耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因及分子特征研究

目的：探讨临床分离的耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的耐药基因和分子流行病学情况。方法：收集2018年1月—2019年3月临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）,采用VITEK-2 compact微生物鉴定仪进行菌种鉴定和药敏检测;改良Hodge和碳青霉烯酶灭活（m CIM）试验对菌株进行碳青霉烯酶表型检测;PCR检测β内酰类胺类（碳青霉烯酶、ESBL、Amp C酶）和喹诺酮类（PMQR）共19种耐药基因;多位点序列分析（MLST）对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）进行分子分型及同源性分析。结果：共收集CRE 134株,其中肺炎克雷伯菌125株,阴沟肠杆菌4株,大肠埃希菌3株,普罗威登菌2株;改良Hodge试验示114株阳性,碳青霉烯酶灭活（m CIM）试验示125株阳性;所有检测菌株均携带碳青霉烯类耐药基因;125株肺炎克雷伯菌中有118株携带blaKPC-2基因,另有5株携带blaNDM基因（4株携带blaNDM-1、1株携带blaNDM-5）和4株携带blaIMP-4基因,4株阴沟肠杆菌中3株携带blaNDM基因（2株携blaNDM-1、1株携带blaNDM-5）,1株...     

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学研究

目的 分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药情况及耐药基因,为临床治疗提供依据。方法 收集并鉴定临床分离非重复CRKP 27株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪鉴定和药敏试验,碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测A类丝氨酸碳青霉烯酶和B类金属β内酰胺酶,聚合酶链反应（PCR）法和基因测序技术检测常见的耐药基因。使用肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)对菌株进行同源性分析。结果 27株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、头孢菌素类、喹诺酮类等抗生素的耐药率均>96%。碳青霉烯酶抑制剂增强试验显示,26株A类丝氨酸碳青霉烯酶阳性,1株B类金属β内酰胺酶阳性。PCR和基因测序结果显示,26株CRKP携带KPC-2基因,1株携带NDM-1基因。ERIC-PCR将27株CRKP分为8型,以Ⅰ型和Ⅱ型为主。结论 分离的CRKP对临床常用抗生素表现出高水平耐药,其耐药机制主要是该类细菌产KPC-2型碳青霉烯酶。     

携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药致肺炎克雷伯菌感染的暴发

目的了解临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,Kpn）KPC型碳青霉烯酶基因blaKPC存在状况。方法在2008年11月至2009年7月间,从住院病人中分离出19株泛耐药肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶情况,采用PCR及序列分析的方法分析blaKPC基因。结果19株泛耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验结果均阳性、blaKPC基因阳性率为100．0％,序列分析确认均blaKPC-2亚型,其HZ001号菌株（原始编号HZ9871）blaKPC-2基因序列已登录GenBank,注册号为GU086225。结论临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌均携带blaKPC-2基因,产KPC-2型碳青霉烯酶应该是本组菌株对碳青霉烯类抗生素耐药主要原因。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因检测及其同源性分析

目的研究六安市人民医院耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药基因及同源性。方法收集2018年4-6月分离自临床标本的肺炎克雷伯菌40株,用法国梅里埃VITEK 2 COMPACT全自动细菌鉴定药敏仪进行鉴定和药敏。采用改良Hodge试验（MHT）和改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）对40株菌进行碳青霉烯酶表型的筛选,采用PCR方法检测其是否携带已知的主要碳青霉烯耐药基因KPC、OXA-48、NDM-1。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对其进行同源性分析。结果40株CRKP多分离自ICU病房（占55%）,以呼吸道来源标本为主（占80%）,对常用抗生素头孢菌素类、氨基糖苷类以及大环内酯类的耐药率均在80.0%以上。MHT和mCIM试验中有33株菌二者均为阳性,2株菌均为阴性,剩下5株MHT试验阳性而mCIM试验结果为阴性。32株菌携带KPC基因,未检出OXA-48及NDM-1基因。同源性分析结果显示40株CRKP分为7个型别,其中A型34株（占85%）,B、C、D、E、F及G型各1株（各占2.5%）。结论分离的CRKP以携带KPC-2基因为主,共有7个型别,以A型为主,为有效治疗和预防CRKP感染提供了参考依据。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及耐药特性.方法:对42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行药敏试验、改良Hodge试验,并采用聚合酶链反应(PCR)方法检测细菌肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因.结果:42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中,药敏试验结果显示耐药情况严重,仅对替加环素、阿米卡星、妥布霉素、复方新诺明较敏感.改良Hodge试验及KPC基因检测全部阳性,基因测序为KPC-2型.结论:KPC-2是引起肺炎克雷伯菌耐药的主要原因,应引起临床及实验室的关注.     

碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌筛选及临床分析

目的 筛选碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(CRKP)及现状分析.方法 采用K-B法及配套GN卡上机鉴定、改良Hodge法试验、EDTA纸片协同试验筛选碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌.结果 2015年7月~2016年12月,本院临床科室送检标本分离碳青霉烯类肺炎克雷伯菌菌株36株.结果表明,碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌院内尤其是重症医学科病房感染严重,其多重耐药现象突出.结论 建议开展其同源性分析及监测肺炎克雷伯菌流行情况,应引起医院高度重视.     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药基因及毒力基因分析研究

目的 通过全基因组测序技术（whole genome sequencing,WGS）检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（carbapenemresistant Klebsiella pneumonia, CRKP）的耐药基因及毒力基因,了解本院CRKP的分布及耐药情况,为临床治疗和预防耐药菌的产生提供理论依据。方法 收集甘肃省肿瘤医院2019年6月至2021年6月临床分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,用全自动细菌鉴定仪进行细菌鉴定和抗菌药物敏感试验,用改良碳青霉烯灭活试验（mCIM）确认所筛选出的菌株是否产碳青霉烯酶,通过全基因组测序分析研究CRKP菌株的耐药基因种类和分布情况以及毒力基因类型和毒力基因位点。结果 23株CRKP分离自4个不同的临床科室,标本主要来源于痰液和血液,药敏结果显示所有菌株对碳青霉烯类、头孢菌素类、青霉素类及含β-内酰胺酶抑制剂类抗菌药物均耐药,对环丙沙星、阿米卡星和复方新诺明部分耐药。基因组测序分析显示：23株CRKP中,17株为ST11型,6株为ST23型。CRKP的荚膜型（KL）均为KL64,一致性均在99.9%以上。23株CRKP均携带bla KPC-2,此外还有...     

对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的肺炎克雷伯菌耐药机理探讨

目的 研究临床分离的1株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机制.方法 对临床分离的1株肺炎克雷伯菌,通过纸片扩散法(KB法)检测其对抗生素的敏感性;利用改良Hodge试验、乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验对此菌株进行碳青霉烯酶表型确证;利用PCR及DNA序列分析,确定其基因型;通过质粒提取、质粒接合试验,对耐药基因进行定位.结果 药敏纸片法显示该菌株对碳青霉烯类抗生素敏感,其抑菌圈直径16～17 cm,提示分离的菌株可能产碳青霉烯酶,改良Hodge试验、EDTA协同试验确证产金属β-内酰胺酶(MBLs),PCR扩增和序列分析发现该菌携带MBLs基因blaIMP,药敏纸片法证实接合子对美罗培南的敏感性降低,IMP-4基因位于接合子约73 000 bp质粒上.结论 肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素敏感性降低的分子机理是携带MBLs基因的blaIMP.     

丽水市中心医院产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学研究

目的明确丽水市中心医院产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征,为临床抗感染治疗提供实验依据。方法收集2011年3月至2015年10月丽水市中心医院分离的碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌（CR-KP）。采用Vitek2-compact系统鉴定菌株并联合纸片扩散法（K-B法）检测其药敏,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶;PCR法扩增KPC基因,测序后利用BLAST比对确定基因型;肠杆菌科基因间重复序列分型法（ERIC-PCR）联合多位点序列分型（MLST）鉴定菌种同源性;进而探讨产KPC酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征。结果共收集到70株CR-KP,其中68株改良Hodge试验阳性,扩增产物测序结果均为blaKPC-2基因。ERIC-PCR结果显示,70株KPC型肺炎克雷伯菌分为A、B、C、D、E5个克隆群分别为63株(90.0%)、3株、2株、1株、1株;MLST分成6个ST型,其中ST11型63株（90.0%),ST35型2株,ST1型2株,ST592、ST1883、ST494型均1株。结论丽水市中心医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的主要克隆群为ST11型,是我院流行感染的主要原因。     

高毒力碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌流行病学和分子生物学分析

目的 对沈阳市第四人民医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的流行病学分析,并对其中高毒力碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CR-hvKP）的表型、耐药基因、荚膜血清和毒力因子进行探究,为深入了解CR-hvKP的耐药机制、进化途径以及鉴别依据提供参考。方法 收集2017—2019年我院住院患者临床样本中分离出的肺炎克雷伯菌（KP）,使用全自动微生物分析仪鉴定和药敏实验,再利用改良碳青霉烯灭活实验（mCIM）和EDTA-改良碳青霉烯灭活实验（eCIM）方法进行菌株表型检测,PCR方法进行碳青霉烯耐药基因检测。通过拉丝实验筛选CR-hvKP,采用PCR进行荚膜血清型和毒力因子检测。结果 本研究共收集到KP 1 531株,其中CRKP 160株（10.45%）,主要来源于痰液标本,占比53.13%。对头孢菌素类、青霉素类、美罗培南、亚胺培南完全耐药,对复方磺胺甲噁唑和替加环素敏感,耐药率分别为45%和10%。CRKP携带blaKPC 基因127株,blaNDM基因26株,同时携带2种基因3株,携带blaOXA-48基因2株,未检测出任何基因2株。mCIM对碳青霉烯酶检出率为95.56%, eCIM对丝氨酸酶检出率为93.18%,对金属β-内酰胺酶检出率为96.55%。拉丝实验初步筛选得到6株CR-hvKP,分离率3.75%,低于其他已报道医院检出率。除1株产K2型荚膜血清菌株来自血液标本外,其余5株来自痰标本,产K1型荚膜血清。6株CR-hvKP全部携带耐药基因blaKPC和4种毒力因子rmpA、rmpA2、iutA、iroN。结论 沈阳市第四人民医院CRKP检出率位于全国平均水平,CRKP对多种抗菌药物耐药,对替加环素敏感,主要产KPC类碳青霉烯酶。CR-hvKP检出率低于其他已报道医院,具有产K1型荚膜血清,携带blaKPC耐药基因和多种毒力因子的特点。当K1型产KPC类碳青霉烯酶CRKP同时携带毒力因子rmpA、rmpA2、iutA、iroN,可进化成为CR-hvKP,提示临床应注意鉴别并进一步加强监测,以防止高毒力耐药菌株的传播和流行。     

产KPC肺炎克雷伯菌检测方法构建与耐药机制

目的 探讨产肺炎克雷伯型碳青霉烯酶(KPC)肺炎克雷伯菌检测方法以及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制、可能的治疗药物.方法 选取K-B法证实的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌36株纳入本研究,使用改良Hodge试验、Carba NP试验对菌株进行验证,随后采用PCR扩增、产物琼脂糖凝胶电泳实验,并对电泳阳性条带进行基因测序鉴定.结果 K-B法药敏试验显示36株耐碳氢烯类肺炎克雷伯菌,随后行Hodge验证,33株(91.7%)是产KPC肺炎克雷伯菌,对碳氢烯类耐药而对替加环素及米诺环素仍然敏感.对Hodge试验阳性33株再行Carba NP试验确证,其中27株(87.9%)阳性,6株(12.1%)阴性;对Hodge试验阳性33株行PCR扩增及电泳实验,共有27株出现目标条带(340 bp)提示阳性,与Carba NP试验结果相一致.对出现目标条带的27株肺炎克雷伯菌再进行KPC-2耐药基因PCR扩增产物测序,均为KPC-2型耐药基因.结论 K-B法药敏试验加随后改良Hodge试验验证对于筛查、发现KPC肺炎克雷伯菌具有较高的符合度,为发现KPC肺炎克雷伯菌有效筛查方法.K-B法药敏试验证实对KPC肺炎克雷伯菌,替加环素等可能是有效治疗的药物之一.Hodge试验检测的KPC肺炎克雷伯菌,存在12.1%(6/33)的假阳性率.Carba NP 试验及PCR扩增检测一致性好,具有确证产KPC肺炎克雷伯菌作用.随后的测序研究结果表明检测出的KPC肺炎克雷伯菌均为KPC-2,该型是引起肺炎克雷伯菌对碳青酶烯酶耐药的主要机制.     

我院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌感染特点及碳青霉烯酶基因型分析

目的 研究丽水市中心医院耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的感染特点、药物敏感性和碳青霉烯酶基因携带情况。 方法 收集2011年3月—2015年12月期间丽水市中心医院共140株CRE的临床资料并分析,Vitek 2-Compact鉴定细菌,K-B纸片法进行药物敏感性试验,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,PCR扩增常见的碳青霉烯酶基因KPC、IMP、VIM、NDM和OXA-48。 结果 140株CRE以肺炎克雷伯菌为主(占70.71%),其次为产气肠杆菌(占6.44%)和阴沟肠杆菌(占5.71%)。标本来源以痰液为主(占69.29%),其次为尿液(占12.86%)、分泌物和血液(均各占4.29%)。临床科室分布以重症监护室为主(占44.29%),其次为神经外科(占18.57%)和血液内科(占5.00%)。药敏结果提示CRE对大部分β内酰胺类药物高度耐药,耐药率>80%,对米诺环素、阿米卡星的耐药率分别为14.78%和35.43%。改良Hodge试验有127株阳性(阳性率为90.71%)。PCR扩增及基因测序比对结果提示99株携带KPC-2基因,14株携带IMP-4基因,2株携带IMP-1基因,13株携带NDM-1基因。 结论 CRE对多种抗菌药物高度耐药,耐药基因以KPC为主,其次为IMP和NDM,临床应根据药物敏感性结果合理选用抗菌药物,做好院感监测及防护,以防止耐药菌株的传播和流行。      

产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药性检测及变迁

目的探讨产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的流行及耐药情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法采用BD Phoenix 100全自动细菌鉴定药敏系统及纸片扩散法测定病原菌的耐药性,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶和Etest MBL确认纸条法表型筛查金属-内酰胺酶。结果近3年临床肺炎克雷伯菌检出株数并无明显变化,但改良Hodge试验阳性株检出率逐年增加,金属-内酰胺酶阳性株检出率也逐年增加。耐碳青霉烯类菌株对大多数抗生素的耐药率较高且逐年上升,但对氨基糖甙类抗生素的敏感性尚可。结论产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的耐药情况日益严重,应加强院感的监测和预防。     

碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨天津医科大学第二医院分离得到的碳青霉烯耐药克雷伯菌的耐药机制。方法:2013-2014年度临床微生物实验室分离到36株碳青霉烯耐药克雷伯菌,改良Hodge试验、EDTA协同试验及 PCR法检测碳青霉烯酶耐药基因,PCR法检测ESBLs及Ampc酶耐药基因,PCR、实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测外膜蛋白基因Ompk35及Ompk36存在及表达情况。结果:9株改良Hodge试验阳性,EDTA协同试验均阴性,碳青霉烯酶耐药基因均阴性;36株碳青霉烯耐药克雷伯菌至少存在1种β内酰胺酶耐药基因;外膜蛋白基因无缺失,33株存在外膜蛋白表达量下降。结论: 分离的碳青霉烯耐药克雷伯菌耐药机制可能为ESBLs及Ampc酶表达合并外膜蛋白表达下降。     

多重PCR检测技术在耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌基因型中的应用

目的利用多重PCR技术检测耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)基因型。方法收集2015年1月—2018年1月某院住院患者各种临床标本(痰液、血液、尿液、腹腔引流液等)中分离得到的CRKP共132株,采用Vitek-2 Compact全自动微生物鉴定仪对分离菌株进行体外药物敏感试验;利用拉丝试验筛选高粘液阳性菌株;利用改良Hodge实验对碳青霉烯酶表型进行检测;利用多重PCR法检测碳青霉烯酶耐药基因型:kpc、imp、vim、ndm、sme、ges、gim、oxa-48;常见毒力基因rmpA、magA、fimH、mrkD、kpn、entB、ybtS、iutA、aerobactin。结果 132株CRKP对头孢类抗生素耐药率较高,氨苄西林、氨曲南次之,对多粘菌素B、四环素、氯霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶敏感;改良Hodge试验阳性118株,阳性率89.39%;132株CRKP中,20株(15.15%)为黏液丝检测阳性。所有CRKP中毒力基因携带情况中,mrkD基因型比例最高,其次为fimH,未检测到magA毒力基因;132株CRKP中,130株检测到kmc基因,2株检测到imp基因,均未检测到ndm、vim、sme、ges、gim、oxa-48毒力基因。结论某院分离得到的CRKP主要毒力基因为mrkD、fimH,耐药基因主要为kpc。     

海南发现4株产NDM-1多重耐药的肺炎克雷伯菌

目的分离和鉴定海南地区临床上发现的耐碳青霉烯类药物的肺炎克雷伯菌携带新德里金属β-内酰胺酶-1（NDM-1）基因的细菌。方法使用法国梅里埃API20E生化鉴定条和VITEK2全自动细菌鉴定仪及其配套的GNS试剂,鉴定出临床上耐亚胺培南和美洛培南的肺炎克雷伯菌;并经改良Hodge试验和亚胺培南,亚胺培南＋EDTA纸片法协同试验检测产金属酶类碳青霉烯酶,对目的菌株进行NDM-1耐药基因PCR特异性扩增,扩增后产物进行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定;同时将目的菌株进行质粒接合转移试验分析其耐药机制,并对接合前后的药敏结果进行比较分析。结果从13株耐亚胺培南或美洛培南的肺炎克雷伯菌中,经亚胺培南,亚胺培南＋EDTA纸片法协同试验检出4株阳性,确定为产金属酶类碳青霉烯酶细菌。该4株产金属酶的肺炎克雷伯菌的改良Hodge试验均为阴性,NDM-1基因PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和测序分析,确认此4株目标菌株均为携带NDM-1的耐药基因的耐药菌株;这4株接合子E．coli J53（NDM-1）对所有β-内酰胺类药物的MIC值较受体菌E．coli J53耐药性均有很大提高,经PCR扩增其接合子NDM-1基因片段分析证实4株接合子均接合成功。结论海南发现的4株耐碳青霉烯酶类的肺炎克雷伯菌为携带blaNDM-1基因,且其NDM-1耐药基因可通过质粒在不同菌株之间传递。     

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药基因分析

目的分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药情况及其耐药基因,为该菌感染的治疗和预防提供参考。方法收集临床分离非重复耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌50株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同法检测金属酶,PCR扩增和基因测序技术检测其耐药基因。结果药敏结果显示,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类及氨曲南等抗生素的耐药率高达80%以上。50株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,mCIM试验结果阳性37株,其中EDTA协同试验阳性有3株。PCR结果显示,37株mCIM试验阳性耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,检测出33株KPC-2型耐药基因,未检测出IMP、VIM、NDM-1、OXA-48等耐药基因。结论耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗生素表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要以KPC-2型为主。     

对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型分析

目的:分析对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型。方法:使用改良的Hodge实验(MHT)初筛产KPC的肺炎克雷伯菌,PCR和测序鉴定耐药肺炎克雷伯菌是否带有KPC基因,并通过GenBank的比对确定KPC基因型。用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对KPC阳性菌株进行同源性分析。结果:13株对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有10株MHT结果为阳性,阳性率为76.92%,其中有2株细菌为KPC基因阳性,阳性率为15.38%,通过GenBank比对,此KPC基因为2型。PFGE结果显示这2株细菌来源于同一克隆。结论:分离出了携带有KPC-2型碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌。     

产气肠杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制研究

目的 探讨产气肠杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制.方法 收集耐碳青霉烯类抗生素产气肠杆菌16株,采用改良Hodge试验筛选产碳青霉烯酶菌株;采用PCR扩增和基因测序技术检测并验证耐药基因;利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)对菌株的外膜蛋白进行分析.结果 改良Hodge试验结果发现16株产气肠杆菌均产碳青霉烯酶;PCR扩增和基因测序结果显示16株产气肠杆菌均存在KPC-2基因,但未携带IMP-1、IMP-2、VIM-1、VIM-2、NDM-1、OXA-1和OXA-9等其他碳青霉烯酶基因;SDS-PAGE电泳结果显示16株产气肠杆菌中有5株出现Omp36膜孔蛋白的缺失.结论 16株耐碳青霉烯类抗生素产气肠杆菌主要耐药机制可能与产KPC-2型酶且部分菌株合并Omp36膜孔蛋白的缺失有关.     

A study on mechanism of carbapenem resistance on pan-drugresistant Acinetobacter baumannii

目的 研究鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药的表型和分子机制.方法 采用KB法及琼脂稀释法从临床分离的84株泛耐药鲍曼不动杆菌中随机选取8株,采用外排泵抑制试验筛查外排泵表型阳性菌株,EDTA协同实验筛选金属β-内酰胺酶表型,改良三维试验检测ESBLs和AmpC酶,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR扩增耐药菌株的KPC酶、碳青霉烯酶和ESBLs基因,并测序分析.提取外膜蛋白行SDS-PAGE.结果 PAβN抑制试验显示亚胺培南MIC值下降均≤4倍,而美罗培南MIC值下降≥4倍者占50%(4/8).EDTA协同试验结果显示阴性.改良Hodge试验检测8株耐药菌结果阳性.耐药基因PCR扩增和测序证实8株耐药菌中7株有blaOXA-23基因,5株含blaTEM-1基因,8株耐药菌均含有KPC-2酶基因;耐药菌株的外膜蛋白电泳条带在25 ku处出现明显缺失.结论 鲍曼不动杆菌对碳青霉烯耐药机制主要是产生KPC-2酶、blaOXA-23酶,外膜蛋白25 ku表达的缺失所致,外排泵过度表达可能参与美罗培南的耐药.