血清miR-153和miR-142-3p表达在宫颈癌诊断和预后评估中的价值

摘 要：［目的］ 探讨宫颈癌患者血清miR-153及miR-142-3p的表达及其在宫颈癌诊断和预后评估中的价值。［方法］ 选取2014年1月至2017年3月收治的宫颈癌患者142例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测宫颈癌患者血清miR-153及miR-142-3p表达水平。绘制ROC曲线分析miR-153及miR-142-3p对宫颈癌诊断的截断值,并以此为标准将宫颈癌患者分为高表达和低表达,对两组临床病理特征进行比较。采用多因素Cox回归模型分析影响宫颈癌患者术后预后不良的危险因素。［结果］ 宫颈癌组血清miR-153（0.76±0.38 vs 1.92±0.95）及miR-142-3p（2.14±1.06 vs 8.15±3.20）表达水平明显低于对照组（P<0.01）。血清miR-153及miR-142-3p表达水平诊断宫颈癌的最佳截断值分别为1.31和4.93,AUC分别为0.817（95%CI：0.755～0.878）和0.850（95%CI：0.791～0.912）。血清miR-153及miR-142-3p低表达与宫颈癌患者的临床分期、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及脉管浸润有关（P<0.05）。miR-153及miR-142-3p低表达与宫颈癌患者生存期短有关（P<0.01）。多因素Cox回归模型分析显示,临床分期、浸润深度、淋巴结转移、miR-153＜1.32及miR-142-3p＜4.93是影响宫颈癌患者预后不良的独立危险因素。［结论］ 血清miR-153及miR-142-3p表达水平在宫颈癌患者中明显下调,miR-153及miR-142-3p有望作为宫颈癌诊断及预后评估的生物学标志物。     

miR-218-5p靶向N-cadherin调节胃癌细胞迁移、侵袭分析

摘 要：［目的］ 研究miR-218-5p靶向N-钙黏蛋白（N-cadherin）调节胃癌细胞迁移、侵袭的作用及机制。［方法］ 收集28例胃癌组织及癌旁组织,检测miR-218-5p及N-cadherin的表达水平;培养MNK45胃癌细胞,分为转染阴性对照（NC）mimic的NC组和转染miR-218-5p mimic的miR-218-5p组,检测细胞的迁移及侵袭数目、N-cadherin的mRNA及蛋白表达水平、N-cadherin双荧光素酶报告基因的荧光活力。［结果］胃癌组织中miR-218-5p的表达水平（0.45±0.09）显著低于癌旁组织的（0.71±0.22）（P<0.05）,N-cadherin的表达水平（0.93±0.20）显著高于癌旁组织的（0.67±0.14）（P<0.05）,且miR-218-5p的表达水平与N-cadherin的表达水平呈负相关（r=-0.201,P<0.05）。miR-218-5p组MNK45胃癌细胞的迁移数目（65.57±11.49）及侵袭数目（67.11±10.34）均少于NC组（113.84±20.13,98.72±18.57;P均<0.05）,N-cadherin的mRNA及蛋白表达水平、野生型N-cadherin双荧光素酶报告基因的荧光活力低于NC组（P<0.05）。［结论］ miR-218-5p在胃癌中低表达,过表达miR-218-5p能够抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,靶向抑制N-cadherin是可能的分子机制。     

MiR-144-5p在胃癌中的表达及其生物学功能

摘 要：［目的］ 探讨miR-144-5p在胃癌组织和细胞中的表达及生物学功能。［方法］ 采用qRT-PCR 检测miR-144-5p在胃癌组织和细胞系中的表达水平,并验证miR-144-5p mimics的转染效率;分别采用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞仪、Transwell实验检测miR-144-5p mimics对胃癌细胞AGS和HGC-27增殖、克隆形成能力、细胞周期和侵袭能力的影响。［结果］ MiR-144-5p在胃癌组织的表达水平明显低于癌旁组织（0.607±0.257 vs 1.000±0.360,t=5.616,P<0.001）。MiR-144-5p低表达与胃癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期显著相关（P<0.05）。MiR-144-5p在胃癌细胞SNU-1、HGC-27、SGC-7901、KATO Ⅲ及AGS中表达水平显著低于正常人胃黏膜上皮细胞GES-1（F=12.17,P<0.001）。转染miR-144-5p mimics后,AGS（t=4.902,P=0.001）和HGC-27（t=4.154,P=0.003）细胞中miR-144-5p的表达水平显著增高;AGS和HGC-27细胞的增殖能力、克隆形成能力、侵袭能力均被抑制（P<0.05）,G1期细胞比例增加、而S期的细胞比例减少（P<0.05）。［结论］ MiR-144-5p在胃癌组织和细胞中表达降低,与胃癌患者的TNM分期较晚和胃癌细胞恶性程度较高有关,提示miR-144-5p在胃癌的恶性进程中起重要作用。     

miR-150-5p在甲状腺癌中的表达及其生物学功能研究

摘 要：［目的］ 探讨微小RNA-150-5p（miR-150-5p）在甲状腺癌组织中的表达水平及其通过PI3K/Akt信号通路对甲状腺癌细胞增殖和凋亡能力的影响。［方法］ qRT-PCR检测68例甲状腺癌患者病变组织及其相应癌旁组织中miR-150-5p的表达水平。将miR-150-5p抑制剂和阴性对照转染至人甲状腺癌TPC-1细胞株,以空脂质体作为对照,qRT-PCR检测转染结果,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,生物信息学网站Targetscan 预测miRNA-150-5p与PI3K的靶向结合情况,荧光素酶试验验证miR-150-5p与PI3K的靶向关系,Western blotting检测Cleaved caspase-3、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达。［结果］ 68例甲状腺癌患者病变组织及相应癌旁组织中miR-150-5p的相对表达水平分别为0.96±0.06和1.66±0.11,差异有统计学意义（P＜0.05）;空白对照组和阴性对照组中miR-150-5p的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,miR-150-5p抑制剂组中miR-150-5p的相对表达量为0.12±0.02,明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。空白对照组和阴性对照组24、48和72h细胞增殖率的差异无统计学意义（P＞0.05）,而miR-150-5p抑制剂组24、48和72h细胞增殖率分别为9.56%±1.38%、24.36%±4.66%和33.63%±5.32%,同一时间点均明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。空白对照组和阴性对照组48h细胞凋亡率的差异无统计学意义（P＞0.05）,而miR-150-5p 抑制剂组的细胞凋亡率为16.25%±2.98%,明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）。TargerScan网站预测结果显示,miR-150-5p可与PI3K互补结合,荧光素酶报告基因分析证实miR-150-5p与PI3K存在靶向结合位点。空白对照组和阴性对照组间PI3K、p-Akt和Cleaved caspase3蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05）,miR-150-5p抑制剂组PI3K、p-Akt蛋白表达低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）,Cleaved caspase3蛋白表达高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）,3组间Akt蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05）。［结论］ miR-150-5p在甲状腺癌组织中表达异常升高,干扰miR-150-5p表达能够抑制甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖,并通过上调Cleaved caspase-3促进细胞凋亡,其调控作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

Linc00176靶向miR-338-3/SMO轴对肝癌细胞增殖和迁移的影响

摘 要：［目的］ 探讨基因间长链非编码RNA Linc00176靶向miR-338-3p/SMO对肝癌（HCC）细胞增殖和迁移的影响。［方法］ 收集手术切除的肝癌患者的HCC组织和癌旁组织标本各96例,采用荧光定量PCR检测Linc00176和miR-338-3p在HCC组织和癌旁组织中的表达水平;构建shRNA-Control、 shRNA-Linc00176、miRNA-Control和miR-338-3p慢病毒肝癌细胞系,采用生物信息学和双荧光素酶报告基因检测分析Linc00176和miR-338-3p的靶向关系;采用CCK-8法和异种移植瘤实验检测各组细胞的增殖能力;采用Transwell分析各组细胞的迁移能力;采用Western blot检测各组细胞中SMO蛋白的表达水平。［结果］ Linc00176在HCC组织中的mRNA相对表达水平（1.94±0.21）显著高于癌旁组织（0.57±0.10）;miR-338-3p在HCC组织中的mRNA相对表达水平（0.35±0.08）显著低于癌旁组织（1.62±0.15）,差异均有统计学意义（P<0.05）。生物信息学分析显示Linc00176可能通过靶向调控miR-338-3p的表达,进一步影响SMO蛋白的表达。双荧光素酶报告基因检测显示转染Linc00176-WT的miR-338-3p细胞（0.33±0.08）的相对荧光素酶活性显著低于miRNA-Control组细胞（1.25±0.16）,差异有统计学意义（P<0.05）。CCK-8和异种移植瘤实验显示shRNA-Linc00176和miR-338-3p组细胞的增殖活力和成瘤能力与其各自的对照组相比显著下降,差异均有统计学意义（P<0.05）。Transwell结果表明与shRNA-Control组（134.47±12.29）和miRNA-Control组（129.87±13.06）比较,shRNA-Linc00176组（53.17±8.74）和miR-338-3p组（44.61±8.02）细胞的迁移个数均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。Western blot结果显示,shRNA-Linc00176和miR-338-3p组细胞中SMO的蛋白表达水平较shRNA-Control和miRNA-Control组均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。［结论］ Linc00176可能通过靶向调控miR-338-3p/SMO的表达促进HCC细胞的增殖和迁移。     

肝细胞癌根治术后早期复发相关microRNAs的筛选

目的 筛选与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者根治术后早期复发相关的microRNAs。方法 收集10例HCC患者肝脏组织标本,其中早期复发组5例,非早期复发组5例,以及正常肝脏组织标本4例。利用microRNA基因芯片技术检测3组肝脏组织标本中microRNAs的表达谱,筛选出差异表达的microRNAs。结果 早期复发组与正常组相比,miR-21-3p、miR-21-5p、miR-222-3p、miR-3182、miR-3651、miR-3654、miR-4451、miR-4633-5p、miR-720的表达均上调,miR-4525的表达下调（P〈0.05）;非早期复发组与正常组相比,miR-106b-5p、miR-4451、miR-3651、miR-93-5p的表达均上调,miR-451a、miR-3692-5p的表达下调（P〈0.05）。结论 microRNAs的表达与HCC患者术后早期复发有关,检测患者肝脏组织中microRNAs的表达水平可能有助于监测HCC术后早期复发。     

circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。［方法］ 通过集落形成实验、流式细胞术、CCK-8法评估circ_0001361和miR-486-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞克隆、凋亡以及细胞活力的影响。双荧光素酶检测circ_0001361与miR-486-3p的相互作用。［结果］ 干扰circ_0001361表达显著性促进细胞凋亡（7.16%±0.65% vs 25.27%±2.32%,P<0.001）、上调miR-486-3p表达（0.96±0.06 vs 3.08±0.29,P<0.001）、降低细胞光密度值（0.82±0.07 vs 0.44±0.04,P<0.001）和克隆形成数（84.47±7.23 vs 39.69±3.76,P<0.001）。过表达circ_0001361显著性下调miR-486-3p表达（1.00±0.00 vs 0.45±0.05,P<0.001）、促进细胞凋亡（7.36%±0.66% vs 20.44%±2.17%,P<0.001）、降低细胞细胞光密度值（0.86±0.06 vs 0.51±0.05,P<0.001）和克隆形成数（89.62±7.35 vs 45.81±4.48,P<0.001）。circ_0001361与miR-486-3p直接结合。下调miR-486-3p表达显著性减弱干扰circ_0001361对MDA-MB-231细胞克隆形成数、凋亡率和细胞光密度值的影响（P<0.001）。［结论］ 干扰circ_0001361通过促进miR-486-3p表达来诱导乳腺癌细胞凋亡,并抑制其增殖。     

miR-519b-3p表达与局部晚期直肠癌患者术前放化疗应答的相关性及机制研究

摘 要：［目的］ 研究miR-519b-3p表达与局部晚期直肠癌术前放化疗应答的相关性,并探讨miR-519b-3p是否通过靶向作用ARID4B提高局部晚期直肠癌患者术前放化疗的反应性。［方法］ 实时定量PCR检测局部晚期直肠癌患者miR-519b-3p的表达水平,用miR-519b-3p模拟物或抑制剂转染HCT116或SW480细胞,体外验证其表达水平与放化疗反应的相关性;双荧光素酶报告实验用于检测miR-519b-3p与ARID4B之间的相互作用;通过重组质粒构建及细胞转染调节相关基因在细胞内的表达,通过建立裸鼠异位移植瘤模型,在体验证miR-519b-3p对ARID4B的调节作用。［结果］ 实验发现miR-519b-3p表达与局部晚期直肠癌患者对pCRT的反应性相关,miR-519b-3p在局部晚期直肠癌应答患者中呈现为高表达。miR-519b-3p的过表达增强了体外放化疗的反应性。在机理上,我们发现miR-519b-3p直接与ARID4B mRNA的3′UTR结合,其表达与miR-519b-3p表达呈负相关。功能实验显示miR-519b-3p以ARID4B依赖方式直接与直肠癌患者对术前放化疗的反应密切相关。［结论］ miR-519b-3p通过靶向作用ARID4B提高局部晚期直肠癌患者术前放化疗的反应性。     

miR-127-3P在乳腺癌患者中的表达及意义

摘 要：［目的］ 探讨乳腺癌患者血浆miR-127-3P表达及其临床意义。［方法］ 采用实时荧光定量PCR法检测60例乳腺癌患者癌及癌旁组织miR-127-3P的表达,并进一步检测60例乳腺癌患者和20名正常志愿者血浆miR-127-3P的表达。［结果］ miR-127-3P在乳腺癌患者治疗前血浆中的表达（8.15±1.10）高于正常人血浆（3.85±0.54）（P<0.05）。miR-127-3P在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织（P<0.05）。 治疗前血浆中miR-127-3P表达与癌组织miR-127-3P表达呈正相关（r=0.812,P=0.000）;治疗前血浆中miR-127-3P表达与CA153表达呈正相关（r=0.786,P=0.000）。［结论］ miR-127-3P在乳腺癌患者血浆中表达水平明显上调,其表达能够反映癌组织中miR-127-3P的表达水平,乳腺癌患者血浆中miR-127-3P能成为乳腺癌筛查的一个潜在指标。     

miR-629对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-629在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响。［方法］ 选取手术切除的胰腺癌组织及其癌旁组织各72例,采用RT-PCR检测miR-629的mRNA表达水平。构建NC-shRNA和miR-629-shRNA慢病毒稳定细胞系,采用CCK-8法检测miR-629对细胞增殖的影响;采用Transwell检测miR-629对细胞迁移的影响;采用双荧光素酶报告基因和Western blot验证miR-629与SIRT3的靶向关系。［结果］ 与癌旁组织（0.40±0.04）比较,胰腺癌组织中miR-629的mRNA相对表达水平（1.71±0.15）显著增加（t=3.901,P<0.001）;与NC-shRNA细胞比较,miR-629-shRNA细胞的增殖能力均显著下降（F=2.719,P<0.001）;与NC-shRNA细胞（140.22±19.37）比较,miR-629-shRNA细胞的迁移能力（63.91±7.44）显著下降（t=4.612,P<0.001）;荧光素酶报告基因显示,转染SIRT3-WT后,miR-629-shRNA细胞的相对荧光素酶活性（0.33±0.05）较NC-shRNA细胞（1.25±0.12）显著增加（t=4.109,P<0.001）;western blot结果表明miR-629-shRNA细胞中SIRT3的蛋白表达水平（0.44±0.03）较NC-shRNA细胞（1.31±0.11）明显增加（t=3.692,P<0.001）。［结论］ miR-629在胰腺癌组织中高表达,可能通过靶向下调SIRT3的表达促进胰腺癌细胞的增殖和迁移,有望为胰腺癌的临床诊疗提供新的思路。