Ras、C-myc、P53基因联合检测对胃镜下活检粘膜癌及癌前病变的诊断意义

目的探讨癌基因Ras、C-myc和抑癌基因P53在胃粘膜癌变过程中的作用及相互关系,及其联合检测对胃镜下活检粘膜癌及癌前病变的诊断意义.方法应用免疫组化S-P法对Ras、C-myc和P53蛋白在胃粘膜异型增生、胃癌组织中的表达作定位及定性研究.结果 Ras、C-myc和P53蛋白阳性表达率在胃粘膜异型增生组中随异型增生程度加重而增高,至胃癌组达最高,其中轻度组与重度组、胃癌组均有显著差异 (P<0.01).中度组的P53与C-myc蛋白的阳性表达率与胃癌组有显著差异 (P<0.01).胃癌组的Ras、C-myc蛋白的阳性表达有显著协同性(P<0.05).结论癌基因Ras的激活发生在胃粘膜癌前病变的早期,癌基因C-myc的激活和抑癌基因P53的失活发生在胃粘膜癌前病变的晚期,癌基因Ras、C-myc的协同表达在胃粘膜癌变的发生发展中起重要作用.提示中、重度异型增生为重要的癌前病变,对异型增生组织进行多基因联合检测对胃癌的早期诊断有重要意义.     

胃癌、癌旁病变中p53与Bcl—2的作用及其相互关系

目的：探讨p53和Bcl-2基因在胃癌和癌旁病变中的作用及其相互关系。方法：应用SP免疫组化法,检测33例胃癌、17例癌旁变和13例正常胃粘膜中p53和Bcl-2蛋白表达。结果：p53蛋白在正常胃粘膜未见表达,胃癌p53阳性表达率和阳性细胞密度均高于癌旁病变,两组间存在显著性差异（P＜0．05）。正常胃粘膜中Bcl-2仅1例表达,癌和癌旁病变中Bcl-2蛋白表达分别高于正常胃粘膜（P＜0．05－0．01）,胃癌与癌旁病变间Bcl-2表达无显著性差异（P＞0．05）。p53和Bcl-2蛋白表达与胃癌的分化程度、病理分期和淋巴转移无明显相关性。虽p53阳性组Bcl-2表达高于p53阴性组,但无统计学意义。结论：p53和Bcl-2蛋白在癌旁病变中均有表达,表明两基因异常是胃癌发生的早期分子生物学事件。p53与Bcl-2基因在胃癌和癌旁病变中有协同作用,但未见二者之间的负性调控作用。     

细胞周期蛋白D1与p16蛋白在胃癌表达的研究

目的研究细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和p16蛋白在胃癌发生、发展中的作用,以及与胃癌生物学行为的关系.方法应用免疫组化SP法观察CyclinD1和p16蛋白在70例胃癌组织和癌旁正常组织中的表达,用增殖细胞核抗原标记指数(PCNALI)做参数,分析CyclinD1和p16蛋白与胃癌预后的关系.结果①CyclinD1蛋白阳性率在胃癌为67.1%,在癌旁正常组织没有表达(P<0.01);在高分化癌为42.3%,低于低分化癌的80.6%(P<0.01)和未分化癌的87.5%(P<0.05);在PCNALI高组为97.1%,明显高于PCNALI低组的63.6%(P<0.01).②p16蛋白阳性率在胃癌为40.0%,低于癌旁的65.7%(P<0.01);在高分化组为69.2%,高于低分化组的27.8%(P<0.01)和未分化组的0.0%(P<0.01);在PCNALI高组为17.7%,低于PCNALI低组的61.1%(P<0.01).③胃癌中CyclinD1和p16蛋白均阳性的5例,均阴性的为0,前者阳性而后者阴性的42例,前者阴性而后者阳性的23例,二者间有非常显著的关联(P<0.01).结论①在胃癌中CyclinD1过表达而p16表达缺失,二者呈负相关.②CyclinD1过表达及p16缺失均与胃癌的发生和肿瘤分化程度有关,并且也可能与预后有关.     

原发性肝细胞癌癌组织中p33ING1b与p53基因的表达

目的研究p33ING1b与p53蛋白在原发性肝细胞癌中表达的相关性及ING1b基因在原发性肝细胞癌中的突变率.方法应用免疫组织化学SP方法检测了57例原发性肝细胞癌癌组织、51例癌旁肝组织及12例正常肝组织中p33ING1b和p53蛋白的表达,并分析了原发性肝细胞癌癌组织中乙肝病毒(HBV)的感染率;应用聚合酶链式反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测了28例配对癌及癌旁肝组织中ING1b基因两个外显子的突变情况,对有异常泳动条带的DNA片段分别克隆测序.结果在57例原发性肝细胞癌癌组织中,p33ING1b、p53蛋白的阳性率分别为42.1%和57.9%,p33ING1b、p53表达均呈阳性者有19例(33.3%),且两者在癌组织中阳性分布区域相同;p33ING1b蛋白表达与p53蛋白表达在癌组织中呈显著正相关(r=0.783, P<0.01);配对癌旁肝组织及正常肝组织中p53蛋白表达均为阴性,p33ING1b蛋白在13例癌旁肝组织及2例正常肝组织中呈弱阳性表达;在57例原发性肝癌组织中有35例(61.4%)HBV X蛋白呈阳性,其病理类型均为肝细胞肝癌,在51例癌旁肝组织中检出HBV X蛋白阳性者39例(76.47%),癌组织中HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关(P<0.01);PCR-SSCP结果表明,ING1b基因在原发性肝细胞癌中突变率较低为7.1%(2/28).结论 p33ING1b、p53蛋白在原发性肝细胞癌中的表达呈显著正相关,p33ING1b的存在可能还有其他不依赖p53蛋白的途径;HBV感染与p33ING1b、p53蛋白表达均有关;基因突变不是p33ING1b丧失抑癌功能的主要因素.     

胃粘膜癌变过程中bc1-2、p~(53)和Rb基因的表达

目的　研究胃粘膜癌变过程中bc1- 2、p53 和Rb的基因的表达及意义。方法　采用免疫组化方法对 5 0例胃癌 ,18例癌旁肠化生 ,7例癌旁轻中度异型增生及 9例重度异型增生组织中bc1- 2、p53 和Rb基因表达情况进行检测和比较。结果　正常胃粘膜上皮增殖带干细胞区bc1- 2蛋白呈弱阳性表达 ,异性增生病变中 ,bcl- 2蛋白表达率和表达强度明显大于肠化生病变和正常胃粘膜上皮 (P <0 .0 5 ) ,胃癌组织中表达减少 ,p53 蛋白和Rb蛋白仅在重度异型增生病变和胃癌组织中表达。结论　bcl-2蛋白的表达主要是在胃癌的启动和促进阶段起作用 ,而在已具有恶性表型的细胞中不起关键作用。p53 和Rb基因的改变可能发生在胃粘膜癌变的较后期阶段 ,使胃癌的细胞凋亡受抑。     

大肠癌中Fas／FasL、p27及PCAN的表达及意义

目的研究Fas/FasL在大肠癌及癌周不同部位细胞中的表达以及p27、PCNA在大肠癌组织中的表达,并探讨其生物学意义.方法利用免疫组化法对50例大肠癌组织、癌旁交界组织、距肿瘤边缘5cm处、正常组织的Fas/FasL表达进行检测,检验上述组织中Fas/FasL表达的差异.并对其中正常组织和肿瘤组织的p27、PCNA在表达进行检测.结果比较肿瘤组织、癌旁交界组织与正常组织Fas的阳性表达率(62%vs84%vs100%)和FasL的阳性表达率(86%vs66%vs2%),差异均有显著性(P<0.05).距肿瘤边缘5cm处与正常组织的Fas阳性表达率(98%vs100%)和FasL的阳性表达率(8%vs2%),差异无显著性(P>0.05).而不同分化的肿瘤组织中Fas/FasL表达差异无显著性(P>0.05).p27在肿瘤组织与正常组织中的高表达率分别为54%和100%;PCNA的阳性细胞数分别为(22.37±6.05)和(50.91±16.06),PCNA和p27在二组织中的表达差异均有显著性(P<0.05),且p27、PCNA表达与大肠癌的分化程度、淋巴结转移和Dukes分期显著有关.结论大肠癌中存在Fas表达的下调和FasL表达的上调,Fas/FasL系统可能参与了大肠癌细胞的免疫逃避机制;p27蛋白的表达与大肠癌的临床病理学特征密切相关,可能是一个预测大肠癌预后的重要指标;PCNA是反映细胞增殖活性的重要指标.     

胃癌及其癌前病变中ras, c-erbB-2, p53癌基因产物的表达

目的 探讨胃癌及其癌前病变中ras,c-erbB-2,p53癌基因蛋白产物的表达分布特点及其在胃癌发生发展中的作用。方法 应用免疫组化ABC方法,对58例胃癌、31例胃粘膜上皮异型增生和11例正常胃粘膜组织中,鼠抗人mAb ras基因p21蛋白、兔抗人c-erbB-2原癌基因产物多克隆抗体p185,鼠抗人mAb p53蛋白进行了检测。结果p21在正常胃粘膜和轻、中、重度异型增生和胃癌中的表达率分别为27．3％,30．0％,46．2％,75．0％和72．4％;其表达率在重度异型增生和胃癌中显著高于正常胃粘膜和轻、中度异型增生（P＜0．05）;p185在正常胃粘膜和轻、中度异型增生中无表达,在重度异型增生和癌中的阳性表达率分别为25．0％,18．9％,各组间无显著性差异（P＞0．05）;p53仅在癌中有表达,表达率29．3％,明显高于非癌组织（P＜0．05）。胃癌中两种以上癌基因蛋白同时表达率明显高于非癌组织（P＜0．05）。结论 ras基因可能作用于胃癌发生的早期阶段,c-erbB-2,p53基因可能作用于胃癌发生的较晚期。并认为胃癌发生需要多基因协同作用。     

胃癌组织中Angiopoietin-2、TRAIL与凋亡关系的研究

目的研究血管生成素-2(Angiopoietin-2)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis indueing ligand,TRAIL)在胃癌组织中的表达,探讨二者与细胞凋亡的关系.方法应用免疫组化技术检测67例胃腺癌组织中及相对应的正常胃黏膜中Angiopoietin-2、TRAIL蛋白的表达,用原位末端标记(TUNEL)技术检测癌组织中的凋亡指数(AI).结果angiopoietin-2在胃癌组织中明显表达(52.39%),而在癌旁正常黏膜呈弱表达(7.46%),低分化癌的angiopoietin-2的表达水平高于中高分化癌,有淋巴结转移者的angiopoietin-2的表达高于无淋巴结转移者(P均<0.05).TRAIL在正常胃黏膜中的阳性表达率97.01%高于癌组织中的阳性表达率47.76%(P<0.05);TRAIL蛋白的表达与肿瘤的分化程度有关,分化程度越低,TRAIL的表达率越低(P<0.05),TRAIL蛋白表达与胃癌的直径、部位、大体分型,浸润深度及有无淋巴结转移及患者的年龄、性别无关(P>0.05).胃癌组织中细胞凋亡指数为1.85±0.66.angiopoietin-2蛋白表达阳性组与阴性组、TRAIL蛋白阳性组与阴性组中凋亡指数分别存在着显著性差异(P<0.05);Angiopoietin-2与TRAIL蛋白表达之间无明显的相关性(rs=0.112,P>0.05).结论Angiopoientin-2可抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤的恶性进展;TRAIL可诱导胃癌细胞发生凋亡.     

非小细胞肺癌中MMP-9和EGFR的表达及对预后的意义

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)和表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义.方法采用免疫组织化学(SP)法检测MMP-9和EGFR在62例NSCLC组织和18例正常肺组织中的表达.结果 62例NSCLC中MMP-9和EGFR阳性表达率分别为67.7%和58.1%,显著高于癌旁正常肺组织(P<0.005).肺癌组织中的MMP-9和EGFR的阳性表达率与肿瘤病理分级、TNM分期和淋巴结转移有密切关系(P<0.05),但与肺癌组织学类型无明显关系(P>0.05).MMP-9、EGFR的表达水平与NSCLC患者的预后显著相关(P<0.05).结论 MMP-9、EGFR可作为判断NSCLC恶性程度及预后的指标.     

胃癌P^53和Ki-67表达与淋巴结转移的相关性

目的研究P53和Ki-67抗原的表达与胃癌淋巴结转移的关系.方法45例胃癌分2组,淋巴结转移组28例,无转移组17例.以P53和Ki-67的单克隆抗体,用SP法免疫组织化学技术对淋巴结转移组和无转移组进行标记.结果淋巴结转移组与无转移组P53阳性表达分别为19例(19/28),5例(5/17),转移组的p53阳性率高于无转移组,差异有显著性(P<0.05).淋巴结转移组和无转移组的Ki-67高表达分别为21例(21/28)、7例(7/17),转移组Ki-67高表达率明显高于无转移组(P<0.05).P53阳性组的Ki-67高表达率明显高于p53阴性组(P<0.01).结论淋巴结转移组p53阳性表达和Ki-67高表达明显高于无转移组(P<0.05).p53和Ki-67表达可作为预测淋巴结转移,判断预后的指标之一.     

沙眼衣原体ompA基因克隆及其在真核细胞中的表达

目的克隆D型沙眼衣原体(Ct)ompA基因,构建真核表达重组质粒,转染真核细胞,为核酸疫苗的研制作准备.方法用PCR技术从D型Ct基因组DNA中扩增ompA基因片段,重组入pUCm-T克隆载体.将pUCm-T/ompA中的ompA外源基因片段经酶切、连接等反应,亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体,进行序列分析和酶切鉴定后,运用脂质体将重组体pcDNA3.1/ompA转染HeLa细胞,免疫组化法观察目的的基因的表达.结果从D型Ct基因组DNA中扩增出特异的ompA基因片段;序列测定证实与GenBank登陆的D型Ct一致;重组质粒pcDNA3.1/ompA在HeLa中获得表达.结论Ct ompA基因能够在体外真核细胞表达,为进一步研究Ct致病机制及DNA疫苗的研究提供理论依据.     

基因工程与医学

目的：探讨基因工程研究与医学的关系。方法：对与医学有关的基因工程研究报告和最新成果,加以分析。结果：基因药物,基因诊断和治疗已在临床上取得一定应用。结论：基因工程研究促进医学的发展。     

人B7-1/Sart3融合基因的克隆和表达

目的：构建人共刺激分子CD80(B7-1)、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原3(Sart3)融合基因真核表达载体，并分别在原核和人成纤维细胞中表达。方法：采用RT-PCR技术，从人胎盘组织抽提的总RNA中克隆Sart3基因的部分cDNA序列(第1～1281bp)．此段序列包括已报道的能诱导HLA限制性细胞毒性T淋巴细胞的抗原表位。然后将不含终止密码子的B7-1 cDNA和Sart3 cDNA共克隆入真核表达载体pEGFP-N1，测定核苷酸序列确定重组成功后，分别转染大肠杆菌和人成纤维细胞，利用流式细胞仪和Western blot检测B7和Sart3的表达。结果：构建人B7、Sart3融合基因真核表达载体B7sart3／pEGFPN。测序结果与GenBank的B7、Sart3相应序列(NM_005191、NM_014706)一致．阅读框无改变。流式细胞仪测定发现在转染的人成纤维细胞表面有明显的荧光增强．免疫印迹发现融合蛋白可以与抗B7抗体反应，融合蛋白分子量与B7-Sart3-EGFP的预测分子量相当。结论：成功构建真核表达载体B7Sart3／pEGFPN，并在人成纤维细胞中表达。为下一步研究将SART3蛋白作为肿瘤疫苗应用于骨肉瘤的生物治疗打下基础。     

Ｌｉｍｓ Ｅ：一个新的ＬＩＭ同源域基因的克隆和初步分析

目的:克隆与分析小鼠不同剪切的Lims基因.方法:应用巢式RT-PCR,以小鼠cDNA为模板,扩增Lims基因不同剪切子,构入PinPointTM Xa-1T质粒,测序鉴定.结果:测序表明克隆了新的Lims基因变异剪切体Lims E,该变异剪切体编码区为1 164 bp.编码387个氨基酸.结论:比较基因组学分析显示,成功地克隆了一新的小鼠Liras基因剪切子Lims E,为进一步研究Lims基因在细胞发育中的功能打下了基础.     

LRP16基因的SAGE谱及其在正常血细胞、白血病细胞中的表达状况

目的：通过信息学和实验学的方法检测LRP16基因在肿瘤细胞以及在造血发育不同阶段的表达状况，探讨其在肿瘤发生、发展以及在血细胞成熟过程中可能的作用。方法：以NCBI提供的高通量CGAP／SAGEmap数据库为实验对象，“Virtual Northern”程序为实验工具，分析比较了LRP16基因在多种肿瘤组织、细胞系和相应正常组织中的表达谱；采用半定量RT－PCR方法检测了该基因在多种正常血细胞及白血病细胞中的表达量。结果：SAGE结果显示LRP16在人类多种肿瘤细胞中的表达量明显高于其正常对应组织。脐血中未检测到LRP16表达，正常骨髓及经G－CSF动员的PBSC（peripheral blood stem cells)中的表达量明显低于正常人外周血、原代白血病细胞及白血病细胞系（P＜0．001）。结论：LRP16在不同的血细胞中表达量不同。同时表明LRP16与急性白血病等多种肿瘤的发生、发展存在相关性；在初诊与复发白血病中，LRP16的表达差异值得进一步研究。     

结直肠癌MICA基因的表达与p53K-ras基因突变的关系研究

目的:分析结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变的关系.方法:回顾性分析我院2014年3月至2016年3月收治的66例结直肠癌患者的临床资料,应用半定量PCR-SSCP技术,对癌组织mdr1基因表达量与p53、K-ras进行检测,并分析结直肠癌MICA基因表达与p53、K-ras基因突变间的相互关系.结果:经研究发现,MICA表达与结直肠癌患者肿瘤部位、年龄、性别无相关性(P>0.05).于66例患者中,22例淋巴结转移者的MICA平均表达量明显高于淋巴结未转移者,差异具有统计学意义(P<0.05).8例K-ras、p53基因联合突变者MICA基因平均表达量高于非联合突变者,差异具有显著统计学意义(P<0.05),12例K-ras基因突变者MICA平均表达量稍高于未突变者,但比较差异无统计学意义(P>0.05),16例p53基因突变者MICA平均表达量显著优于p53基因未突变者,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:MICA基因高表达已成为了结直肠癌的关键检测指标,而p53、K-ras基因与其高表达具有相关性.     

耐异烟肼结核分枝杆菌及其katG、inhA基因的突变

目的 探讨耐异烟肼结核分枝杆菌及其katG与inhA基因突变的特征,为临床选择抗结核药物治疗提供实验室参考。方法 回顾性分析2015年1月1日-2017年1月1日在上海交通大学附属同仁医院海南分院的260例患者标本,对213例进行结核分枝杆菌分离培养,对47例进行博奥芯片法检测,再对213例培养所得菌株进行博奥芯片检测,对博奥芯片检测的47例痰标本进行结核分枝杆菌分离培养;对101株结核分杆菌进行katG与inhA基因检测。结果 培养法和博奥芯片结核分枝杆菌检出率分别为36.6%（78/213）和48.9%（23/47）;培养法和博奥芯片耐多药结核分枝杆菌检出率分别为41.0%（32/78）和47.8%（11/23）;博奥芯片法和比例法耐异烟肼符合率98.7%(77/78);男性结核分枝杆菌阳性率45.9%高于女性阳性率29.2%;检测katG基因和inhA基因,3个基因区域都发生突变,突变发生率大小依次为katG315（AGC→ACC）密码子(32株,54.2%)、katG315（AGC→AAC）密码子(16株,27.1%)、inhA-15（C→T）(10株,16.9%)。24株(23.8%,24/101)对异烟肼无突变但对利福平发生突变;43株也同时耐利福平(42.6%,43/101)。突变频率较高的突变位点是315,突变频率为81.4%(48/59),1株(1.7%,1/59)为双位点联合突变且突变频率最低。结论 结核分枝杆菌katG和inhA基因突变与耐INH相关,这为临床及时准确诊断、及早使用抗结核药物联合治疗提供了帮助。     

PTEN 、FHIT基因在胃腺癌中的表达及其意义

目的:探讨PTEN和FHIT基因在胃腺癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学(Envi-sion二步法)检测56例胃腺癌组织及10例正常胃黏膜组织中PTEN和FHIT基因蛋白的表达。结果:56例胃腺癌组织中PTEN和FHIT蛋白阳性表达率分别为41.1%和46.4%,正常胃黏膜组织均为100%,差异均有统计学意义(P<0.05)。PTEN蛋白的表达与胃腺癌的分化程度、浆膜浸润、淋巴结转移均有关(P<0.05)。FHIT蛋白的表达与胃腺癌淋巴结转移、浆膜浸润无关(P>0.05),与胃腺癌的分化程度有关(P<0.05)。结论:PTEN和FHIT基因蛋白缺失在胃腺癌发生、发展中起重要作用,二者可作为判断胃腺癌生物学行为和临床预后的参考指标。     

结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变的关系研究

目的研究结直肠癌MICA基因的表达与p53、K-ras基因突变之间的联系。方法选取我院从2015年8月~2017年8月132例结直肠癌患者为此次研究对象行回顾性分析,应用半定量PCR-SSCP技术,进行mRNA水平的检测,对结直肠癌组织MICA基因表达量与p53、K-ras进行检测,并分析结直肠癌MICA基因表达与p53、K-ras基因突变之间的相互关联。结果在K-ras基因突变组中的MICA平均表达量显著高于K-ras基因未突变组,差异具有统计学意义(P0.05);在p53基因突变组中的MICA平均表达量显著高于p53基因未突变组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论高表达的MICA基因的发生可能与p53、K-ras基因突变关系密切,MICA基因的表达情况是目前检测结直肠癌的关键,应引起人们的广泛关注。     

Cx基因组在大肠癌中的表达及突变

目的 :研究大肠癌基因组中Cx基因的表达 ,探讨诱导剂作用后Cx基因的表达及Cx4 3基因编码序列突变。方法 :Northern杂交、RT PCR和PCR 单链构象多肽分析。结果 :正常大肠粘膜有Cx32、Cx37、Cx4 3mRNA的高表达 ,大肠癌癌旁组织有较弱的Cx32、Cx37、Cx4 3基因表达 ,大肠癌组织中仅有Cx4 3基因微弱表达。维甲酸 (RA)、二甲基亚砜 (DMSO)对大肠癌基因组中Cx4 3基因有诱导作用 ,而其本身表达的Cx4 6基因在RA及佛波酯 (TPA)作用后明显减弱或消失。Cx4 3基因编码区未发现突变。结论 :Cx32可能是人大肠粘膜上皮细胞基因组中维持细胞间隙连接通讯功能的特异表达的Cx基因 ,Cx4 6可能是大肠癌Cx基因表达的一种变异。Cx4 3基因在人大肠癌中表达下调的原因不是其编码区的点突变