NMDA受体亚单位NR2A在凝血酶诱导的脑出血后脑损伤中的研究

目的 探讨NMDA受体亚单位NR2A在脑出血后脑损伤中的作用机制.方法 成年雄性SD大鼠随机分为生理盐水组,脑出血组,凝血酶组,凝血酶＋阿加曲班组.各组在手术后48 h采用不同方法观察其分布及动态变化规律.结果 NMDA受体亚单位NR2A在72h达高峰,阿加曲班可以减少其在72 h时的表达.阿加曲班可以改善血脑屏障的通透性、减轻脑水肿.结论 NMDA受体亚单位NR2A参与了脑出血后脑损伤的病理生理过程;阿加曲班通过抑制NMDA受体亚单位NR2A的激活而发挥神经保护作用.     

NMDA受体亚单元NR2A和NR2B mRNA在缺血大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨短暂性前脑缺血后大鼠海马NR2A和NR2B mRNA的表达变化及其与海马缺血性细胞凋亡的关系。方法 四动脉阻断法建立脑缺血再灌注动物模型、原位杂交、TUNEL染色和图像分析与统计处理。结果 ①缺血后，NR2A和NR2B mRNA在海马各区呈现出一种相对一致的表达规律。在CA1区，NR2A和NR2B mRNA的表达分别在缺血再灌6h和12h降至低谷，然后回升，在缺血再灌48h都升至高峰，之后表达再次下降，直至缺血后7d；在CA3区，该变化规律依然存在，不同的是表达变化的幅度明显减小；而在齿状回，缺血再灌0．5～72h，二者的表达未见显著性变化；72h后，表达下降，直至缺血后7d。②缺血后24h，凋亡细胞出现，主要位于海马CA1区，进行性增多，48h增加更为明显，缺血后72h达高峰；然后凋亡细胞有所减少，但至缺血后7d，依然存在。结论 短暂性前脑缺血后，大鼠海马各区NR2A和NR2B mRNA的表达变化及细胞凋亡均存在着显著性差异；这种差异提示，缺血后，NR2A和NR2B mRNA的表达变化与海马的选择性易损现象和缺血性细胞凋亡之间可能存在着某种密切的关系。     

大鼠听皮质NMDA受体来单位NR2BmRNA年龄—依赖性表达

应用原位杂交技术，研究了大鼠生后发育过程中，听皮质神经元NMDA受体亚单位NR2B mRNA年龄－依赖性的表达变化。特异性DIG标记寡核苷酸探针检测显示，NR2B亚单位mRNA阳性神经元数量从出生后即有高水平表达，之后，随着天龄增长逐渐递减，在出生后14d出现一过性表达高峰，14－21d时表达水平急剧降低（＞50．0％），21d后保持低水平表达至成年。研究结果为进一步在皮质水平上探讨出生后听觉功能发育可塑性的分子机制提供了重要资料。     

脑缺血再灌注大鼠皮质NMDA受体亚单位NR2A/B蛋白的表达变化

目的 采用免疫细胞化学技术，探讨急性脑缺血再灌注不同时间段大鼠脑顶皮质NMDA受体亚单位NR2A及NR2B蛋白的表达变化。方法 雄性Wistar大鼠70只,随机分成正常对照组、假手术对照组、脑缺血再灌注对照组；以颈动脉引流法行全脑缺血7min再灌注造模，术后分6h、24h、72h3个时间段取脑．脑组织恒冷箱连续冠状切片,免疫细胞化学ABC反应，图像分析系统行顶皮质Ⅰ区V层免疫阳性面积检测。结果 （1）麻醉及假手术可导致顶皮质NR2A、NR2B蛋白表达短暂增多，24h内恢复正常；（2）缺血再灌注后6h前后形成表达高峰,24h恢复正常，随后表达急剧减少，持续至72h以后。结论（1）脑缺血再灌注可导致顶皮质神经元NR2A、NR2B蛋白表达变化，且表达存在明显的时间依赖性；（2）缺血再灌注早期皮质NR2A、NR2B蛋白高度表达可能是导致迟发性神经元丢失的重要原因。     

大鼠大脑皮层损伤后N-甲基D-天门冬氨酸受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达研究

目的 分析研究急性损伤后大鼠大脑皮层N-甲基D-天门冬氨酸受体(NMDA)亚单位NR1，NR2A和NR2B的表达。方法 建立开放式挫伤型机械脑损伤大鼠模型，采用NMDA受体的NR1，NR2A和NR2B3种亚单位的特异性抗体，对不同时间点的皮层组织3种亚单位蛋白作定量免疫印迹分析。结果 以健侧大脑皮层作为对照组，NR1亚单位在各时间点的含量保持基本稳定。NR2A的含量在3h内升高明显，至3h达到高峰，随后降至正常；NR2B在1h时略有上升后随即下降，至3h时最低，尔后又明显升高，于6h时达高峰，随后又恢复正常。结论 大鼠脑皮层损伤NMDA受体NR2A和NR2B亚单位的表达发生了改变。     

阿加曲班抑制脑出血大鼠血肿周围组织蛋白酶激活受体-1的表达

目的：探讨凝血酶与脑出血后蛋白酶激活受体-1（PAR-1）表达的关系,以及观察阿加曲班对脑出血后PAR-1表达的影响.方法：60只大鼠随机分为5组：假手术对照组,脑出血组（ICH组）,脑出血＋阿加曲班干预组（ICH＋Arg 组）,凝血酶注入组（TH组）和凝血酶＋阿加曲班干预组（TH＋Arg组）,每组6只.建立大鼠自体血脑出血模型以及凝血酶注入模型,术后3 和12 h经腹腔分别注入阿加曲班0.9 mg·kg-1体重.术后24 h处死大鼠取脑,分别用免疫组化、West ern blot和RT-PCR检测PAR-1的表达.结果： ICH组血肿周围和TH组尾状核区PAR-1阳性细胞数明显高于假手术对照组,ICH＋Arg和TH＋Arg组PAR-1阳性细胞数明显低于ICH和TH组.Western blot和RT-PCR法检测显示ICH＋Arg和TH＋Arg组的PAR-1蛋白和PAR-1 mRNA表达水平明显低于ICH和TH组（P〈0.01或P 〈0.05）.结论：脑出血后PAR-1的表达水平与凝血酶有关,阿加曲班可抑制脑出血后的PAR-1表达.     

亚低温对脑出血后凝血酶受体Ⅰ表达影响的实验研究

目的观察亚低温对大鼠自体血注入法脑出血模型凝血酶受体(PAR-1)表达的影响,探讨亚低温减轻脑出血后脑水肿的可能机制。方法雄性SD大鼠108只,随机分为生理盐水组、脑出血组和脑出血 亚低温组。每组分为脑出血后24h、72h和7d共3个亚组。脑出血 亚低温组于注血后给予6h亚低温治疗。各组于注血后24h、72h和7d断头取脑组织,测定脑水含量(干湿重法),检测脑内血肿周围微血管壁上PAR-1的表达(免疫组化学法)。结果脑出血组血肿周围微血管壁上PAR-1的表达高于生理盐水组(P<0.05)。亚低温组血肿周围微血管壁上PAR-1的表达低于脑出血组(P<0.01)。同时,亚低温组脑水含量在各时间点与脑出血组比较明显下降(P<0.01)。结论脑出血后血肿周围微血管壁上PAR-1的表达增加,其变化与脑水肿的变化一致,说明PAR-1参与了脑出血后脑水肿的形成;亚低温可能通过抑制出血后微血管壁上PAR-1的表达来发挥其脑保护作用。     

丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中NMDA受体亚单位NR2B及突触素表达的影响

目的 观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚单位(NR2B)及突触素表达的影响.方法 采用免疫组化方法观察丁基苯酞对慢性脑缺血老龄大鼠海马中NR2B及突触素表达的影响.结果 B组与A组比较,海马CA1区、CA3区及齿状回NR2B及突触素的表达明显减少(P＜0.05),C、D组大鼠海马各区NR2B及突触素的表达与单纯缺血组比较均不同程度增加(P＜0.05);D组与C组比较,NR2B及突触素的表达增加更明显(P＜0.05).结论 慢性缺血3个月后,大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回中NR2B 及突触素的表达明显减少,而丁基苯酞能改善这种缺血改变,增加NR2B 及突触素的表达.     

大鼠听皮质NMDA受体亚单位NR2BmRNA年龄-依赖性表达

应用原位杂交技术 ,研究了大鼠生后发育过程中 ,听皮质神经元NMDA受体亚单位NR2BmRNA年龄 依赖性的表达变化。特异性DIG标记寡核苷酸探针检测显示 ,NR2B亚单位mRNA阳性神经元数量从出生后即有高水平表达 ,之后 ,随着天龄增长逐渐递减 ,在出生后 14d出现一过性表达高峰 ,14～ 2 1d时表达水平急剧降低(>5 0 .0 % ) ,2 1d后保持低水平表达至成年。研究结果为进一步在皮质水平上探讨出生后听觉功能发育可塑性的分子机制提供了重要资料     

大鼠听皮质NMDA受体亚单位NR2BmRNA年龄-依赖性表达

应用原位杂交技术,研究了大鼠生后发育过程中,听皮质神经元NMDA受体亚单位NR2B mRNA年龄-依赖性的表达变化.特异性DIG标记寡核苷酸探针检测显示,NR2B亚单位mRNA阳性神经元数量从出生后即有高水平表达,之后,随着天龄增长逐渐递减,在出生后14 d出现一过性表达高峰,14～21 d时表达水平急剧降低(＞50.0%),21 d后保持低水平表达至成年.研究结果为进一步在皮质水平上探讨出生后听觉功能发育可塑性的分子机制提供了重要资料.     

慢性脑缺血老龄大鼠海马NMDA受体亚单位NR2B表达的特征

目的研究老龄大鼠慢性脑缺血后大脑海马中NR2B表达特征。方法应用免疫组化染色技术检测大鼠脑海马中CA1、CA3区和齿状回中NR2B的表达。结果缺血组海马CA1、CA3区和齿状回三处NR2B灰度值均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论老龄大鼠海马结构内CA1、CA3区及齿状回内NR2B的表达明显减少。     

经腹腔应用阿加曲班对脑出血后凝血酶神经毒性的抑制作用

目的:探讨经腹腔应用阿加曲班治疗脑出血（ICH）后凝血酶神经毒性损伤的可能性。方法:①研究阿加曲班对ICH及凝血酶注入后脑水肿、细胞损伤的影响。Wistar大鼠60只,随机分为假手术对照组（只进针不注血）;ICH组（50μL自体尾血注入右尾状核）;ICH+阿加曲班干预组(50μL自体尾血注入大鼠右侧尾状核,分别于术后3和12h经腹腔给予阿加曲班0.9mg·kg^-1,总量0.6mL);凝血酶组(10U·2μL^-1凝血酶注入大鼠右侧尾状核);凝血酶+阿加曲班干预组(10U·2μL^-1凝血酶注入大鼠右侧尾状核,分别于术后3和12h经腹腔给予阿加曲班0.9mg·kg^-1,总量为0.6mL)。各组均n=12,术后24h处死各组大鼠,每组中6只用于检测脑组织水含量,6只检测caspase-3免疫反应细胞及TUNEL阳性细胞数。②经腹腔注射阿加曲班对血肿容积的影响:建立胶原酶ICH大鼠模型组:注入Ⅰ型胶原酶+肝素;阿加曲班组:胶原酶ICH模型成功后3及12h分别经腹腔注入阿加曲班溶液0.9mg·kg^-1,每次注入液体量为0.6mL,测定两组大鼠脑组织血肿血红蛋白的含量(测定血红蛋白A₅₅₀值)以评价阿加曲班对血肿容量的影响。结果:自体血ICH及凝血酶模型大鼠在阿加曲班干预后,ICH组及凝血酶组的TUNEL阳性细胞数、caspase-3阳性细胞数明显下降（P<0.01或P<0.05）,脑组织水肿含量百分比明显降低（P<0.05）。胶原酶ICH血红蛋白A值为（0.45±0.12）,阿加曲班干预组为（0.46±0.09）,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:ICH后3～12h经腹腔注入阿加曲班可减轻ICH后的脑水肿及细胞凋亡性损伤,且没有血肿增大的不良反应。     

阿加曲班对大鼠脑出血后脑水肿作用的研究

目的探讨阿加曲班对大鼠脑出血模型脑水肿的作用。方法取雄性SD大鼠32只,体重300~350g,随机分为A、B、C、D,4组,每组8只。大鼠经立体定向分别向右侧尾状核区注入生理盐水60ul、无肝素自体血50ul+生理盐水10ul、生理盐水50ul+阿加曲班生理盐水溶液10ul、无肝素自体血50ul+阿加曲班生理盐水溶液10ul。实验大鼠于术后48小时断头处死,测定脑含水量,HE染色,观察脑组织学变化。结果D组脑组织含水量降低,与B组比较有明显差别(P<0.05);C组脑组织含水量与A组比较无明显差别(P>0.05);HE染色观察:B组可见血肿周围脑组织水肿,炎症细胞渗出,脑组织疏松;D组上述改变减轻;A、C两组未见明显病理学改变。结论阿加曲班可减轻大鼠脑出血后血肿周围脑组织脑水肿。     

氯硝西泮预处理对癫痫大鼠海马区γ-氨基丁酸A受体γ2亚单位表达的影响

目的 探讨氯硝西泮预处理对癫痫大鼠海马区γ-氨基丁酸A受体γ2亚单位(GABAARγ2)表达的影响.方法 60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、癫痫组和氯硝西泮预处理组;癫痫组再分为6h、12 h、1 d、3d、7d、15 d和30 d7个亚组;药物预处理组再分为假预处理组、预处理6h、12h和ld亚组.药物预处理组给予氯硝西泮6 mg/(kg·d)分2次灌胃,连续5d;然后癫痫组和预处理组通过向大鼠海马C3区注射海人酸建立颞叶癫痫模型;采用免疫组化法在相应时点检测各组大鼠海马区GABAARγ2的表达.结果 与假手术组比较,癫痫组CA1区癫痫发作ld后、CA3区癫痫发作后各时间点GABAARγ2表达明显下降(P＜0.05 ～0.01).与癫痫组相应亚组比较,预处理6h、12 h亚组海马CA3区及预处理ld亚组海马CA1区及CA3区GABAARγ2的表达明显增高(P＜0.05～0.01).结论 氯硝西泮预处理可上调癫痫大鼠海马区GABAARγ2的表达.     

神经肽Y对海人酸致痫大鼠中NR1、NR2A受体的影响

目的探讨重组腺相关病毒载体神经肽Y(r AAV2/1-NPY-EGF-P)干预前后海人酸致痫大鼠海马中NR1、NR2A表达的变化。方法将36只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组、海人酸致痫大鼠组(KA组)以及神经肽Y(NPY)干预组(NPY组)各12只。KA组和NPY组均在海马CA3区注射海人酸建立为慢性癫痫模型,造模成功后,NPY组向脑室注射10l滴度为5×10~(11)μg·mL~(-1)的r AAV2/1-NPYEGFP进行基因转染,KA组不注射病毒,对照组海马CA3区注射等量的生理盐水。各组动物分别于基因转染后2w、4w,取海马保存于液氮。每组动物选取12只,每个时间点6只大鼠,用免疫组化方法检测各组NR1,NR2A的表达情况。对试验结果采用双盲法进行统计,应用半定量积分的方法,把每个时间点的大鼠CA3区NPY的阳性细胞率和阳性细胞着色强度进行分级记分,最后依据两项之积计算其阳性强度(IHS)。结果 2w及4w时KA组和NPY组NR1、NR2A阳性细胞数量、染色强度和IHS分数均高于对照组,(P<0.05);4w时NPY组阳性细胞比例、染色强度和IHS评分均低于KA组,(P<0.05)。结论 NR1、NR2A受体的低表达可能参与了NPY抑制癫痫发作的发病机制。     

凝血酶对大鼠脑出血血肿周围组织的毒性损伤研究

目的 :研究脑出血血液凝固过程中产生凝血酶的神经毒性作用。方法 :90只大鼠分成 :对照组、脑出血组、脑出血水蛭素干预组、凝血酶组和凝血酶 +水蛭素干预组。术后 48h观察大鼠神经功能缺损评分 (NDS) ,检测血肿周边组织髓过氧化物酶 (MPO)的活性、脑水肿含量及TUNEL阳性细胞数量。结果 :局部注入重组水蛭素显著减轻了脑出血大鼠神经功能缺损 ,降低局部MPO活性、减少脑水分含量及TUNEL阳性细胞数量 ;脑内直接注入凝血酶后局部脑水分含量升高 ,MPO活性升高 ,并可检测到大量TUNEL阳性细胞。结论 :凝血酶与脑出血后的脑水肿、白细胞浸润和神经细胞DNA损伤有关     

N-甲基-D-天冬氨酸受体2A亚单位基因与精神分裂症的连锁分析

目的了解N-甲基-D-天冬氨酸受体2A亚单位基因(NR2A)与精神分裂症的连锁关系。方法选取NR2A亚单位基因所在区域的3个微卫星标志[D16s407、D16s3075及NR2A启动子区的1个(GT)重复序列]，对中国汉族81个独立精神分裂症受累同胞对及其家系成员共324个个体作基因分型，其中男166名，女158名，患病同胞对81个162例。采用受累同胞对法对分型资料进行非参数连锁分析。结果324人的两点、多点非参数分析最大LOD值均位于D16s407，分别为2．643(P=0．004)，2．504(P=0．005)，均大于2．2。结论NR2A基因微卫星标志与精神分裂症存在提示性连锁关系，NR2A基因可能为精神分裂症的易感基因之一。     

阿加曲班对大鼠脑出血模型脑水肿作用的研究

目的 探讨阿加曲班对大鼠脑出血模型脑水肿的作用.方法取雄性SD大鼠40只,体重300～350g,随机分为A、B、C、D、E组,每组8只.大鼠用10%水合氯醛(350mg/kg)腹腔注射麻醉后,经立体定向分别向右侧尾状核区注入生理盐水60μl、无肝素自体血50μl 生理盐水10μl、无肝素自体血50μl Argatroban生理盐水溶液(0.5μl/ml)10μl、含10U凝血酶生理盐水溶液50μl 生理盐水10μl、含IOU凝血酶生理盐水溶液50μl Ar-gatroban生理盐水溶液(0.5μg/ml)10μl.48h后,断头处死,测定脑含水量,HE染色,观察脑组织病理学变化.结果 C、E两组脑组织含水量降低,与B、D两组比较有明显差别(P<0.05);B组与D组比较脑组织含水量无明显差别(P>0.05).HE染色观察:B组可见血肿周围脑组织水肿,炎症细胞渗出,脑组织疏松,神经细胞呈气球样变、坏死;D组可见注射部位脑组织水肿,脑组织疏松,炎症细胞渗出;C、E两组上述改变减轻;A组未见血肿及局部明显病理学改变.结论阿加曲班可减轻凝血酶造成的脑水肿;可减轻大鼠脑出血后血肿周围脑组织脑水肿     

芬太尼、咪达唑仑复合麻对大鼠认知功能及海马NR1、NR2B表达的影响

目的 探讨芬太尼、咪达唑仑复合麻醉对大鼠认知功能及海马NR1、NR2B表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠随机分为3组,即对照组、复合麻醉组、催醒组,每组6只.复合麻醉组和催醒组均腹腔注射芬太尼0.5mg/kg、咪达唑仑50mg/kg进行麻醉诱导,以翻正反射消失为标准记录大鼠麻醉起效时间.催醒组在麻醉起效30min后腹腔注射纳络酮0.5mg/kg、氟马西尼0.8mg/kg进行动物催醒,记录从给予拮抗剂到动物出现翻正反射的复苏时间.对照组腹腔注射等体积的生理盐水.各组大鼠于实验结束后7d内采用Y型电迷宫对大鼠进行认知功能测试,测试结束后处死动物,分离双侧海马,RT-PCR测定海马组织内NR1、NR2B的mRNA表达.结果 复合麻醉组大鼠Y迷宫实验正确反应率较对照组显著下降(P＜0.01),NR2B的mRNA表达显著降低(P＜0.01);催醒组大鼠正确反应率和NR2B的mRNA表达与对照组相比无显著差异,NR1的表达在各组差异不明显.结论 芬太尼、咪达唑仑复合麻醉可引起大鼠短期内一定的认知功能损害,其机制可能与NR2B基因表达下调有关.     

拉莫三嗪对大鼠脑出血后血肿周围兴奋性氨基酸受体亚基NR1和GluR2表达变化的影响

目的 研究拉莫三嗪对大鼠脑出血血肿周围兴奋性氨基酸受体亚基NR1和GluR2的影响.方法 用免疫组化法观察大鼠脑出血血肿周围NR1和GluR2在给药组和对照组的表达变化.结果 NR1和GluR2在病灶周围均有不同程度的高表达,给药组NR1在病灶周围阳性细胞明显减少,反应强度减弱,而GluR2则表达增强.结论 拉莫三嗪明显降低NR1在病灶周围的阳性表达, 而增强GluR2的表达从而发挥对受损神经元的保护作用.