4种不同核酸提取试剂在自建新型冠状病毒核酸检测系统中性能比较

目的 比较不同品牌核酸提取试剂盒在自建新型冠状病毒核酸检测中的性能差异,为临床实验室自建新型冠状病毒核酸检测系统提供参考依据。方法 将第3方新型冠状病毒核酸检测质控品稀释成4种浓度,采用上海之江生物科技股份有限公司(A)、重庆中元生物技术有限公司(B)、广州和信生物科技有限公司(C)及杭州博日科技有限公司(D)4个不同厂家核酸提取试剂组成的4种自建检测系统进行检测,比较其阳性检出率及批内重复性。结果 在不同浓度样本中,D品牌提取试剂盒提取的样本结果阳性率最高,靶基因检出率最高;B品牌扩增结果的Ct值最小,提取产物浓度最高。结论 不同品牌核酸提取试剂的提取性能在自建检测系统中存在一定差异,实验室在自建核酸检测系统时,选择核酸提取试剂盒时应进行充分验证,以保证检测结果的准确性。     

5种新型冠状病毒核酸检测试剂应用于DXcellenceTM全自动核酸检测分析系统的性能评估

目的 探讨5种新型冠状病毒核酸检测试剂与DXcellence^TM全自动核酸检测分析系统的适配性，为临床实验室选择新型冠状病毒核酸检测方法和仪器提供参考依据。方法 参考《病原体核酸即时检测质量管理要求专家共识》对定性项目的性能验证要求，在DXcellence^TM全自动核酸检测分析系统上，搭配艾科诺公司(简称Accunome)的核酸提取纯化试剂盒，评价5种新型冠状病毒核酸检测试剂(杭州金迪安、武汉明德、江苏硕世、北京金豪和上海思路迪，简写为JDA、MD、SS、JH、SLD)的性能。结果 5种新型冠状病毒核酸检测试剂均可配合Accunome公司的核酸提取纯化试剂盒，在DXcellence^TM全自动核酸检测分析系统上实现样本进、结果出的检测。5种试剂检测时间为：单个样本54～94 min, 12个样本65～105 min。JDA、MD、JH试剂对新型冠状病毒开放阅读框1ab基因(ORF1ab基因)329～450 copies/mL的检出率均为100%,在核衣壳蛋白基因(N基因)260 copies/mL的检出率均为100%;SS...     

5种新型冠状病毒核酸检测试剂应用于DXcellence™全自动核酸检测分析系统的性能评估

摘要:目的探讨5种新型冠状病毒核酸检测试剂与DXcellenceM全自动核酸检测分析系统的适配性,为临床实验室选择新型冠状病毒核酸检测方法和仪器提供参考依据。方法参考《病原体核 酸即时检测质量管理要求专家共识》对定性项目的性 能验证要求，在DXcellenceT全自动核酸检测分析系统上,搭配艾科诺公司(简称Accunome)的核酸提取纯化试剂盒,评价5种新型冠状病毒核酸检测试剂(杭州金迪安、武汉明德、江苏硕世、北京金豪和上海思路迪，简写为JDA、MD、SS.JH、SLD)的性 能。结果5种新型冠状病毒核酸检测试剂均可配合Accunome公司的核酸提取纯化试剂盒,在DXcellenceTM全自动核酸检测分析系统.上实现样本进、结果出的检测。5种试剂检测时间为:单个样本54~94 min,12个样本65~ 105 min。JDA、MD .JH试 剂对新型冠状病毒开放阅读框lab 基因( ORF1ab基因)329~ 450 copies/mL的检出率均为100%,在核衣壳蛋白基因(N基因)260 copies/mL的检出率均为100% ;Ss试剂对ORF1ab基因256~ 350 copies/mL、N基因203 copies/mL 的检出率为100% ;SLD试剂对ORF1ab基因146~ 200 copies/mL、N基因116 copies/mL的检出率为100%。5种核酸检测试剂在稀释标准品浓度约1200 copies/mL进行精密度测试,其ORF1ab基因和N基因循环阈值(Ct)的变异系数(CV)分别为JDA 1.13%和1.97%, MD 0.96%和1.01%,JH 1.55%和1.29%,ss 1.01%和1.96% ,SLD 1.12%和2.00%。5种试剂在DXcellenceTM 系统上检测的10 例阳性样本均为阳性,10例阴性样本均为阴性。结论5种新型冠状病毒核酸检测试剂配合Accunome公司的核酸提取纯化试剂 与DXcellenceTM系统适配,检测时间短、结果准确。实验室可以根据需要选取合适的检测试剂用于DXcellenceT"全自动核酸检测分析系统。     

不同检测系统对新型冠状病毒核酸的检测结果分析

摘要：目的?评价不同检测系统对新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸的检测能力差异，为选择2019-nCoV核酸检测试剂提供指导。方法?用本实验室在用的提取试剂、扩增试剂及扩增仪组合成8个检测系统，分别对国家卫生健康委临床检验中心2019-nCoV室间质评发放的12个样本进行检测。结果?纳入统计指标的10个样本中，有5个2019-nCoV阴性样本，8个检测系统对5份阴性样本均为未检出，与预期结果相符，另5份2019-nCoV阳性样本中，8个检测系统均未检出202010(128 copies/mL)，均检测出202004、202008、202011。对202002(640 copies/mL)弱阳性样本，只有B及D 2个检测系统检出，其余均未检出。B及D检测系统扩增试剂均为e扩增试剂，检测的符合率总体优于f扩增试剂。N区的阳性率高于ORF区，样本2019-nCoV拷贝数越低，这一现象越显著。A-D检测系统检测到的ORF1ab基因的阳性率高于E-H检测系统，A-D检测系统均使用的是b快速提取试剂，而E-H检测系统使用的是a提取试剂，提取试剂的提取效率对检测结果影响较大。结论?在关注扩增试剂检测性能的前提下，也要关注核酸提取试剂的提取效率，尽量选择配套试剂。如选择非配套试剂，要做好试剂比对，确保检测结果的准确性及一致性。此外，还要重视人员培训，提高检测人员操作技能。     

室间质评样本混样核酸检测模式的探讨

目的 探索血站病毒核酸检测质评样本混样核酸(MP-NAT)检测的最佳工作模式.方法 应用罗氏COBASs201核酸检测系统及配套的TaqScreen MPX试剂,采用6混样核酸检测(MP-6-NAT).将质评样本采用2种混样模式进行平行检测,模式1:质评样本与常规待检献血者标本混样(pool),混样无反应性报告阴性,反应性pool进行拆分检测(单样本检测);模式2:质评样本与已知NAT阴性献血者标本混样,混样无反应性报告阴性,反应性pool只对质评样本进行单样本检测.比较2种混样检测模式检测结果的一致性,血液放行时间,试剂消耗量.结果 核酸检测室间质评次数为12次,检测标本120份,共检出84份阳性标本,36份阴性标本,得分100分,2种混样模式的检测结果一致.模式1的血液放行时间比第2种大约延长5h.模式1的试剂消耗量为3 744个测试,模式2的试剂消耗量为1 824个测试.结论 室间质评样本与已知NAT阴性标本混样检测的工作模式,符合质评样本按常规标本对待的原则,节约试剂成本,加快血液放行速度.     

核酸检测在血站血液筛查中的初步应用及特点

目的对酶联免疫检测阴性的样本进行核酸检测,探讨其应用特点。方法将酶联免疫检测阴性的样本按不同试剂厂家的要求进行汇集并进行核酸筛查,不同时段应用不同的核酸检测试剂,并参加卫生部临检中心和澳大利亚国家实验室的核酸检测室间质评。结果在筛查的55 543人份样本中,检出HBsAg阴性而核酸HBVDNA阳性的样本2份,未检出丙型肝炎病毒抗体和艾滋病毒抗体阴性而其相应核酸阳性的样本。卫生部临检中心室间质评结果与预期结果完全相符,国际室间质评结果HIV-1RNA完全相符,HBVDNA和HCVRNA分别有1个和2个未检出。结论我国目前核酸检测试剂的灵敏度还有待进一步提高,核酸检测还需进一步扩大检测规模。核酸检测在血站和医院应用的不同。     

不同核酸提取方法SARS-CoV-2核酸检测性能比较

目的比较磁珠吸附法和样本释放剂法对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测结果的符合率、重复性及检出限,优选出提取效率高、耗时短、成本低的核酸提取方法。方法采用2种核酸提取方法的3种商品化核酸提取试剂,分别对阴性样本、阳性样本及不同浓度(稀释度20～28)的SARSCoV-2 RNA标准品进行RNA提取及实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测,以Ct值评价不同核酸提取方法的性能。结果 3种核酸提取试剂的阴性和阳性样本结果符合率均为100%。使用磁珠吸附法进行核酸提取的变异系数(CV)(CV为0.89%～1.58%)低于样本释放剂法,样本释放剂B的CV(CV为0.83%～2.73%)次之,样本释放剂A的CV最大(CV为1.62%～4.90%)。磁珠吸附法及样本释放剂B提取核酸的检出限均为156.3拷贝/mL,样本释放剂A的检出限为625.0拷贝/mL。结论磁珠吸附法核酸提取试剂核酸提取效率高、重复性好,适合大批量样本的集中操作。     

新型冠状病毒核酸提取方法的性能评价及临床应用

目的评价3种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸提取方法的分析性能及临床应用价值。方法采用目前临床常用的裂解法、柱提法和磁珠法提取SARS-CoV-2核酸,通过实时荧光反转录聚合酶链反应及自建检测系统检测SARS-CoV-2核酸[开放阅读框(ORF)1ab、核衣壳蛋白(N)],评价3种核酸提取方法下的检测精密度、正确度、最低检测限等性能指标。将3种核酸提取方法应用于17份新型冠状病毒肺炎(COVID-19)确诊病例标本的检测,分析其临床应用价值。结果3种核酸提取方法下检测结果的重复性精密度和中间精密度、正确度均通过验证,可满足临床需求。采用裂解法、柱提法、磁珠法提取核酸时的最低检测限(Ct值)分别是37.42、37.87、39.61,均符合厂家声明的最低检测限。在应用于临床标本检测时,3种核酸提取方法下的检测结果两两之间均呈良好的线性关系(P<0.05),其中,采用柱提法和磁珠法提取核酸时的检测结果相关性最好(r=0.905,P<0.001)。3种核酸提取方法下的靶标(ORF1ab+/N-、ORF1ab-/N+、ORF1ab+/N+)检出率比较,差异无统计学差异(P>0.05)。结论裂解法、柱提法和磁珠法提取SARS-CoV-2核酸在自建检测系统中的分析性能可接受,均可满足临床对SARS-CoV-2的检测需求。     

新型冠状病毒核酸混采对检测结果的影响

目的:评估新型冠状病毒（2019-nCoV）样本混采对提取、扩增步骤的影响。方法:取10只阴性咽拭子储存在6 ml病毒保存液中,充分混匀后1∶2、1∶10稀释,加入灭活2019-nCoV病毒培养液,以模拟10混1、5混1和单人份检测。使用a、b、c 3种提取方式和体系不同的核酸提取试剂及A~E 5种模板上样量和检测灵敏...     

核酸提取仪在肝炎病毒核酸定量检测中的应用研究

目的 比较核酸提取仪和手工法核酸提取对荧光定量PCR准确定量的影响.方法 血清样本分别用NP968核酸提取仪和手工法提取DNA和RNA,提取产物作为模板,用ABI 7500进行荧光定量PCR分别检测HBV和HCV,对比CT值,比较两种核酸提取方法的效率.结果 核酸提取仪提取的核酸PCR扩增的CT值明显低于手工法的CT值,处理大批量样本的时间也明显短于手工法.结论 核酸提取仪具有速度快、提取效率高的优点,值得在临床实验室推广应用.     

2种国产新型冠状病毒核酸检测试剂检测结果的比较与分析

目的对不同的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂的检测结果进行比较和分析,以供实验室参考。方法收集本院2月9日至2月11日期间共101例检测SARS-CoV-2核酸的临床样本,用两种国产试剂盒进行平行检测,根据检测结果比较试剂盒差异。结果 101例样本中试剂A阳性32例(阳性率31.68%),阴性56例(阴性率55.45%),试剂B阳性35例(阳性率34.65%),阴性53例(阴性率52.48%),两组对比,差异无统计学意义(c2=0.2169,P=0.8972)。试剂单通道结果统计发现两种试剂盒N检测位点检出率较ORF1a/b检测位点检出率高,其中试剂A两个通道的检出率分别为ORF1a/b:31.68%,N:44.55%;试剂B为ORF1a/b:35.64%,N:40.59%且14例确诊患者检测结果显示两种试剂盒对于N位点检出的Ct值非常接近。结论本研究中两种SARS-CoV-2核酸检测试剂的检出率无明显差异,两种试剂盒的N位点检出率都较ORF1a/b高,且两种试剂盒对于N基因检测结果相似。     

不同标本前处理方法对新型冠状病毒核酸检测结果的影响

目的分析不同标本前处理方法对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测结果的影响。方法选取该院SARS-CoV-2核酸检测结果为阳性的18份未灭活咽拭子标本为研究对象。分别采用56℃金属浴30 min、56℃金属浴60 min、56℃水浴30 min、56℃水浴60 min、化学裂解15 min、化学裂解30 min 6种方法进行标本前处理,分析各方法处理后的检测结果。结果经56℃水浴30 min、56℃水浴60 min处理后,开放读码框1ab(ORF1ab)基因检出率分别为94.44%、100.00%,核衣壳蛋白(N)基因检出率均为100.00%,假阴性率均为0.00%。经56℃金属浴30 min、56℃金属浴60 min处理后,ORF1ab基因检出率分别为83.33%、77.78%,N基因检出率分别为88.89%、77.78%,假阴性率均为5.56%。经化学裂解15 min、化学裂解30 min处理后,ORF1ab基因检出率分别为77.78%、50.00%,N基因检出率分别为77.78%、61.11%,假阴性率分别为11.11%、38.89%。结论SARS-CoV-2核酸检测标本前处理方法应首选56℃水浴60 min和56℃水浴30 min,而化学裂解法对标本核酸检测结果影响最大,不建议在日常实验中使用。     

某国产人类免疫缺陷病毒1型核酸定量检测试剂的临床试验研究

目的 评价某国产人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核酸定量检测试剂(考核试剂)和对比试剂的相关性及一致性.方法 采用国产HIV-1考核试剂和对比试剂,对197例标本进行平行检测.采用相关性分析、Bland-Altman模型等统计方法分析2种检测试剂之间的相关性和一致性.结果 197例标本中该国产HIV-1考核试剂与对比...     

22种呼吸道病原体核酸多重联检试剂盒检测效能评估

目的 通过对1种新型呼吸道病原体核酸多重联检试剂盒检测效能评价,为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、流行性感冒(流感)病毒等叠加流行的大规模检测提供适宜技术方法.方法 收集北京地区急性呼吸道感染病例阳性标本252份,采用4种核酸检测试剂盒(3种核酸多重检测试剂盒A、B、C及1种SARS-CoV-2检测试剂盒D)分别...     

基于Donabedian三维理论的上呼吸道核酸检测标本采集的质量管理实践

目的:分析Donabedian三维理论指导下,新冠肺炎核酸检测标本采集的质量管理实践效果。方法:分析影响上呼吸道核酸检测标本采集质量的影响因素,根据Donabedian三维理论制定标本采集管理策略,应用于2020年1月23日至2月17日我院新冠肺炎疑似患者及相关人群,共采集上呼吸道核酸标本1274例。结果:1274例上呼吸道核酸标本检测阳性率为2.59%,假阴性率为0.24%,标本合格率为99.68%,医务人员操作技能掌握率为100.00%,采样部位正确率为99.92%,采样手法正确率为99.84%,空气与物体表面细菌学检测合格率为100.00%,工作人员零感染。结论:基于Donabedian三维理论制定的上呼吸道核酸检测标本采集管理策略可提高标本合格率、预防交叉感染,为建立科学严谨的核酸检测质量管理体系提供参考借鉴。     

新型国产肠道病毒71型核酸检测试剂的质量评价

评价新型国产肠道病毒71型核酸定性检测试剂（新型定性试剂）的质量。方法首先用基于磁珠法自动化核酸提取平台的新型定性试剂和上海之江定性试剂对临床收集的EV71 RNA咽拭子和粪拭子样本进行10、100、1000、10 000倍稀释后进行多次平行检测,比较其精密度。最后,用两种定性试剂平行检测EV71 RNA阴性拭子样本和不同浓度的EV71 RNA阳性临床拭子标本,并评价其相关性和结果符合率。结果两种定性试剂测定各检测节点变异系数的结果经配对比较,EV71的咽拭子和粪拭子样本检测的精密度差异均无统计学意义（P均〉0.05）。两种定性试剂检测41份临床标本的总符合率达92.86%,且显著相关（r2=0.9885,P〈0.05）。结论新型定性试剂与之江定性试剂在各项指标的差异均无统计学意义,甚至某些指标更具优势,该定性试剂有良好的检测质量,可用于临床EV71 RNA检测。     

住院患儿血清人巨细胞病毒核酸与IgM抗体检测比较研究

目的：比较核酸与IgM抗体检测对人巨细胞病毒（human cytomegalov virus,HCMV）感染的诊断价值。方法：用达安基因和安图生物两个公司的商品化试剂盒对我院217例住院患儿血清中的巨细胞病毒核酸和IgM抗体平行进行检测。结果：住院患儿巨细胞病毒核酸阳性率为22．1％,IgM抗体阳性率为29．5％,IgM抗体阳性率高于核酸,核酸阳性的样本中有83．3％为IgM阳性,IgM阳性的样本中有62．5％为核酸检测阳性。结论：核酸和IgM抗体检测对于住院患儿巨细胞病毒感染的诊断有较高的符合率。     

一种快速核酸提取试剂在流感病毒检测中的应用评价

目的 探讨一种快速核酸提取试剂在流感病毒检测中的适用性及有效性。方法 选取流感病毒H3亚型、乙型Yamagata系细胞株和甲型H1N1型鸡胚株各1株,对其倍比稀释液及2015年北京市流感病原学监测阳性的67份咽拭子样本,同时采用快速提取法及离心柱提取法提取病毒核酸,经实时荧光PCR法进行定性、定量检测,检测结果采用SPSS 19.0软件进行统计分析。结果 快速提取法提取细胞培养液、鸡胚培养液中流感病毒核酸的最低检测限高于离心柱法10倍,咽拭子样本则高100倍;快速提取法提取核酸后检测到的病毒载量均低于离心柱法,其中对含有病毒量较高的毒株检测到的病毒载量低于离心柱法10倍,而对病毒量较少的咽拭子样本,则低100倍;快速提取法稳定性优于离心柱法;提取后的核酸-80℃保存10 d后冻融复测,快速提取法核酸损失量大于离心柱法。67份离心柱提取法检测阳性咽拭子样本使用快速提取法提取核酸后检测,两种方法阳性符合率总计为92.54%,其中10～102拷贝/ml组,阳性符合率为76.92%,102～103拷贝/ml组,阳性符合率为92.59%,103拷贝/ml组,阳性符合率为100%。结论 快速提取法具有稳定性高、易于操作、不易污染的优势,适用于细胞培养液、鸡胚培养液等病毒含量较高的大量样本中流感病毒核酸提取,适于检测样本量大、人手不足、设备欠缺的基层实验室使用;但-80℃冻融后核酸损失量较大,不宜反复冻融后使用;传统的离心柱法对于病毒含量较少的咽拭子样本及核酸需被反复冻融使用时具有优势。     

SARS-CoV-2实验室核酸检测要点

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)可引起新型冠状病毒肺炎(COVID-19),目前已在全世界广泛流行。作为SARS-CoV-2的确诊方法,实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测成为广受关注的热点技术。文章针对SARS-CoV-2的生物学特性,核酸检测的原理、意义、条件、防护以及结果判读进行综述,并对实验室核酸检测假阴性和复检阳性的原因给予了解释。