043 空肠弯曲菌分型方法研究进展

空肠弯曲菌是重要的人类肠道致病菌.随着近年分子生物学及相关技术迅猛发展使基于其基础上的各种空肠弯曲菌分型方法不断推陈出新,并因其分辨力、分型率、敏感性高于传统检测方法而越来越受到人们的重视.本文综述了空肠弯曲菌的传统检测方法及基因分型方法(RFLP分型、PFGE分型、AFLP分型、RAPD分型、MLST分型)的研究进展.     

空肠弯曲菌检测与基因分型的研究进展

随着分子生物学技术的迅猛发展,空肠弯曲菌的基因诊断与分型方法因其敏感性、特异性、分型率和分辨力高于传统的检测方法,且操作简便、快速而备受重视。本文对空肠弯曲菌常规生化检测方法、PCR方法、RELP分型、RAPD分型、PCR-RFLP分型、核糖体分型、鞭毛蛋白基因分型、AFLP分型的进展作了综述。     

空肠弯曲菌检测与基因分型的研究进展

随着分子生物学技术的迅猛发展，空肠弯曲菌的基因诊断与分型方法因其敏感性、特异性、分型率和分辨力高于传统的检测方法，且操作简便、快速而备受重视。本文对空肠弯曲菌常规生化检测方法、PCR方法、RELP分型、RAPD分型、PCR－RFLP分型、核糖体分型、鞭毛蛋白基因分型、AFLP分型的进展作了综述。     

分子分型技术在空肠弯曲菌鉴定中的应用

分子分型克服了传统表型分型方法分辨力、重复度和重现性低且费时费力的缺陷。近年来,一系列空肠弯曲菌的分子分型方法应运而生。本文对应用于空肠弯曲菌的PFGE、RFLP、RAPD、MLST、SNP、flaA-RFLP、PCR-DGGE、PCR-SSCP、核糖体分型等分子分型方法的原理、应用及优劣势进行了分析比较。     

环介导等温扩增法检测空肠弯曲菌

目的 空肠弯曲菌是重要的食源性疾病病例标本的病原菌检测项目,用环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的方法,对食源性致病菌空肠弯曲菌进行快速检测。方法 以空肠弯曲菌 mapA 基因序列为检测靶基因,建立了空肠弯曲菌的LAMP 快速检测方法。空肠弯曲菌的LAMP反应由DNA扩增试剂盒提供的反应体系加入引物和模板进行。做了空肠弯曲菌DNA模板灵敏度的检测、菌液灵敏度的检测和特异性检测。结果 我们方法对空肠弯曲菌DNA 的检测灵敏度为84.5fg/反应管;对空肠弯曲菌菌液检测灵敏度为0.8 CFU/反应管;特异性100%。结论 对食源性疾病腹泻样本的空肠弯曲菌检测项目,可以采用mapA-LAMP方法进行等温扩增初筛,初筛阳性的样品再有针对性地进行后续的传统培养。     

一种用于食源性空肠弯曲菌阻抗法检测的培养基及其应用

目的:利用空肠弯曲菌生长时对培养基中添加物质氧化还原电位的改变,建立空肠弯曲菌阻抗检测法。方法:利用电阻抗法检测食品中空肠弯曲菌方法,通过对空肠弯曲菌选择性增菌培养基布氏肉汤的改进,加入硫酸亚铁、丙酮酸、偏亚硫酸钠等还原剂降低培养基中氧化还原电势Eh,及多种抗生素,TMP为抗菌增效剂,多粘菌素B对革兰阴性菌有效,万古霉素对革兰阳性菌抗菌效果较强。检测时在培养基表面覆盖石蜡油以获得更好的微需氧条件,连续检测空肠弯曲菌代谢所引起培养基的电阻抗变化值,通过培养基电阻抗变化判定空肠弯曲菌的存在。结果:经与常规培养法进行比较,阻抗法可最低检出添加量为102/m l的阳性样品,检测结果与常规培养法一致性较高,对于阴性结果能在48 h内出具结果,大大提高了检测速度。结论:空肠弯曲菌阻抗检测法相比于传统的培养法,能够有效缩短检测时间,提高检测效率。     

PCR技术快速检测空肠弯曲菌方法的建立

目的建立空肠弯曲菌的快速检测方法。方法用PCR法扩增标本菌株中弯曲菌属16SrRNA片段、空肠弯曲菌M apA片段和结肠弯曲菌CeuE片段,通过电泳后对产物进行分析。结果11份标本中有7份检出弯曲菌属16SrRNA片段,其中3份样品中检测到空肠弯曲菌M apA片段,4份样品中检测到结肠弯曲菌CeuE片段。结论PCR技术可用于空肠弯曲菌的快速检测。     

一起空肠弯曲菌食源性疾病突发事件的流行病学和病原学研究

对空肠弯曲菌所致的食源性疾病事件进行病原学研究及溯源分析,为突发食源性疾病事件的应急处置提供依据.方法 采用现场流行病学调查方法对疫情实施调查,可疑样本先用多重巢式PCR快速筛查22种常见胃肠道病原,锁定目标病原后,将病原菌分离鉴定与实时荧光定量PCR同步检测.对检出的空肠弯曲菌进行PFGE分子分型,用BioNumeries软件进行同源性分析.结果 共有病例91例,采集样本49件.从27件病例样本中分离出15株空肠弯曲菌,PFGE分为2种带型,其中14株带型完全一致,另1株为另一带型,2种带型相似性为66.7%.结合流行病学调查、实验室病原学检测和PFGE分析,判定此次事件为一起空肠弯曲菌引起的食源性疾病暴发事件.结论 传统分离培养检测方法结合FilmArray多重PCR系统、实时荧光定量PCR、PFGE分型技术可快速、准确确定和追溯病原.     

161株人、动物空肠/大肠弯曲菌的生物学分型

关于空肠弯曲菌的生物学分型,国外尚未统一,国内未见报道。我们根据Butzler教授的方法,对1984年6—8月在广州市海珠区分离到161株人和动物的空肠/大肠弯曲菌进行生物学分型,并比较人和动物的菌型分布,结果报告如下。材料与方法1.菌株来源及鉴定:来自病人7株、健康人47株、猪52株、鸡55株空肠/大肠弯曲菌,     

060食品中空肠弯曲杆菌快速检测及计数方法

空肠弯曲杆菌是世界范围内引起人类急性腹泻的最常见的致病菌.传统的用于空肠弯曲杆菌检测及定量的培养法缓慢、需时长.因此,需要特异、敏感和快速的空肠弯曲杆菌检测方法,以收集足够的资料数据进行危险性评估及食品安全政策的制定.本文介绍了几种以PCR、DNA杂交、疏水栅滤膜筛选(HGMFs)和酶免疫(EIAs)为基础的快速方法.PCR方法检测目的菌为空肠弯曲杆菌(C.jejuni),结合简单的样品制备过程,经20～24h增菌培养,可从自然污染的鸡肉冲洗水中检测空肠弯曲杆菌少至每ml 0.3最大可能数(MPN).HGMF-EIA方法采用市售空肠弯曲杆菌多克隆抗体,从加样的鸡肉冲洗水、牛奶及自然污染的鸡肉冲洗水中检测并计数嗜热性空肠弯曲杆菌.在HGMF-DNA杂交方法中,利用一种C.jejuni特异性探针检测和定量食品中空肠弯曲杆菌.难以通过HGMF滤过的样品中的嗜热性空肠弯曲杆菌,可应用斑点EIA结合MPN,进行定量检测.     

北京市房山区腹泻患者空肠弯曲菌感染及菌株分型耐药特征

目的了解北京市房山区感染性腹泻患者空肠弯曲菌感染及分离株的病原学特征。方法 2017年5—12月,收集2家医院腹泻患者的粪便标本,进行弯曲菌的分离、培养及鉴定。对分离的空肠弯曲菌进行11种抗生素的敏感性检测,并对菌株进行多位点序列分型。结果共检测标本286份,分离到弯曲菌31份,检出率为10.80%;经质谱鉴定28株为空肠弯曲菌,3株为结肠弯曲菌。空肠弯曲菌可分为23种不同的ST型,其中4株为ST22,2株为ST760,2株为ST6500,其他20株分别属于20种ST型别;研究发现3个新的ST型,分别为ST9253、ST9254和ST9255。28株空肠弯曲菌对萘啶酸、环丙沙星、四环素的耐药率达100.00%,对氟苯尼考的耐药率为39.29%,对红霉素、阿奇霉素、泰利霉素、克林霉素敏感。结论北京市房山区腹泻患者空肠弯曲菌感染率较高,对喹诺酮、氟喹诺酮类、四环素类药物耐药严重,对大环内酯类、酮内酯类和林可酰胺类药物敏感;菌株的ST型呈多样性分布。     

食品中空肠弯曲杆菌快速检测及计数方法

空肠弯曲杆菌是世界范围内引起人类急性腹泻的最常见的致病菌。传统的用于空肠弯曲杆菌检测及定量的培养法缓慢、需时长。因此 ,需要特异、敏感和快速的空肠弯曲杆菌检测方法 ,以收集足够的资料数据进行危险性评估及食品安全政策的制定。本文介绍了几种以PCR、DNA杂交、疏水栅滤膜筛选 (HGMFs)和酶免疫 (EIAs)为基础的快速方法。PCR方法检测目的菌为空肠弯曲杆菌 (C .jejuni) ,结合简单的样品制备过程 ,经 2 0～ 2 4h增菌培养 ,可从自然污染的鸡肉冲洗水中检测空肠弯曲杆菌少至每ml 0 3最大可能数 (MPN)。HGMF EIA方法采用市售空肠弯曲杆菌多克隆抗体 ,从加样的鸡肉冲洗水、牛奶及自然污染的鸡肉冲洗水中检测并计数嗜热性空肠弯曲杆菌。在HGMF DNA杂交方法中 ,利用一种C .jejuni特异性探针检测和定量食品中空肠弯曲杆菌。难以通过HGMF滤过的样品中的嗜热性空肠弯曲杆菌 ,可应用斑点EIA结合MPN ,进行定量检测     

多重PCR与传统方法检测空肠弯曲菌的比较研究

目的应用多重PCR法和传统检测方法对禽类样品进行空肠弯曲菌的检测,比较两种方法在检测结果准确性、效率、实用性上的差异与优缺点。方法分别采用基于空肠弯曲菌hipO、mapA、23S基因多重PCR法和传统检测方法(GB/T4789.9-2003)对来自南京市5个大型农贸市场的290份禽类样品进行同步检测,并对两种方法的检出率、灵敏度、检测周期进行比较。结果传统检测方法的检出率为16.6%,灵敏度为45CFU;多重聚合酶链反应(PCR)的检出率为37.9%,灵敏度为15cfu。结论多重PCR方法在检出率、灵敏度与检测周期等指标上均优于传统空肠弯曲菌的监测方法。     

济南市鸡源空肠弯曲菌的流行特征及病原毒力、耐药性分析

目的 了解济南市市售肉鸡中空肠弯曲菌的污染情况、分离株的分子分型特征及其耐药性和毒力基因携带情况。方法 采用滤膜法于2015—2018年对济南市农贸市场售卖的98份现杀活鸡整禽中的空肠弯曲菌进行分离培养;利用脉冲场凝胶电泳和多位点序列分型对分离株进行分子分型;用商品化药敏板测试分离株对11种八类药物的敏感性;通过PCR对5种毒力相关基因进行筛查分析。结果 济南市市售肉鸡中空肠弯曲菌的检出率为26.5%（26/98）;PFGE分型的结果显示,济南市肉鸡来源26株空肠弯曲菌共有16种带型,带型的相似度在53.9%～100%之间;MLST分型的结果显示,26株空肠弯曲菌可分为19种ST型,其中新发现型别占比为47.4%（9/19）。药敏测试的结果显示,空肠弯曲菌对治疗首选药物喹诺酮类抗生素环丙沙星和萘啶酸的耐药率高达92.3%和100%;分离株五种毒力基因:cadF、cdtB、iamA、flaA和virBII的携带率为分别为100%、100%、92.3%、69.2%和19.2%。结论 济南市市售肉鸡中存在一定程度的空肠弯曲菌污染,分离株存在遗传多样性,耐药情况比较严重,且携带有毒力基因的菌株的比例较高,因此应加强空肠弯曲菌感染监测。     

福建省食品中分离的空肠弯曲菌株鞭毛蛋白基因flaA的PCR-RFLP分型

目的:采用PCR-RFIP基因分型方法对分离自福建省不同地区不同种类食品中的空肠弯曲菌株的鞭毛蛋白基因flaA进行分型,掌握福建省食品中空肠弯曲菌的基因型别,为流行病学追踪调查提供科学依据.方法:采用欧洲弯曲菌实验室网络Campynet推荐的空肠弯曲菌鞭毛蛋白基因flaA的PCR-RFLP分型方法(http://Campynet.vetinst.dk/Fla.htm).即用PCR技术对弯曲菌的鞭毛蛋白基因/flaA上的一个1700 bp片段进行扩增,再用限制性内切酶Ddel对PCR产物进行酶切,通过凝胶电泳并分析酶切图谱.结果:目前福建省食品中分离的空肠弯曲菌基因型别较多样,34株空肠弯曲菌可分为18个型别.不同地区分离的菌株其基因型多不相同,只有4个型别在不同地区的菌株间有重复.结论:空肠弯曲菌鞭毛蛋白基因flaA的PCR-RFLP分型方法分辨率高,可重复性好,不需要特殊设备,且操作简单、快速,适合于实验室开展,且方法标准化后,能将世界各地获得的数据进行比较,从而能更好的了解各个基因型的区域分布和流行趋势.     

空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检验方法团体标准解读

空肠弯曲菌和结肠弯曲菌是重要的食源性病原菌，是导致人类弯曲菌病的重要菌种。病原菌的培养、鉴定是食品污染以及人和动物感染诊断的“金标准”。中国CDC传染病预防控制所和国家食品安全风险评估中心等单位撰写了《空肠弯曲菌、结肠弯曲菌检验方法（T/CPMA 006－2019）》团体标准。标准以“科学性、规范性、适用性和可行性”为基本原则，提出从不同种类的标本、样品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的分离培养以及鉴定的方法，用于指导和规范我国不同种类的标本以及样本中两种弯曲菌的检测过程、检测步骤和鉴定方法，提高空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的检测水平。     

2021—2022年上海市金山区人源与禽源空肠弯曲菌的耐药性及多位点序列分型

【目的】了解上海市金山区人源与禽源空肠弯曲菌的耐药性现状及多位点序列分型（MLST）情况。【方法】收集2021—2022年金山区腹泻患者的粪便样品,采集金山区2家禽类养殖场禽类及相关样品进行空肠弯曲菌检测,对检出空肠弯曲菌进行微量肉汤稀释法药敏试验测定最小抑菌浓度（MIC）,并选取部分菌株进行全基因组测序和MLST分析。【结果】共收集腹泻病样品823件,检出空肠弯曲菌32株,检出率3.89%。禽类相关样品600件,检出空肠弯曲菌62株,检出率10.33%。人源多重耐药达93.75%(30/32),禽源多重耐药达100.00%(62/62)。人源与禽源空肠弯曲菌耐药率排名前4位分别为阿奇霉素（人源100.00%、禽源100.00%）,萘啶酸（人源93.75%、禽源87.10%）,环丙沙星（人源90.63%、禽源98.39%）,四环素（人源84.38%、禽源98.39%）。人源空肠弯曲菌中耐药性相对较低者为红霉素、氯霉素、泰利霉素。禽源空肠弯曲菌中耐药性相对较低者为红霉素、克林霉素、氟苯尼考。MLST分析显示选取的16株菌分为9种ST型,其中禽源空肠弯曲菌进化关系比较集中,人源空肠弯曲菌比...     

多聚酶链反应扩增技术检测空肠弯曲菌

多聚酶链反应扩增技术检测空肠弯曲菌北京市卫生防疫站（１０００１３）王斌刘园任保国空肠弯曲菌不仅是重要的人畜共患病原菌，而且也是引起食源性肠炎暴发的病原菌。空肠弯曲菌能引起人急性腹泻，在夏、秋季的腹泻病防治中，越来越被重视。常规方法检测空肠弯曲菌不仅需...     

深圳市罗湖区禽畜肉中空肠弯曲菌的流行状况及分子分型

目的 了解深圳罗湖区市售不同肉类来源的空肠弯曲菌流行分布状况及分子分型结果。方法 采集2016年—2021年4月、6月、10月深圳市罗湖区各大超市、农贸市场生禽肉及生畜肉样品共280份作为研究对象,采用双孔滤膜法对空肠弯曲菌进行分离培养及荧光PCR法鉴定,通过脉冲场凝胶电泳对目标菌进行分子分型。结果 2016年—2021年280份食品样本共有52份样本中检出空肠弯曲菌,阳性率为18.57%,其中136份生禽肉类样本中有49份检出空肠弯曲菌,阳性率为36.03%;144份生畜肉类样本中有3份检出空肠弯曲菌,阳性率为2.08%,生禽肉类的阳性率高于生畜肉类（χ2=53.30,P<0.01）。62株菌株PFGE分子分型得到57种带型。结论 罗湖区生禽肉和生畜肉均存在空肠弯曲菌污染的风险,其中禽肉类污染高于畜肉类,PFGE分子分型溯源结果显示菌株污染来源呈现多态性。     

空肠/结肠弯曲菌的生物分型和质粒分析及其在流行病学中的初步应用

本文对来自成都地区的弯曲菌进行了生物分型和质粒分析,并结合血清学分型应用于弯曲菌肠炎病人家庭的调查。116株弯曲菌中,空肠弯曲菌生物1型、生物2型和结肠弯曲菌分别占58.6%、4.3%和37.1%;人源菌和鸡源菌均以空肠弯曲菌生物1型为主,猪源菌主要为结肠弯曲菌。弯曲菌质粒检出率为18.9%,检出的质粒株中,大多含2~3个质粒带,分子量﹤1.4~58×10⁶道尔顿;结肠弯曲菌的质粒检出率(34.21%)明显高于空肠弯曲菌(10.29%)。两个病家的调查结果说明:生物分型和质粒分析在追踪弯曲菌感染的传播中具有一定价值,可以作为弯曲菌感染流行病学调查的有用工具。