卢龙县一起人杯状病毒引起急性胃肠炎暴发的流行病学调查

目的调查河北省卢龙县急性胃肠炎暴发的流行情况，分析发病原因。方法应用流行病学调查方法对卢龙县发生一起暴发性急性胃肠炎进行调查，采用ELISA和RT-PCR方法进行人杯状病毒检测，并对PCR产物克隆测序，进行遗传进化分析。结果在调查的736人中，发病134例，罹患率为18．20％，1例死亡。发病年龄范围在1-77岁，以青壮年发病较多。6月25～30日为发病高峰。6份粪便标本中，ELISA方法检出3份杯状病毒阳性，RT-PCR方法确认1例，并鉴定为诺如病毒GI/2基因型。结论证实由杯状病毒引起急性胃肠炎暴发。     

相同来源HIV-1 Env、Gag基因序列变异和宿主基因多态性与疾病进展关系的分析

目的探讨HIV—1基因序列变异和宿主基因多态性与疾病进展的关系。方法PCR方法从外周血细胞中扩增HIV—1 Env、Gag区片段和测序，分析序列变异、糖基化，超突变等指标。RFLP法确定宿主基因多态性。结果未治疗组中，env基因区PCR和克隆序列平均离散率分别为0．1和0．06，差异有统计学意义，治疗组内差异没有统计学意义。V3环顶端序列在未治疗和治疗组中均以GPGQ比例最大（61．5％和39％），治疗组出现稀有多肽序列如GPGH、GQGR、GLGR、12位I／V和21位Y／H变异与疾病快速进展相关。Env区段上进展较快速组（RRP）比典型进展组（TP）的糖基化程度高（平均值分别为14．56和13．20个），差异有统计学意义。Env区段上RRP比TP组GA取代百分率和绝对数平均值都高（8．7％／6．9％和10．1／7．6），差异也有统计学意义。TP组中SDF1—3’A和CCR2V62I基因频率均高于RRP组，但差异没有统计学意义。CX3CR1 V249I／M280T与疾病快速进展没有显著相关性。结论V3区序列主要位点的氨基酸变异、Env区段糖基化程度、GA取代与疾病进展相关。SDF1—3’A、CCR2V641和CX3CR1 2491／280M与疾病进展均无显著相关性。     

2013年中国狂犬病流行特征分析

目的 分析中国2013年狂犬病病例流行病学特征与趋势,探讨相应防治对策建议.方法 利用2013年“传染病报告信息管理系统”和6省监测点监测上报的数据,进行回顾性描述分析.结果 2013年我国28个省共报告狂犬病1172例,较2012年下降17.75％.病例主要分布在南方地区,报告发病数居前5位的省份依次为广西(161例)、广东(140例)、贵州(84例)、湖南(83例)和河南(81例),占全国报告发病总数的46.84％.高发季节为夏秋季,病例以农民、学生和散居儿童为主.病例男女性别比为2.27∶1.40-64岁组报告病例最多,其次为0-14岁组.共收集到319例狂犬病病例个案调查表,致伤动物仍以犬为主(占93.83％),其次为猫(占5.48％).病例潜伏期中位数为67天.暴露程度以Ⅲ级暴露为主,占64.36％.暴露后疫苗接种率为11.86％,但疫苗全程接种率仅1.36％,Ⅲ级暴露者的被动免疫制剂注射率为5.91％.结论 2013年全国狂犬病疫情总体继续呈下降趋势,南方病例仍然多于北方,但北方地区疫情有上升和扩散的趋势.病例主要分布于农村地区,病例职业以农民、学生、散居儿童为主.病例的伤口自行处理与医疗机构处理率、疫苗接种率与被动免疫制剂注射率均很低.应加强狂犬病监测工作,以农村地区为重点,加强狂犬病暴露后预防处置宣传.     

中国狂犬病高发地区狂犬病毒磷蛋白基因特点分析

目的 调查研究中国狂犬病高发地区狂犬病毒磷蛋白P基因遗传变异情况,分析其结构特点.方法 测定广西、贵州、湖南的人、犬脑组织标本狂犬病毒P基因核苷酸序列,进行序列的同源性比较和种系发生分析.结果 P基因核苷酸和推导氨基酸序列同源性分别为82.1%~100%和87.5%~100%;三省区毒株明显区别于其他国家地区分离株;PP主要功能位点未发生影响P基因生物学功能的变异.结论 三省区狂犬病毒同属于基因1型,具有共同的进化途径和基因结构特点;病毒分布具有独特的中国地域性特征;中国湖南省个别毒株可能和泰国毒株来源于共同的狂犬病毒.     

狂犬病暴露后免疫接种人群流行病学调查分析

目的 了解我县狂犬病暴露后免疫接种人群流行病学特征.方法 对我中心预防接种门诊2009年狂犬病疫苗接种者的资料进行统计分析.结果 在登记的1761例疫苗接种者中,男女之比为2.44:1,暴露的高危年龄段为10～29岁,高发月份为每年的7、8、9月;绝大多数接种者是被犬致伤;伤及部位以下肢最多;接种者中Ⅲ级暴露所占构成比最高,暴露后未处理伤口的比例为1:1.14%,全程注射狂犬疲苗者1738例.结论 加强狂犬病防治知识的宣教,提高暴露人群免疫预防接种率,加强犬的管理.搞好戈的免疫工作,从源头防止狂犬病的发生,加强基层医务人员的培训与疲苗的管理是控制狂犬病的主要措施.     

狂犬病暴露后免疫接种人群流行病学调查分析

目的了解我县狂犬病暴露后免疫接种人群流行病学特征。方法对我中心预防接种门诊2009年狂犬病疫苗接种者的资料进行统计分析。结果在登记的1761例疫苗接种者中,男女之比为2.44：1,暴露的高危年龄段为10～29岁,高发月份为每年的7、8、9月;绝大多数接种者是被犬致伤;伤及部位以下肢最多;接种者中Ⅲ级暴露所占构成比最高,暴露后未处理伤口的比例为1：1.14%,全程注射狂犬疫苗者1738例。结论加强狂犬病防治知识的宣教,提高暴露人群免疫预防接种率,加强犬的管理,搞好犬的免疫工作,从源头防止狂犬病的发生,加强基层医务人员的培训与疫苗的管理是控制狂犬病的主要措施。     

青海省某学校流行性腮腺炎暴发的流行病学调查

目的 了解分析学校流行性腮腺炎暴发的流行病学特征及发生原因,为今后的防病工作提供参考.方法 对疫情资料进行描述性流行病学分析.结果 2013年9月22日发现首发病例,截止10月17日,共发病43例.罹患率为6.23(43/690).流行曲线呈双峰型,病例出现班级聚集性.100％的患者无相关疫苗免疫史.实施应急接种后,疫情得到有效控制.结论 疫情迟报、病例未严格隔离、疫苗接种率低、易感人群积累是造成流行性腮腺炎暴发的主要原因.提高人群免疫接种率是防止暴发的主要措施.     

先天性巨结肠患者人类巨细胞病毒UL139基因多态性的研究

目的研究人巨细胞病毒（HCMV）UL139基因在先天性巨结肠（HD）临床株中的多态性，探讨其多态性与HD之间的关系。方法对53株HD患儿痉挛段肠组织标本和6株尿标本的临床株进行UL139开放阅读框（ORF）的扩增及测序。对照组为10个无症状HCMV感染患儿的尿标本。结果28个HD临床株完成测序，进化树分析结果显示UL139基因DNA序列分为3组5个基因型。G3为主要基因型（48．1％）。与对照组比较，X^2=7．378，P=0．194。24个临床株同时完成了HCMVUL144基因测序，HCMVUL144与UL139基因经Kendall等级相关分析r=-0．114，P=0．425。不同临床分型HD分散分布于UL139各个基因型中。结论HCMVUL139基因具有高度的多态性；UL139基因分型与HD的临床分型无关；UL139基因与UL144基因无相关性。     

人巨细胞病毒临床分离株US28基因的研究

目的 研究US28基因在儿童人巨细胞病毒临床分离株中的多态性，探讨多态性与致病性间的关系。方法 对临床分离株进行PCR扩增和HMA—SSCP分析，选取有代表性的毒株进行克隆和测序，对测序结果进行序列分析。结果 测序结果可见US28核酸变异比较普遍，变异集中在序列的两端，大部分变异是同义突变，US28的重要功能基团高度保守；氨基酸变异使临床株的US28编码蛋白的二级结构呈现出3种新构象；未发现US28基因多态性与临床致病性的联系；GenBank序列与临床分离株序列的氨基酸高突变位点不尽相同。结论 US28基因变异在临床分离株中普遍存在，临床株序列与GenBank序列在氨基酸的高突变位点上存在差异；实验室标准株VHL／E株比AD169株和TOWNE株更接近临床株。     

一起诺如病毒感染性腹泻暴发疫情流行病学调查

目的了解一起诺如病毒感染性腹泻暴发的特点和流行原因，探讨暴发疫情调查处理的经验，为制定防治对策提供科学依据。方法对开平市月山镇一起诺如病毒暴发疫情用流行病学方法进行分析。结果该镇水井片11月25日至12月5日共发生感染性腹泻238例，罹患率4．18％；患者各年龄组均有发病，青壮年居多；患者大多呈腹泻、呕吐等胃肠炎症状，病情较轻；对搜索到的575户2347人进行发病聚集性分析，发现有明显的家庭聚集性；不同村委会发病差异有统计学意义。部分病人粪便标本经检测诺如病毒阳性。疫情经加强饮用水消毒、病人隔离治疗、开展爱国卫生运动和健康教育等综合措施后得到控制。结论本起暴发疫情由诺如病毒感染引起，供水系统受到一过性污染是引起水源性暴发的主要原因。加强饮用水的消毒与管理，开展健康教育是控制疫情的关键。     

狂犬病毒糖蛋白及核蛋白在非复制型痘苗病毒天坛株中的共同表达

目的　提高重组痘苗病毒狂犬疫苗的有效性和安全性。方法　利用TK区表达狂犬病毒糖蛋白 (RG)的重组痘苗病毒作为亲本株 ,通过两步同源重组 ,删除痘苗病毒基因组CK片段间与毒力和宿主范围相关的核酸片段 ,同时将狂犬病毒核蛋白 (RN)基因插入C K片段之间 ,获得了含有RG基因和RN基因的非复制型重组痘苗病毒VTKRGΔCKLacZRN。结果　经PCR鉴定 ,RN基因已插入CK区 ;Westernblot结果显示 ,该株病毒能同时表达RG和RN ,相对分子质量 (Mr)分别为 6 5× 10 3 和 5 0 5× 10 3。VTKRGΔCKLacZRN在人源细胞如TK 143细胞中不能正常繁殖 ,在鸡胚成纤维细胞 (CEF)中能正常复制。与非复制型重组病毒VTKRGΔCK相比 ,VTKRGΔCKLacZRN免疫小鼠后能更快地诱生较高滴度的中和抗体 ,效果相当于复制型重组病毒VTKRG免疫组 ;它们均能保护小鼠针对致死剂量狂犬病毒国际标准攻击毒株 (CVS)的攻击。结论　VTKRGΔCKLacZRN具有良好的免疫效果和安全性     

2011年云南楚雄地区狂犬病疫情分子流行病学研究

目的 针对2011年发生于云南楚雄地区的狂犬病疫情开展分子流行病学调查分析.方法 通过直接免疫荧光试验(DFA)和RT-PCR方法对采集样本进行检测.采用DNAstar中MegAlign软件和MEGA 3.1软件Neighbour-joining(NJ)方法分别进行病毒样本N基因的同源性分析和系统进化分析.结果 在23份脑组织或脑脊液标本中,11份实验室检测结果为阳性,阳性率为47.8％.核蛋白(N)基因同源性结果表明,来自犬只的病毒样本与基因Ⅰ型Asia 1a亚型病毒同源性最高,核苷酸同源性为99.2％ ～ 99.4％之间,与Asia 2c基因亚型病毒核苷酸同源性为88.5％～89.6％.进化树分析结果表明,本研究分离到的病毒样本与Yunnan-ZT07处于同一进化分支内.结论 引发本次疫情的狂犬病毒属于基因Ⅰ型Asia 1a亚群,且此次疫情可能与2007年云南昭通流行毒株Yunnan-ZT07的输入关系密切.     

中国狂犬病毒RdRp基因特点

目的 测定中国狂犬病毒人用疫苗株aG和减毒株CTN181的RdRp编码(L)基因序列并初步研究其结构和功能特点.方法 RT-PCR法获得若干交叉重叠小片段,序列拼接得到完整RdRp编码基因序列,利用生物学软件进行同源性和种系发生分析,并对RdRp保守功能序列和位点进行预测分析.结果 中国狂犬病毒aG和CTN181株的L蛋白分别由6387和6384个核苷酸编码的2128和2127个氨基酸组成,前者比后者在起始部位多编码一个Met.结构功能分析发现在L蛋白上存在若干可能对RNA合成、mRNA聚腺苷酸化和磷蛋白磷酸化以及甲基转移酶的功能起决定作用序列;种系发生树显示中国疫苗株aG相对独立于WHO推荐使用的其他疫苗株.结论 完整L基因结构揭示,对于全面了解中国狂犬病毒分子特征,发现新的功能位点,开发以RdRp为靶标的新型抗病毒药物研究以及弹状病毒科种系发生分析提供了有力的工具.     

狂犬病病毒糖蛋白和核蛋白基因的克隆及其重组蛋白在昆虫细胞中的表达

目的从国内狂犬病疫苗ａＧ株中克隆狂犬病病毒糖蛋白（ＧＰ）基因和核蛋白（ＮＰ）基因，应用杆状病毒－昆虫细胞表达系统使其在昆虫细胞中表达。方法从狂犬病病毒感染细胞上清液中提取病毒ＲＮＡ，应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增ＧＰ基因和ＮＰ基因。扩增的基因与转移质粒连接并转化大肠杆菌，得到重组转移质粒。将其与野生杆状病毒（ＡｃＭＮＰＶ）线性ＤＮＡ共转染Ｓｆ９昆虫细胞，通过有限稀释法筛选含有ＧＰ基因和ＮＰ基因重组病毒。初步检测了重组蛋白的抗原性。结果用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到ＧＰ基因和ＮＰ基因，通过重组转移后重组病毒感染的细胞经免疫印染实验表明可分别表达ＧＰ和ＮＰ重组蛋白。重组蛋白的分子量分别为５８×１０３和５３×１０３。用重组病毒感染的细胞免疫小鼠后可诱导动物产生特异性抗体。结论可以应用杆状病毒－昆虫细胞表达系统表达狂犬病病毒ＧＰ和ＮＰ重组蛋白，为开发基因工程化狂犬病疫苗提供有意义的资料     

无锡地区流感病毒病原学监测及H3亚型血凝素基因变异研究

目的 监测无锡地区2005年至2008年季节性流感型与亚型分布并了解2008年部分A/H3N2分离株血凝素(8A)基因变异状况.方法 无锡地区医院门诊流感样患者及集体单位聚集性流感样暴发患者采集鼻咽拭标本,接种MDCK细胞,采用标准抗血清鉴定阳性分离株型与亚型,并对2008年部分H3亚型流感病毒进行HA全基因测序,分析HA基因变异状况.结果 2005年至2008年9月,在无锡地区流感样患者中共分离到435株流感病毒,其中164株为A/H1N1亚型,80株为MH3N2亚型,B型191株.型与亚型有明显季节性分布强弱特征.H3亚型HA序列分析,无锡地区9株分离株与上海地区同期分离株接近,有很多序列相互穿插归属于进化树的同一分支,与WHO 2008-2009年疫苗推荐株相近.结论 近年无锡地区散发和局部暴发流感病毒感染仍主要为A/H1N1、A/H3N2和B型,A/H3N2 HA基因与上海地区同期分离株接近,与WHO 2008-2009年疫苗推荐株相近.     

狂犬病病毒核蛋白及糖蛋白在杆状病毒表达系统中的共表达及鉴定

目的 利用杆状病毒表达系统共表达狂犬病病毒CTN-1V株核蛋白(nucleoprotein,NP)及糖蛋白(glycoprotein,GP).方法 RT-PCR分别扩增CTN-1V株病毒GP、NP编码区基因,分别依次克隆入转移质粒pFastBacDual的PP10区及PPH区构建杆状病毒重组转移质粒P-NG,转化DH10Bac E.coli感受态细胞获得重组穿梭质粒A-NG,转染Sf9细胞获得重组杆状病毒Bac-NG,高效表达目的蛋白NP、GP,进行Western blot分析.结果 重组杆状病毒穿梭质粒A-NG经PCR鉴定证明构建正确;狂犬病病毒NP、GP在重组杆状病毒感染的Sf9细胞中获得正确表达,表达的重组蛋白NP、GP相对分子质量(Mr)约为51×103、59×103;表达的重组蛋白NP、GP均可与抗RV小鼠血清特异性结合.结论 成功共表达狂犬病病毒CTN-1V株NP、GP,表达产物具有良好的抗原性,为狂犬病病毒基因工程疫苗及诊断试剂的研究奠定了基础.     

湖南3县(市)狂犬病病毒分子生物学研究

目的研究湖南省狂犬病高发区和无病例区动物携带狂犬病的分子生物学特征。方法用直接免疫荧光法检测犬唾液及犬、猫脑标本，以RT．PCR法复核阳性进行遗传学分析。结果武冈市和洞口县送检的82只和17只犬中，分别有12只和1只检测到狂犬病毒抗原与核苷酸阳性，阳性率分别为14．63％和5．88％。凤凰县67份大脑标本未检测出病毒。28份猫脑组织标本也未检测出狂犬病毒。用RT-PCR法扩增阳性大脑组织（编号为Wg13，Dk13）的狂犬病毒N基因，两株病毒之间核苷酸与氨基酸的同源性分别为99、4％及99．1％；Wg13株与中国疫苗株CTN株和aG株的核苷酸同源性（氨基酸）分别为89．4％（98．2％）、86．1％（95．1％）；Dk13株与中国疫苗株CTN株和aG株的核苷酸同源性分别为89．1％（98．0％）、86．1％（94．9％）。与其他国家分离到的狂犬病毒相比，两株病毒与印度尼西亚的同源性最大，分别为92．8％、93．2％，而与印度、日本及斯里兰卡等其他国家同源性相对较小。结论两株狂犬病毒均为I型狂犬病毒。其N基因的核苷酸序列与当前使用的疫苗株相比，两株病毒与CTN疫苗株分在同一组，同源性较大。     

Molecular epidemiology of rabies in Colombia 1994-2005 based on partial nucleoprotein gene sequences

One hundred and twenty-four rabies viruses (RABV) were isolated from humans and eight species of mammals in Colombia during 1994–2005. To determine the genetic and reservoir-associated diversity cDNA fragments encoding 88 amino acids at the carboxyl terminus of the nucleoprotein were sequenced and used in phylogenetic analyses. Eight genetic lineages (GL) were characterized. GL1, GL2 and GL3 consisted of dog-associated antigenic variant (AV) 1 RABV, isolated in the centre-east, north and southwest of Colombia, respectively. GL1 is apparently extinct in Colombia. The GL4 were AV3, AV8 and non-determined (ND) AV viruses associated with hematophagous bats. The GL5 and GL6 consisted of AV4 viruses. GL6 isolate was found associated with Tadarida brasiliensis bats. GL5 segregated independently. The GL7 and GL8 segregated independently within clades associated with colonial insectivorous and solitary bats, respectively. Both of these were represented by NDAV viruses. Viruses isolated from humans grouped within GL2, GL3 and GL4, which in turn corresponded to AV1, 3, 8 and ND. Dogs and D. rotundus are the two major rabies reservoirs and vectors in Colombia. Insectivorous bats may also be important rabies reservoirs but spillovers to other species are rare. Our data were consistent with previous studies in which partial Psi, G and L gene sequences were analyzed. Our results confirmed the existence of RABV of unclassified AV in Colombia.     

重组狂犬病毒在原核细胞中的表达

目的：探讨狂犬病毒Ｎ蛋白的免疫原性,方法：采用生物工程技术,基因重组方法。结果：以狂犬病毒基因文库及ＩＬ－２基因文库设计两对引物,基因扩增后分别得到完整狂犬病毒Ｎ蛋白基因片段（１．４ｋｂ）和ＩＬ－２基因片段（０．４ｋｂ）两基因片段经重组后,构建了狂犬病毒Ｎ蛋白及ＩＬ－２重组基因工程菌,重组基因产物具有特异性生物活性,用ＩＬ－２单抗检测有一定ＩＬ－２活性,免疫小鼠后,小鼠可抵抗狂犬病毒脑内攻击,结论