慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Fas和FasL的表达及临床意义

我们应用逆转录 ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ)方法 ,对 37例慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达进行检测 ,初步探讨其在活化诱导慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡中的作用。对象与方法一、病例收集我院 1998～ 1999年间收住的 37例慢性乙型肝炎患者 ,男 2 6例 ,女 11例。年龄 16～ 6 0岁 ,平均 ( 35± 12 )岁。诊断按 1995年第五次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎标准。ＡＬＴ >10 0Ｕ/Ｌ ,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗 ＨＢｃ和ＨＢＶＤＮＡ均阳性。排除ＨＡＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ和ＨＥＶ感染 ,以及近 3个月应…     

Fas、FasL在慢性乙型肝炎患者肝细胞和外周血淋巴细胞上的表达

探讨慢性乙型肝炎患者肝细胞及外周血淋巴细胞上Fas、FasL的表达与乙型肝炎病毒（HBV）复制水平及肝组织炎症程度的关系。对30例慢性乙型肝炎患者进行肝穿刺肝组织病理检查及免疫组化SP法检测肝细胞中Fas、FasL表达强度。并采用单克隆抗体经流式细胞仪检测外周血淋巴细胞上Fas、FasL表达阳性百分率;同时,采用荧光实时标记法测定血清中病毒复制指标HBV DNA水平;采用Beckman全自动生化分析仪检测肝功能并研究其相关性。慢性乙型肝炎患者肝细胞中Fas、FasL表达强度随肝组织炎症活动度加重而增强（P均〈0．001）,与白蛋白及丙氨酸转移酶（ALT）呈负相关（P〈0．005,P〈0．001）,与球蛋白、总胆红质无明显相关性（P均〉0．05）。外周血淋巴细胞上Fas、FasL的表达阳性率与血清中肝炎病毒复制指标HBV DNA水平呈正相关;与慢性肝炎分度无明显的相关性。乙型肝炎病毒感染可诱导肝细胞及外周血淋巴细胞上Fas、FasL的表达。肝细胞Fas、FasL的表达随炎症活动度加重而表达增强,但其介导的凋亡并不引起肝细胞炎症损伤即ALT活性并不升高,相反减少;同时在某种程度上影响白蛋白的合成。提示Fas—FasL介导的肝细胞凋亡是以非细胞损伤方式参与慢性乙型肝炎的发病过程。同时,随血清HBV DNA水平增高,外周血淋巴细胞上Fas、FasL的表达亦增强,淋巴细胞的凋亡因而增多,是导致乙型肝炎慢性化的原因之一。由此可见,Fas、FasL介导的凋亡参与了慢性乙型肝炎的发病机制,且在慢性乙型肝炎的发生发展中起重要作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞穿孔素-颗粒酶的表达

HBV感染后主要通过机体对病毒的免疫应答而发生肝细胞损害，但确切的发病机制尚不完全清楚。近年来，细胞凋亡在慢性乙型肝炎发病机制中的作用受到重视，细胞毒T淋巴细胞（CTL）和自然杀伤细胞（NK）在肝细胞凋亡中发挥重要作用。CTL和NK细胞诱导细胞凋亡的机制有两条重要路径，一是Fas-Fas配体系统的杀伤作用，二是穿孔素-颗粒酶的杀伤作用。这两条杀伤途径彼此独立存在，即靶细胞损伤可是Fas-Fas配体或穿孔素-颗粒酶的单独作用，也可是两者的相互作用。本研究旨在探讨外周血淋巴细胞穿孔素-颗粒酶的表达与慢性乙型肝炎肝损伤的关系。     

大肠癌患者外周血及肿瘤浸润淋巴细胞Fas/FasL的表达

目的　探讨Fas及其配体FasL与大肠癌患者肿瘤局部及全身免疫反应的关系。方法　用流式细胞仪 (FCM )对 40例大肠癌患者外周血淋巴细胞 (PBL)及肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)的Fas及其配体FasL表达进行定性、定量分析 ,以 40例正常人的PBL作对照。结果　大肠癌患者TIL上Fas分子表达率为 16 8% ,PBL上Fas分子表达率为 8 0 % ,正常人PBL上Fas分子表达率为12 6% ,前者表达率明显高于后两者 (P <0 0 5 ) ,大肠癌患者PBL上Fas分子表达明显低于正常人PBL上Fas分子表达 (P <0 0 5 )。结论　Fas分子在大肠癌患者PBL与TIL中的表达不同 ;Fas/FasL在大肠癌患者肿瘤微环境和全身水平均参与了免疫系统与肿瘤的相互作用     

慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的观察不同临床类型HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群的变化,以探讨HBV感染对人体细胞免疫功能的影响。方法使用流式细胞仪技术检测22例HBV携带者、231例慢性乙型肝炎、61例肝炎肝硬化、18例原发性肝癌和22例健康志愿者外周血T淋巴细胞亚群。结果本组正常人外周血CD3＋、CD4＋和CD8＋细胞百分比分别为73.7±5.4、43.6±4.3和29.2±5.4;HBV携带者、慢性肝炎、乙型肝炎肝硬化和肝癌患者外周血CD3＋细胞百分比分别为67.3±11.2、70.0±12.5、64.4±16.5和58.4±43.4,除HBV携带者外,均明显低于正常人（P〈0.05）;CD4＋细胞百分比分别为32.9±7.7、36.6±12.5、35.4±12.4和31.2±22.0;CD8＋细胞百分比分别为29.2±7.4、28.8±9.9、24.5±9.7和20.6±13.0,其中肝硬化和肝癌患者与正常人比,均有显著性差异（P〈0.05）。结论慢性HBV感染者随着病情进展,外周血淋巴细胞百分比逐渐发生变化,这可能影响了细胞免疫功能而致感染慢性化和重症化。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞诱导特异性T淋巴细胞应答

目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(Dc)是否诱导特异性T细胞应答。方法(1)将研究对象分为慢性乙型肝炎患者组、急性乙型肝炎痊愈组、健康志愿者组,分离各组研究对象的外周血单个核细胞(PBMC),细胞内细胞因子染色方法检测其对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异表位多肽乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)18-27的记忆性免疫应答;(2)培养慢性乙型肝炎患者DC,将负载有乙型肝炎抗原表位多肽的DC诱导特异的T细胞应答。采用细胞内细胞因子染色方法检测诱导的T细胞分泌的细胞因子,乳酸脱氢酶释放法测定诱导的T细胞杀伤活性。结果(1)急性乙型肝炎患者PBMC对HBcAg 18-27 CTL特异表位多肽存在记忆的免疫应答,其分泌干扰素-γ的CD8+T细胞占CD8+T细胞总数的(4.3±2.5)％,分泌白细胞介素-2的占总细胞数的(4.8±2.2)％,分泌肿瘤坏死因子-α占总细胞数的(4.6±2.3)％。而慢性乙型肝炎患者和健康志愿者对其记忆应答很低,与急性乙型肝炎患者比较差异有显著性,t值为2.508-3.305,P<0.05。(2)用多肽共孵育过的慢性乙型肝炎患者DC多次诱导的T细胞慢性乙型肝炎患者组,加肽孵育的靶细胞比例为30:1、10:1、3:1时,其杀伤率分别为(57.0±20.3)％、(49.5±20.2)％、(21.8±12.9)％,均高于对照组,表明慢性乙型肝炎患者DC可以诱导特异的T     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群与病程相关性的研究

目的对慢性乙型肝炎轻中度、重度和肝硬化患者外周血淋巴细胞亚群的百分比和绝对细胞数进行观察,探讨慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群的变化与病程的关系.方法采集88例慢性乙型肝炎患者柠檬酸钠新鲜抗凝血,经流式细胞仪进行免疫分型检测.结果慢性乙型肝炎重度患者的CD3+CD4+细胞百分比显著低于轻中度患者(P＜0.05),肝硬化患者的CD3+和CD3+CD8+细胞百分比显著低于轻中度患者(P＜0.01).肝硬化患者CD3CD19+细胞百分比显著高于重度和轻中度患者(P＜0.01).CD4/CD8比例在慢性乙型肝炎轻中度、重度和肝硬化患者间无显著差异.肝硬化和重度患者淋巴细胞、CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+细胞的绝对细胞数均显著低于轻中度患者(P＜0.01),且肝硬化患者CD3-CD16+56+细胞的绝对细胞数显著低于轻中度患者(P＜0.05).肝硬化患者与轻中度患者的DNA载量分布差异有显著性(P＜0.01),其高水平病毒载量的患者比例高于轻中度患者.结论慢性乙型肝炎轻中度发展为重度和肝硬化的过程中,外周血淋巴细胞亚群绝对细胞数随病情的进展显著减少,主要表现为CD3+CD4+和CD3+CD8+的T淋巴细胞亚群的百分比进行性降低.     

慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞和T淋巴细胞计数变化及其临床意义

目的观察慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞和T淋巴细胞数量的变化。方法在56例乙型肝炎肝衰竭、49例HBeAg阳性慢性乙型肝炎和41例乙型肝炎病毒携带者使用流式细胞仪检测外周血CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞和NK(CD3-CD16+CD56+)细胞占淋巴细胞的比率(%)。结果肝衰竭患者CD3+T细胞和CD3-CD16+CD56+NK细胞计数比慢性乙型肝炎患者和乙型肝炎病毒携带者显著性降低(P0.05);慢性乙型肝炎患者CD3-CD16+CD56+NK细胞计数比乙型肝炎病毒携带者显著性升高(P0.05)。结论乙型肝炎肝衰竭患者外周血T细胞和NK细胞数量减少,而HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者外周血T细胞数量增多。     

慢性乙型肝炎和肝病中Fas和FasL表达的原位研究

目的了解慢性乙型肝炎和肝病时介导凋亡的Ｆａｓ／ＦａｓＬ表现。方法以免疫组化法原位检查各种慢性肝病４５例的活检肝组织。结果肝内浸润的淋巴细胞中检出ＦａｓＬ，肝细胞Ｆａｓ／ＦａｓＬ表达与炎症活动性一致，多分布在界面性炎症区。肝细胞表达ＦａｓＬ，可能也发挥细胞毒效应。结论新的发现是ＦａｓＬ可在肝细胞结节和肝癌细胞表达，提示有细胞毒效应的ＦａｓＬ在ＨＢ相关慢性肝病中有发病学意义。肝癌细胞中未检出Ｆａｓ而检出ＦａｓＬ，可能是一种肿瘤逃避免疫攻击的机制     

乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血淋巴细胞亚群的变化,以了解细胞免疫在乙型肝炎发病中的作用。方法使用流式细胞仪检测100例乙型肝炎患者和20例正常人外周血CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群百分比。结果 15例急性肝炎患者T淋巴细胞亚群与正常对照组比,差异无统计学意义(P>0.05),而43例慢性肝炎、26例乙型肝炎肝硬化和16例慢性肝衰竭患者CD3+淋巴细胞百分率分别为56.15±8.94%、48.85±9.01%和55.86±9.03%,均显著低于正常对照组的66.35±8.93%(P<0.05);慢性肝炎、乙型肝炎肝硬化和慢性肝衰竭患者CD4+淋巴细胞百分率分别为30.46±7.51%、26.71±7.03%和29.03±7.64%,,均显著低于正常对照组的35.72±7.52%(P<0.05);慢性肝炎、乙型肝炎肝硬化和慢性肝衰竭患者CD8+淋巴细胞百分率分别为21.93±5.06%、18.71±5.53%和21.15±5.62%,均显著低于正常对照组的24.58±4.92%(P<0.05);慢性肝炎、乙型肝炎肝硬化和慢性肝衰竭患者CD4+/CD8+比值分别为1.34±0.60、1.35±0.53和1.34±0.58,均低于正常对照组的1.58±0.47(P<0.05)。结论 HBV感染者体内存在T细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱,提示细胞免疫参与了乙型肝炎的发病和疾病进展。     

外周血淋巴细胞凋亡在慢性乙型肝炎中的作用

1987年,Ashwell等发现激活诱导的细胞死亡(AICD)现象,即成熟的外周血淋巴细胞(PBLs)被抗原刺激活化后在抗原CD3/TCR单抗或植物血凝素(PHA)的再刺激下可发生凋亡.研究发现20%～30%的反应性T细胞在同种抗原的再刺激下发生凋亡,产生典型的形态学与分子生物学特征.AICD现象被称作本体自杀性调节,在许多疾病发病机制中占有重要地位,但其在慢性乙型肝炎(CHB)发病机制中的作用报道甚少.现仅就其在CHB感染和发病机制中的作用作一探讨.     

慢性乙型肝炎血清肿瘤坏死因子-α与肝组织中FasL表达的关系

我们检测了慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者血清ＴＮＦ－α水平,并同步观察了肝组织ＦａｓＬ的表达,现将结果报告如下。 一、资料与方法 １,病例来源：我院１９９９年３月～２０００年３月经过肝穿刺活检确诊的２８例慢乙肝患者。男２３例,女５例。年龄１８～５６岁。慢性轻度８例,中度１０例,重度１０例。肝组织病理学改变符合１９９５年病毒性肝炎修订的诊断标准。 ２．标本采集方法：１ｓ钟负压吸取肝组织,长度超过２．０ｃｍ,标本经１０％中性甲醛溶液固定,石蜡包埋。同时空腹从肘静脉采血５ｍｌ,离心１５ｍｉｎ,３５００ｒ／ｍ…     

Fas、FasL在慢性乙型肝炎肝组织中的表达

探讨Fas、FasL在慢性乙型肝炎肝组织中的表达特点。对 30例慢性乙型肝炎患者进行肝穿刺肝组织病理检查及免疫组化法检测肝组织中的Fas/FasL表达强度。 (1)Fas、FasL在肝组织肝细胞膜及胞浆均有不同程度表达 ,其表达阳性细胞主要位于汇管区小叶内及周边碎屑状坏死区 ,呈弥漫分布 ,在其周围浸润的淋巴细胞上多为FasL阳性细胞 ,亦可见到Fas阳性细胞。 (2 )肝组织中Fas、FasL表达随着慢性肝炎程度即炎症和纤维化程度加重而加强 (P均 <0 0 0 1)。Fas-FasL系统介导的细胞凋亡 ,确实参与了慢性乙型肝炎的发病机制 ,且在慢性乙型肝炎的发生发展中起重要作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能的研究

目的研究慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(DC)的免疫功能.方法从慢性乙型肝炎患者外周血中分离单个核细胞,用无血清培养法分离培养DC,用流式细胞仪检测DC表型,用液闪计数仪观察DC对T细胞的增殖作用,用ELISA法检测混合淋巴细胞反应(MLR)中细胞因子的分泌水平.结果患者组DC的CD86的表达率为(70.2±5.2)%,明显低于正常人组(95.3±3.8)%,P＜0.01;其诱导T细胞增殖能力每分钟液闪计数cpm为10000±2000,明显低于正常人组(cpm为30000±3000),P＜0.01患者MLR中IL-12为(120.0±19.7)pg/ml,γ-干扰素为(799.0±161.3)pg/m1,明显低于正常人组的(280.0±41.1)pg/ml和(3359.0±635.4)pg/ml,P＜0.01.结论慢性乙型肝炎患者外周血DC免疫功能低下,并与DC表面CD86的表达率下降及DC分泌IL-12减少密切相关.     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

目的探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血T淋巴细胞亚群的变化。方法在拉米夫定治疗的HBeAg阳性CHB患者62例和34例健康人,使用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞比率。常规检测患者HBV DNA和血生化指标。结果 HBeAg阳性CHB患者治疗前外周血CD4＋T细胞比率为31.4±10.6％,明显低于对照组（47.3±16.5％,P﹤0.05）,而CD8＋T细胞和NK细胞则相对较高（分别为33.4±18.2％和16.6±13.6％）,显著高于健康对照组（分别为29.8±16.4％和13.7±9.4％, P﹤0.05）;抗病毒治疗后患者外周血CD4＋T淋巴细胞比率为74.7±18.9%,CD8＋T淋巴细胞比率为37.2±19.7%,比治疗前显著升高（P﹤0.05）。结论拉米夫定能抑制HBV DNA复制,调节CD4＋和CD8＋T淋巴细胞比率,促进疾病恢复。     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡与血清HBVDNA定量关系的研究

探讨慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡与血清HBV DNA定量的关系。分别采用流式细胞计数仪和荧光定量PCR法检测慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡率与血清HBV DNA。慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡率明显高于正常对照组，且与血清HBV DNA水平呈正相关。慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡水平异常可能与HBV的持续感染与复制相关联。     

慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞凋亡的检测及临床意义

目的探讨乙型肝炎患者外周血淋巴细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ,ＰＢＬ）凋亡在乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）持续感染中的作用。方法分离１５例慢性乙型肝炎患者ＰＢＬ,体外单独或与金黄色葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）域重组ＨＢｃＡｇ（ｒＨＢｃＡ）共培养,用荧光素ＹＯＰＲＯ－１和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２对ＰＢＬ染色,观察ＰＢＬ中凋亡细胞比例。结果慢性乙型肝炎患者ＰＢＬ体外培养４８小时后,无论自发性还是由ＳＥＢ或＜ｒＨＢｃＡｇ诱导的ＰＢＬ凋亡率均明显高于正常对照组,Ｐ＜０．０１。其中ｒＨＢｃＡｇ诱导的ＰＢＬ凋亡率最高,达２４．６％。血清ＨＢｅＡｓ阳性组患者ＰＢＬ凋亡率明显高于ＨＢｅＡｇ阴性组患者。慢性轻度和中度肝炎ＰＢＬ凋亡率又高于慢性重度或慢性重型肝炎患者。结论　慢性乙型肝炎ＰＢＬ凋亡可能是ＨＢＶ持续感染的重要因素之一。