异基因大鼠小肠移植选择素的表达与急性排斥反应的相关性

目的: 建立大鼠异位全小肠移植的急性排斥反应动物模型,分析急性排斥反应过程中选择素的表达变化及其在排斥反应中的意义.方法: 选用近交系Wistar/A和F344/N大鼠建立全小肠移植模型.实验共分4组,每组供受体各18只:第1组非手术对照组(F344/N);第2组同基因移植组 (F344/N→F344/N);第3组异基因移植组(F344/N→Wistar/A);第4组异基因移植治疗组(F344/N→Wistar/A FK506).每组分别于术后第3,5,7日处死,在无菌条件下取移植肠行常规HE染色,观察组织学变化;免疫组织化学染色测组织中选择素的表达,同时检测移植肠中选择素mRNA表达的变化.结果: 异基因大鼠异位全小肠移植术后3,5,7 d可出现典型的轻、中、重度排斥反应,而同基因组及异基因移植治疗组中未出现排斥反应. P-选择素在异基因移植术后早期显著升高,但随着排斥反应的加重,持续升高不明显,而E、L-选择素随着排斥反应的加重而持续升高,而同基因移植及治疗组选择素的升高不明显,且治疗组略低于同基因移植组.结论: 早期肠黏膜中P-选择素的表达对急性排斥反应的早期诊断及治疗有一定意义.     

白细胞介素10和γ干扰素基因表达在大鼠肝移植排斥反应诊断中的意义

目的:研究探讨白细胞介素10和γ干扰素基因表达在大鼠肝移植排斥反应诊断中的意义。方法:以成年、健康的二级雌性SD大鼠、Wistar大鼠为研究对象,体重为(250±20)g,实施肝移植手术,术后采用RT-PCT技术对大鼠白细胞介素10(IL-10)和γ干扰素基因(IFN-γ)表达进行检测,并以组织病理学结果为急性排斥反应的诊断标准,将大鼠分为排斥组与非排斥组,对比观察两组大鼠的IL-10与血清IFN-γ含量及移植肝脏内IL-10与IFN-γ基因表达情况。结果:同系移植组肝移植后肝细胞、组织、结构轻微变化,同种异体移植组则变化显著,严重紊乱。同系移植组血清IL-10含量最高,显著高于同种异体移植组与对照组(P0.05);同种异体移植组IFN-γ含量最高,显著高于同系移植组与对照组(P0.05)。同系移植组肝脏IL-10 m RNA表达水平显著高于对照组与同种异体移植组(P0.05);同种异体移植组IFN-γm RNA表达水平显著高于对照组与同系移植组(P0.05)。结论:大鼠肝移植手术后发生排斥反应的IL-10表达显著降低,IFN-γ表达显著增高,两者表达的变化可作为早期诊断肝移植术后急性排斥反应的诊断指标,为临床诊断提供依据。     

同种异体组织工程复合皮肤移植修复大鼠皮肤缺损

目的：检测组织工程皮肤的生物活性及免疫原性，探讨临床可行性。方法：以新生SD大鼠皮肤为原材料培养组织工程复合皮肤并将其移植到成年Wistar大鼠，通过大体观察，组织学检测对不同时间自体，异体及组织工程复合皮肤移植进行比较，研究了组织工程复合皮肤的存活及免疫排斥情况。结果：异体皮肤移植组有明显的免疫排斥，组织工程皮肤组见有明显排斥，且与自体皮肤结合良好。结论：组织工程复合皮无明显的免疫排斥，是较好的皮肤移植替代品，具有潜在的发展前景。     

大鼠移植肾组织急性排斥反应中Fas基因的表达与细胞凋亡的关系

目的 :探讨肾移植急性排斥反应大鼠移植肾组织中Fas基因的表达与细胞凋亡的关系。方法 :分别取4 6只SD成年大鼠和 4 6只Wistar成年大鼠 ,将SD大鼠左肾原位移植至Wistar大鼠左肾区 ,建立大鼠同种异体肾移植模型 ,以右侧肾为正常对照 ,应用免疫组织化学方法检测移植肾组织Fas基因的表达 ,应用原位DNA片段未端标记法检测移植肾组织细胞凋亡状态。结果 :正常大鼠肾Fas基因主要呈弱阳性或阴性表达 ,而移植肾Fas基因表达显著增强 ,且与肾曲小管细胞凋亡指数呈显著的正相关 (rs=0 .5 1 2 ,P <0 .0 0 1 )。结论 :大鼠移植肾Fas基因的过量表达可引起肾组织细胞的凋亡 ,导致移植肾结构的破坏和功能的丧失     

肾移植术后抗体介导排斥反应模型的构建与鉴定

目的：构建并鉴定一种肾移植术后抗体介导排斥反应（antibody?mediated rejection,AMR）的动物模型。方法：AMR动物模型采用Wistar大鼠作为供体,SD大鼠作为受体。将Wistar大鼠背部皮肤移植至SD大鼠背部,构建同种异体大鼠皮肤移植模型,分别在皮肤移植后1、3、7、10、14、21、28、35 d取大鼠血清,采用流式细胞术检测供者特异性抗体（donor specific antibodie,DSA）。在DSA最高时将供体肾脏移植至受体,构建同种异体大鼠肾移植AMR动物模型。分别于肾移植术后1~5 d收取移植肾及血清标本,行常规病理染色、C4d免疫荧光染色,以及血清DSA检测。结果：大鼠受体的血清DSA在皮肤移植术后第14天达到最高。相较于各对照组,AMR组大鼠移植肾出现显著的管周毛细血管炎和肾小球炎,免疫荧光示管周毛细血管C4d沉积显著增多,血清DSA显著升高（P < 0.05）,管周毛细血管炎、肾小球炎、C4d评分显著增高（P < 0.05）。结论：成功构建并鉴定一种同种异体肾移植术后AMR的动物模型。该模型操作简便易行,稳定性和性价比较高,具有较高的推广价值。     

转染病毒白细胞介素10基因对同种异体大鼠皮肤移植术后皮肤CD80和CD86表达率的影响

目的 探讨免疫调节因子vIL-10基因对修复同种异体大鼠全层皮肤缺损的免疫耐受作用,以期为解决皮肤移植领域的免疫排斥问题提供理论依据,为解决大面积皮肤缺损病人皮源不足问题奠定必要的基础.方法 将转染vIL-10的骨髓基质干细胞经腹腔注射输入实验组大鼠体内,以病毒白细胞介素10表达阳性的大鼠为受体,同种异体大鼠为供体,对照组为注射未转染vIL-10的骨髓基质干细胞的大鼠,空白组为注射同量生理盐水的大鼠,行同种异体全层皮肤移植.取3组1,2,3周的皮肤标本制成石蜡切片,进行免疫组织化学检测并拍照.观察在vIL-10的作用下CD80,CD86的表达率变化.结果 CD80,CD86表达率不断升高,但实验组表达率较同期对照组、空白组明显降低(P<0.05),同期对照组、空白组表达率无明显差异.结论 转染病毒白细胞介素10能够降低CD80,CD86的表达水平进而影响T淋巴细胞分型,从而降低机体的免疫排斥反应.     

胸腺内注射供体MHC抗原对同种异体肢体移植的影响

目的 探讨胸腺内注射异基因抗原对同种异体肢体移植存活的影响.方法 Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体.将SD大鼠随机分成3组,A组;自体肢体移植组;B组:异体肢体移植组;C组:胸腺内注射组.术后观察肢体的存活时间,并在术后7d进行移植肢体皮肤苏木精-伊红染色检查及血清IFN-γ细胞因子的检测.结果 C组肢体存活时间长于B组,差异具有统计学意义(P＜0.05).组织学检查发现,C组出现的炎症排斥反应以及组织的改变明显较B组轻,与A组相接近.IFN-γ的检测,C组低于B组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 胸腺内注射异基因抗原可以对异体肢体移植产生特异性免疫耐受作用.     

同种异体肢体移植特异性免疫耐受诱导方案的研究

目的探讨联合应用亚致死量放射线照射、氟达拉滨及骨髓腔内骨髓移植对诱导大鼠同种异体肢体移植产生特异性免疫耐受的影响。方法以纯系SD大鼠及Wistar大鼠为供受体，行同种异体右后肢移植。40只大鼠肢体移植后随机分为4组：A组：仅进行肢体移植；B组：在肢体移植前1d，受体给予亚致死量^60Co照射及腹腔内注射氟达拉滨；C组：肢体移植当天受体接受供体骨髓腔内骨髓移植；D组：受体联合应用亚致死量照射、注射氟达拉滨及骨髓腔内骨髓移植，用法及用量同B、C组。观察移植物排斥反应征象及存活情况，并对D组产生免疫耐受大鼠进行SD大鼠及DA大鼠皮肤移植以及脾细胞中细胞因子mRNA检测。结果与其他实验组相比，D组移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著延长（P〈0．01）（〉120d）；D组大鼠仅对第3方DA大鼠的皮肤呈现强烈的免疫反应；与A组大鼠相比，D组大鼠Thl型细胞因子的表达明显降低，而Th2型细胞因子的表达明显增高。结论联合方案可以诱导大鼠同种异体肢体移植产生特异性免疫耐受。     

针灸对大鼠克罗恩病结肠组织E-选择素、ICAM-1表达影响的实验研究

目的 :探讨针灸对大鼠克罗恩病结肠组织E 选择素、ICAM 1表达的影响。方法 :在成功制备大鼠克罗恩病模型的基础上 ,随机分为隔药灸组、电针组和模型组 ,并设正常组进行对照。隔药灸组与电针组分别予以隔药灸、电针“天枢”、“气海”治疗 ,采用免疫组化方法检测各组大鼠结肠组织E 选择素、ICAM 1免疫阳性细胞的表达。结果 :与正常大鼠相比 ,模型组大鼠结肠组织E 选择素、ICAM 1的表达均有显著升高。电针组大鼠E 选择素、ICAM 1的表达有明显的下调 ;隔药灸组大鼠结肠组织ICAM 1的异常表达显著下降 ,但E 选择素的异常表达下降不明显。结论 :大鼠克罗恩病的发病与E 选择素、ICAM 1的异常表达有关 ;电针治疗可能是通过调节克罗恩病大鼠结肠粘膜ICAM 1与E 选择素的异常表达而取效 ,隔药灸治疗对克罗恩病大鼠结肠粘膜E 选择素的表达没有显著影响 ,提示隔药灸与电针疗法的作用机制可能不完全相同。     

FK506对心脏移植急性排斥反应Fas和Fas-L mRNA表达的影响

目的研究心脏移植急性排斥反应中供体心肌组织Fas及其配体Fas-L的mRNA的表达规律。同时探讨FK506在发挥免疫抑制作用时对二者的影响,阐述FK506在体内的作用机制。方法实验分为6组:①同系异体心脏移植组[Sprague-Dawley(SD)to SD,n=6];②同种异体移植组(Dahl to SD,n=6);③同种异体移植FK506治疗组(0.15 mg/kg.d肌肉注射,28 d,n=6),此3组观察移植心脏的存活时间。④~⑥分组情况与①~③相同,术后第5 d摘取移植心脏测定急性排斥反应强度,同时应用反转录-聚合酶链反应检测心肌Fas mRNA和Fas-L mRNA的表达水平。结果①同系异体移植组、同种异体移植FK506治疗组移植心脏存活时间(139.00±31.61)和(53.83±5.19)d明显长于同种异体移植组(7.17±0.75)d,(P<0.001);同时,前二者的急性排斥反应强度也明显低于后者(P<0.001)。②同种异体移植组心肌Fas mRNA和Fas-L mRNA的表达水平(Fas:0.62±0.26;Fas-L:0.34±0.12)明显高于同系异体移植组(Fas:0.39±0.16;Fas-L:0.16±0.05,P<0.05)和同种异体移植FK506治疗组(Fas:0.35±0.18;Fas-L:0.13±0.06,P<0.05)。结论心脏移植急性排斥反应中FasmRNA和Fas-L mRNA的表达增强。由此可以认为,急性排斥反应中浸润性免疫细胞表面将大量表达Fas-L,从而诱导表达有Fas分子的心肌细胞的凋亡。FK506在发挥免疫抑制作用时能够阻止Fas和Fas-L mRNA的转录而抑制Fas死亡蛋白途径,抑制排斥反应的发生,延长移植心脏存活时间。     

单核细胞趋化蛋白-1和NF-κB通路在心脏移植排斥反应中的作用

目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在心脏移植排斥反应中的表达及意义,并研究核因子-κB(NF-κB)通路在其中发挥的作用。方法 近交系SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,“套管连接技术”行颈部心脏移植术。将SD大鼠随机平均分为4组,急性排斥组：受体未采用任何治疗;CsA组：移植术后环孢霉素A(CsA) 10mg/kg治疗受体,术后60～90d采集移植心脏;免疫耐受组：采用Wistar大鼠脾细胞(SPC)和环磷酰胺(CP)预处理SD大鼠,14d后行颈部心脏移植术;PDTC组：移植术后腹腔注射吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)100mg/kg,1次/d,连续15d。Masson染色观察移植心脏纤维化程度,免疫组化及Western blotting检测MCP-1的表达。结果 急性排斥组、CsA组、免疫耐受组和PDTC组移植心脏存活时间分别为(6.53±2.48)d、(93.51±20.07)d、 (201.42±40.36)d和(142.37±24.64)d,PDTC组明显高于CsA组和急性排斥组(P＜0.05),且心肌纤维化程度明显减轻。各组MCP-1表达的积分光密度(IOD)值依次为(1.86±0.23)、(1.58±0.16)、(0.57±0.15)及(1.16±0.28),免疫耐受组明显低于其他３组,PDTC组显著低于急性排斥组和CsA组(P＜0.05)。结论 MCP-1的表达与排斥反应程度呈正相关,测定MCP-1的水平可预测移植心脏的功能状况;抑制NF-κB通路可减少MCP-1表达,明显减轻心脏移植排斥反应。     

CTLA4Ig基因表达对鼠皮肤移植免疫抑制作用的研究

目的　探讨静脉注射CTLA4Ig腺病毒后在大鼠体内的表达和对同种异体移植皮肤存活的影响 ,以及该载体应用的安全性 ,为该基因治疗方法在抑制器官移植排斥反应的临床应用奠定基础。方法　供体SD大鼠皮肤移植前 1周 ,用腺病毒作载体将CTLA4Ig导入Wistar大鼠体内 ,用蛋白质斑点印迹实验检测血清中CTLA4Ig的表达 ,用腺病毒荧光抗体检测腺病毒在脏器的分布。同时还观测了各脏器的病理改变及移植物生存时间。结果　CTLA4Ig腺病毒在肝、脾、心、肺、肾均有明显分布 ,但实质细胞均未见严重损伤性改变。CTLA4Ig基因能在血清中的表达高峰时间一般在 7d左右 ,移植皮肤的生存显著长于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　从静脉注射导入的CTLA4Ig基因能在大鼠体内表达并对同种移植的排斥反应有明显的抑制作用。     

基质细胞衍生因子-1与趋化因子受体4在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）与基质细胞衍生因子-1（CXCR4）在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植术后 免疫排斥反应中的作用。方法取15只Wistar大鼠作为正常对照组;取22只Wistar大鼠行自体角膜移植术作为自体组;取22只 SD大鼠与44只Wistar大鼠,以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体行穿透性角膜移植,术后随机抽取22只归入典必殊组,术眼滴 典必殊眼液（每日2次）,剩余22只归入异体组,术眼滴同等量生理盐水,共一个月。参照Larkin法对各组角膜植片进行临床评 估;分别于术后第5、9天取术眼角膜植片,行组织病理学观察、免疫组化检查、实时荧光定量PCR检测。结果自体组不发生排 斥反应,典必殊组角膜存活时间为24±0.32 d,远高于异体组10±0.36 d（P<0.001）。组织病理学检查发现异体组角膜有大量炎 性细胞浸润以及新生血管形成。SDF-1和CXCR4 mRNA在异体组角膜组织中表达水平明显升高（第5天P<0.001,第9天P< 0.01）,典必殊组较异体组明显降低。免疫组化检查发现SDF-1/CXCR4主要表达在角膜植片的上皮层与基质层,异体组角膜组 织SDF-1和CXCR4含量明显升高。结论SDF-1/CXCR4可能参与了大鼠角膜移植术后早期的排斥反应,其机制可能为SDF-1 特异性诱导CXCR4+细胞成熟和朝着排斥部位趋化,并促进角膜新生血管形成。     

MIF在小鼠同种皮肤移植排斥过程中的表达

目的：通过对巨噬细胞游走抑制因子(MIF)在小鼠同种皮肤移植排斥前后脾组织和移植皮片中的相对表达量分析，探讨MIF表达与小鼠同种皮肤移植排斥的关系。方法：利用小鼠同种皮肤移植模型，对皮肤移植后不同时间的小鼠脾细胞和移植皮片进行RNA提取及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)，以β肌动蛋白(β-actin)作为对照，比较移植前后MIF的相对表达量。结果：移植后的移植皮片中MIF的相对表达量有明显变化，移植后第1、7、14天，逐渐升高，在排斥高峰期第14天达到最高，第21天皮片完全排斥后下降，但仍比移植前水平高。在移植过程中，脾细胞MIF相对表达量无明显变化。结论：在移植排斥过程中，移植物局部MIFmRNA表达增强，提示MIF可能参与了小鼠同种皮肤移植的局部排斥反应。     

Immunological studies on the cellular phenotype involved in corneal allograft rejection

ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｅｌｕｌａｒｐｈｅｎｏｔｙｐｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｃｏｒｎｅａｌａｌｏｇｒａｆｔｒｅｊｅｃｔｉｏｎｕｓｉｎｇｗｈｏｌｅｍｏｕｎｔｓａｎａｌｙｓｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＣｏｒｎｅａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔ...     

移植肾组织中共刺激分子B7-1及相关蛋白的表达研究

目的研究尸体移植肾组织中共刺激分子B7—1及HLA—DR的表达规律，探讨阻断共刺激途径诱导免疫耐受在预防和治疗肾移植术后排斥反应中的应用。方法应用免疫组化ABC法检测56例尸体移植肾及5例正常供肾组织中B7—1及其相关蛋白的表达情况。结果急性排斥组移植肾组织中B7—1及HLA—DR强烈表达，并伴有大量CD^＋4及CD^＋8T细胞的浸润，与其余各组比较具有显著性差异（P〈O．01）。结论在发生移植排斥反应时。肾小管上皮细胞等作为抗原提呈细胞，主动表达B7-1，为T淋巴细胞的活化提供了协同刺激信号；通过阻断共刺激途径诱导移植免疫耐受，为寻找新型免疫抑制剂提供了理论基础。     

Expression characteristics of major histocompatibility complex class I-related chain A antibodies and immunoadsorption effect in sensitized recipients of kidney transplantation

Background  Sensitized recipients have a high risk of immunological graft loss due to hyperacute rejection and/or accelerated acute rejection. The presence of major histocompatibility complex class I-related chain A (MICA) antibodies has also been described associated with an increased rate of kidney-allograft rejection. The aim of this study was to describe the expression of MICA antibodies in sensitized recipients of renal transplantation and evaluate its influence on the kidney transplantation recipients.

Methods  A total of 29 sensitized recipients were included in this study. All patients received the MICA antibodies detection before and after protein A immunoadsorption. Panel reactive antibody (PRA), HLA-matches, acute rejection and postoperative one to four-week serum creatinine level were also collected and analyzed, respectively. No prisoners were used in this study.

Results  Eight patients (27.6%) in all 29 sensitized recipients expressed the MICA antibodies but did not show higher acute rejection rate than the non-expressed patients (3/8, 37.5% vs. 8/21, 38.1%; P=1.000). Recipients with PRA >40% showed higher expression levels of MICA antibodies than the recipients with PRA <40% (7/16, 43.8% vs. 1/13, 8.3%; P=0.044). HLA mismatch did not have any effect on the expression of MICA antibodies (P=1.000). MICA antibodies positive group had higher serum creatinine level than the control in postoperative one week ((135.4±21.4) µmol/L vs. (108.6±31.6) µmol/L, P=0.036), but no significant difference in postoperative four weeks ((89.0±17.1) µmol/L vs. (77.1±15.9) µmol/L, P=0.089). MICA antibodies decreased significantly after protein A immunoadsorption.

Conclusions  MICA antibodies increase in the sensitized recipients, which have significant effects on the function of allograft in early postoperative period. Protein A immunoadsorption can decrease MICA antibodies effectively in sensitized recipients.

     

Anti-CD25 monoclonal antibody modulates cytokine expression and prolongs allografts survival in rats cardiac transplantation

Objective To investigate the role of anti- interleukin-2 receptor（CD25) monoclonal antibody in the regulation of cytokine mRNA expression of IL-1β, IL-2, CD25, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, tumour necrosis factor-α (TNFα), and interferon-γ (IFNγ) in cardiac allografts to elucidate its immunological mechanism and role in rats that have undergone cardiac transplantation. Methods These in vivo studies were conducted using a rat MHC mismatch SD to Wistar heterotopic cardiac transplant model. Simulect, an anti-CD25 antibody, was used to prevent allograft rejection. An increase in the rate of allograft survival was observed. Rats were sacrificed on day 1, 3, 5, 7, 9, 11, 14 post-transplantation and hearts were harvested for furgher study. Cytokine mRNA expression was determined by semiquantitative RT-PCR. Results In the control group, cardiac allografts were rejected at 8.3±1.7 days after transplantation (mean±s).The rats who received CsA rejected the cardiac allograft at 26.4±5.7 days post-transplant. Allograft survival of Simulect-treated rats was 29.2±7.1 days (P&lt;0.05 vs controls). Rats treated with simulect and CsA had the longest survival of 55.0±11.6 days (P&lt;0.001 vs controls). CD25 mRNA expression in the heart tissue samples of treated rats was undetectable or very weak. However, the untreated group, CD25 expression increased, although anti-CD25 decreased this CD25 expression in the heart graft. Furthermore, in untreated allografts, IL-2, TNFα and IFN-γ were strongly expressed, an effect that markedly decreased after simulect treatment. Finally, IL-4, IL-5, IL-6 and IL-10 expression was strong in anti-CD25-treated allografts. Conclusions These results suggest that anti-CD25 antibody treatment may not only neutralize CD25 activity but also play a role in altering cytokine mRNA expression and prolong the survival of allografts.     

大鼠肝移植技术改进及免疫排斥初步观察

目的：对大鼠肝移植模型进行技术改进,并观察将SD大鼠肝脏移植至Wistar大鼠时免疫斥发生的规律,方法：将“二袖套法”肝称植技术在袖套管制作,受体麻醉,肝上下腔静脉,门静脉及肝下下腔静脉吻合等方面进行,行供肝取自SD大鼠的Wistar大鼠肝移植30例,并随机分为环孢霉素（CsA,2mg/kg,术后第1天至第7天皮下注射）治疗组和对照组,观察移植术后免疫排斥情况,结果：肝上下腔静脉吻合时间为6．5－10．0mg/kg,术后第1天到第7天皮下注射）治疗组和对照组,观察移植术后免疫排斥情况,结果：肝上下腔静脉吻合时间为6．5－10.0min,无肝期为8．5－12．0min,93%以上的移植大鼠生存超过7天,对照组大鼠术后9－13天全部死亡,组织病理学提示有典型的免疫排斥,而CsAI治疗组到目前为止生存良好,结论：对大鼠肝移技术进行了可明显提高移植大鼠的生存率,SD大鼠移植对Wistar大鼠的肝移植组合为高排异组合,是较理想的研究肝移植排斥及移植免疫耐受的动物模型。