DAPK基因CpG岛的异常甲基化在人膀胱癌组织中的意义

目的 探讨DAPK基因CpG岛的异常甲基化在膀胱癌组织中的意义.方法 选择临床膀胱癌组织标本24例和癌旁组织标本22例进行研究.用免疫组织化学和Western blot方法分别检测DAPK基因和DNMTl基因在不同组织中的表达情况.采用甲基化特异PCR(MSP)方法检测不同组织标本中DAPK基因的甲基化状态.结合上述结果分析DAPK基因甲基化及其表达状态与肿瘤之间的关系.结果 DAPK基因表达于细胞质及胞膜,在正常膀胱黏膜中强表达,在膀胱癌组织中弱表达或不表达.在膀胱癌组织中有14例(14/24,58.3%)检测到DAPK基因的甲基化改变,而正常组织中未检测到其甲基化.甲基化改变与肿瘤病理分级无显著相关性,但是与肿瘤肌层浸润(P＜0.05)及复发(P＜.05)明显相关.结论 DAPK基因的甲基化改变可能是肿瘤复发的一个重要预测指标.肿瘤组织中DNMTl的高表达提示其在调节肿瘤组织抑癌基因甲基化中发挥重要作用.     

肝细胞肝癌中外周血浆DNA基因甲基化检测及意义

目的评估外周血浆DNA甲基化检测在肝细胞肝癌(HCC)诊断中的作用,筛选血浆灵敏度及特异性高的甲基化抑癌基因。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)检测34例经病理检查证实的HCC患者血浆及其配对癌组织中的SLIT2及DAPK基因启动子甲基化状态,并分析其与HCC临床病理特征的关系。结果 34例HCC患者癌组织中SLIT2和DAPK基因甲基化率分别为70.6%(24/34)和79.4%(27/34),相应外周血浆中SLIT2和DAPK基因甲基化率分别为44.1%(15/34)和50.0%(17/34)。血浆SLIT2和DAPK基因甲基化检测的灵敏度分别为62.5%和63.0%,特异度均为100%,阴性预测值分别为52.6%和41.2%,阳性预测值均为100%。HCC癌组织和外周血浆中SLIT2及DAPK甲基化检出率与HCC各临床病理特征无关(P>0.05)。在AFP<400μg/L患者中SLIT2和DAPK基因甲基化联合检出率达61.1%(11/18)。结论基于MSP方法,血浆中SLIT2及DAPK基因甲基化仍有较高的检出率,HCC癌组织和血浆中SLIT2及DAPK基因甲基化具有明显的一致性。血浆DNA甲基化可作为一种独立非侵入性诊断HCC的标志物,尤其对AFP阴性者可提高HCC的诊断率。HBV感染可能仅与部分抑癌基因甲基化相关。     

肝细胞癌多基因启动子甲基化与预后关系的研究

目的 了解肝细胞癌(hepatucellular carcinoma,HCC)中,DAPK、FHIT及SLIT2基因的甲基化状况与病人生存预后的关系.方法 应用甲基化特异性PCR(methylation- specific PCR,MSP)技术,检测50例HCC组织中上述基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化...     

人膀胱尿路上皮癌细胞DAPK基因启动子甲基化状态与生物学功能之间的关系分析

目的:分析人膀胱尿路上皮癌(BUCC)细胞DAPK基因启动子甲基化状态与生物学功能之间的关系。方法:以中国科学院细胞库提供的BUCC 5637细胞株作为对照组,以经10μmol/L 5-Aza-CdR处理过的BUCC 5637细胞株作为观察组。应用Western blot、RT-PCR分别检测对照组细胞及观察组细胞中DAPK、DAPKmRNA的表达;应用MS-PCR检测对照组和观察组中DAPK基因启动子CpG岛的甲基化状态;应用流式细胞术检测对照组及观察组的细胞凋亡率;应用肿瘤细胞侵袭实验检测对照组及观察组的细胞侵袭能力。结果:(1)对照组细胞中DAPK的表达为146.32±21.24,显著低于观察组的312.15±14.57,差异有统计学意义(t=3.582,P=0.024);(2)对照组细胞中的DAPKmRNA表达水平为0.38±0.07,显著低于观察组的0.82±0.04,差异有统计学意义(t=4.257,P=0.032);(3)对照组细胞中DAPK启动子基因CpG岛甲基化状态为阳性,而观察组细胞中DAPK启动子CpG岛甲基化状态为阴性;(4)对照组的细胞凋亡率为2.09%,显著低于观察组的凋亡率6.02%,差异有统计学意义(X2=0.368,P=0.036);(5)对照组细胞的侵袭能力为6.12±0.32,明显优于观察组的2.34±0.12,差异有统计学意义(t=3.245,P=0.022)。结论:5-Aza-CdR能显著增加5637细胞中DAPK的表达,而DAPK能明显促进BUCC细胞的凋亡,且显著抑制BUCC细胞的侵袭(迁移)能力,提示5-Aza-CdR可作为BUCC的基因靶向治疗药物。     

肝细胞癌中抑癌基因的甲基化现象

目的 了解肝细胞癌(HCC)中RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73基因的甲基化状况.方法 应用甲基化特异性PCR技术,检测40例HCC和4例正常肝组织中5种基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化程度和临床参数之间的关系.结果 正常肝组织中无基因甲基化.癌组织中,RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73基因的甲基化率分别是:90%、77.5%、70%、30%和5%.相应癌旁组织中,RASSF1A、DAPK、FHIT、RIZ1和p73的甲基化率分别为77.5%、77.5%、62.5%、5%和0%.结论 HCC中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件.     

膀胱癌细胞中DAPK基因启动子甲基化状态分析

目的 分析DAPK抑癌基因在T24、5637、ScaBER三种膀胱癌细胞中的表达情况及该基因启动子区的甲基化状态。方法 采用半定量RT-PCR和Westernblot分别检测三种膀胱癌细胞中DAPK基因的表达，用甲基化特异PCR（MSP）方法检测三种细胞中的DAPK基因启动子甲基化状态。观察甲基转移酶（DMNT）抑制剂5-aza-2’-deoxy．cytidine（5-aza-CdR）对各细胞中的基因表达和甲基化状态的影响。结果 T24细胞中未检测到DAPK基因的表达，也未检测到启动子甲基化；5637细胞中该基因表达水平极低，在SeaBER细胞中该基因的表达较前两者要高。5637细胞和ScaBER细胞中均有甲基化改变。2．5μmol／l浓度的5-aza-CdR可以有效上调5637和ScaBER细胞的DAPK基因的表达。结论 抑癌基因DAPK的表达异常与移行细胞癌的发生发展有重要联系，且基因启动子区CpG岛的异常甲基化在调节DAPK基因的表达中发挥重要作用。     

肝细胞癌MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因甲基化研究

目的了解肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma, HCC)中MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因的甲基化状况。方法应用甲基化特异性PCR(methylation specificPCR,MSP)技术,检测40例HCC和2例正常肝组织中4种基因启动子区域的甲基化状况,并分析每种基因甲基化程度和临床参数之间的关系。结果正常肝组织中无基因甲基化。肝癌组织中,MGMT、DAPK、THBS1和RIZ1基因的甲基化率分别是15%、77 5%、37 5%和30%。且87 5%的HCC中至少有一种基因甲基化。相应癌旁组织中,MGMT,DAPK,THBS1和RIZ1的甲基化率分别为5%、77 5%、27 5%和5%。RIZ1基因癌组织中的甲基化率明显高于癌旁组织(χ2 =8 658,P<0 05)。有2种基因甲基化的患者年龄较有1种基因甲基化组的年轻(t=2 389,P<0 05 )。有THBS1基因甲基化的患者年龄较无此基因甲基化组的年轻(t=3 047,P<0 05)。结论HCC中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件。     

CDKN2基因的变异在人前列腺增生症中发病机制的研究

目的：研究抑癌基因CDKN2的突变、缺失在人前列腺增生症（BPH）病因中的作用机制。方法：用PCR-银染SSCP技术分析了20例正常前列腺组织和41例BPH中CDKN2基因纯合性缺失和突变的情况。结果：13例BPH有CDKN2基因缺失，总缺失率为31.6％：正常前列腺组织中有1例出现CDKN2基因缺失.缺失率为5％（P＜0.05）;无CDKN2基因的突变。结论：CDKN2基因的变异与BPH的发病机制有关，纯合性缺失是CDKN2基因在前列腺增生中主要灭活机制之一。     

死亡相关蛋白激酶与肿瘤

死亡相关蛋白激酶(DAPK)是钙离子/钙调素调节的丝氨酸/苏氨酸激酶。DAPK有一个多区结构,具有潜在的转录活性,色氨酸308自身磷酸化被认为是其基本状态的一个自控装置。DAPK参与干扰素-γ、TNF-α、p53和TGF-β等介导的细胞凋亡,在整个凋亡系统中发挥着重要作用。DAPK被认为是抑癌基因,与肿瘤的发生、发展、转移密切联系,其启动子CpG岛甲基化是其在表观遗传学上调节的重要方式。DAPK在肿瘤早期诊断、评价预后及基因靶向治疗等方面有重要意义。     

CDH1基因Exon1非编码区插入/缺失多态性与膀胱移行细胞癌易感性的关系

目的:探讨上皮钙粘素(E-cadherin,CDH1)基因Exon1非编码区234bp位点插入/缺失多态性与膀胱移行细胞癌(TCCB)生物学行为之间的关系。方法:从TCCB组180例,对照组健康人110例的血液中提取人基因组DNA,PCR获取包含CDH1基因启动子近侧序列-160位点和Exon1的DNA片段,DNA测序方法测得上述DNA片断的基因序列。选择χ2检验进行统计学分析,Woolf法计算OR值(odd sratio,OR)和95%CI。结果:CDH1基因Exon1非编码区234bp位点插入片断碱基序列为5'-CCGTGCCCCAGCC-3',其插入/缺失多态性基因型分为插入\插入纯合子(I/I)、缺失\缺失纯合子(D/D)和插入\重复插入杂合子(I/2I)三种。TCCB组该位点I/2I基因型频率(0.54)高于对照组(0.35)(P<0.01),提示I/2I基因型患TCCB风险较高(OR=2.15,95%CI1.32～3.52)。结论:CDH1基因Exon1非编码区234bp位点2I等位基因频率与膀胱移行细胞癌的发生密切相关。-160A/A-234I/2I基因型与膀胱移行细胞癌的发生密切相关。     

5-氮-2-脱氧胞苷调控p53-baX凋亡通路DNA甲基化对胆管癌细胞生长的影响

目的 探讨甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(DAC或5-aza-dc)对胆管癌细胞QBC939生长的影响及其机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)比色法检测DAC在不同浓度(0.1、0.5、1.0、5.0、25.0、100.0μmol/L)及不同时间(24、48、72 h)下对胆管癌细胞QBC939存活率的影响,透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪观察细胞生长周期及凋亡率的变化;甲基化聚合酶链反应检测DAC作用前后p53-bax凋亡通路DNA甲基化变化.结果 DAC对QBC939细胞生长的抑制有浓度和时间依赖性,其半数抑制率(IC50)为72h 5μmol/L;经DAC作用后电镜下胆管癌细胞凋亡增加;胆管癌细胞凋亡发生率由DAC处理前的4.31%上升至处理后的43.04%;DAC作用前p53-bax凋亡通路中p14、DAPK抑癌基因甲基化,DAC作用后p14、DAPK抑癌基因脱甲基化.结论 DAC对胆管癌QBC939细胞的生长具有抑制作用,这一抑制作用是由于DAC脱甲基化造成的,DAC对胆管癌QBC939细胞p53-bax线粒体凋亡通路DNA甲基化的影响使细胞凋亡功能得以恢复.     

MTS1基因在人BPH中突变缺失的初步研究

目的探讨ＭＴＳ１基因在人前列腺增生症（ＢＰＨ）发病机制中的作用和变异情况。方法用ＰＣＲ银染ＳＳＣＰ技术检测１８例正常前列腺和３８例ＢＰＨ中抑癌基因ＭＴＳ１各外显子的纯合性缺失和突变。结果１２例ＢＰＨ出现ＭＴＳ１基因缺失,总缺失率为３２％;正常前列腺组织中有１例出现ＭＴＳ１基因缺失,缺失率为６％,两者之间差异有显著性（Ｐ＜００５）;无１例有ＭＴＳ１基因的突变。结论ＢＰＨ的发病机制可能与ＭＴＳ１的纯合性缺失有关,未见有突变发生。应对ＭＴＳ１基因在人ＢＰＨ中的作用作更深入的研究     

食管癌p16基因变异分析

目的 为了探讨Ｐ１６基因与食管癌发生、发展的关系。方法 应用聚合酶链反应、单链构象多态分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法检测３０例食管癌中Ｐ１６基因的纯合性缺失和突变情况，并分析Ｐ１６基因变异与食管癌的是关系。结果 ３０例食管癌患者中４例Ｐ１６基因纯合性缺失，２例存在突变。６例阳性样品与其它样品在年龄、饮酒史方面差异有显著性（Ｐ〈０．０１），与淋巴结转移、病理分期有差异（Ｐ〈０．０５），而与性别、肿瘤部     

膀胱移行细胞癌E-钙粘连素基因启动子C/A单核苷酸多态性与肿瘤复发的关系

目的　探讨膀胱移行细胞癌 (TCCB)E 钙粘连素 (CDH1)基因启动子 160处C/A单核苷酸多态性 (SNP)与TCCB复发及低分化的关系。方法　运用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)方法检测血液标本中CDH1基因启动子上游 160处C/ASNP。通过定期随访肿瘤患者并进行膀胱镜检查以确定肿瘤是否复发。结果　TCCB中CDH 1基因启动子 160处AA ,AC ,CC基因型之间与TCCB的复发具有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;其中AA与CC基因型之间对TCCB复发的相关性差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ,而CC与AC基因型之间以及AC与CC基因型之间对TCCB复发的相关性差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。以CC基因型为参照 ,AA基因型和AC基因型TCCB复发的危险性均增高 (OR =4.0 5 66,95 %可信区间为 1.83 2 5～ 8.980 1;OR =1.7849,95 %可信区间为 1.10 91～ 2 .872 5 )。该SNP与复发肿瘤发生低分化无明显相关 (P >0 .0 5 )。结论　CDH1基因启动子 160处SNP对TCCB的复发可能具有重要作用。检测该SNP也可作为一种预测患者术后复发的指标。     

OPN在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的通过检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma of the bladder,TCCB)组织及癌旁正常膀胱组织中的表达情况,探讨其在肿瘤组织中的表达与肿瘤的临床分期、病理分级之间的关系,为临床病理诊断及预后判断提供一定的理论依据。方法收集2010年1月至2015年9月在本院泌尿外科手术切除的TCCB组织标本65例,应用免疫组织化学S-P法对65例TCCB组织以及10例癌旁正常膀胱组织标本进行OPN的检测,结合这些患者的临床病历资料进行分析:(1)OPN在TCCB组织与癌旁正常膀胱组织中的表达差异;(2)OPN在TCCB组织中的异常表达与TCCB的临床分期、病理分级之间的关系。结果 OPN在TCCB组织中的阳性表达率为47.7%,在癌旁膀胱正常组织中不表达,其阳性表达率与TCCB的病理分级和临床分期密切相关(P0.05)。结论 OPN对TCCB的病理诊断有一定的意义,可能与TCCB的发生存在一定的关联,可作为TCCB病理诊断的标记物之一;同时,OPN可作为TCCB临床分期及病理分级的一项客观指标,可能与肿瘤的侵袭及转移密切相关,可以帮助判断患者的预后。     

乳癌中p16,c-erbB-2的表达及意义

探讨ｐ１６和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达与乳癌临床病理因素及预后的关系。方法 采用免疫组化和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术,分别检测５０例乳癌ｐ１６,ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达和２０例乳癌ｐ１６基因的纯合性缺失及突变。结果 ５０例乳癌中,１７例（３４．０％）ｐ１６蛋白表达阳性,２４例（４８．０％）ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达阳性。２０例乳癌中无ｐ１６基因的纯合性缺失,１例ｐ１６基因外显子２有点突变。结果表明,ｐ１６     

死亡相关蛋白激酶与肿瘤

死亡相关蛋白激酶（DAPK）是钙离子／钙调素调节的丝氨酸／苏氨酸激酶。DAPK有一个多区结构，具有潜在的转录活性，色氨酸000自身磷酸化被认为是其基本状态的一个自控装置。DAPK参与干扰素-γ、TNF-α、p53和TGF-β等介导的细胞凋亡，在整个凋亡系统中发挥着重要作用。DAPK被认为是抑癌基因，与肿瘤的发生、发展、转移密切联系，其启动子CpG岛甲基化是其在表观遗传学上调节的重要方式。DAPK在肿瘤早期诊断、评价预后及基因靶向治疗等方面有重要意义。     

人脑胶质瘤抑癌基因p16的研究

目的 研究抑癌基因p16与原发胶质瘤发生、发展的内在关系。方法 使用PCR－温度梯度凝胶电泳（TGGE）的方法，对48例脑胶质瘤的第2外显子进行测定，研究p16的缺失和突变；同时选用甲基化敏感限制性内切酶与基因组DNA反应，然后进行PCR扩增了解p16的甲基化改变。结果 48例胶质瘤标本中，14例发生p16基因的纯合缺失，其中Ⅲ级为33％（5／15）；Ⅳ级为50％（9／18）。对34例p16扩增阳性标本进行TGGE检测，2例有点突变。48例标本中检测到第2外显子甲基化的有6例，2例为Ⅱ级胶质瘤，4例为Ⅲ级胶质瘤，甲基化率为12％（6／48）。结论 p16的改变可能与胶质瘤的发生有一定关系。其中以第2外显子的纯合缺失为主，第1外显子的甲基化为辅，而点突变很少发生。p16缺失主要发生在高级别的胶质瘤中，可能为肿瘤发生的较晚期事件。     

CDKN2基因变异致前列腺增生症发病机制的研究

ＣＤＫＮ２基因位于人染色体９Ｐ２１～２２区，研究表明，其在各种恶性肿瘤中存在高频率的缺失、突变、甲基化和重排等变异。前列腺增生症（ＢＰＨ）是常见的老年男性疾病，其病因尚未阐明。为了探讨ＣＤＫＮ２基因与ＢＰＨ生物学行为之间的关系，我们采用ＳＳＣＰ技术分析了２０例正常前列腺组织和４１例ＢＰＨ组织中ＣＤＫＮ２基因纯合性缺失和突变情况。现将结果报告如下。１　材料与方法１．１　标本与试剂本组６１例，其中ＢＰＨ组织４１例，非前列腺增生组织（包括正常前列腺组织１０例，前列腺炎组织１０例）２０例，均来自湖北医…     

膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞中生存素的检测及其意义

目的:探讨膀胱移行细胞癌(TCCB)患者尿脱落细胞生存素(Survivin)蛋白和mRNA表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法和巢式逆转录聚合酶链反应方法,对TCCB患者32例(TCCB组)、非TCCB16例(对照组)尿脱落细胞Survivin的蛋白和mRNA进行检测,同时行尿脱落细胞学检查。结果:TCCB组尿脱落细胞Survivin的蛋白、mRNA阳性表达率分别为28例(87.5%),32例(100%);对照组仅1例mRNA阳性表达(6.2%)。两组Survivin阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01);尿液中Survivin的敏感性和特异性,分别为87.5%,80%和96.9%,93.8%。而尿脱落细胞阳性率为18例(56.2%),其敏感性和特异性分别为56.2%和100%。结论:尿脱落细胞Survivin检测诊断TCCB的敏感性和特异性均较高,且对患者无创、无痛苦,可作为早期诊断TCCB的敏感指标,其中RT-PCR检测敏感性更高。