复合杂合突变导致的遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系分析

目的:对1个遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系进行临床表型及基因突变分析,探讨其分子致病机制.方法:检测先证者及其家系成员(共3代5人)血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原含量(FIB)、D-D二聚体(D-D)、凝血因子Ⅻ促凝活性(FⅫ:C)和凝血因子Ⅻ抗原(FⅫ∶Ag)等凝血指标.采...     

凝血因子Ⅻ缺乏症一例

凝血因子Ⅻ缺乏症属少见疾病，1955年首先由国外报道。最近我们发现一例先天性因子Ⅻ缺乏症患者。     

一个遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系凝血因子Ⅻ基因分析

目的 对一个遗传性FⅫ缺陷症家系进行 FⅫ基因突变检测,探讨其参与的分子发病机制.方法 通过活化aPTT、FⅫ:C和FⅫ:Ag等测定进行表型诊断;用PCR技术对先证者及其家系成员FⅫ基因的14个外显子及其侧翼序列进行扩增,PCR产物纯化后,由DNA测序仪进行测序,发现突变位点则反向测序以证实.选择100名健康体检者作对照.结果 先证者及胞弟aPTT明显延长,分别为aPTT79.1s/35 s、aPTT 84.6 s/35 s,大儿子aPTT稍高,为42.1 s/35 s,家系其他成员aPTT正常范围.先证者及胞弟FⅫ:C极度降低,分别为2%、3%,其FⅫ:Ag水平均<1%;胞兄、大儿子和小儿子FⅫ:C明显下降,分别为39%、29%、34%,FⅫ:Ag水平分别为32%、30%、37%.先证者及胞弟FⅫ 1号外显子启动子区46位表现为46T/T型;5号外显子发现5741delc,5742delA,读码框移位,导致Set400Pro;10号外显子发现7142insertC,使得Lys346Gln终止密码子提前出现,产生截短蛋白.此外,家系其他成员:胞兄、大儿子及小儿子发现46T/T和7142insertC;小孙女发现46T/T;侄女、大孙女、二孙女发现46C/T.结论 在该遗传性FⅫ缺陷症家系发现常见的46C/T多态性及exon5区5741delC,5742delA与exon10区7142insertC.5741delC,5742delA及7142insertC与FⅫ水平的降低有关.     

凝血因子Ⅻ缺乏症一例

患者 ,女 ,2 7岁 ,孕 38周 ,入住产科。否认有皮肤、黏膜出血史。无家族性遗传病史。入院查体 :神清 ,皮肤、黏膜无出血 ,无黄染。浅表淋巴结未触及 ,心、肺、肝、脾未见异常。产科检查 :宫高 33cm ,腹围 96cm ,胎位LSA ,胎心 :14 2次 min ,无宫缩。产前常规检查血浆活化的部分凝血活酶时间(APTT) 30 0s(正常对照值 35 .5s,参考值 31.5～ 4 1.5s) ;血浆凝血酶原时间 (PT) 11.2s(正常对照 12 .0s ,参考值 11～ 15s) ;凝血酶时间 (TT) 2 2 .1s(正常对照值 16 .0s,参考值 14～2 1s) ;血浆纤维蛋白原 (Fg) 5 .98g L(参考值 2 .0～ 4 .0g L…     

Lman1基因复合杂合突变导致的凝血因子Ⅴ、Ⅷ联合缺乏症

凝血因子Ⅴ和Ⅷ(FⅤ、FⅧ)联合缺乏症(F5F8D)是一种罕见的常染色体隐性遗传性出血性疾病。近年的研究发现,该病病因在于基因lman1或mcfd2的突变。本研究的目的是对1名F5F8D先证者及其家系成员的lman1、mcfd2基因进行扩增、测序,以查找潜在的致病突变。采集了先证者及其父母的外周血样本,进行了凝血功能相关检查,包括活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、血浆纤维蛋白原(Fg)、FⅤ促凝活性(FⅤ∶C)、FⅧ促凝活性(FⅧ∶C),并提取基因组DNA,通过PCR法对先证者lman1基因的13个外显子及侧翼序列、mcfd2基因的4个外显子及侧翼序列进行特异性扩增,产物经纯化后直接测序,以检测致病突变。根据先证者突变所在位点,选择性扩增其父、母的相应片段,纯化、测序,以便进行家系分析。结果表明:先证者APTT82.2秒、PT19.6秒、TT18.6秒,Fg2.9 g/l,FⅤ∶C 7.1%,FⅧ∶C 18.7%。先证者及其母亲lman1基因第8外显子区出现杂合性单碱基插入c.912_913insA,导致蛋白序列改变p.Glu305fsX20;先证者及其父亲lman1基因11外显子区出现杂合性无义突变c.1366CT,导致p.Arg456X。结论:先证者lman1基因的复合杂合突变c.912_913insA、c.1366CT是导致其发病的原因;前者继承自其母,后者继承自其父。这种复合杂合突变的组合方式尚未见有报道。     

1例凝血因子Ⅻ缺乏症个案分析并文献复习

正凝血因子Ⅻ缺乏症是由自身凝血因子Ⅻ基因异常或其他基础疾病继发引起的凝血因子Ⅻ活性下降而导致的一种凝血因子缺乏症。患者常无出血等临床表现,但有血栓形成倾向,多在外科手术前筛查凝血功能时发现活化部分凝血活酶时间(APTT)延长~([1-2])。2018年10月,宁夏回族自治区人民医院收治1例因凝血功能异常而最终诊断为凝血因子Ⅻ缺乏症的产妇,现将病例报道如下。     

两个遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系FⅫ基因突变分析

目的:检测两个中国汉族人遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系中的FⅫ基因突变。方法:检测先证者及家系成员血浆FⅫ∶C,并以其外周血单个核细胞中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增FⅫ基因的所有外显子及其侧翼序列,用DNA测序仪检测FⅫ的基因突变。结果:在两个家系中共发现3种杂合型基因突变,即Gly526Asp、7142insertC和Gly542Ser。结论:上述3种FⅫ基因突变是导致中国人遗传性FⅫ缺陷的分子发病机制之一,且均为国际首次发现。     

四个遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系基因分析

目的 探讨4个遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症家系基因突变及分子发病机制.方法 检测凝血酶原时间(PT)、APTT、FⅫ促凝活性(FⅫ∶C)和FⅫ抗原(FⅫ∶ Ag)等凝血指标;PCR扩增FⅫ基因的全部外显子及侧翼序列,PCR产物纯化后测序;在野生型pIRES2-EGFP FⅫ表达质粒上构建突变体FⅫ表达质粒,瞬时转染COS7细胞,测定细胞裂解液和培养上清中FⅫ∶Ag水平和FⅫ∶C.结果 4例先证者APPT均明显延长,FⅫ∶C均＜2％,FⅫ∶Ag亦同步下降至1％.4个家系均检出常见的FⅫ46C/T多态性.家系A先证者检出5741-5742delCA(His101Gln)及7142insertC(Lys346Gln)双重杂合突变;家系B先证者检出6800-6808de19bp杂合缺失突变.FⅫ6800-6808de19bp瞬时转染结果显示,在细胞裂解液中突变体FⅫ∶Ag为野生型的85.6％;在细胞培养上清中突变体FⅫ∶Ag为野生型的51.9％,FⅫ∶C为野生型的56.4％;家系C先证者检出8699G＞ A(Gly542Ser)杂合突变;家系D先证者检出8699G＞A(Gly542Ser)纯合突变(其父母为近亲结婚).结论 4个遗传性FⅫ缺陷症家系除有46C/T多态性外,共发现g.5741-5742delCA、g.7142insertC、g.6800-6808de19bp、g.8699G＞A 4种基因突变.其中g.5741-5742delCA和g.6800-6808de19bp为两种新的突变.FⅫ6800-6808de19bp体外表达显示,FⅫ6800-6808de19bp突变蛋白合成基本正常,但存在蛋白分泌障碍.     

脑血栓患者凝血因子Ⅻ对纤溶活性影响的初步研究

目的：研究脑血栓和（或）脑腔隙性梗死（脑腔梗）患中凝血子因子Ⅻ（ＦⅫ）对纤溶的影响。方法用ＥＬＩＳＡ方法检测脑血栓患血浆ＦⅫ：Ａｇ、ＦⅫα、βＦⅫａ水平,ＦⅫ：Ｃ和其他纤溶性性;利用ＭＯＦＡ技术筛选是否存在已知常见的ＦⅫ基因点突变。结果１０７例脑血栓患中,有２２例呈ＦⅫ：Ｃ下降,类似ＦⅫＣＲＭ＾＋表现,ＰＬＧ：Ａ、α２ＡＰ：升高和Ｄ－二聚体（Ｄ－Ｄ）水平降低的同时,ＦⅫａ和βＦⅫ：Ｃ下降,类     

凝血因子Ⅻ的研究进展

Ratnoff等于20世纪50年代发现了Hageman因子,后将其正式命名为因子Ⅻ(factorⅫ,FⅫ)。然而,FⅫ缺乏(缺陷)的患者并不存在出血倾向,后来先证者John Hageman死于肺梗死。     

7例凝血因子Ⅻ缺乏症患者临床报道和文献复习

目的 回顾性分析2016年2月～2020年1月就诊于本院的凝血因子Ⅻ缺乏症7例病例患者临床表现、实验室特征,以提高对此类疾病诊治方法的认识.方法 对7例病例凝血因子Ⅻ缺乏患者的临床资料进行分析,并复习相关文献.结果 7例患者均以APTT明显延长为主要表现,无出血、血栓表现,有1例有阳性家族史,有1例为肿瘤继发的获得性凝...     

2例遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症分子发病机制研究

目的探讨遗传性凝血因子Ⅻ(FⅫ)缺陷症的分子发病机制。方法对2例遗传性FⅫ家系作临床表型检测及基因诊断:采用凝固法及ELISA法分别检测先证者及其家系成员血浆FⅫ促凝活性(FⅫ∶C)和抗原含量(FⅫ∶Ag);直接测序法作基因序列分析,针对先证者的突变位点,检测其家系成员相应的基因突变;采用凝血酶生成试验,检测患者凝血功能的变化;在野生型pIRES2-EGFP/FⅫ表达质粒基础上,定点突变法构建突变型FⅫ表达质粒,以Polyfect转染试剂介导瞬时转染293T细胞,分别测定细胞裂解液及培养上清液中FⅫ∶Ag,测定上清液中FⅫ∶C。结果 2个遗传性FⅫ缺陷症家系的先证者的FⅫ:C分别为4.68%和12.08%,FⅫ∶Ag分别为4.6%和2.2%;先证者1的F12基因第13、14号外显子分别发现了(G8489A、Glu502Lys)和(C8833A、Tyr586Stop)2种复合杂合突变;先证者2的F12的第13号外显子发现(G8489A;Glu502Lys)纯合突变,其家系部分成员检测到相应的杂合突变。2名遗传性FⅫ缺陷症患者的凝血酶生成潜力与正常人比较无明显差异。瞬时转染结果显示,FⅫ突变蛋白E502K上清液中FⅫ∶C和FⅫ∶Ag分别为野生型的27.2%和14.4%;细胞裂解液中FⅫ∶Ag为野生型的36.7%。结论体外表达的实验进一步证实了突变蛋白E502K合成和分泌障碍导致FⅫ明显降低。先证者1由罹病F12基因(Glu502Lys;Tyr586Stop)双杂合突变所致;先证者2为G8489A纯合突变(Glu502Lys)所致遗传性FⅫ缺陷症;E502K和Y586Stop 2种突变均为国际首次报道。     

一个遗传性凝血因子ⅩⅢ缺陷症家系新的基因异常

目的对1例遗传性凝血因子Ⅻ（FⅫ）缺陷症家系进行基因分析，探讨其发病的分子机制。方法用尿素溶解法和Berichrom kit检测患者及其家系成员血浆FⅫ的活性．用火箭电泳和酶联免疫吸附试验测定FⅫ抗原含量。PCR法扩增FⅫA基因的所有外显子和侧翼序列．DNA测序分析基因异常，用直接测序法和限制性内切酶（SfaNⅠ、NspⅠ）分析80名正常人相应序列的PCR产物以排除基因多态性。应用生物信息学软件对所鉴定的突变进行分子模建，探讨其致病的分子机制。结果患者纤维蛋白凝块在5mol／L尿素中30min内完全溶解，加入正常人血浆后则24h不溶解，患者血浆FⅫ活性为0，FⅫA抗原含量〈2％，FⅫB抗原含量在正常范围。家系成员中其父母和外祖母血浆FⅫ活性和FⅫA抗原约为正常人一半。在患者FⅫA基因外显子15中发现两处杂合异常，分别位于177246位碱基（C→T，导：致Arg703→Trp）和177286位碱摹（A→G，导致His716→Arg），直接测序和酶切分析两种方法均排除了基因多态性。患者的母亲与外祖母为Arg703→Trp杂合子，患者的父亲为His716→Arg杂合子．分子模建分析表明，Arg703和His716两个位点突变后均可导致barrel2与core结构域之间距离和结合能力的政变，使蛋白质发生错误折叠，稳定性降低。His716→Arg还可能影响酶的催化活性基因的空间结构形成。结论FⅫA基因外显子15上Arg703→Trp、His716→Arg复合杂合突变影响了蛋白质的正确折叠和稳定性，造成患者FⅫ抗原和活性的缺失。此复合杂合错义突变是一种未报道过的新的突变类型。     

人类凝血因子Ⅻ基因一种新突变的发现与确证

目的 对一例凝血因子Ⅻ缺陷症患者进行凝血因子Ⅻ（Factor Ⅻ,F Ⅻ）基因序列分析,以发现可能存在的基因变异.方法 PCR结合直接测序方法对该患者F Ⅻ基因全部14个外显子及其侧翼序列进行分析,应用PCR产物反向测序法或等位基因特异PCR技术对突变位点进行确证,随机选择100名体检健康人作为正常对照.结果 该患者F Ⅻ基因第14外显子存在G1706A错义突变,5′非翻译区的46位核苷酸为TT纯合子;等位基因特异PCR证实在100名体检健康人中未发现F Ⅻ G1706A突变.结论 F Ⅻ基因的G1706A错义突变及5′非翻译区的46TT多态性可能与本例患者F Ⅻ缺陷有关.     

1例遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系基因突变分析

目的对1例姑表近亲结婚的遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症家系进行实验室表型诊断和基因突变检测,以期寻找致病基因并初步探讨其分子发病机制。方法检测先证者及其相关家系成员(共3代8人)的血浆凝血酶原时间(PT)、FⅦ活性(FⅦ:C)、FⅦ抗原(FⅦ:Ag)等指标。采用DNA直接测序法对先证者F7基因9个外显子及其侧翼序列、5'和3'非翻译区进行片段扩增测序,发现突变位点后用反向测序予以证实,并检测家系成员相应的突变位点区域。采用ClustalW软件分析氨基酸序列保守性,用PROVEAN、Pyolphen和Mutation Taster等在线生物信息学软件预测突变位点对蛋白质功能可能存在的潜在影响。利用Swiss-pdb Viewer软件分析FⅦ蛋白模型野生型和突变型局部空间构型及分子间作用力的变化。结果先证者PT为31.2 s,明显延长;FⅦ:C和FⅦ:Ag分别为4%和6%,较健康人对照降低;先证者母亲、父亲、大姐、二姐和哥哥PT值均稍延长,FⅦ:C和FⅦ:Ag均下降至健康人对照的一半左右。基因检测结果显示先证者F7基因第8外显子存在c.1224 T>G纯合错义突变导致p.His348Gln,其母亲、父亲、大姐、二姐和哥哥均存在c.1224 T>G杂合错义突变。His348位点在同源物种中高度保守;生物信息学软件预测显示该突变位点会影响蛋白质功能;蛋白质模型分析显示,该突变位点可导致His348和Thr359以及Gly360之间形成的氢键数目减少,可影响蛋白质结构的稳定性。结论先证者的F7基因存在c.1224 T>G纯合错义突变导致p.His348Gln,该突变位点分别来自其近亲婚配的父母,并与其FⅦ水平降低有关。     

1例凝血因子Ⅺ缺乏症的基因突变研究

目的研究1例凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺乏症患者的基因突变,揭示其分子发病机制。方法应用凝固时间法测定患者血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原含量(Fbg)、凝血因子Ⅷ促凝活性(FⅧ∶C)、凝血因子Ⅸ促凝活性(FⅨ∶C)、FⅪ促凝活性(FⅪ∶C)及凝血因子Ⅻ促凝活性(FⅫ∶C);采用聚合酶链式反应(PCR)扩增产物直接测序的方法对患者FⅪ基因进行直接检测,鉴别其中可能存在的基因变异。结果患者血浆中APTT、PT、TT、Fbg含量、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅪ∶C及FⅫ:C分别为64.2s、12.8s、17.9s、3.8g/L、87.4%、71.2%、16.6%及80.2%,其FⅪ基因第13号外显子编码482位氨基酸的碱基发生杂合性的错义突变TGC→TGG(Cys482Trp)。结论 Cys482Trp的杂合突变可能是导致患者FⅪ缺乏的分子发病机制。     

一个复合杂合突变导致的遗传性凝血因子V缺陷症家系

目的:探讨一个遗传性凝血因子Ⅴ（FⅤ）缺陷症家系的分子致病机制。方法:DNA直接测序法分析先证者F5的全部外显子、侧翼序列、5′和3′端非翻译区及家系成员（共3代11人）相应的突变位点区域。通过CAT法检测凝血酶生成量;用ClustalX软件分析突变位点的保守性;用MutationTaster、PolyPhen-2、P...     

头孢哌酮致成人获得性维生素K依赖性凝血因子缺乏症1例

维生素K（Vit K）依赖性凝血因子缺乏属于获得性凝血因子异常。临床常见病因：①摄入减少;②吸收不良综合征;③胆道阻塞;④合成障碍;⑤口服抗凝剂及大量抗生素;⑥蛋白质丧失综合征。由于静脉输注头孢眼酮而引起成人获得性VitK依赖性凝血因子缺乏症,临床较为罕见,现报道1例。