端粒酶hTRT基因在睾丸肿瘤组织中的表达及其意义

目的 研究端粒酶hTRT基因在睾丸肿瘤组织的表达及其意义。方法 应用核酸原位杂交技术对51例男性睾丸肿瘤组织和10例正常睾丸组织中端粒酶hTRT基因的表达进行检测和定位，并应用HRIAS－1000高清晰度图像处理对hTRT阳性信号进行图像分析。结果 端粒酶hTRT基因在睾丸肿瘤组织吸极高的表达，其阳性率为92．16％（47／51），端粒酶hTRT基因表达强度与肿瘤细胞的分化程度显著相关，睾丸良性肿瘤与睾丸恶性肿瘤间差异有显著性（P＜0．05）， 在睾丸肿瘤组织和癌旁组织及正常睾丸组织中的表达强度差异有非常显著性（P＜0．01），并且其强阳性表达水平与肿瘤细胞的分布定位一致。结论 端粒酶hTRT有可能成为睾丸肿瘤诊断的新标志物及治疗的新靶点。     

前列腺癌组织中端粒酶hTRT基因表达及意义

目的 探讨前列腺癌组织中端粒酶hTRT基因的表达及意义。方法 应用原位分子杂交技术,对47例前列腺癌（PCa)、21例良性前列腺增生（BPH）和10例正常前列醇（NP）组织中微粒酶hTRT基因进行检测和定位,并运用图像分析系统对hTRT表达水平与PCa分化程度的相关性进行研究。结果 端粒酶hTRT基因在PCa中表达阳性率为93．6％,表达强度与肿瘤细胞的分化程度显著相关：未分化腺癌＞低分化腺癌＞中分化腺癌＞高分化腺癌;癌旁组织中hTRT基因表达率为8．5％,在肿瘤组织和癌旁组强中差别有极显著性意义（P＜0．01）。端粒酶hTRT基因表达水平与肿瘤细胞的分布定位一致,NP组织及BPH组织中端粒酶hTRT基因表达均为阴性。结论 原位杂交检测端粒酶hTRT基因对PCa细胞水平的定位诊断具有重要意义,端粒酶hTRT有可能成为PCa诊断有新标志物及治疗新靶点。     

端粒酶活性及其结构基因在人脑胶质瘤中的表达

目的 研究分析端粒酶活性及相关结构基因在不同级别脑胶质瘤中的表达,探讨端粒酶与脑胶质瘤的相关性及其临床意义。方法 采集40例脑胶质瘤手术切除标本、4例正常脑组织,通过半定量端粒重复序列扩增（TRAP）－银染方法检测端粒酶活性水平;通过半定量逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）检测端粒酶相关结构基因hTR、TP1、hTRT的 mRNA表达水平,结果 在40例胶质瘤标本的33例（82.5%)中检测出端粒酶活性,而在正常脑组织中无端粒酶活性的表达,不同级别脑胶质瘤之间端粒酶活性水平差异有显著性,脑胶质瘤粒酶活性水平与hTRT基因的表达呈显著正相关,而与TP1、hTR 的表达无显著相关。结论 端粒酶活性可以作为脑胶质瘤的恶性标记之一,hTRT基因是一个端粒酶的正调控结构基因,hTRT的表达与细胞永生化和恶性肿瘤形成过程中的端粒酶的激活机制有关,hTR基因是端粒酶活性必须的组分,但不影响端粒酶活性的高低。     

膀胱癌组织中端粒酶活性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）为基础的端粒酶活性检测方法（ＴＲＡＰ法），对５例正常膀胱组织、４例膀胱炎症组织、４２例膀胱癌组织和癌旁正常组织进行检测。正常膀胱组织和膀胱炎症组织无端粒酶活性，膀胱癌组织端粒酶表达阳性率７６．２％，癌旁组织阳性率为２６．２％，端粒酶活化与膀胱癌分期分级呈正相关。结果提示：端粒酶活化与膀胱癌浸润发展密切相关，癌旁组织端粒酶活化提示肿瘤微浸润可能。     

重组端粒酶pEGFP-hTRT质粒的构建

目的 构建具有绿色荧光蛋白报道(GFP)基因的端粒酶真核质粒载体，为转染细胞、延长细胞寿命提供基础。方法 酶切含人端粒酶逆转录酶(hTRT)基因的pGRNl45质粒获取hTRT片段，插入经酶切及磷酸化处理的GFP载体pEGFP—C1，形成8．1kb质粒，经HindⅢ、NotI酶切电泳筛选、鉴定并测序。结果 经酶切电泳分析得到3．4kb及4．7kb大小的两片段；测序结果显示接头两端序列正确。结论 重组竭粒酶pEGFP—hTRT质粒的成功构建，可用于细胞转染，对进一步研究组织工程种子细胞的衰老问题具有重要意义。     

小肝癌与癌旁组织中端粒酶检测的意义

目的: 研究小肝癌与癌旁组织中端粒酶蛋白hTRT基因. 方法: 用原位杂交、免疫组化方法检测小肝癌中hTRT基因与PCNA的表达. 结果: hTRT阳性信号在癌中检出率为80%(16/20),呈异质性分布,并在细胞中有两种阳性形式:膜型和浆型.hTRT阳性信号强度、分布与癌细胞PCNA阳性强度呈密切相关(P<0.01).癌旁肝硬变和肝炎肝硬变中出现弱阳性信号,其检出率分别为14.7%(1/7)和25%(1/4),癌中hTRT阳性信号显著高于癌旁非癌组织(P<0.01).癌旁不典型腺瘤样增生病灶中,hTRT阳性信号的检出率为66.67%(2/3),接近于癌中;在癌中坏死组织和癌旁相对正常的肝组织中未检出hTRT阳性信号.癌中hTRT阳性信号强度与癌分化、与是否同时伴有肝病情况无关. 结论: 小肝癌中hTRT阳性信号特异性增强,与肝细胞增殖有关,端粒酶活化是肝癌发生的早期事件,检测端粒酶蛋白hTRT基因有望成为肝癌早期诊断的指标之一.     

膀胱移行细胞癌组织中环氧化酶-2的表达及其意义

目的　探讨环氧化酶 2 (COX 2 )在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测 5 2例膀胱移行细胞癌患者的癌组织及 17例患者距离肿瘤组织 3cm以外的正常膀胱黏膜组织中COX 2mRNA的表达 ,应用Westernblot法检测其中 4 9例膀胱癌组织及全部 17例正常膀胱黏膜组织中COX 2蛋白的表达 ,并应用条带密度分析软件半定量分析Westernblot条带密度。结果　COX 2mRNA在 83% (43/ 5 2 )的癌组织中表达 ,仅在 2 9% (5 / 17)的正常膀胱黏膜组织中表达 (P <0 .0 0 1) ;4 9例膀胱癌组织COX 2蛋白的表达量与肿瘤的分级、分期相关 (P<0 .0 0 1)。结论　COX 2在膀胱移行细胞癌组织中高表达 ,可能在肿瘤的发生发展中起一定的作用 ,可能成为膀胱癌化学预防的一个靶点。     

原发性肝癌血源性微转移检测及临床意义的研究

目的通过联合检测外周血端粒酶亚单位hTERT mRNA，AFP mRNA及TPS（组织多肽特异性抗原）表达水平，来提高肝癌血源性微转移早期检测的敏感性和特异性。尤其对肝移植术后进行早期预测微转移，以指导综合治疗，改善预后。方法选取肝癌肝移植病人20例，肝癌伴肝外转移10例作为实验组，胆石症病人10例、乙型肝硬化病人10例作为对照组。外周抗凝血进行低温离心取有核细胞成分进行RT-PCR mRNA检测；非抗凝血离心留取血清进行TPS ELISA检测。结果外周血AFP mRNA在肝癌中表达率为75％，端粒酶为90％，伴肝外转移者均为100％。TPS表达水平在116-4600U／L之间，中位值为1600U／L，伴肝外转移者多〉1600U／L。AFP或端粒酶任意一项表达阳性肝癌为100％。对照组中胆结石病人AFP、端粒酶及TPS均阴性。肝硬化病人AFP表达率10％，端粒酶10％，TPS值〈1600U／L，实验组与对照组间三者表达有显著差异。术后AFP持续阳性、术前TPS〉1600U／L的2例病人于术后2个月左右发生肝肺转移死亡。另外2例术后AFP、端粒酶由阴性转阳性且TPS升高到500U／L左右，分别于术后6、8个月出现转移，带瘤存活。结论联合检测AFP mRNA，hTERT mRNA及TPS使检测微转移敏感性达100％，使AFP阴性肝癌亦得到诊断。术后AFP、端粒酶持续阳性且TPS水平高者易于发生转移且转移出现时间早。动态监测AFP、端粒酶由阴转阳、TPS逐渐增高是转移复发的征兆。该研究为评估预后及预警术后转移复发提供了很好的方法。     

PCNA在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的 探讨增殖细胞核抗原在不同膀胱组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化LSAB法对59例膀胱癌,32例癌旁组织和6例正常膀胱粘膜中增殖细胞核抗原(PCNA)进行检测,结合临床病理资料进行分析。结果 PCNA在不同膀胱组织中的表达有显著性差异(P<0.01),即膀胱癌组织>癌旁组织>正膀胱组织。PCNA表达强度随着病理分级的增加而增加(P<0.05)。在肿瘤乳头状和浸润状两种不同生长方式之间PCNA表达有显著性差异(P<0.05)。癌和癌旁组织PCNA表达与复发有关(P<0.05)。结论 PCNA表达与膀胱病理分级、生长方式和复发有关,PCNA可作为判断膀胱生物学特性的重要指标。     

膀胱移行细胞癌组织中黑色素瘤抗原基因及蛋白的表达

目的探讨膀胱移行细胞癌(TCC)中黑色素瘤抗原(MAGE)基因mRNA的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术检测3个膀胱TCC细胞株和20例膀胱TCC患者癌组织(新鲜标本,T1期7例,T2期5例,T3期6例,T4期2例;G11例,G211例,G38例)MAGE A1,A2,A3,A4mRNA表达,免疫组化法检测105例膀胱TCC患者癌组织(石蜡标本,T1期35例,T2期12例,T3期26例,T4期13例,另19例无法确定分期;G113例,G244例,G348例)MAGE A4蛋白的表达。结果3个膀胱TCC细胞株均有MAGE基因mRNA的表达;20例膀胱TCC新鲜标本组织MAGEmRNA阳性:A112例(60%),A216例(80%),A311例(55%),A418例(90%),A1～A4均阳性8例(40%)。105例膀胱TCC石蜡标本组织中MAGE A4蛋白阳性53例(50%),高分级膀胱TCC组织中强表达(++或+++)率为27%(13/48),显著高于低分级的4%(2/57)(F=12.00,P<0.01),高分期膀胱TCC组织中强表达率为27%(14/51),显著高于低分期的0%(0/35)(F=11.48,P<0.01)。结论MAGE基因在膀胱TCC中有较高表达,分级或分期高的膀胱TCC中MACE A4蛋白明显强表达。     

RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其与膀胱移行细胞癌的发生发展复发的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测29例膀胱移行细胞癌组织及5例正常膀胱组织中RASSF1A mRNA的表达水平.结果:①RASSF1A mRNA在所有正常膀胱组织中均呈阳性表达,而在膀胱移行细胞癌组织中表达缺失率为79.3%(23/29),两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).②RASSF1A mRNA表达缺失与膀胱移行细胞癌的分级无显著相关性(P＞0.05).RASSF1A mRNA表达在浸润性膀胱中表达缺失率为90%(9/10)明显高于在表浅性膀胱移行细胞癌中的表达缺失率73.7%(14/19),但两者比较差异有无统计学意义(P＞0.05).③RASSF1A mRNA表达与膀胱移行细胞癌复发密切相关(P＜0.05).结论:①RASSF1A mRNA在膀胱移行细胞癌中表达缺失提示RASSF1A基因可能参与膀胱移行细胞癌的发生过程.②RASSF1AmRNA表达缺失可能与膀胱移行细胞癌进展相关.③RASSF1A mRNA的表达缺失与膀胱移行细胞癌的复发密切相关,可以作为复发预后标志物.     

膀胱癌患者癌组织及尿脱落细胞中血管内皮生长因子mRNA的表达及临床意义

目的 探讨癌组织和尿脱落细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达水平与膀胱移行细胞癌生物学行为的关系。方法 采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测42例膀胱移行细胞癌患者癌组织和尿脱落细胞 VEGF mRNA的表达情况。结果 膀胱癌患者癌组织和尿脱落细胞 VEGF mRNA表达都明显高于正常对照组,两者相比差异皆有显著性(P<0.001)。尿脱落细胞与相应膀胱癌组织的 VEGF mRNA表达水平之间有显著的正相关(r=0.982,P<0.001)。癌组织和尿脱落细胞VEGF mRNA的表达水平与膀胱癌临床病理各参数密切相关,肿瘤直径>2 cm组与≤2 cm组相比(分别为P=0.001,P=0.002)、复发组与初发组相比(分别为P=0.022,P=0.029)、多灶性肿瘤组与单灶性肿瘤组相比(分别为P=0.005,P=0.006)、低分化膀胱癌组(G3)与中高分化组(G1～G2)相比(分别为P=0.003,P=0.003)以及浸润性膀胱癌组(T2～T4)与浅表性膀胱癌组(Tis～T1)相比(分别为P=0.001,P=0.003)差异皆有显著性。结论癌组织和尿脱落细胞 VEGF mRNA的表达与膀胱癌生物学行为密切相关。检测尿脱落细胞VEGF mRNA的表达能很好的反应癌组织 VEGF的表达情况,可作为膀胱肿瘤辅助诊断、预后监测的一种非侵袭性方法。     

初发与复发膀胱癌组织中端粒酶活性表达差异的临床意义

我们在本研究中采用端粒片段扩增(ＴＲＡＰ)法检测膀胱癌组织端粒酶活性 ,探讨端粒酶活性检测在预测膀胱癌复发方面的作用 ,现报道如下。一、材料和方法1.一般资料 :膀胱移行细胞癌 44例 ,其中男 2 8例 ,女 16例 ,年龄 2 7～ 82岁 (平均 5 4岁 ) ,肿瘤分期为 :Ｇ119例、Ｇ2 12例、Ｇ313例 ;ＰＴａ13例、ＰＴ112例、ＰＴ2 10例、ＰＴ3 49例。初次发病 2 6例 ,复发 18例。随访 2～ 3年。2 .标本采集及端粒酶提取 :术中切除标本立即置液氮中冷冻备用。另 18例非肿瘤正常膀胱组织作对照用。膀胱癌组织 5 0ｍｇ研碎 ,适量磷酸盐缓冲液洗 ,离心收…     

PTEN和Survivin在膀胱癌中的表达及临床意义

目的 探讨PTEN mRNA和Survivin mRNA在膀胱移行细胞癌中的表达及其与病理分级、临床分期和复发的关系.方法 采用SYBR Green Ⅱ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应试验方法检测43例膀胱癌组织及9例膀胱正常组织中PTEN mRNA和Survivin mRNA的表达情况.结果 膀胱正常组织中PTEN m...     

端粒酶催化亚单位基因反义寡核苷酸诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的 探讨端粒酶催化亚单位(hTRT)基因反义寡核苷酸(ASODN)对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用。方法合成针对hTRT的28mer ASODN,转染前列腺癌细胞12～36 h后,细胞计数、透射电镜、DNA Ladder、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测癌细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)技术检测hTRT基因表达和端粒酶活性。结果0.5～2.0μmol/L ASODN转染后,癌细胞体外生长抑制16.08％～53.41％(P<0.05),部分癌细胞呈现凋亡形态学改变和DNA片段化,凋亡率为9.36％～37.54％(P<0.05),hTRT表达减弱24.48％～86.73％(P<0.01),端粒酶活性降低24.74％～76.72％(P<0.01)。 结论运用ASODN阻断端粒酶hTRT基因表达,能降低端粒酶活性,显著诱导前列腺癌细胞凋亡。     

Fas配体mRNA在正常睾丸组织及精原细胞瘤中的表达

为明确Fas配体mRNA在正常睾丸组织及精原细胞瘤中的表达情况，采用原位杂交，反转录PCR（RT－PCR）法检测正常睾丸组织8例Fas配体mRNA的表达，采用原位杂交法检测33例精原细胞瘤组织中的Fas配体mRNA的表达。结果RT－PCR方法证明正常人睾丸组织中有Fas配体mRNA的表达；原位杂交法证明8例正常睾丸组织中均有Fas配体mRNA的表达，且表达局限于睾丸Sertoli细胞，正常生殖细胞中无Fas配体mRNA的表达；原位杂交方法在33例精原细胞瘤组织中检测到Fas配体mRNA表达阳性11例，阳性率为33．33％，多呈现小片状或点状表达。提示Fas配体mRNA仅表达于人类睾丸的Sertoli细胞中，Fas配体mRNA在精原细胞瘤组织中的出现可能是精原细胞瘤形成及进展的原因。     

TRAP银染法检测端粒酶在胃癌组织中的表达

目的 了解胃癌组织中端粒酶表达的状况及其临床意义，研究非放性TRAP检测端粒酶的可行性。方法 用TRAP银染法检测5B例胃癌及相应患的正常胃粘膜，12例胃腺瘤和9例胃溃痔组织的端粒酶表达情况。结果 58例胃癌组织中49(84．5％)例端粒酶表达阳性，正常粘膜无一例检测到端粒酶活性(P<0．001)，12例胃腺瘤，9例胃溃疡组织中各有1例检测到端粒酶活性。胃癌组织端粒酶的表达与年龄、肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期等临床病理参数无明显相关(P<0．05)。结论 端粒酶是一种较理想的胃癌肿瘤标记物，TRAP银染法是一种值得推广的检测端粒酶活性的方法。     

hTERT和β-catenin在胆囊癌中的表达及其临床意义

胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤，但其发病机制尚未完全阐明。端粒酶重要组分端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA表达与肿瘤恶性表型及端粒酶活性一致。近来研究显示β-catenin蛋白（β-cat）异位表达与胆囊癌的不良预后有关，但是hTERT蛋白和异位β-cat蛋白表达关系尚鲜见报道。     

血管内皮生长因子及其受体mRNA在乳腺癌组织中的表达

目的　研究血管内皮生长因子及其受体FLT 1、FLK 1mRNA在乳腺癌组织中的表达及与临床病理因素的相关性。　方法　采用逆转录聚合酶链反应技术对手术的 47例乳腺癌标本 ,11例乳腺良性病变标本中血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体FLT 1、FLK 1mRNA的表达进行检测。结果　在良、恶性乳腺组织中均检测到VEGF12 1、165mRNA的表达 ,在乳腺癌组织中表达水平分别为0 42 0± 0 13 3、0 2 91± 0 0 94高于良性乳腺组织 0 196± 0 0 67(P =0 0 0 0 )、0 2 0 6± 0 0 5 8(P =0 0 0 1) ;在乳腺癌组织中 ,VEGF12 1mRNA表达高于VEGF165mRNA(P =0 0 0 0 ) ,而在良性乳腺组织中两者表达水平差异无显著性意义 (P =0 666)。FLT 1、FLK 1mRNA在部分乳腺癌组织中表达 ,分别为 3 8 3 %(18/4 7)和 2 5 5 % (12 /4 7) ,而在良性乳腺组织中未见表达。乳腺癌组织中VEGF12 1、VEGF165、FLT 1、FLK 1mRNA表达与患者年龄、肿块大小、淋巴结转移状况、肿瘤分期及雌、孕激素受体状况之间无明显相关性。　结论　乳腺癌组织中VEGF12 1、165及其受体FLT 1、FLK 1mRNA表达水平上调 ,提示其在乳腺癌的血管生成中起着重要作用。     

膀胱癌尿脱落细胞端粒酶活性检测及其临床意义

目的检测尿脱落细胞端粒酶活性并探讨其临床意义。方法应用改良的端粒重复序列扩增（ＴＲＡＰ）银染方法,分别对膀胱癌组织、正常膀胱组织,以及膀胱癌患者和非尿路上皮肿瘤患者的尿脱落细胞、膀胱冲洗液进行端粒酶活性检测。结果１２例正常膀胱组织均无端粒酶活性,４８例膀胱癌组织中４４例（９１．７％）端粒酶阳性。膀胱癌患者尿液及膀胱冲洗液中脱落细胞端粒酶阳性率分别为８３．３％（４０／４８）和８７．５％（４２／４８）。１２例分化良好（Ｇ１级）膀胱癌患者中,尿液和膀胱冲洗液中脱落细胞端粒酶阳性率分别为７５．０％（９／１２）和８３．３％（１０／１２）。结论尿脱落细胞端粒酶活性检测敏感性高,可用于膀胱癌的早期诊断和术后随访。