非诺贝特对溶血卵磷脂诱导的血管内皮细胞增生及凋亡的影响

目的:观察非诺贝特对溶血卵磷脂(LPC)诱导的血管内皮细胞增生、凋亡的影响并探讨其机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常对照组、LPC组、非诺贝特低浓度组(10μmol·L-1)、非诺贝特中浓度组(50μmol·L-1)及非诺贝特高浓度组(100μmol·L-1)。分别观测LPC对血管内皮细胞增生、凋亡及凋亡调控蛋白抑制X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的影响,及非诺贝特干预后的变化。结果:与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增生,促进内皮细胞凋亡,XIAP表达减弱。非诺贝特可干预LPC对内皮细胞的作用,使内皮细胞增生增强,凋亡减少,XIAP表达增强。结论:非诺贝特可通过促进XIAP表达干预LPC对HUVECs增生及凋亡的影响。     

miR-365靶向调控IRAK1促进脓毒症血管内皮细胞增殖和抑制细胞凋亡

目的 探讨微小RNA-365(miR-365)对脓毒症血管内皮细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),利用脂多糖(LPS)诱导HUVECs模拟炎性环境,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测miR-365、白细胞介素-1受体...     

马来酸噻吗洛尔对人脐静脉内皮细胞HUVEC的增殖、凋亡、成管的影响

目的探讨马来酸噻吗洛尔在治疗婴幼儿血管瘤的作用机制。方法培养HUVEC细胞,采用CCK-8检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,体外血管形成试验检测细胞成管情况,应用SPSS17. 0统计包进行数据分析。结果用CCK-8测定马来酸噻吗洛尔能抑制人脐静脉内皮细胞HUVEC的生长;使用Annexin V-FITC/PI双染色法结果表明马来酸噻吗洛尔对HUVEC细胞的凋亡成剂量依赖性抑制;采用体外血管形成试验,表明马来酸噻吗洛尔对HUVEC细胞的成管能力成剂量依赖性的抑制。结论马来酸噻吗洛尔可能通过对婴幼儿血管瘤肿瘤中内皮细胞增值和血管生成能力的抑制,同时诱导内皮细胞凋亡来实现治疗目的。     

卡托普利与黄芪注射液对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察卡托普利、黄芪注射液及两者合用对过氧化氢（H2O2）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）株凋亡的抑制作用,初步探讨其机制。方法将HUVEC分为11组：①正常对照组（Normal）;②H2O2模型组（Model）：细胞培养基中加入2.00 mmol•L 1H2O2孵育4 h;③卡托普利低、中、高浓度组：细胞培养基中加入0.5,5.0,50.0 μg•mL 1卡托普利预处理24 h,再加入2.00 mmol•L 1H2O2孵育;④黄芪注射液低、中、高浓度组：细胞培养基中加入0.1,1.0,10.0 mg•mL 1黄芪注射液预处理24 h,再加入2.00 mmol•L 1H2O2孵育;⑤两药合用低、中、高浓度组：细胞培养基同时加入具有上述3种终浓度卡托普利和黄芪注射液混合液预处理24 h,再加入2.00 mmol•L 1H2O2孵育。流式细胞术测定内皮细胞凋亡率,吖啶橙溴化乙啶荧光染色（AO EB染色）观察细胞凋亡形态,Western blotting检测Bcl 2表达。结果与H2O2模型组比较,正常对照组、卡托普利各浓度组和黄芪注射液中、高浓度组早期凋亡率明显降低（P＜0.05或P＜0.01）;正常对照组、卡托普利和黄芪注射液中、高浓度组总凋亡率均明显降低（P＜0.05或P＜0.01）, Bcl 2含量明显升高（P＜0.05或P＜0.01）。各浓度联合用药组与单独用药组比较,早期凋亡率、总凋亡率明显降低,Bcl 2含量明显升高,均差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）。结论不同浓度卡托普利、黄芪注射液及两药合用可降低H2O2诱导的HUVEC凋亡率,增强Bcl 2表达,且呈一定浓度依赖性。相同浓度两药联用作用优于单药组。     

高糖环境早期对血管内皮细胞的作用之商榷

目的:探讨高糖环境在48 h内对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的增殖以及粘附分子表达的影响,并观察在炎性刺激下高糖作用的改变。方法:用不同浓度的葡萄糖作用于HUVEC,用噻唑蓝法(MTT法)检测48 h内高糖对细胞增殖的影响。采用流式细胞术及细胞酶联免疫吸附法(cell ELISA)测定高糖作用下HUVEC表达的细胞间粘附分子(ICAM-1)的水平。脂多糖(LPS)与高糖联合刺激HUVEC后,比较其与只用LPS刺激情况下的ICAM-1的表达之间的差异。结果:25、45 mmol.L-1的葡萄糖在48 h内无抑制HUVEC增殖的作用,对其表达粘附分子的水平也无显著影响。但在LPS刺激条件下,高糖组HUVEC的增殖明显被抑制,ICAM-1水平也较正常糖浓度组显著增加。结论:在短期内高糖对HUVEC的增殖及粘附分子的表达无明显影响,而在炎症刺激存在下,高糖显著抑制其增殖、增加粘附分子的表达。     

普纳替尼对人血管内皮细胞功能的影响

目的 观察普纳替尼(Ponatinib)对人血管内皮细胞的增殖、迁移、血管形成及NO合成释放的影响, 从细胞水平评价Ponatinib血栓不良反应形成机制。方法 采用CCK-8法、体外划痕法、Matrigel基底膜成管法及NO检测试剂盒分别考察Ponatinib对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的细胞毒作用、迁移能力、血管形成能力及细胞NO释放水平的影响。结果 研究表明Ponatinib对HUVECs细胞半数抑制浓度(IC₅₀)为(0.69±0.05)μmol/L。非毒性剂量的Ponatinib能够不同程度抑制HUVECs细胞的迁移、血管形成及NO的释放(P<0.05)。结论 Ponatinib通过影响人血管内皮细胞增殖、迁移、血管形成等正常功能而造成血管内皮损伤, 可能为其诱发血栓的原因之一。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及对ICAM-1蛋白表达影响的研究

目的:研究乙醇体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡,及对细胞间黏附分子(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法:以不同浓度乙醇(50、100和200mmol/L)作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞24h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附法检测ICAM-1蛋白表达。结果:乙醇能抑制内皮细胞活力,促进细胞凋亡,增加ICAM-1表达,并呈浓度依赖性。结论:乙醇能诱导内皮细胞损伤,其机制可能与促进细胞凋亡、影响ICAM-1蛋白表达有关。     

栀子苷对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究栀子苷对体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(Hy-drogen peroxide,H2O2)建立体外培养的HUVEC细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为正常对照组、H2O2氧化损伤组、H2O2加栀子苷低、中、高剂量组,其中后3组给予栀子苷预培养24h后加入400μmol.L-1H2O2,然后继续培养12h。MTT法检测细胞存活率;检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮合酶(NOS)水平和培养液中一氧化氮(NO)水平;检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果栀子苷能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,提高细胞内SOD、GSH-Px、NOS活性,使培养液中NO含量增加,降低细胞内ROS水平,减少H2O2诱导的细胞凋亡率,恢复血管内皮细胞增殖。结论栀子苷具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻血管内皮细胞的氧化损伤。     

TLR9对巨噬细胞向M1型极化及M1型巨噬细胞条件培养基诱导内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨Toll样受体9(TLR9)对巨噬细胞向M1型极化及M1型巨噬细胞条件培养基诱导内皮细胞凋亡的影响.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人急性单核细胞白血病细胞(THP-1).THP-1细胞分为八组:A1组仅加入培养基培养;A2组用佛波酯(PMA)处理;A3组用PMA和脂多糖(LPS)处理,建立M1型巨...     

纤维蛋白诱导的自噬促进人脐静脉内皮细胞增殖与血管腔样结构形成

目的 探讨纤维蛋白诱导的自噬对内皮细胞增殖和血管腔样结构形成的作用.方法 MTT法观察在不同浓度和时间的纤维蛋白作用下,人脐静脉内皮细胞(HUVECs)形成血管腔样结构和细胞增殖的改变;采用RT-PCR检测不同浓度(1.5、3.0和6.0 mg/ml)和时间(6、12和24 h)的纤维蛋白作用下,微管相关蛋白1轻链3(MAP1 LC3)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达.用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)干预作用最显著的纤维蛋白浓度和时间,观察细胞增殖、血管形成和基因表达变化.结果 HUVECs在纤维蛋白作用下,可见管腔样结构形成,并呈浓度和时间依赖性;细胞增殖也较对照组明显增加.LC3和VEGF的表达均随着纤维蛋白浓度和时间的增加而增加.但在自噬抑制剂3-MA的作用下,细胞增殖降低,未见明显的新生血管形成;并且LC3、VEGF的mRNA表达也明显减少.结论 纤维蛋白激活自噬,参与了细胞增殖和血管新生的过程.     

Apoptosis of human umbilical vein endothelial cells induced by artesunate

Artesunate (ART), a semi-synthetic derivative of artemisinin isolated from the traditional Chinese herb Artemisia annua, is an effective novel antimalarial drug. The present study investigated the apoptotic activity of artesunate in cultured human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) by means of nuclear staining, DNA agarose gel electrophoresis, and flow cytometry. The observations also indicated that artesunate induced apoptosis of HUVEC in a concentration-dependent and time-dependent manner. A Western immunoblot analysis showed down-regulation of the bcl-2 protein and up-regulation of the bax protein in the artesunate-treated HUVEC. Ca2+ in cells was evaluated by fluorescent spectrophotometer using Fura 2-AM as probe. These results suggest that artesunate may be a potential apoptosis-inducing agent for endothelial cells.     

高糖对HUVEC功能的影响及机制研究

目的观察葡萄糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性功能的影响及机制研究。方法内皮细胞培养液体外培养HUVEC,用不同浓度(10、20、30、40、50mmol/L)的葡萄糖作用于HUVEC,用NO含量、eNOS活性检测、细胞凋亡测定和细胞内ROS检测方法,观察不同浓度葡萄糖作用后的HUVEC功能活性的影响。结果高糖对HUVEC的增殖活性具有剂量依赖性抑制作用。高糖剂量依赖性抑制HUVEC细胞eNOs活性、NO的产生,增强细胞凋亡和细胞内ROS的生成。结论葡萄糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性功能具有抑制作用,其机制与增强细胞凋亡和增加细胞内ROS有关。     

芍药内酯苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药内酯苷对高糖损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用及机制.方法 采用33mmol·L-1的高糖培养基建立HUVECs损伤模型,并在造模前给予不同浓度的芍药内酯苷进行预保护,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用试剂盒检测细胞中内源性一氧化氮合酶（eNOS）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）活性以及培养液中一氧化氮（NO）和乳酸脱氢酶（LDH）含量.结果 芍药内酯苷能够剂量依赖性增强细胞活力,降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（P＜0.05）,并能增强eNOS的活性和NO的释放量（P＜0.05）.结论 芍药内酯苷对高糖诱导的HUVEs损伤具有保护作用,其机制可能与促进eNOS活性提高、NO释放量增加和抑制Caspase-3活性有关.     

有机磷诱导HUVEC-12损伤的实验研究

目的观察有机磷农药敌百虫对人脐静脉内皮细胞（HUVEC-12）损伤的时相特征,探讨敌百虫诱导内皮细胞损伤的作用机制。方法将HUVEC-12与含不同浓度敌百虫的DMEM培养基孵24h后,MTT法检测细胞的活性;以IC50浓度的敌百虫处理细胞一定时间后（0、4、6、8、12、24、48h）,观察敌百虫诱导内皮细胞损伤的时相特征;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）浓度。结果敌百虫呈时间依赖性地促进内皮细胞凋亡及细胞上清液MDA产生。结论敌百虫刺激HUVEC-12氧化应激,致细胞损伤。     

微RNA-24对过氧化氢诱导的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的影响及作用机制

目的探讨微RNA-24(miR-24)对H2O2诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)存活、迁移和凋亡的影响及作用机制。方法通过转染miR-24高表达、miR-24抑制物(anti-miR-24)及其阴性对照慢病毒质粒(miR-24 NC)构建稳转细胞,3种细胞用H2O2500μmol·L^-1处理12 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,划痕实验检测细胞迁移率,Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24,Bax,Bcl-2和胱天蛋白酶3 mRNA表达水平,Western印迹法和免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与miR-24 NC组比,miR-24高表达组miR-24表达升高(P<0.05),而anti-miR-24组降低(P<0.05)。与正常对照组比,H2O2组细胞凋亡率增加(P<0.05)、细胞存活和迁移率降低(P<0.05),表明氧化损伤模型构建成功。与H2O2+miR-24 NC组比,H2O2+miR-24高表达组上述指标较H2O2+miR-24 NC组升高(P<0.05),促凋亡蛋白Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达量增加,抑凋亡蛋白Bcl-2 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而H2O2+anti-miR-24组可降低细胞凋亡率、增加细胞存活和迁移率,降低Bax和胱天蛋白酶3 mRNA与蛋白表达水平,增加Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。结论氧化应激状态下,miR-24可通过上调Bax、胱天蛋白3表达和下调Bcl-2蛋白表达,促进HUVEC凋亡和抑制其存活和迁移能力。     

乌司他丁对脂多糖诱发的单层人脐静脉内皮细胞高通透性的影响及其机制

目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱发的单层人脐静脉内皮细胞(HUVECs)高通透性的影响及其可能机制.方法 体外培养的单层 HUVECs被分为对照组、LPS组(LPS 1μg/ml刺激4 h)、乌司他丁复合LPS组(乌司他丁3000 U/ml孵育1 h+LPS 1μg/ml刺激4 h)和血管内皮钙黏蛋白单克隆抗体(VE-cadherin mAb)组(VE-cadherin mAb 50μg/ml孵育6 h+乌司他丁3000 U/ml孵育1 h+LPS 1μg/ml刺激4 h).采用双腔系统Transwell法检测单层 HUVECs的通透性 , Western blot法检测HUVECs中VE-cadherin的表达水平.结果 与对照组相比,LPS组单层HUVECs渗透性增高 ,VE-cadherin表达降低(P＜0 .01).与LPS组相比 ,乌司他丁复合LPS组单层HUVECs渗透性降低 ,VE-cadherin表达增高(P＜0 .01).与乌司他丁复合LPS组相比 ,VE-cadherin mAb组单层HUVECs渗透性增高 ,VE-cadherin表达降低(P＜0 .01).结论 乌司他丁预处理可改善LPS引起的单层HUVECs高通透性状况 ;其可能机制与VE-cadherin表达增多有关.     

Citreoviridin inhibits cell proliferation and enhances apoptosis of human umbilical vein endothelial cells

In some areas of China, citreoviridin (CIT) is considered one of the risk factors for development of cardiovascular disease (CVD). Apoptosis of endothelial cell may induce vascular endothelium injury and atherosclerosis, which result in CVD probably. In this study, we investigated the effect of CIT on apoptosis and proliferation of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). The MTT assay was used to determinate HUVECs proliferation. Distribution of the cell cycle was analyzed by flow cytometry. The Annexin-V/PI staining was used to investigate cell apoptosis. Western blotting analysis was used to indicate changes in the expression level of apoptosis-related proteins. The results indicated that CIT inhibited HUVECs proliferation and the cells were arrested at G0/G1 phase, which is associated with decreased levels of cyclinD1 and increased expression of p53 and p21. The apoptosis rate of HUVECs was improved by CIT. The expression of Bcl-2 were down-regulated after CIT treatment, whereas the levels of Bax was significantly up-regulated. Furthermore, CIT-induced apoptosis was accompanied by the activation of caspase-3, -9. These findings demonstrate that CIT inhibits cell proliferation via DNA synthesis reduction and induces caspase-dependent apoptosis in HUVECs. CIT plays a pivotal role in the process of endothelial cell apoptosis, may thereby play an important role in the improvement of CVD in areas of China that have a high prevalence of CIT contamination.     

辛伐他汀对脐静脉内皮细胞金属基质蛋白酶9表达的影响

目的观察辛伐他汀对脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）金属基质蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应及蛋白质免疫印迹分析检测MMP-9mRNA转录和蛋白水平表达,观察辛伐他汀不同浓度及不同孵育时间HUVECMMP-9表达的影响。结果辛伐他汀呈浓度和时间依赖性减低HU-VEC的MMP-9mRNA转录和蛋白水平的表达。结论辛伐他汀可抑制HUVE CMMP-9表达,防治动脉粥样硬化。