射(6×104V/m,脉冲上升时间20ns,脉宽30μs,频率2.5脉冲/min,作用2 min)后即刻,3,6,24,48 h麻醉状态下断头取脑,剥离海马;用高效液相色谱法测定氨基酸含量,并以3H标记的谷氨酸为配基进行放射性配基-受体结合实验.对照组麻醉处死前不做任何处理.主要观察指标①各组大鼠海马组织兴奋性氨基酸和抑制性氨基酸含量的变化.②各组大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体的最大结合量和平衡解离常数的变化.结果32只大鼠全部进入结果分析.①电磁脉冲照射后即刻、3 h、6 h可见天冬氨酸的含量显著升高[峰值(17.25±1.63)μmol/L],明显高于对照组[(10.56±1.5)μmol/L,P＜0.05],谷氨酸含量也于上述3个时间点升高[峰值(13.67±0.95)μmol/L],显著高于对照组[(6.94±1.1)μmol/L,P＜0.05],两者含量均于照射后24 h渐趋恢复,48 h接近正常水平.3抑制性氨基酸(甘氨酸、牛磺酸、γ-氨基丁酸)的含量也于电磁脉冲照射后不同时间点升高,并于48 h恢复.谷氨酸/γ-氨基丁酸比值于照后即刻明显升高(P＜0.05),照后24 h明显下降,48 h恢复至接近对照组.②电磁脉冲照射后即刻大鼠海马中N-甲基-D-天冬氨酸受体的平衡解离常数开始下降,照后3 h下降最显著(P＜0.05),6 h渐有恢复,48 h恢复至正常水平;受照大鼠海马中N-甲基-D-天冬氨酸受体的最大结合量于照后3 h和6 h显著下降(P＜0.05),24 h渐有恢复,照后48 h明显升高,超过正常组水平(P＜0.05).结论电磁脉冲照射导致大鼠海马组织中兴奋性氨基酸含量及谷氨酸/γ-氨基丁酸比值升高;同时N-甲基-D-天冬氨酸受体的亲和力升高及受体密度下降.提示实验动物认知障碍可能与兴奋性氨基酸的过度释放和N-甲基-D-天冬氨酸受体功能改变有关.     

氯沙坦对原发性高血压伴高尿酸血症患者血清超敏C反应蛋白和尿酸浓度的影响

目的 探讨氯沙坦对原发性高血压伴高尿酸血症（HUA）患者血清超敏C反应蛋白（hsCRP）和尿酸（UA）的影响及其安全性.方法 将80例高血压伴HUA患者随机分为氯沙坦组（40例）和硝苯地平组（40例）,每组分别给予氯沙坦50 mg/d、硝苯地平控释片30 mg/d口服,连续治疗6个月,检测用药前、后血清hs-CRP、UA、肝肾功能、血肌酸磷酸激酶（CK）浓度及血压的变化.结果 与治疗前比较,治疗6个月后氯沙坦组与硝苯地平组的收缩压（SBP）、舒张压（DBP）均显著降低[氯沙坦组收缩压由（158.5±13.2） mmHg降至（136.7±9.4） mmHg,t=3.50,P＜ 0.01;舒张压由（95.6±8.4） mmHg降至（83.3±6.4） mmHg,t=3.49,P＜ 0.01;硝苯地平组收缩压：（157.7 ±13.9） mmHg降至（134.6±8.2）mmHg,t=3.53,P＜ 0.01;舒张压：（96.1 ±8.9）mmHg降至（81.2 ±6.8）mmHg,t=3.56,P＜ 0.01],但组间比较差异无统计学意义.氯沙坦组的血清hs-CRP、UA浓度较用药前明显下降,差异均有统计学意义[氯沙坦组hs-CRP：（5.68±1.53） mg/L降至（3.52±0.57） mg/L,t=3.82,P＜ 0.01;UA：（502 ±45）μmol/L降至（450 ±38） μmol/L,t=3.48,P＜0.01];而硝苯地平组血清hs-CRP、UA浓度较用药前无明显变化[血清hs-CRP：（5.61±1.64） mg/L降至（5.33±1.48） mg/L,t=1.34,P＞ 0.05;UA：（499 ±43）μmol/L降至（489 ±42） μmol/L,t=0.68,P＞ 0.05].氯沙坦组患者服药前后肝肾功能、CK的变化均无显著差异,未发生严重不良事件.结论 氯沙坦能降低原发性高血压伴HUA患者的血清hs-CRP、UA浓度,治疗期间无严重不良反应,安全性良好.     

慢性应激对大鼠海马长时程增强和氨基酸神经递质的影响

背景:严重或持久的应激是很多身心疾病的诱发因素,明显损害机体的认知功能。目的:观察应激状态下海马氨基酸的变化及慢性应激对大鼠海马长时程增强的影响。设计:完全随机对照动物实验。单位:汕头大学精神卫生中心。材料:实验于2000-12在汕头大学医学院完成。实验动物为SD成年雄性大鼠16只,随机分为对照组和应激组,每组8只。方法:应激组强迫游泳4周建立慢性应激模型,采用离体海马脑片(500μm)结合电生理的方法观测海马CA1区长时程增强的变化。在海马CA3区Schaffer侧支施加高频刺激后,观察CA1区锥体神经元群体峰电位幅值和场兴奋性突触后电位斜率的改变。应用高效液相色谱紫外检测法对海马氨基酸神经递质进行定量分析。主要观察指标:①以群体峰电位的幅值和场兴奋性突触后电位的斜率作为观察长时程增强变化的指标。②海马氨基酸含量变化。结果:实验第2周应激组大鼠溺水死亡1只,给予补充,其余全部进入结果分析。①对照组的群体峰电位幅值和场兴奋性突触后电位斜率在高频刺激后增大的幅度明显高于应激组(P<0.05)。②对照组天冬氨酸和谷氨酸的水平明显低于应激组,[(2.425±0.211),(4.746±0.609)μmol/g,P<0.01];[(6.016±0.677)(8.094±1.035)μmol/g,P<0.01],而两组间γ-氨基丁酸的含量接近,差异无显著性[(4.229±0.449),(4.249±0.463)μmol/g,P>0.05]。结论:慢性应激抑制海马CA1区长时程增强的形成,提高海马组织天冬氨酸和谷氨酸的水平,而对γ-氨基丁酸的含量没有影响。慢性应激所引起的海马兴奋性氨基酸的堆积可能是学习和记忆能力损害的神经生化基础。     

创伤修复期间参附注射液对肠黏膜的保护作用

背景创伤修复期间胃肠道存在再灌注损伤和灌注不全,引起肠黏膜损伤.目的观察人用等效剂量参附注射液对创伤修复期间家兔肠pH、肠黏膜一氧化氮、丙二醛、Ca2+含量、血清双胺氧化酶的影响.设计以实验动物为观察对象的随机对照实验.单位武汉大学人民医院麻醉科.材料实验于2003-08/10在武汉大学人民医院麻醉学研究室完成,选择健康家兔24只随机分为3组参附注射液治疗组、单纯创伤修复组和对照组,每组8只.干预措施通过股动脉放血[2 mL/(kg·min)],平均动脉压降至40mmHg并持续60 min,回输自体血及等量平衡盐液制备兔创伤修复模型;参附注射液组于回输自体血同时先静注参附注射液2.1 mL/kg,随后持续注入参附注射液5 mL/(kg·h).主要观察指标分别于实验前,创伤修复1 h,及再灌注1,3 h检测乙状结肠黏膜内pH、肠黏膜一氧化氮、丙二醛及钙含量、血清双胺氧化酶活性.结果24只家兔均进入结果分析.①参附注射液治疗组再灌注1,3 h肠黏膜pH为7.171±0.102,7.194±0.106,高于单纯创伤修复组(6.920±0.155,6.971±0.165,P＜0.05,P＜0.01)及对照组(7.329±0.038,7.322±0.101,P＜0.05).②参附注射液治疗组再灌注1,3 h血清双胺氧化酶为(35.090±1.184),(32.440±2.884)μkat/L,显著高于单纯创伤修复组[(50.994±2.684),(52.377±1.217)μkat/L,P＜0.01]及对照组[(15.970±1.734),(16.620±0.767)μkat/L,P＜0.05].③再灌注3 h肠黏膜一氧化氮、丙二醛含量参附注射液治疗组均显著低于单纯创伤修复组[(61.8±5.3,72.2±5.8)μmol/g,(68.2±4.9,96.9±8.5)μmol/L,P＜0.05].再灌注3 h肠黏膜Ca2+含量参附注射液治疗组为(2.43±0.27)μnol/L,低于单纯创伤修复组[(2.93±0.34)μmol/L,P＜0.05],高于对照组[(2.26±0.31)μnol/L,(P＜0.05)].结论给予家兔人用等效剂量的参附注射液,增加了肠黏膜灌注及氧合作用,抑制了肠黏膜一氧化氮活性和清除氧自由基及减轻钙超载,对创伤修复期间肠黏膜具有良好的保护作用.     

中药川芎、当归有效成分对缺氧后复氧大鼠海马神经元钠、钾电流的作用

背景:中药红景天、人参、当归的有效成分具有抗缺氧损伤的作用。目的:从细胞电生理角度观察中药芎归滴丸对脑海马神经元的保护作用。设计:以细胞为观察对象,自身对照观察。单位:解放军第八十八医院和解放军军事医学科学院。材料:实验于2002-03/08在解放军军事医学科学院毒物药物研究所完成。选择新生清洁级Wistar大鼠1只,取其海马,将其分离培养成海马神经元细胞,然后选取9例海马神经元细胞,将其放入3个培养皿中培养,每个培养皿中3例神经元细胞,将其分为缺氧-复氧前后(对照组)、芎归滴丸(由解放军第八十八医院制剂室提供,主要成分为川芎和当归的挥发油)1×10-6mol/L组和芎归滴丸10×10-6mol/L组。方法:缺氧-复氧前后组分为两个亚组(即缺氧-复氧前、缺氧-复氧后),均不进行药物干预;芎归滴丸1×10-6mol/L组分为两个亚组(即芎归滴丸1.0×10-6mol/L 不缺氧组、芎归滴丸1×10-6mol/L 缺氧组);芎归滴丸10×10-6mol/L组分为两个亚组(即芎归滴丸10×10-6mol/L 不缺氧组、芎归滴丸10×10-6mol/L 缺氧组)。采用膜片箝全细胞记录方法检测缺氧-复氧前后体外培养的大鼠海马神经元的电压门控性Na 、K 电流。主要观察指标:体外培养的大鼠海马神经元的电压门控性Na 、K 电流幅度。结果:①海马神经元的电压门控性Na 电流幅度变化:缺氧-复氧后明显低于缺氧-复氧前犤(-3.8±1.0,-10.3±0.5)nA,t=3.49,P<0.01犦。②海马神经元的电压门控性K 电流幅度变化:缺氧-复氧后K 电流的激活阈值由-40mV变为-20mV,电流幅度变化差异无显著性意义。③芎归滴丸预处理后缺氧-复氧前后海马神经元的Na 、K 变化:缺氧-复氧前海马神经元ⅠNa、Ⅰk在阈值处的幅度很接近,差异无显著性意义。缺氧-复氧后芎归滴丸10×10-6mol/L组高于芎归滴丸1×10-6mol/L组和缺氧-复氧后犤(-58.5±1.9,-6.9±1.4,-3.8±1.0)nA,t=7.51,P<0.05犦。结论:芎归滴丸对海马神经元的缺氧损伤有抑制作用。     

血尿酸在不同类型冠心病发生中的作用机制

目的 探讨血尿酸在不同类型冠心病发生中的作用机制.方法 88例住院患者分为对照组、稳定型心绞痛(SA)组和急性冠状动脉综合征(ACS)组,分别测定其血尿酸、血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、血管性假性血友病因子(vWF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、血栓素B_2(TXB_2)、C-反应蛋白(CRP).结果 (1)①UA、CRP:ACS组[(392.10±68.57)μmol/L、(42.2±39.4)mg/L]和SA组[(370.50±58.80)μmoL/L、(18.9±17.1)mg/L]均高于对照组[(286.00±65.31)μmol/L、(2.5±0.7)mg/L,P均＜0.05];UA在ACS组、SA组差异无统计学意义(P＞0.05),ACS组CRP高于SA组(P＜0.05);②vWF、TXB_2:ACS组[(1.65±0.48)%、(19.73±18.66)ng/L]和SA组[(1.35±0.49)%、(11.18±10.71)ng/L]均高于对照组[(1.07±0.26)%、(6.46±5.41)ng/L,P均＜0.05],ACS组高于SA组(P均＜0.05);③GMP-140、PAI-1:ACS组[(13.04±0.99)μg/,L、(65.65±14.76)μg/L]和SA组[(12.55±0.74)μg/L、(62.69±12.24)μg/L]均高于对照组[(12.32±0.29)μg/L、(50.78±13.88)μg/L,P均＜0.05],ACS组与SA组间差异无统计学意义(P均＞0.05).④ACS组血尿酸升高者与血尿酸正常者CRP[(71.3±18.9)、(20.70±17.9)mg/L]、vWF[(1.08±0.52)%、(0.84±0.54)%]、GMP-140[(13.57±1.11)、(13.23±1.07)μg/L]、TXB_2[(57.26±47.84)、(26.70±23.83)ng/L]、PAI-1[(72.12±9.23)、(61.30±12.07)μg/L]差异均有统计学意义(t值分别为7.394、0.008、0.227、7.605、0.421,P均＜0.05),SA组血尿酸升高者与血尿酸正常者CRP[(31.1±18.9)、(10.9±10.1)mg/L]、TXB_2[(21.54±3.90)、(5.02±4.93)ng/L]差异均有统计学意义(t值分别为0.494、8.669,P均＜0.05).(2)Logistic逐步回归分析:与急性冠状动脉综合征相关的因素有UA、CRP、PAI-1、PT、TG(OR值分别为1.046、7.615、1.301、0.300和2.243,P均＜0.05).结论 血尿酸升高是影响冠心病发生、发展的重要危险因素.血尿酸升高可能通过损害血管内皮功能、激活血小板、影响凝血和纤溶功能、引发炎症反应参与不同类型冠心病的发生与发展.     

促肾上腺皮质激素释放激素对下丘脑神经元胞浆内环磷酸腺苷和Ca2+浓度的调节作用

背景:在应激反应中,下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的激活对下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素表达的增加起着关键的作用。然而关于通过何种途径调控下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素的神经内分泌活性,促肾上腺皮质激素释放激素能否激活下丘脑神经元,尚不十分清楚。目的:通过外源性促肾上腺皮质激素释放激素刺激培养下丘脑神经元,以观察细胞内环磷酸腺苷和胞浆内钙离子浓度的变化。设计:观察对比实验。单位:解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所,首都医科大学附属天坛医院神经外科。材料:实验于1999-12/2002-03在解放军第三军医大学大坪医院完成。取孕17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元。方法:用外源性促肾上腺皮质激素释放激素刺激培养下丘脑神经元,促肾上腺皮质激素释放激素1受体特异性拮抗剂CP-154526预先处理下丘脑神经元。将培养的细胞分组:①促肾上腺皮质激素释放激素(10-12,10-10,10-8,10-6mol/L)刺激组。②预先用CP-154526(500μmol/L)处理再用促肾上腺皮质激素释放激素(10-12,10-10,10-8,10-6mol/L)刺激组。③分别设置相应的正常对照组,正常对照组用等渗盐水刺激。用PTI荧光成像系统测量和分析外源性促肾上腺皮质激素释放激素对培养下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度变化,用放射免疫方法测定神经元内环磷酸腺苷含量。主要观察指标:①下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度。②下丘脑神经元内环磷酸腺苷含量。结果:正常对照组的下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度和环磷酸腺苷含量较低,外源性促肾上腺皮质激素释放激素刺激后,胞浆内游离钙浓度立即升高,神经元胞浆内环磷酸腺苷生成明显增加[(240±22),(153±11)nmol/L;(3.26±0.19),(0.44±0.02)pmol/dish,P<0.01];CP-154526可明显抑制促肾上腺皮质激素释放激素(10-6mol/L)刺激的下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度和环磷酸腺苷含量的生成[钙离子浓度:(240±22),(171±16)nmol/L;环磷酸腺苷含量:(3.26±0.19),(2.33±0.21)pmol/dish,P<0.01]。结论:促肾上腺皮质激素释放激素可通过与其1受体结合直接作用于下丘脑神经元,使神经元胞浆内游离钙浓度和环磷酸腺苷含量明显增加,在调节下丘脑神经元激活过程中下丘脑合成和分泌的促肾上腺皮质激素释放激素可能起了重要作用。     

APP17肽通过抑制细胞内ROS保护紫外线照射后人皮肤成纤维细胞(英文)

Objective Ultraviolet light (UV) is known to cause photoaging of skin.UV irradiation can damage proliferation capacity and induce collagenase in fibroblasts in the dermis.Many researchers have explored the potential photo-protective agents;however,no ideal agent has been widely accepted.Amyloid precursor protein 17-mer peptide (APP17-mer peptide),an active peptide segment,has been reported to be responsible for the trophic effect in clonal CNS neuronal line,fibroblast cell line and HaCat cells.The aim of this study was to explore the effects of APP17-mer peptide on cultured fibroblasts after ultraviolet irradiation.Methods Human skin fibroblasts were cultured in DMEM medium with or without APP17-mer peptide (concentrations ranging from 20μmol/L,40 μmol/L,to 80μmol/L).The cultured fibroblasts were exposed to a single UV irradiation,and the proliferation activity of fibroblasts was detected by a MTT assay.The expression of matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) mRNA was analyzed quantitatively following real-time RT-PCR.The generation of intracellular reactive oxygen species (ROS) was measured with fluorescent quantitation method.Results A single exposure to UV irradiation depressed proliferation activity of fibroblasts compared with sham-irradiated control (P<0.05).40μmol/L and 80μmol/L APP17-mer peptide increased the cellular proliferation activity in UV irradiated and unirradiated fibroblasts (P<0.05),however,20μmol/L did not show such protective effects (P>0.05).A single exposure of fibroblasts to UV irradiation resulted in 1.78 fold up-regulation of MMP-1 mRNA compared with unirradiated sample (P<0.05),and 40μmol/L and 80μmol/L APP17-mer peptide decreased the expression of MMP-1 mRNA (P<0.05 and P<0.01,respectively).UV irradiation increased generation of ROS in cultured fibroblasts (P<0.05).40μmol/L APP17-mer peptide inhibited the generation of ROS in irradiated fibroblasts.Conclusions APP17-mer peptide can enhance proliferation activity of fibroblasts after exposure to UV irradiation;it can also inhibit MMP-1 mRNA expression and ROS generation induced by UV irradiation.Inhibition of ROS generation after UV irradiation might be involved in the protective mechanism of APP17 peptide on proliferation activity and collagenase induction in UV-irradiated fibroblasts.