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1.
细胞端粒酶活性的定性及定量分析 总被引:7,自引:1,他引:6
对Kim等的端粒重复序列PCR扩增法加以改进,用SYBR Green染色代替EB染色,建立了细胞端粒酶活性的PCR-TRAP定性分析法;同时,用γ-^32P-ATP标记TS引物,加入内对照TSK1,建立了PCR-TRAP定量分析法。利用上述方法,对12株人肿瘤或非肿瘤细胞进行端端酶活性分析,结果发现,所有被检细胞株均呈端酶阳性,但其活性水平在不同细胞株间有较大差异(23 ̄652TPGunits)。 相似文献
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用TRAP PCR ELISA及TRAP PCR PAGE测定鼻咽癌端粒酶活性的比较 总被引:6,自引:3,他引:3
目的:比较TRAP PCR ELISA及TRAP PCR PAGE检测鼻咽癌端 酶的活性。方法:分别采用TRAP PCR ELISA及TRAP PCR PAGE检测了38例鼻咽癌(NPC)、15例癌旁组织、19例慢性鼻咽炎和鼻咽癌HNE1细胞株、其它2种癌细胞株及3种正常细胞的端粒酶表达,并探讨了在不同数量的HNE1细胞中端粒酶表达的灵敏度及HNE1细胞株、5例NPC活检组织经热灭活后端粒酶检测的 相似文献
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逆转录病毒介导癌基因疗法体外安全实验 总被引:2,自引:0,他引:2
从逆转录病毒pLXSN与人IL-2cDNA基因进行重组,包括PA317细胞,建立逆转录病毒包装体系细胞PA317/pLIL-2SN。用病毒上清液转导人淋巴细胞(TIL,PBL)和3株人腺癌细胞株(SPC-A1,MKN-HepG2)对转IL-2基因的淋巴细胞(TIL/IL-2,PBL/IL-2)和转IL-2基因的人癌细胞(SPC-A2/IL-2,MKN-45/IL-2,HepG2/IL2)进行体外安 相似文献
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甲状腺乳头状癌端粒酶活性的研究 总被引:2,自引:2,他引:0
目的 通过检测甲状腺乳头状癌中的端粒酶活性,探讨其在甲状腺乳头状癌中潜在的临床价值。方法 采用TRAP-PCR-ELISA定量及TRAP-PCR银染定性法,对49份甲状腺组织进行端粒酶活性的分析。结果 23例甲状腺乳头状癌组织中端粒酶阳性率为86.9%,其活性水平与组织学分级无关,病灶越大,年龄越大,病期越晚,端粒酶活性水平越高,淋巴结转移者高于无转移者。10例甲状腺正常组织端粒酶皆为阴性。8例甲 相似文献
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检测端粒酶活性的PCR—ELISA方法的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
建立一种更为敏感,特异的端粒酶检测方法。方法将分子生物学和免疫学方法有机地结合起来,建立PCR-ELISA方法并检测多种肿瘤细胞株和部分组织中端粒酶活性。结论PCR-ELISA方法检测端粒酶活性是一种简便,快速,无放射性污染的方法,适用于肿瘤早期诊断和普查。 相似文献
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单纯疱疹病毒TK基因介导GCV治疗人RB肿瘤的实验研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为探讨HSV-TK基因介导的GCV系统对人视网膜母细胞瘤(RB)基因治疗的有效性,利用电穿孔技术把重组逆转录病毒载体pLXSN-TK导入包装细胞PA317,筛选出逆转录病毒产生细胞PA317/TK,收获病毒。体外实验:用逆转录病毒感染RB细胞,筛选出含TK基因的RB细胞(RB/TK),用GCV分别处理RB,RB/TK及不同比例的混合细胞。体内实验:建立人RB裸鼠原位异种移植模型,瘤内注射病毒液后再 相似文献
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利用逆转录病毒载体pLNSX构建了带HSVTK基因的逆转录病毒重组体pLNSTK,用磷酸钙沉淀法转染PA317包装细胞,经G418筛选抗性克隆,建立了产生重组病毒的载体产生细胞系PA317/TK,用NIH3T3细胞测定病毒(CFU)滴度为3×108L-1。提取PA317/TK细胞的DNA和细胞上清液的RNA,在特异性引物引导下,分别用PCR和RTPCR检测证实PA317/TK细胞整合了HSVTK基因并产生重组病毒,为HSVTK基因治疗恶性肿瘤的实验研究打下了基础。 相似文献
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建立一种非同位素的不对称聚合酶链反应-单链构象多态性技术(aPCR-SSCP):通过不对称PCR(aPCR)获得单链,普通PAGE电泳分离,经银染快速准确检出突变;应用这种方法,研究了4株鼻咽癌细胞株CNE1,CNE2,HK1和SUNE1中肿瘤抑制基因P53基因突变,证实CNE1,CNE2在第8外显子,HK1在第5外显子有突变,并发现新建立的细胞株SUNE1存在第8外显子的突变。 相似文献
10.
B细胞活化因子B7—1cDNA的克隆及其在白血病细胞的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
利用RT-PCR方法从EBV转化B淋巴细胞中扩增出B7-1cDNA、酶切B7-1基因和逆转录病毒载体PLXSN,连结、克隆PLB7-1SN到大肠杆菌Mc1061。扩增纯化质粒PLB7-1SN。用PA317细胞包装病毒,NIH3T3细胞筛查病毒滴度,获得高效价的B7-1病毒上清,病毒感染人白血病细胞株K562和HL60,获得稳定表达B7-1分子的肿瘤细胞。 相似文献
11.
采用细胞接种、X-gal染色、TK基因的PCR和病理切片观察,分别将PA317/BAG,PA317/TK产病毒细胞注射动物体内,结果产病毒细胞在动物体内存活期均不超过1个月;产病毒细胞在体内有形成肿瘤,也没有发现严重的炎症 反应;HSV-tk/ACV系统用于动物基因治疗,ACV及其代谢物产物没有发现明显的毒副作用和病理改变。说明反转录病毒介导的HSV-tk/AVC系统的在动物体内取得了安全的结果。 相似文献
12.
目的:建立银染-TRAP法检测胸水脱落细胞端粒酶活性,探讨银染-TRAP法用于胸水,脱落细胞中端粒酶活性研究的可行性。方法:应用银染-TRAP法检测30例癌性胸水脱落细胞和30例结核性胸膜炎胸水脱落细胞端粒酶活性的表达。结果:癌性胸水脱落细胞端粒酶活性为100%(30/30)表达,对照组胸水脱落细胞端粒酶活性为阴性(P<0.01)。结论:癌性胸水脱落细胞中存在端粒酶活性;端粒酶活性与癌性胸水的形成原因有关;银染-TRAP法是一种敏感、可靠且简便、快速和经济的方法,适用于临床实验室进行大规模的样本筛选。 相似文献
13.
目的 克隆H-2K^bcDNA及研究其在多种真核细胞中的表达。 方法 RT-PCR法扩增H-2K^bcDNA,克隆入双顺反子逆转录病毒载体pGCEN,PA317包装出重组病毒后,分别感染NIH3T3、COS7及MM45T.Li,PCR和RT-PCR分析目的基因表达,FACS分析H-2K^b在细胞膜上的表达。结果 以双顺反子逆转录病毒载体pGCEN介导,分别建立了H-2K^b基因转导细胞:NIH3T 相似文献
14.
为深入探讨第三代维甲类化合物Ro13-7410诱导白血病细胞凋亡和分化的机制。本文采用PCR-ELISA和PCR-PAGE两种方法观察了o13-7410对HL-60细胞端粒酶活性的影响。实验结果显示在Ro13-7410诱导HL-60细胞亡和分化的过程中端粒酶活性逐渐下降,结论:Ro13-7410能明显抑制HL-60细胞端粒酶活性,且可能与白血病细胞的增殖抑制和诱导凋亡及分化作用有关。 相似文献
15.
日本血吸虫谷胱甘肽转移酶基因在真核表达载体中的亚克隆 总被引:3,自引:2,他引:3
目的 将日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(GST)基因片段克隆到真核表达载体PBKCMVK ,以便以进行酸疫苗的研究。方法 特定核苷酸引物的设计和合成,TRIZOL试剂以日本血吸虫成虫RNA〈RT-PCR法扩增GST基因编码序列,将扩增产物连接PGEM-T克降体,再亚克隆到真核表达载体PBKCMV中。结果 RT-PCR法特异性扩增出SjGST编码基因片段。其大小约为670bp,经双酶切、PCR鉴定表明所构 相似文献
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蠲哮汤对哮喘患者血栓素B2/6—酮—前列腺素F1α,超氧化物歧化… 总被引:6,自引:0,他引:6
报告以TXB2/6-Keto-PGF1α,RBC-SOD为实验指标,探究蠲哮汤治疗轻,中度支气管哮喘发作的机理。在蠲哮喘汤药效的同时哮喘患者TXB2/6-keto-PGF1α,RBC-SPD较治疗前均下降,缓解组TXB2/6-keto-PGF1α较健康组升高,TRBC-SOD则下降,表明蠲哮汤对轻,中度哮喘发作可能通过降低TXB2/6-Keto-PGF1α值,增加了RBC-SOD调节值起治疗作用。 相似文献
17.
人IL—4重组逆转录病毒载体的构建及在人肿瘤细胞中的表达 总被引:10,自引:1,他引:9
利用多聚酶链反应(PCR)方法,从PCD-hIL-4质粒中扩增得到人白细胞介素4(hIL-4)的cDNA-。DNA序列测定证实此片段包含完整的IL-4开放阅读框架。应用DNA重组技术,将此cDNA重组于逆转录病毒载休LXSN。用脂质体转染法将此重组质粒导入病毒包装细胞PA317。得到滴度为2.5x10CFU/ml的感染性病毒。病毒感染人白血病细胞株HL-60、K562及Burkit淋巴瘤细胞株Raji,使之表达并分泌IL-4。逆转录PCR(RT-PCR)法证实hIL-4cUNA可在上述肿瘤细胞中持续转录。ELISA怯证实病肿瘤细胞分辨IL一4水平可高达300P/10细胞.24小时。本研究为进一步探讨转IL一4基因用于血液系统恶性肿瘤免疫治疗的价值提供了基础。 相似文献
18.
端粒酶活性及其hTR表达在诱导大肠癌分化细胞中的变化 总被引:5,自引:1,他引:4
目的 观察全反式维甲酸(ATRA0和1,25-二羟维生素D3(VD3)大肠癌细胞株诱导分化过程中粒酶活性的变化,并对其RNA组分hTR进行检测。方法 ATRA和VD3对大肠癌细胞进行诱导分化,在进行细胞活力测定,细胞增殖测定,流式细胞仪(FCM)分析细胞周期及碱性磷酸酶比活性测定的时时,分别在诱导后第2天,第4天和第6天用TRAP法检测其端粒酶活性的变化,并同时用RT-PCR的方法对端粒酶的RNA 相似文献
19.
目的:对单纯疱疹Ⅰ型胸苷激酶基因扩增、克隆和测序.方法:从单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)17syn+株感染的BHK21细胞上清液中提取HSV-1基因组DNA,以此为模板,用PCR方法扩增胸苷激酶(TK).将扩增的片段克隆入载体pUC18中,并进行测序.结果:除终止码外,HSV-1TK基因全部编码区为1128bp,编码376个氨基酸,其中含12个蛋氨酸,4个半胱氨酸.TK的第249和250位氨基酸残基分别为Leu和Gln,其相应密码子为CTG,GAG,构成1个PstI位点,第313和314氨基酸残基分别为Asp和Val,其相应密码子为GAC和GTC,构成另一个PstI位点.结论:本研究扩增出了HSV-1TK基因的全部编码区序列 相似文献
20.
维甲酸和三氧化砷对急性早幼粒细胞性白血病细胞组织因子表 … 总被引:3,自引:1,他引:2
目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2O3)在体内外对急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞组织因子(TF)表达的意义。方法 利用复钙时间测定、ELISA和RT-PCR等方法,分别检测了ATRA和As2O3治疗前后APL患者(23例)骨髓单个核细胞的促凝活性、TF抗原及其mRNA的转录水平,同时还检测了使用ATRA和As2O3处理APL细胞株NB4-R1细胞以及转染PML-RARa融 相似文献