逍遥散对雌性兔膝关节软骨细胞超微结构的影响

目的:探讨逍遥散对雌性兔膝关节软骨细胞超微结构的影响。方法:采用改良Huith法对30只雌性新西兰兔右膝关节进行膝骨关节炎造模,造模1周后将30只实验兔随机分为逍遥丸组、玻璃酸钠组及对照组,每组10只。逍遥丸组每天每只给予8丸逍遥丸(相当于原药材3 g),配成30 mL液体灌胃,连用5周;玻璃酸钠组予以玻璃酸钠注射液0.15 mL.kg-1右膝关节内注射,每周1次,连用5周;对照组每天予以30 mL生理盐水灌胃,连用5周。造模后12周末处死所有实验兔,取右膝内侧胫骨平台软骨组织切片后透射电镜观察。结果:逍遥丸组细胞核正常,核膜完整,核质均匀,线粒体嵴部分模糊,出现空泡化现象,内质网、高尔基体正常,纤维组织稍紊乱,有凋亡小体存在;玻璃酸钠组细胞核正常,核膜完整,核质均匀,线粒体空泡化较轻,内质网、高尔基体正常,纤维组织稍紊乱,有凋亡小体存在;对照组细胞核可见固缩现象,线粒体异常,表现为线粒体嵴模糊、消失,空泡化现象较明显,内质网、高尔基体基本正常,纤维组织紊乱现象较明显,多个标本见凋亡小体。结论:逍遥散对雌性兔膝关节软骨细胞具有保护作用。     

高静水压下益气活血汤通过p38MAPK信号通路对兔椎体终板软骨细胞的调控作用

目的观察益气活血汤含药血清在高静水压下对兔终板软骨细胞p38MAPK信号通路的调控作用,探讨益气活血汤治疗椎间盘退行性病变的可能作用机制。方法选用3月龄新西兰白兔制备益气活血汤含药血清,体外分离培养第3代兔椎体终板软骨细胞,建立体外高静水压加载干预模型,确定益气活血汤含药血清最佳干预条件。将体外培养的第3代终板软骨细胞随机分为空白组、模型组及含药血清组,空白组无任何干预,其余2组分别施加1 MPa静水压干预24 h后收集终板软骨细胞,运用Western Blot法检测各组终板软骨细胞p38、磷酸化p38蛋白表达情况。结果持续高静水压干预下,1μg/μL含药血清促终板软骨细胞增殖作用最明显。各组终板软骨细胞p38蛋白表达量比较差异无统计学意义;模型组磷酸化p38蛋白表达量显著高于空白组,而含药血清组磷酸化p38蛋白表达量显著低于模型组(P0.05)。结论益气活血汤可以提高持续高静水压下终板软骨细胞增殖率,抑制软骨细胞凋亡,可能与其降低磷酸化p38蛋白表达水平,抑制p38MAPK信号通路的激活有关,推测益气活血汤可能通过调控p38MAPK信号通路发挥延缓椎间盘退行性病变的作用。     

六味地黄汤含药血清对兔软骨细胞表型的影响

目的:探讨六味地黄汤含药血清对关节软骨细胞增殖及表型的影响。方法:无菌条件分离新生24小时胎兔长骨干骺端透明软骨,用酶消化法分离原代关节软骨细胞,取P_2代软骨细胞分别种于96孔板(用于细胞增殖实验)和6孔板(用于细胞分泌性蛋白检测),设置空白对照组、正常兔血清组和六味地黄汤含药血清组,每组4个复孔。连续干预96小时后,CCK8法测定细胞增殖情况,ELISA法测定各组培养上清中Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,colⅡ)、糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量。结果:干预结束后,CCK8法测定正常兔血清组和六味地黄汤含药血清组OD值均高于空白对照组,六味地黄汤含药血清组OD值高于正常兔血清组,差异均具有统计学意义(P0.05);ELISA法检测六味地黄汤含药血清组colⅡ、GAG含量均高于空白对照组,差异均具有统计学意义(P0.05);与正常兔血清组比较,六味地黄汤含药血清组GAG含量高于正常兔血清组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:六味地黄汤含药血清可以促进体外培养兔关节软骨细胞的增殖,促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原和GAG,从而更好地维持软骨细胞表型。     

海桐皮汤熏蒸对兔实验性膝骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的:探讨海桐皮汤熏蒸对实验性兔膝关节骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响。方法:取45只新西兰大白兔,随机取10只作为正常对照组(A组),其余35只采用Hulth方法造模,1周后取30只元膝关节感染实验兔,随机分为3组(每组10只):并随机分为模型组(B组)、水蒸气熏蒸组(C组)和海桐皮汤熏蒸组(D组)。分别采取相应的处理方法4周后处死取材,采用流式细胞术检测软骨细胞凋亡状况。结果:正常组兔关节软骨细胞凋亡率为18.57%,模型组29.41%,水治疗组和药物治疗组分别为28.26%、21.09%。与正常组相比,模型组、水蒸气熏蒸组、海桐皮汤熏蒸组有显著差异(P<0.05);与模型组相比水蒸气熏蒸组、海桐皮汤熏蒸组有显著差异(P<0.05);与水蒸气熏蒸组相比海桐皮汤熏蒸组有显著差异(P<0.05)。结论:海桐皮汤熏蒸可显著减少实验性兔膝关节骨性关节炎软骨细胞凋亡,从而延缓关节软骨的退变,促进软骨修复的作用。     

成年兔骨髓基质细胞之软骨细胞表型的诱导及体外长期培养时表型的维持

目的 探讨体外诱导成年兔骨髓基质细胞(MSCs)表达并长期保持软骨细胞表型的方法.方法 原代骨髓基质细胞传代后,以含rhTGF-β1、地塞米松、维生素C等的成软骨培养液诱导培养,以倒置相差显微镜观察细胞形态变化,通过甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化检测诱导的MSCs的软骨细胞表型.诱导的MSCs在体外长期持续或间断以含1ng/ml rhTGF-β1诱导液培养,以单纯DMEM培养为对照,观察细胞传5代后的表型变化.结果 原代培养的MSCs传代后,在成软骨诱导培养后,细胞逐渐由梭形变为多边形,诱导7d后即可表达Ⅱ型胶原,甲苯胺蓝染色阳性.具软骨细胞表型诱导后的MSCs在间断或持续以低浓度rhTGF-β1诱导下长期培养,仍可保持其软骨细胞表型,对照组则表现为成纤维样细胞.结论 成年兔骨髓基质细胞可在体外培养条件现下诱导成软骨细胞,低浓度的TGF-β1可维持诱导的骨髓基质细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原.     

模拟微重力培养环境下载威灵仙丝素蛋白微球对软骨细胞表型分化的影响

目的:研究模拟微重力培养环境下载威灵仙丝素蛋白微球三维培养对软骨细胞表型分化的影响及机制.方法:高压静电法结合冷冻技术制备载威灵仙总皂苷的丝素蛋白多孔微球,扫描电镜观察支架的形貌及孔隙,香草醛-高氯酸显色方法检测威灵仙总皂苷的释放率.利用液动力聚焦细胞培养系统体外模拟微重力培养环境,将提取的兔膝关节软骨细胞分为3组:空...     

鹿茸多肽对兔骨性关节炎软骨细胞的影响

目的:观察鹿茸多肽对兔骨性关节炎软骨细胞的影响。方法:参考Hulth法建立骨性关节炎模型,给予不同浓度的鹿茸多肽进行干预,分别进行MTT法检测、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,获得鹿茸多肽对软骨细胞作用。结果:鹿茸多肽对骨性关节炎软骨细胞有一定的增殖作用,骨性关节炎软骨细胞直接分泌到胞外的基质金属蛋白酶含量变化不明显,骨性关节炎软骨细胞核酸中金属蛋白酶有一定表达。结论:骨性关节炎软骨细胞在正常分化及增殖发生改变过程中,其软骨基质的降解是金属蛋白酶与其它因子协同作用的结果;鹿茸多肽有促进骨性关节炎软骨细胞增殖作用,并可抑制骨性关节炎软骨细胞中金属蛋白酶的过度表达,可能对治疗骨性关节炎有较好的作用。     

复骨健步片对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的：观察复骨健步片对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响，探讨其治疗膝骨性关节炎的机制。方法：将48只家兔随机分为4组，A为正常对照组，B为模型组，C为壮骨关节丸组，D为复骨健步片组，每组12只，B、C、D组造模成功后。A、B组予生理盐水，C组予壮骨关节丸，D组予复骨健步片。第2、4、6周每组各处死4只兔，取关节软骨观察细胞凋亡及计数。结果：第2周，C、D两组凋亡显著低于B组（P〈0．01），且两组间差异无统计学意义；第4、6周，B、C、D三组凋亡显著高于A组（P〈0．01），D组显著低于B、C组（P〈0．01）。结论：复骨健步片可以明显降低骨关节炎中软骨细胞的凋亡率，从而达到保护软骨细胞，延缓发病的目的。     

针刀对膝骨关节炎兔软骨细胞氧化应激的影响

目的 通过观察针刀干预对膝骨关节炎（KOA）兔软骨细胞氧化应激的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法 将28只健康清洁级雄性新西兰兔随机分为空白组、模型组、电针组及针刀组,每组7只。除空白组外,余组以改良后Videman左后肢伸直位固定法造模并制动6周。治疗组干预4周后离体取材,用试剂盒分别测定各组膝软骨细胞一氧化氮合酶（NOS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px)活力,用免疫组化法测定各组膝软骨细胞内γ-H2AX表达。结果 模型组较空白组软骨细胞NOS及MDA活力升高（P <0.01）,SOD及GSH-Px活力下降（P <0.01）;针刀组NOS及MDA活力较模型组下降（P <0.05）,针刀组及电针组SOD活力较模型组均升高（P <0.05）;模型组、电针组、针刀组之间GSH-Px活力无明显差异（P> 0.05）。模型组软骨细胞内γ-H2AX表达较空白组强（P <0.01）,针刀组、电针组表达较模型组弱（P <0.05）。结论 针刀干预可通过降低软骨细胞NOS及MDA活力、升高SOD活力、减缓软...     

参麦注射液对IL-1β体外诱导兔软骨细胞增殖的影响

目的：观察参麦注射液对白细胞介素-1β（IL-1β）体外诱导兔软骨细胞增殖的影响。方法：采用IL-1β体外诱导兔软骨细胞的方法,建立变性软骨细胞模型,将其分为空白组、模型组、1％参麦组、5％参麦组和10％参麦组。空白组采用含10％胎牛血清的DMEM培养液培养;模型组采用含10ng／mLIL-1β的DMEM培养液培养;1％、5％、10％参麦组采用含10ng／mg/mLIL-1βDMEM培养液培养24h,再分别采用含1％、5％、10％参麦注射液的DMEM培养液培养。采用MTT比色法检测软骨细胞的增殖情况。结果：模型组吸光度值（OD值）低于空白组,2组比较,差异有非常显著性意义（P〈0．01）,说明IL-1β可抑制软骨细胞的增殖,建立变性软骨细胞模型。模型组及不同浓度参麦组间的OD值比较,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）,不同浓度的参麦注射液均可明显促进变性软骨细胞的增殖,其增殖作用与参麦注射液浓度呈正相关。结论：参麦注射液能够明显促进IL-1β体外诱导兔软骨细胞的增殖,这可能是参麦注射液防治关节退变的机理之一。     

补肾益气活血方含药血清对兔软骨细胞增殖和bFGF-mRNA表达的影响

目的观察补肾益气活血方对体外培养兔软骨细胞增殖和bFGF-mRNA表达的影响。方法体外分离、培养兔膝骨关节软骨细胞,检测细胞增殖和软骨细胞bFGF-mRNA原位表达。结果补肾益气活血方高、中、低剂量组细胞增殖均优于对照组(P<0.05),软骨细胞bFGF-mRNA表达均显著高于对照组(P<0.01)。结论补肾益气活血方能促进关节炎软骨细胞bFGF-mRNA表达,加强软骨细胞增殖。     

龟鹿二仙胶汤及其拆方对大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响,比较龟鹿二仙胶汤中各药物组成在全方中的作用。方法:取1月龄SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,采用实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53mRNA表达。结果:龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角、人参、枸杞、盐酸氨基葡萄糖均可显著抑制大鼠软骨细胞Bax、Caspase-3、P53的表达;龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角与盐酸氨基葡萄糖效果相当,人参、枸杞弱于盐酸氨基葡萄糖。结论:龟甲和鹿角是龟鹿二仙胶抑制凋亡的主要物质。龟甲、鹿角峻补阴阳以生气血精髓的作用可以一定程度上从抑制软骨细胞凋亡来体现。人参大补元气、枸杞滋补肾阴,抑制凋亡有效,但效果明显不如龟鹿二仙胶;而4味药共同作用,具有填补精髓、益气壮阳之功,人参、枸杞可以在一定程度上加强龟甲、鹿角抑制软骨细胞凋亡基因的表达。     

针刺对眼压已控制的慢性高眼压兔视网膜保护作用的研究

目的:观察针刺对眼压已控制的慢性高眼压兔的保护作用。方法:以大耳白兔为实验动物,通过前房注射复方卡波姆溶液造成慢性高眼压模型,28天后通过滤过性手术使眼压恢复正常。分层随机分为模型组、针刺组、电针组、神经营养剂组,并设正常组。予针刺和电针治疗4周,观察其对各组兔视网膜形态学和视网膜节细胞(RGCs)计数的影响。结果:实验结束时各组动物出现显著差异,针刺组、电针组兔视网膜病理结构损伤较轻,视网膜节细胞(RGCs)数量明显高于模型组(P0.05)。结论:针刺能保护高眼压损害的视神经,作用主要表现为减轻视网膜结构损伤,减少视网膜神经节细胞的凋亡。     

龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的比较研究

目的：通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的影响,比较在生理及病理状况下龟鹿二仙胶汤及拆方各药物的作用。方法：取1月龄SD大鼠和4月龄豚鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,运用MTT法比较龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对不同软骨细胞增殖的影响。结果：中药血清各组对SD大鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用,西药组明显高于中药各组;龟板与全方效果相当。中药血清各组对豚鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用。龟鹿二仙胶、龟板促增殖效果与西药相比差异无统计学意义。人参的促增殖作用也比作用于正常软骨细胞时有所增强。结论：在病理状态下,龟鹿二仙胶、龟板的促增殖作用明显增强,人参在细胞机能状况下降时才明显发挥补虚作用。     

龟鹿二仙胶汤及其拆方对关节软骨细胞增殖的作用

目的:分析龟鹿二仙胶汤方、鹿茸、龟板、人参和枸杞药理血清对大鼠关节软骨细胞的调节作用,探讨中药治疗骨性关节炎的机理。方法:使用酶消化法,建立大鼠关节软骨细胞培养体系;采用MTT法,筛选出龟鹿二仙胶汤、鹿茸、龟板、人参和枸杞作用软骨细胞的最佳药理血清浓度。通过形态学、细胞超微结构观察、MTT法、流式细胞仪细胞增殖指数测定,分析龟鹿二仙胶汤方、鹿茸、龟板、人参和枸杞含药血清以及IGF-I对照组对软骨细胞增殖的影响。结果:建立了大鼠关节软骨细胞培养体系。通过MTT法筛选了龟鹿二仙胶汤及其拆方最佳药效的药理血清。龟鹿二仙胶汤药物血清组、IGF-I对照组能显著促进软骨细胞的增殖,其余各拆方组与正常组比较,无显著性差异,药效低于全方组。结论:证实了药物血清的制备与获得应通过实验筛选得出。龟鹿二仙胶汤能显著促进软骨细胞的增殖,全方药效优于拆方各组,体现了中药复方配伍的优越性。深化了中医"肾主骨"理论与软骨细胞增殖的关系的认识,进一步丰富了中医"肾主骨"理论的现代科学内涵。     

马钱子碱对体外软骨细胞凋亡线粒体途径的影响

目的:探讨中药马钱子主要成分马钱子碱(strychnine)影响体外SD大鼠软骨细胞凋亡的作用机制,为骨关节炎的临床用药提供理论依据。方法:将体外培养的SD大鼠软骨细胞分为5组,分别加入正常培养液、凋亡诱导剂(SNAP)、SNAP 高剂量马钱子碱、SNAP 中剂量马钱子碱、SNAP 低剂量马钱子碱混合培养。并于培养20h后,流式细胞仪检测软骨细胞早期、晚期凋亡率;免疫组化及Western免疫印迹法观察与细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果:马钱子碱可抑制软骨细胞凋亡,其凋亡率随马钱子碱剂量增大而降低;各剂量组早期凋亡率明显高于晚期凋亡率,与晚期凋亡率相比(P<0.05),差异有统计学意义。正常对照组胞浆内细胞色素C(cytochrome C,CytC)及Smac极少表达,SNAP诱导凋亡后,释放入胞浆的CytC及Smac表达明显增加,但随马钱子碱剂量的增大,其活性降低。结论:马钱子碱可抑制SNAP诱导的鼠软骨细胞凋亡,其保护软骨的作用可能是通过线粒体通路实现。     

糖肝康对糖尿病肝损伤模型大鼠肝脏PCNA表达的影响

目的 观察以健脾益气调肝解毒活血为治法组方的中药糖肝康对糖尿病慢性肝损伤模型大鼠肝脏中PCNA免疫组化表达的影响.方法 用腹腔注射链脲佐菌素联合硫代乙酰胺方法复制糖尿病慢性肝损伤大鼠模型,药物干预12周后,观察糖肝康对糖尿病慢性肝损伤大鼠肝脏中PCNA表达的影响.结果 糖肝康可降低糖尿病慢性肝损伤模型大鼠的肝脏中PCNA表达水平.结论 糖肝康可通过影响PCNA表达水平,在改善糖尿病肝损伤方面发挥积极作用,值得进一步深入研究.