MiR-125b-5p抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭：基于靶向下调CD147的表达

目的 探讨miR-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子（CD147）表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法 应用荧光实时定量PCR技术（RT-qPCR）检测卵巢癌组织和癌细胞株中miR-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达miR-125b-5p的SKOV3细胞或低表达miR-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达miR-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase(http://starbase. sysu.edu.cn/)生信软件预测miR-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、miR-125b-5p mimic、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1、miR-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、miR-125b-5p mimic组、miR-125b-5p mimic组+pcD...     

LncRNA SNHG7靶向调节miR-146a-5p对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和细胞凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(lncRNASNHG7)对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制.方法:培养人正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞NCI-N87、Hs-746T、NCI-SNU-16;将si-NC、si-SNHG7分别转染至 NCI-N87细胞中,记为 si-NC 组、si...     

miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的探讨miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法荧光定量PCR检测胰腺癌组织中miR-125a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒-8检测下调miR-125a-5p水平对胰腺癌细胞生长的影响,流式细胞术检测下调miR-125a-5p表达水平对胰腺癌细胞周期和凋亡的影响,软琼脂集落形成实验评价miR-125a-5p在胰腺癌细胞恶性转化过程中的作用。结果 miR-125a-5p在胰腺癌组织的表达高于癌旁正常组织(P<0.05)。下调miR-125a-5p表达水平后,胰腺癌细胞系Panc-1和MIA Pa Ca-2的生长受到抑制(P<0.05),早期凋亡率分别增加13.6%和11.0%(P<0.05),细胞集落数目分别下降27.3%和27.8%(P<0.05),Panc-1细胞S期细胞百分比降低11.8%(P<0.05)。结论 miR-125a-5p在胰腺癌组织中高表达,下调miR-125a-5p表达水平使胰腺癌细胞生长受到抑制,集落形成能力下降,细胞周期受到阻滞,凋亡比例增加,提示miR-125a-5p在胰腺癌中发挥癌基因的作用。     

网络筛选乳腺癌相关miRNAs及miR-106a-5p对乳腺癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的 网络筛选乳腺癌关键微小RNAs(microRNAs,miRNAs),并探讨miR-106a-5p对乳腺癌细胞侵袭及迁移能力的影响.方法 通过TargetScan和miRanda等工具,构建miRNAs与靶基因以及显著靶向性功能(gene ontology,GO)的调控网络,筛选对乳腺癌有关键调控作用的miRNAs;利用miR-106a-5p agomir及miR-106a-5p antagomir转染MCF-7、T47D乳腺癌细胞株,建立乳腺癌细胞中miR-106a-5p的过表达及敲低体系,Transwell侵袭实验、Transwell迁移实验、划痕实验检测miR-106a-5p对乳腺癌细胞的侵袭、迁移能力的影响.结果 在miRNAs-gene-network和miRNAs-GO-network两个网络中调控维度最高的miRNAs基本一致,其中miR-106a-5p是调控维度最高的miRNAs之一;过表达miR-106a-5p显著抑制乳腺癌细胞的侵袭能力和迁移能力(P＜0.05),敲低miR-106a-5p则显著增加乳腺癌细胞的侵袭能力和迁移能力(P＜0.05).结论 miR-106a-5p是乳腺癌miRNAs调控网络中的关键miRNAs之一,具有抑制乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力的生物学功能.     

miR-30a-5p调控ECM-受体作用信号通路相关蛋白抑制肺腺癌细胞的侵袭和迁移

目的 探讨miR-30a-5p和细胞外基质（ECM）-受体作用信号通路相关蛋白在肺腺癌细胞进展中发挥的调控作用。方法 将miR-30a-5p模拟物及其阴性对照分别转染到肺腺癌Calu-3细胞内,设为miR-30a-5p模拟物组、模拟物对照组。通过基因集富集分析（GSEA）软件对miR-30a-5p进行通路富集分析。将miR-30a-5p抑制剂及其阴性对照转染到细胞内,设为miR-30a-5p抑制剂组、抑制剂对照组,在miR-30a-5p抑制剂组的细胞中加入ECM-受体相互作用通路蛋白抑制剂,设为miR-30a-5p抑制剂+ECM-受体相互作用抑制剂组。采用qRT-PCR法检测不同处理组细胞中miR-30a-5p mRNA表达水平,采用Western blot法检测肺腺癌细胞系中ECM-受体作用信号通路相关蛋白磷酸化水平,采用噻唑蓝（MTT）实验、细胞划痕愈合实验和Transwell实验分别检测各处理组细胞的增殖、迁移与侵袭能力。结果 与人正常支气管上皮细胞BEAS-2B比较,肺腺癌细胞系SPC-A1、Calu-3、HCC827、PC14中miR-30a-5p表达水平下调（均P<0...     

miR-30a-5p对肺癌细胞增殖与迁移的影响及其机制

研究miR-30a-5p 对非小细胞肺癌（NSCLC）增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应（real time-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别测定两组泛素蛋白连接酶（UBE3C）mRNA 和蛋白质表达水平。结果培养48 h后,miR-30a-5p 组相对活细胞百分比低于对照组[（203.7±16.8）% vs（330.4±20.7）%（p =0.000）];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比（258±30.2）%,对照组相对活细胞百分比（403.4±28.4）%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组（p =0.001）。细胞划痕实验示：miR-30a-5p组划痕愈合率为（23.2±2.7）%,对照组划痕愈合率为（89.2±4.8）%,miR-30a-5p 组划痕愈合率低于对照组（p =0.000）。real time-PCR显示,miR-30a-5p 组UBE3C mRNA 表达水平为（0.15±0.02）,对照组UBE3C mRNA 表达水平为（1.03±0.09）,miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组（p =0.000）;Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C 蛋白表达水平为（1.57±0.26）,对照组UBE3C 蛋白表达水平为（5.32±0.42）,miR-30a-5p 组UBE3C 蛋白表达水平低于对照组（p =0.000）。结论miR-30a-5p抑制NSCLC 增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关。     

lncRNA LINC00339靶向miR-520a-3p对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00339靶向调控miR-520a-3p对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响.方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测卵巢癌细胞系(SKOV3、A2780、OVCAR3、HO-8910)和正常卵巢上皮细胞系(HOSEpiC)中LINC00339和miR-520a-3p...     

下调miR-409-5p对口腔癌细胞SCC-9增殖、迁移的影响

目的探讨下调微小核糖核酸-409-5p(miR-409-5p)对人口腔癌细胞SCC-9增殖、迁移的影响。 方法收集口腔癌患者口腔癌组织及癌旁正常组织,采用qRT-PCR检测癌组织及癌旁正常组织中miR-409-5p mRNA相对表达量。qRT-PCR筛选出细胞株SCC-9细胞后,将其分为空白对照组(Lip2000处理SCC-9细胞)、阴性对照组(Lip2000＋阴性对照序列处理SCC-9细胞)、miR-409-5p组(Lip2000和inhibitor-miR-409-5p共同处理SCC-9细胞)。采用MTT法、Transwell小室法检测miR-409-5p对细胞增殖、侵袭、迁移的影响。qRT-PCR法、Western blotting法检测细胞vimentin mRNA和蛋白的相对表达量。 结果与癌旁正常组织比较,口腔癌组织中miR-409-5p显著增加(P＜0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,miR-409-5p组细胞增殖、侵袭和迁移能力均下降(P＜0.05);miR-409-5p组vimentin mRNA和蛋白相对表达量也显著降低(P＜0.05)。 结论下调miR-409-5p能够抑制SCC-9细胞的增殖、迁移,其机制可能与下调vimentin蛋白表达有关。     

miR-141-3p靶向UNC5C促进结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 本文旨在探究miR-141-3p对结直肠癌细胞的生物学功能及其影响结直肠癌发展的分子机制。方法 用生信分析法分析结肠癌组织中的差异表达基因;qRT-PCR检测细胞中miR-141-3p和UNC5CmRNA的表达;WB检测各细胞中UNC5C的蛋白表达;通过MTT实验、细胞划痕实验、Transwell实验分别检测各细胞增殖、迁移和侵袭情况。双荧光素酶实验检测miR-141-3p对UNC5C的靶向作用。结果 结肠癌细胞中miR-141-3p高表达;下调miR-141-3p抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭;UNC5C在结肠癌细胞中低表达, miR-141-3p靶向抑制UNC5C的表达;miR-141-3p通过靶向UNC5C促进结肠癌细胞的增殖, 迁移和侵袭。结论 miR-141-3p靶向抑制UNC5C的表达, 为结肠癌患者的治疗提供了新思路。     

miR-296靶向FGFR1对卵巢癌细胞生长、迁移及侵袭的影响

目的 探讨miR-296靶向成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)对卵巢癌细胞生长、迁移及侵袭的影响。方法 体外培养人SK-OV-3细胞,并将细胞分为对照组、miR-296 NC组、miR-296 mimics组、miR-296 mimics+FGFR1 NC组、miR-296 mimics+FGFR1组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-296、FGFR1 mRNA水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)法检测增殖、迁移和侵袭蛋白的表达;双荧光素酶报告实验分析miR-296与FGFR1的靶向关系。结果 与对照组比较,miR-296 mimics组miR-296表达显著升高,FGFR1 mRNA表达显著降低(P<0.05);与miR-296 mimics组比较,miR-296 mimics+FGFR1组miR-296表达差异无统计学意义(P>0.05),FGFR1 mRNA表达显著升高(P<0.05)。与对照组比较,miR-296 mimics组细胞活力、迁移和侵袭细胞数目、...     

lncRNA CASC19靶向miR-490-3p调控骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

【摘要】 目的 探讨lncRNA CASC19对骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的影响以及潜在的作用机制。 方法 实验设置si con组、si CASC19组、pcDNA组、pcDNA CASC19组、miR con组、miR 490 3p组、si CASC19+anti miR con组、si CASC19+anti miR 490 3p组;qRT PCR检测miR 490 3p和CASC19的表达水平;Western blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。 结果 骨肉瘤细胞MG63、U2 OS、OS187中miR 490 3p低表达,CASC19高表达（P＜005）;过表达miR 490 3p或干扰CASC19表达可抑制骨肉瘤细胞MG63增殖、迁移和侵袭。CASC19靶向调控miR 490 3p的表达,抑制miR 490 3p表达能逆转干扰CASC19对骨肉瘤细胞MG63增殖、迁移、侵袭的抑制作用。 结论 lncRNA CASC19可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向调控miR 490 3p有关,将可为骨肉瘤的预防和治疗提供新靶点。     

miR-125b-5p通过负调控RAB3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

目的 探讨 miR-125b-5p 调控 RAB3D 在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法 通过 qRT-PCR 检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化;通过生物信息学软件预测miR-125b-5p可能调控的靶基因为RAB3D;通过Western blot检测正常骨细胞hFOB1.19、骨肉瘤细胞系（MG63、HOS）中RAB3D的表达水平;骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低miR-125b-5p的表达,通过Western blot及qRT-PCR实验检测骨肉瘤细胞中RAB3D mRNA及蛋白表达水平;并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAB3D的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化;随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高miR-125b-5p和RAB3D的表达量,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-PCR结果表明在骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中miR-125b-5p的表达明显下调（P<0.05）。3种生物信息学软件预测RAB3D是miR-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-PCR、Western blot结果显示,miR-125b-5p 表达量升高,骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中 RAB3D 的蛋白表达量下降（P<0.05）;miR-125b-5p 表达量降低,骨肉瘤细胞（MG63、HOS）中RAB3D的蛋白表达量下降（P<0.05）,而RAB3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示,miR-125b-5p与RAB3D对细胞增殖及迁移的影响相反,而同时在骨肉瘤细胞内升高miR-125b-5p与RAB3D的表达量,RAB3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高miR-125b-5p表达量时被阻断（P<0.05）。结论 miR-125b-5p在转录后水平通过调控RAB3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。     

miR-20a-5p通过下调HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖

目的 探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法 转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549,通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平;CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;利用生物信息学分析筛选HOXB13可能结合的miRNA;通过qRT-PCR检测转染miR-20a-5p mimic与miR-20a-5p inhibitor到肺癌细胞系后miR-20a-5p的表达水平;Western blot实验检测HOXB13在肺癌细胞系中的表达情况;CCK-8及EdU实验检测miR-20a-5p肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;在A549细胞中共转染miR-20a-5p mimic及HOXB13过表达质粒,CCK-8及EdU实验检测A549细胞增殖能力。结果 HOXB13促进了A549细胞的增殖（P<0.05）;生物信息学筛选出HOXB13可能结合的miRNA为miR-20a-5p;在肺癌细胞系中过表达miR-20a-5p后,HOXB13蛋白表达量降低（P<0.05）;而干扰miR-20a-5p表达后,HOXB13蛋白的表达量升高（P<0.05）;细胞增殖实验结果显示,miR-20a-5p与HOXB13对细胞增殖的影响相反,miR-20a-5p及HOXB13同时过表达,细胞增殖情况介于单独过表达miR-20a-5p及单独过表达HOXB13组之间（P<0.05）。结论 miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549的增殖。     

miR-126调控SKOV3卵巢癌细胞周期的实验研究

目的探讨miR-126对卵巢癌细胞株的细胞周期和形态的影响,评价miR-126靶向调控卵巢癌增殖侵袭的作用。方法体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,通过慢病毒包装miR-126并转染卵巢癌SKOV3细胞系,将其分为三组：转染miR-126表达组（SKOV3/LV3-has-miR-126组）、转染阴性对照组（SKOV3/LV3NC组）和空白对照组（SKOV3组）,观察转染miR-126后细胞形态变化,并用流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期,分析转染miR-126后细胞形态与细胞周期的改变情况。结果转染miR-126后卵巢癌细胞组短梭形细胞居多,片状伪足减少,这均不有利于肿瘤细胞的迁移。同时SKOV3组、SKOV3/LV3NC组、SKOV3/LV3-has-miR-126组S期细胞平均比例分别为（53.8±4.5）%、（55.2±4.2）%和（39.7±6.6）%,而G1细胞比例则分别为（43.2±13.2）%、（42.6±13.2）%和（55.6±13.2）%,可见SKOV3组和SKOV3/LV3NC组细胞S期和G1期细胞比例相近（P〉0.05）,而与其他两组比较,SKOV3/LV3-has-miR-126组的细胞S期增殖指数较低,而停留在G1的细胞比例则较高,两期比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论经miR-126转染后SKOV3卵巢癌细胞S期合成显著抑制,而G1期细胞明显增加,细胞伪足减少,提示转染miR-126的SKOV3卵巢癌细胞其增殖和侵袭能力降低。     

RNAi沉默N-cadherin通过MEK-ERK信号通路抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移及上皮-间质转化过程

目的 探讨沉默神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)对卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移与上皮-间质转化的影响及分子机制。方法 收集2021年3月～2021年12月我院卵巢癌患者手术切除的卵巢癌组织与邻近癌旁正常组织,采用免疫组织化学染色检测N-cadherin蛋白表达。通过RNAi技术沉默卵巢癌细胞SKOV3细胞中N-cadherin的表达后分为空白对照组、空载体组、siRNA-N-cadherin组。CCK-8法、细胞克隆形成实验、流式细胞术分别检测各组细胞增殖活性、克隆形成能力以及细胞周期分布,Transwell实验和细胞划痕实验分别检测各组细胞侵袭与迁移能力,实时荧光定量PCR检测各组细胞中N-cadherin、上皮性钙粘附分子(E-cadherin)mRNA表达,免疫细胞化学染色检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin、基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)蛋白表达,Western blot检测各组细胞中MEK、ERK蛋白表达。结果 与癌旁正常组织比较,卵巢癌组织中N-cadherin呈高表达(P<0.05)。与空白对照组和空载体组比较,沉...     

Circ_DOCK1调节miR-122-5p/PPIB轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨环状核糖核苷酸_胞质分裂作用因子1（Circ_DOCK1）通过调节微小核糖核苷酸-122-5p（miR-122-5p）/肽酰脯氨基顺反异构酶B（PPIB）轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR检测结直肠癌患者癌组织与癌旁组织中的circ_DOCK1、miR-122-5p、PPIB表达水平。取人结直肠细胞SW480,脂质体转染法转染circ_DOCK1干扰质粒（sh-circ_DOCK1）、miR-122-5p抑制物（anti-miR-122-5p）和模拟物（miR-122-5p mimics）,以CCK-8法、划痕试验和Transwell实验检测结直肠癌细胞的增殖、迁移和凋亡情况。以生物信息学和荧光素酶报告基因实验分析circ_DOCK1与miR-122-5p的靶向关系。结果 结直肠癌组织的circ_DOCK1、PPIB mRNA表达水平高于癌旁组织,miR-122-5p表达水平低于癌旁组织。与挽救组和NC-circ_DOCK1组比较,sh-circ_DOCK1组的circ_DOCK1和PPIB mRNA表达量下降,miR-122-5p表达量升高,且细胞转染48 h和72 h的A值及细胞迁移率和穿膜细胞数均降低（P＜0.05）;挽救组和NC-circ_DOCK1组的数据比较差异无统计学意义（P＞0.05）。生物信息学软件预测circ_DOCK1含有与miR-122-5p互补的核苷酸序列。转染miR-122-5p mimics后,circ_DOCK1的野生型荧光素酶报告质粒相对活性降低,转染anti-miR-122-5p后,circ_DOCK1的野生型荧光素酶报告质粒相对转录活性增加（P＜0.05）,circ_DOCK1突变型荧光素酶报告质粒相对活性值变化无统计学意义（P＞0.05）。结论 circ_DOCK1在结肠癌组织中的表达上调,且能通过调节miR-122-5p/PPIB轴影响结直肠癌的增殖、迁移和侵袭,可考虑经circ_DOCK1作为结直肠癌的分子靶向治疗研究方向。     

miR-203靶向Survivin抑制卵巢癌细胞增殖、迁移与侵袭

目的 探讨miR-203靶向抑制Survivin对卵巢癌SKOV3及OVCAR3细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法 构建过表达miR-203、Survivin及空白对照组的慢病毒载体,转染卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,嘌呤霉素筛选后构建空白对照组、过表达miR-203组、过表达Survivin组及过表达miR-203联合Survivin组卵巢癌细胞系。Western blotting方法测定各组卵巢癌细胞中Survivin及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;MTT和平板克隆实验检测卵巢癌细胞增殖能力的改变;Transwell实验检测对细胞迁移和侵袭能力的影响。 结果 (1) 过表达miR-203抑制Survivin的表达及EMT(P<0.05);(2) MTT、平板克隆实验及transwell实验显示,与空白对照组相比,过表达miR-203组能够抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);而过表达Survivin逆转了miR-203对卵巢癌的抑制作用(P<0.05)。 结论 miR-203通过靶向Survivin抑制EMT从而抑制卵巢癌的增殖、迁移及侵袭,miR-203/Survivin/EMT轴有望成为卵巢癌治疗的新靶点。