人天然CD4+CD25+调节性T细胞的体外扩增培养及鉴定

目的：建立有效的体外培养扩增人天然CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的体系,并检测扩 增细胞的表型及体外免疫抑制功能,为Treg应用于临床免疫治疗提供实验基础。方法：免疫磁珠分离(MACS)方法从 人外周血单个核细胞中分离CD4+CD25+Treg,加入抗CD3/CD28包被磁珠刺激扩增;用台盼蓝染色法测定新鲜分选 的和扩增的Treg的数量和活性,用流式细胞法检测新鲜的和扩增的Treg主要表型标志和纯度,用混合淋巴细胞反应 (mixed lymphocyte reaction,MLR)法检测扩增的Treg对羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)标记的自体和异体的 CD4+CD25–T细胞增殖的抑制作用。结果：扩增3周后Treg数目约为新鲜分选细胞数的2 000倍(由5.23×105±1.52×105扩增 至1.02×109±0.20×109),活性>97%。扩增3周后的Treg与新鲜分选细胞保持了相似的表型特征：CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺三阳细 胞约占(94.22±2.12)%,与新鲜分选细胞相似。扩增3周后的Treg对自体和异体的CD4+CD25–T细胞的增殖均有明显的抑 制作用,抑制率随着效靶比浓度的增高而增高(P<0.01),而且其各浓度梯度对自体和异体CD4⁺CD25^–T细胞的抑制率 无明显差异(P>0.05)。结论：创建的分离和体外扩增人CD4⁺CD25⁺Treg的方法,可以大量扩增出高纯度且保留其免疫 抑制功能的Treg,解决了Treg数目少的问题,有利于进一步的免疫研究和治疗。     

阿昔洛韦对小儿传染性单核细胞增多症CD4~+、CD8~+的影响研究

目的探讨阿昔洛韦对小儿传染性单核细胞增多症T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+影响效果。方法选取我院儿科收治的传染性单核细胞增多症患者64例,随机分为两组,其中对照组31例,予常规干扰素100万U/d,肌肉注射,1周为1个疗程,治疗2个疗程。试验组33例,予阿昔洛韦5 mg/kg静脉滴注,2次/d,7 d后改为5 mg/(kg·d),1周为1个疗程,治疗1个疗程。治疗结束后,对比两组患儿T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+水平级咽峡炎、肝功、临床体征恢复时间、血象及免疫系统水平。结果 1两组患儿咳喘、哮鸣音症状均在短时间内恢复,且试验组咳喘、哮鸣音恢复时间明显较对照组缩短,差异有统计学意义(P<0.05);2两组患儿心率及呼吸频率均不同程度增高,且试验组心率增快次数、呼吸频率增快次数较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);3两组T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+水平均不同程度改善,且试验组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+较对照组水平明显改善,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿昔洛韦能够明显改善患儿咽峡炎、肝功、脾脏肿大、淋巴结炎症等症状,明显缩短体温异常时间,降低并抑制EBM及VCA免疫抗体在机体的合成,降低异常淋巴细胞水平,调节T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+水平。     

CD4+CD25+调节性T细胞在糖尿病发病中作用的研究

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞在糖尿病发病中的作用及机制。方法:选取BALB/c小鼠,每日腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40mg/kg,连续5天,建立1型糖尿病模型;从小鼠内眦静脉采血,检测血糖;取小鼠尿液,检测尿糖;流式细胞术检测两种小鼠感染不同时间脾细胞悬液中CD4+T细胞和CD4+CD25+T细胞百分含量;ELISA法检测脾细胞培养上清IFN-γ和IL-10水平。结果:BALB/c小鼠的IFN-γ水平在注射STZ第2周和4周明显增高(P<0.05);IL-10水平在注射STZ第2周和4周明显降低(P<0.05);CD4+T细胞数量在注射STZ第2周未见明显升高,第4周水平明显升高(P<0.05);CD4+CD25+T细胞数量在注射STZ第2周和4周明显降低(P<0.05)。结论:CD4+CD25+调节性T细胞通过抑制Th1型细胞因子分泌,分泌IL-10等细胞因子,防止糖尿病的发生,维持自身耐受。     

乳腺癌患者CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的变化

目的 检测临床乳腺癌患者肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)和外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的变化,并探讨其意义.方法 分离22例乳腺癌患者PBMCs和TILs, 用流式细胞仪检测CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的比例,同时检测其Foxp3的表达;进一步用流式细胞仪检测CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞记忆分子CD45RO、CD44和CD62L的表达水平;用3H-TdR增殖实验观察CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制作用.结果 乳腺癌患者PBMCs和TILs中CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞的比例明显增加,并在肿瘤局部存在显著的富集;CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞高表达Foxp3,在体外能有效抑制CD4+CD25-T细胞的增殖,并高表达记忆分子CD45RO、CD44,低表达CD62L,显示了效应/记忆样表型.结论 CD4+CD25highCCR6+调节性T细胞在乳腺癌患者肿瘤局部有明显富集,这可能是肿瘤长期免疫逃逸的重要原因.     

CD19+ CD24high CD27+调节性B细胞在儿童传染性单核细胞增多症中的表达及意义

目的 探讨调节性B细胞（Breg）在儿童传染性单核细胞增多症（IM）中的作用。方法 应用流式细胞术检测53例IM患儿外周血T淋巴细胞亚群,CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达情况。用荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA。同时用ELISA方法分析血清IL-10、TGF-β分泌水平。以50例健康儿童为对照。结果 IM急性期组与对照组比较CD3⁺ CD4⁺ T细胞明显降低（t=19.99,P<0.01）,CD3⁺ CD8⁺ T细胞明显增高（t=17.47,P<0.01）,CD4/CD8比值降低（t=16.79,P<0.01）。IM恢复期组与急性期组比较,CD3⁺ CD4⁺ T细胞明显增高（t=21.54,P<0.01）,CD3⁺ CD8⁺ T细胞明显降低（t=17.47,P<0.01）,CD4/CD8比值增高（t=16.68,P<0.01）。IM急性期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平13.4%±1.87%,与对照组比较显著降低,差异有统计学意义（t=14.61,P<0.01）。IM急性期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平与EBV-DNA病毒载量呈负相关（r=-0.52,P<0.01）。经治疗后IM恢复期组CD19⁺ CD24^high CD27⁺ Breg细胞表达水平18.3%±2.11%与IM急性期组比较显著增高,差异有统计学意义（t=12.61,P<0.01）。IM急性期组血清IL-10较对照组明显降低,差异有统计学意义（t=11.50,P<0.01）。治疗后IM恢复期组IL-10较IM急性期组明显增高,差异有统计学意义（t=9.40,P<0.01）。结论 IM急性期存在明显免疫失衡,即CD3⁺ CD8⁺ T细胞增多,CD4/CD8比值降低,可能与Breg细胞表达减低导致的免疫抑制功能不足有关。     

传染性单核细胞增多症患儿T淋巴细胞亚群变化及临床意义

目的通过检测传染性单核细胞增多症（infectious mononuc leosis,IM）患儿治疗前后外周血T淋巴细胞亚群绝对值的变化,分析其临床意义。方法采用流式细胞术检测初诊、治疗2周和随访2个月后IM患儿外周血中CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋淋巴细胞分布情况,并分别与健康儿童相比较。结果与健康儿童比较：①IM初诊患儿CD3^＋和CD8^＋细胞显著升高（P〈0.01）,而CD4^＋细胞和CD4^＋/CD8^＋比值均显著降低（P〈0.01）;②治疗2周后,CD3^＋细胞明显降低,与健康儿童比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但CD4^＋和CD4^＋/CD8^＋仍低于健康儿童（P〈0.01）;③随访2个月后,CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋细胞及CD4^＋/CD8^＋比值与健康儿童差异无统计学意义（P〉0.05）。结论检测T淋巴细胞亚群绝对值对评估IM患儿的细胞免疫状况,辅助诊断和指导治疗具有重要的临床价值。     

慢性丙型肝炎患者外周血CD4+ CD25high调节性T细胞与抗病毒疗效的关系

目的探讨慢性丙型肝炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)与抗病毒疗效的关系。方法选取83例完成抗病毒治疗和随访的慢性丙型肝炎患者作为研究对象(慢性丙型肝炎组)。分别在治疗前和治疗12、48周及随访24周时,采用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25highTreg百分比,并进行血清丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)定量和肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)等指标的检测。设立正常对照组(n=32)。结果与正常对照组比较,治疗前慢性丙型肝炎组外周血中的CD4+CD25highTreg百分比和血清ALT、AST均显著升高(P<0.05)。在治疗12周时,32例患者获得早期病毒学应答(EVR),外周血CD4+CD25highTreg百分比和HCV-RNA定量结果与治疗前和未获得EVR患者比较,差异均有统计学意义(P<0.01),但血清ALT无明显变化。在治疗48周时,慢性丙型肝炎病毒学应答组(HCV-RNA定量结果低于最低检测限)(n=51)患者外周血中CD4+CD25highTreg百分比、HCV-RNA定量结果和血清ALT均显著低于治疗前和无病毒学应答组(n=32)(P<0.01),慢性丙型肝炎无病毒学应答组患者各项检测指标治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后随访24周时,病毒学应答组中有39例患者获得了持续病毒学应答(SVR),外周血中的CD4+CD25highTreg百分比、HCV-RNA定量及血清ALT均显著低于治疗前和未获得SVR患者(P<0.01);而未获得SVR患者的各项检测指标均较治疗结束时(48周末)明显升高(P<0.05)。结论慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗及随访过程中外周血中CD4+CD25highTreg百分比的变化对预测疗效和复发有一定的价值。     

儿童传染性单核细胞增多症T淋巴细胞亚群的变化及意义

目的通过对儿童传染性单核细胞增多症（IM）外周血T淋巴细胞亚群的检测,探讨其细胞免疫功能变化与疾病的关系。方法采用流式细胞仪对52例IM患儿外周血T淋巴细胞亚群进行检测。结果IM患儿CD3^＋,CD8^＋T淋巴细胞水平明显升高,CD4^＋T淋巴细胞和CD4^＋／CD8^＋水平明显降低,分别与正常对照组比较均有显著性差异。IM患儿急性期CD汀淋巴细胞升高水平与患儿外周血异型淋巴细胞升高的百分率呈显著正相关。IM患儿血清免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）水平与正常对照组比较无显著性差异。结论儿童传染性单核细胞增多症在急性期存在细胞免疫异常情况,EB病毒感染引起机体细胞免疫功能异常是IM发病的关键,在整个疾病过程中T淋巴细胞起着主要作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞与肿瘤的研究进展

CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)是健康个体T细胞库的组成成分之一,具有独特的生物学功能,能够分泌IL-4、IL-10,转化生长因子-β(TGF-β),表达IL-2Ra(CD25)、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)分子,对效应性T细胞具有抑制作用,是调节性T细胞的重要亚群,参与肿瘤的生长,自身免疫性疾病的发生及耐受移植排斥.现将该类细胞抑制作用机制的研究现况及其与肿瘤关系的研究进展作一综述.     

类风湿关节炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞测定及意义

目的探讨CD4+CD25high调节性T细胞(CD4+CD25highTreg)在类风湿性关节炎(RA)发病机制中的作用。方法采用流式细胞仪(FCM)检测42例RA患者及23例健康对照组外周血CD4+CD25highTreg的数量。结果 RA患者组及对照组外周血CD4+CD25highTreg的表达为(2.69±1.85)%和(3.83±0.89)%,RA患者组CD4+CD25highTreg的表达低于对照组,差异有统计学意义(<0.01)。结论 RA组患者CD4+CD25highTreg表达下降。     

小鼠乳腺癌实验动物模型中CD4+CD25+调节性T细胞的变化及意义

目的研究CD4 CD25 调节性T细胞在小鼠乳腺癌实验动物模型中的变化,并探讨其意义。方法以4T1接种BALB/c小鼠建立小鼠乳腺癌动物模型;分别以接种后1周和4周为荷瘤早、晚期;用流式细胞术(FACS)检测小鼠CD4 CD25 Foxp3 调节性T细胞在肿瘤局部及引流淋巴结中的比例变化;通过特异性增殖和杀伤实验观察早、晚期肿瘤局部的免疫应答。结果CD4 CD25 调节性T细胞在肿瘤浸润淋巴细胞中的比例晚期为7.36%±0.26%,高于早期4.47%±0.88%(P<0.05);在引流淋巴结中比例变化不大;肿瘤浸润淋巴细胞的抗原特异性增殖和杀伤能力明显减弱(P<0.05)。结论CD4 CD25 调节性T细胞在肿瘤局部存在富集,这可能是导致肿瘤局部免疫反应减弱的重要原因。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在葡萄胎恶变的作用

目的:研究在葡萄胎恶变过程中外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)所起的作用。方法:收集27例葡萄胎患者作为观察组(A组,含轻中重度各9例),以15例恶变葡萄胎患者作为阳性对照(B组,含侵袭性葡萄胎7例及绒癌8例),并以15例同龄段健康女性作为阴性对照(C组)。采用流式细胞术检测上述三组外周血Treg及其功能因子白介素(IL-10)、转化生长因子β1(TGF-β1)及叉头蛋白p3(Fox p3)的百分含量。结果:A组Treg含量(8.79±3.74)%,B组(13.28±5.43)%,C组为(4.29±1.33)%,以上三组当中任意两组间Treg含量差异均具有显著性(P=0.012)。三组间TGF-β1及Foxp3的变化趋势与Treg一致;而A组患者IL-10与C组无显著性差异,但A组患者IL-10显著低于B组(P<0.05)。轻度葡萄胎患者的Treg及TGF-β1百分含量均显著低于中度及重度组(P<0.05),且重度患者的Fox p3显著高于轻度及中度(P<0.05)。结论:CD4+CD25+调节性T细胞及其胞内因子TGF-β1及Fox p3可能参与葡萄胎恶变的发生,且与葡萄胎的严重程度相关。     

CD4+CD25+调节性T细胞在类风湿关节炎患者免疫耐受失衡中的变化

目的 检测CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ 调节性T细胞（Treg）在类风湿关节炎（RA）患者外周血和关节液中的变化,探讨该细胞亚群在RA免疫耐受失衡中的作用。方法 采用流式细胞术检测活动期RA患者关节液、外周血和健康对照外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞比例;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测外周血和关节液单个核细胞FoxP3基因的表达。分析外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞比例与病情活动指标的相关性。结果 活动期RA患者关节液CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞比例（7.56%±2.89%）高于外周血（1.84%±0.97%）和健康对照外周血（2.19%±0.54%）,差异均有统计学意义（P<0.01）;RA患者抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体（ACPA）阴性组外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg细胞水平（2.85%±0.87%）高于ACPA阳性组（1.40%±0.63%,P<0.01）。活动期RA患者关节液单个核细胞FoxP3基因表达水平高于RA患者外周血和健康对照外周血（P<0.01）;活动期RA患者外周血CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞比例与疾病活动指标无相关性（P>0. 05）。结论 RA患者关节液CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ Treg细胞的变化更能反映RA炎症部位免疫耐受失衡机制。     

脓毒症患者CD4+CD25+调节性T细胞检测的临床意义

目的 探讨脓毒症患者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平与机体细胞免疫状态的关系及其检测的临床意义.方法 将脓毒症患者40例按照疾病严重程度分为3组:脓毒症组14例,严重脓毒症组15例,脓毒症休克组11例.所有入选的40例脓毒症患者在入选当天行流式细胞术检测血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例和CD3+...     

CD4~+CD25~+调节性T细胞与肿瘤关系研究概况

<正>1995年,Sakaguchi等发现了CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tr)。近年来有关CD4+CD25+Tr细胞的研究日益广泛和深入,其在肿瘤的相关研究中也越来越受到关注,国     

乙型肝炎患者CD4~+CD25~+调节性T细胞检测及意义

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞在乙型肝炎患者发病机制中的作用。方法利用免疫荧光法检测20例携带者、10例慢性乙型肝炎5、例慢性重症乙型肝炎患者的CD4+CD25+调节性T细胞水平,分析与HBV基因型的关系。结果①重型乙型肝炎组外周血CD4+CD25+调节性T细胞的百分率为(2.52±0.94)%,较慢性乙型肝炎组的(5.25±2.17)%差异有统计学意义(P<0.05),比乙肝病毒携带者组及健康对照组则差异有统计学意义(P均<0.01);②慢性乙型肝炎组外周血CD4+CD25+调节性T细胞的百分率与无症状乙肝病毒携带者组及健康对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);③乙肝病毒携带者组外周血CD4+CD25+调节性T细胞的百分率为(8.51±2.82)%,与健康对照组的(8.51±2.82)%比较差异无统计学意义(P>0.05)。④HBV基因型C型组外周血CD4+CD25+调节性T细胞的百分率为(6.42±2.36)%,较HBV基因型B型组的(7.64±2.87)%稍为下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞能抑制T细胞对乙肝病毒的免疫反应,从而抑制乙型肝炎的发生;CD4+CD25+调节性T细胞的水平与病情轻重有一定的关系。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对哮喘大鼠免疫功能影响

目的:观察CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对CD4+CD25-T细胞增殖和Th1/Th2细胞因子分泌的影响,探讨其在哮喘气道炎症中的作用机制。方法:将哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞分别与卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞和哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞联合培养,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测量细胞增殖情况,ELISA检测细胞IL-4、IL-5和IFN-γ含量。结果:OVA耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞能抑制CD4+CD25-T细胞增殖和Th2细胞因子分泌(P<0.05);哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞可明显抑制IFN-γ的分泌(P<0.05)。结论:OVA免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞可能通过抑制哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞增殖和影响Th1/Th2平衡发挥作用,哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞存在功能异常,可能与哮喘的发病有关。     

传染性单核细胞增多症患儿淋巴细胞亚群的变化

目的 :探讨传染性单核细胞增多症 (IM)患儿急性期和恢复期淋巴细胞亚群的变化规律。方法 :采用流式细胞仪 (FCM)检测IM患儿急性组和恢复组淋巴细胞亚群 ,并和正常对照组比较。结果 :IM患儿急性组CD3+ 、CD8+ T淋巴细胞明显上升 ,CD4 + T淋巴细胞、CD4/CD8、CD19+ 淋巴细胞下降 ,与恢复组、正常对照组比较差异具有显著性 (P <0 .0 5)。恢复组与对照组比较CD8+ T淋巴细胞上升、CD4/CD8下降差异有显著性(P <0 .0 0 1)。恢复组CD3 + 、CD8+ T淋巴细胞下降 ,CD4 + T淋巴细胞、CD4/CD8,CD19+ 淋巴细胞上升与急性组比较差异具有显著性 (P <0 .0 5)。结论 :IM患儿存在细胞与体液免疫功能紊乱 ,在整个疾病过程中T淋巴细胞起着主要作用 ,对IM患儿应进行长期随访以防治恶性疾患