补肾活血中药动员大鼠骨髓EPC修复内皮功能的实验研究

目的探讨补肾活血中药对心肌梗死（MI）模型大鼠外周血、缺血心肌组织内皮祖细胞（EPC）数量及血管内皮功能的影响。方法结扎法建立大鼠MI模型,随机分为补肾活血中药高剂量组（H组）、低剂量组（L组）和模型组（M组）,正常大鼠为空白组（K组）,每组10只。H组、L组以补肾活血中药灌胃,M组、K组正常喂养,4周后外周血、缺血心肌组织EPC培养,7d后收集贴壁细胞运用流式细胞仪鉴定CD34／CD133表型,ELISA法检测血管内皮生长因子（VEGF）,硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）。结果H组、L组外周血和缺血心肌表达CD34／CD133阳性率、EPC数量均高于M组、K组（P〈0．05或P〈0．01）;H组、L组外周血和缺血心肌NO含量、VEGF表达均高于M组、K组（P〈0．05或P％0．01）。结论补肾活血中药具有动员骨髓EPC进入血液循环、修复血管内皮损伤的作用。     

心肌梗死患者血清MMP-9的表达特征及补肾活血中药干预作用

[目的]观察心肌梗死患者血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达情况,分析MMP-9的变化特征,探讨补肾活血中药的干预作用。[方法]选择急性心肌梗死(AMI)患者36例,陈旧性心肌梗死患者20例,健康者10例。将AMI患者随机分为补肾活血中药组(常规药物加补肾活血中药)和对照组(常规药物),观察2周。于入院后1 h、24 h、3 d、5 d、7 d、14 d采集肘静脉血,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清MMP-9表达水平,免疫比浊法检测C-反应蛋白(CRP),免疫印迹法检测肌钙蛋白I(CTn I)。[结果]AMI患者血清MMP-9表达水平入院后1 h显著高于陈旧性心梗患者和健康者(P0.01),入院后3 d继续升高,5 d达高峰,后逐渐下降,7 d后持续回落,至14 d显著低于入院后1 h水平(P0.01),与CTn I和CRP均呈正相关性。补肾活血中药组治疗后MMP-9的表达水平显著低于对照组治疗后(P0.05)。[结论]AMI患者前期MMP-9表达水平与CTn I、CRP基本一致,但高表达期持续时间更长。补肾活血中药能够降低MMP-9表达水平。     

补肾活血方对心肌梗死大鼠心肌修复作用及机制探讨

目的:观察不同剂量补肾活血方对异丙肾上腺素所致心肌梗死大鼠内皮祖细胞(EPCs)的动员作用及其对缺血心肌组织的损伤修复作用,并探讨可能的作用机制。方法:雄性SD大鼠48只随机分为对照组、模型组、辛伐他汀组、补肾活血方低、中、高剂量组,皮下注射异丙肾上腺素造模后检测各组外周血EPCs数量、HE染色及TTC染色观察病理改变、心肌组织中Notch1蛋白表达及心肌组织中CD+34蛋白表达。结果:补肾活血方各剂量组及辛伐他汀组均可见外周血EPCs数量增多(P<0.01),心肌缺血损伤程度减轻,心肌组织中CD+34含量增多,且Notch1蛋白表达量较模型组明显增多,补肾活血方中高剂量组作用明显。结论:补肾活血方有可能通过激活Notch信号通路,动员心肌梗死大鼠EPCs,促进血管新生,从而达到修复受损心肌的作用。     

补肾中药对雄激素致不孕大鼠基质金属蛋白酶-9的影响

目的 :观察补肾中药治疗前后雄激素致不孕大鼠模型 (ASR)基质金属蛋白酶 9(MMP 9)的变化。方法 :建立雄激素致不孕大鼠模型 ,通过阴道涂片筛选各组大鼠。进行MMP 9原位杂交 ,显微镜检并电脑摄像 ,图像分析卵巢MMP 9RNA信号表达强度。结果 :MMP 9mRNA的表达面积和表达强度 :模型组 <正常组 <阳性组 <中药组 (P <0 0 1)。结论 :卵巢基质金属蛋白酶 9mRNA在雄激素致不孕大鼠表达水平较其它组为低 ,而中药促排卵方对其有一定的调节功能     

补肾活血方对恒河猴PCO模型卵巢MMP-9mRNA表达影响的实验研究

目的:探讨中药补肾活血方对恒河猴PCO模型卵巢MMP-9mRNA表达的影响。方法:选择健康育龄雌性恒河猴(6只)随机分为空白对照组、模型对照组、中药组,采用皮下注射丙酸睾丸酮和绒毛膜促性腺激素建立PCO模型,分别灌胃给予生理盐水、补肾活血方,采用原位杂交技术观察其卵巢局部MMP-9mRNA表达的变化。结果:空白对照组卵巢中卵泡的颗粒细胞和发育良好的卵泡膜细胞中均可检测到MMP-9mRNA的杂交信号;模型组卵泡的颗粒细胞、卵泡膜细胞MMP-9mRNA表达强度上超过空白对照组(P<0.05,P<0.01);中药组的作用与空白对照组相比无差异(P>0.05)。结论:恒河猴PCO模型卵巢局部MMP-9mRNA异常高表达;补肾活血方具有改善这种异常表达的作用,可能是其促进卵巢排卵的机制之一。     

补肾活血方动员急性心肌梗死大鼠骨髓干细胞的研究

目的:观察不同剂量补肾活血方与基因重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对急性心梗大鼠骨髓干细胞的动员作用.方法:结扎大鼠左冠脉前降支造成心肌梗死模型后,随机分为空白组、rhG-CSF组(简称CSF组)、补肾活血方(简称BS)低剂量组与BS高剂量组.造模1d、5d和14d后采用流式细胞仪检测外周血CD34+细胞,HE染色观察病理变化和免疫组织化学检测心肌CD34+细胞,比较不同组间血管密度.结果:急性心梗5d后BS高剂量组与CSF组外周血CD34+细胞测值较空白组测值明显升高(P<0.01),BS高剂量组与CSF组比较无显著差异(P>0.05),造模5d后BS低剂量组与空白组比较亦具有显著差异(P<0.05);2周后BS高剂量组测值仍维持在较高水平,其余3组基本恢复至动员前水平.心梗5d后和14d后CSF组与BS低剂量组、BS高剂量组心肌梗死区可见大量CD34阳性单个核细胞浸润,梗死灶周围可见CD34阳性心肌细胞样细胞生长,且血管密度明显高于空白组.结论:不同剂量补肾活血方均可能致外周血CD34+细胞数量增加,高剂量补肾活血方动员效果明显强于低剂量组.动员的外周血CD34+细胞有可能流入心肌梗死部位,进而分化为心肌细胞与血管内皮细胞等.与rhG-CSF相比,高剂量补肾活血方疗效确定,且动员作用更为持久.     

补肾活血中药对系膜增生性肾炎大鼠MMP-2表达的影响

目的:研究补肾活血中药对系膜增生性肾小球肾炎的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响。方法:取雄性SD大鼠54只,实验设正常对照组、模型组、补肾活血药物干预组,观察MMP-2的表达。结果:通过免疫组化、流式细胞术、免疫蛋白印记以及RT-PCR等方法表明模型组大鼠MMP-2表达较正常对照组明显减少,经补肾活血中药治疗后,MMP-2活性可部分恢复。结论:补肾活血中药能上调MMP-2的表达及活性的部分恢复,使得胶原合成减少,在延缓肾小球疾病的进展,防治肾小球硬化方面具有确切疗效。     

健脾补肾活血方含药血清调控PI3K/Akt信号通路影响大鼠内皮祖细胞功能的机制

目的 探讨健脾补肾活血方含药血清影响大鼠骨髓源内皮祖细胞（EPCs）增殖、迁移、成管功能的机制,以期为该方治疗缺血性脑血管病提供理论依据。方法 SD大鼠12只,随机分为两组：中药组和对照组,每组6只。分别给予每毫升含生药为3.25 g健脾补肾活血方颗粒药液和CMC-Na溶液灌胃,采集血清,组内混合,保存备用。SD大鼠2只,取骨髓EPCs,并培养、鉴定。将EPCs随机分为8组：空白组（KB）,低、中、高浓度含药血清组（Lx、Mx、Hx）,PI3K抑制剂组（PI）,低、中、高浓度含药血清+PI3K抑制剂组（Lp、Mp、Hp）。分别给予同等体积的对照组混合血清,10%、20%、40%浓度中药组混合含药血清,30μmol·L-1浓度LY294002,10%、20%、40%浓度中药组混合含药血清+30μmol·L-1浓度LY294002。Western blot、CCK8、Tranwell、体外成血管试剂盒分别检测各组EPCs p-Akt/Akt、p-PI3K/PI3K的相对蛋白表达量、增殖、迁移、成管能力。结果 与空白组（KB）比较,健脾补肾活血方低、中、高浓度含药血清组（Lx、Mx、Hx）E...     

补肾活血方对兔NPMSCs移植治疗退变椎间盘P38 MAPK信号通路的影响

目的探讨补肾活血方对兔髓核间充质干细胞(nucleus pulposus-derived mesenchymal stem cells,NPMSCs)移植治疗退变椎间盘P_(38)丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,P_(38)MAPK)信号通路的影响。方法选取128只SPF级健康新西兰大白兔,其中2例用于NPMSCs的获取、纯化及培养,选取24只为假手术组(A组);兔退变椎间盘模型成功100只,模型组(B组,24只)、补肾活血方组(C组,24只)、NPMSCs移植组(D组,24只)、补肾活血方+NPMSCs移植组(E组,24只),死亡6只。每组在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周4个时间点均处死6只兔,取相应椎间盘,采用酶联免疫测定每组大兔不同时间点椎间盘P_(38)MAPK、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)、基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase 7,MMP-7)的表达。结果 (1)各组变化趋势:A组、B组组内不同时间点P_(38)MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达差异无统计学意义(P0.05); C组、D组、E组P_(38)MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达与治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周呈下降趋势,各组组内差异有统计学意义(P0.01)。(2)与A组比较:B组、C组、D组、E组P_(38)MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均升高,组间差异有统计学意义(P0.01)。(3)与B组比较:C组、D组、E组P_(38)MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前差异无统计学意义(P0.05);在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P0.01)。(4)与C组比较:D组P_(38)MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗前、治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周时同期差异无统计学意义(P0.05); E组P_(38)MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P0.01)。(5)与D组比较:E组P_(38)MAPK、MMP-3、MMP-7蛋白相对表达在治疗后1周、治疗后2周、治疗后3周均降低,组间差异有统计学意义(P0.01)。结论补肾活血方对兔NPMSCs移植治疗退变椎间盘具有协同作用;其机制可能与抑制P_(38)MAPK信号通路,下调MMP-3、MMP-7蛋白相关。     

补肾活血方对大鼠软骨细胞凋亡增殖及MMP-13水平的影响

目的:探讨补肾活血方对大鼠体外培养软骨细胞凋亡增殖及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平的影响。方法:采用SD大鼠切取关节软骨进行软骨细胞的体外培养,应用甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色进行鉴定。同步细胞后分为中药组、西药组和空白对照组分别处理。采用流式细胞仪进行细胞凋亡与增殖检测,采用放免法进行MMP-13水平检测。结果:成功进行了软骨细胞的培养及鉴定。流式细胞仪检测显示补肾活血方可减低软骨细胞的凋亡率,与空白对照组比较有显著性差异(P0.05),补肾活血方可促进细胞周期中G2与S期细胞比例,与空白组比较有非常显著性差异(P0.01)。补肾活血方还可以降低MMP-13水平,与空白组比较有显著性差异(P0.05)。结论:补肾活血方具有减少软骨细胞凋亡的作用,同时可以降低MMP-13水平。     

补肾活血汤治疗股骨头坏死的作用机制研究

目的：探讨补肾活血汤对股骨头坏死的疗效,同时观察其对Wnt-βcatenin信号通路的影响。方法：将45只SD大鼠随机分为空白组、模型组及中药组,每组15只。利用甲泼尼龙琥珀酸钠制备激素性股骨头坏死动物模型,成模后中药组大鼠接受补肾活血汤灌胃,1次/d,空白组及模型组大鼠接受生理盐水灌胃,均连续灌胃6周,比较各组大鼠股骨形态学、骨密度、股骨头病理学、血清钙、磷、股骨头组织Wnt10b、β-Catenin水平变化。结果：1）模型组大鼠股骨头密度高低不同,股骨头毛糙,骨小梁模糊,中药组大鼠股骨头骨小梁数目较模型组增多,且相对清晰,股骨头面较模型组光滑。2）模型组及中药组大鼠骨密度、血清钙、磷水平、股骨头组织Wnt10b、β-Catenin蛋白均明显下降(P<0.05),中药组高于模型组(P<0.05)。3）模型组大鼠股骨头软骨出现明显病理改变;中药组大鼠股骨头结构尚完整,空骨陷窝较模型组减少,软骨细胞排列欠规则。结论：补肾活血汤对股骨头坏死有保护效应,其作用机制与Wnt-βcatenin信号通路有关。     

补肾活血方通过p38 MAPK信号通路影响人成骨细胞功能的机制

目的：观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞功能及其对p38 MAPK信号转导通路的活性影响,探讨补肾活血方防治骨质疏松症的作用机制。方法：将人成骨细胞株分为Control组、补肾活血方含药血清组（Z组）、含药血清＋p38抑制剂SB203580组（Z＋SB组）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测各组成骨细胞的增殖情况,通过PNPP法分析检测成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）的活性,采用免疫印迹（Western blot）法检测和磷酸化p38（p-p38）的表达水平。结果：补肾活血方含药血清能刺激成骨细胞的增殖,使分化增强,与Control组比较有显著性差异（P〈0.01）;阻断p38 MAPK信号转导通路后,与Z组比较,对成骨细胞的增殖无明显抑制（P〉0.05）,而对成骨细胞的分化功能有显著抑制作用（P〈0.01）;Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能刺激p-p38表达,阻断p38 MAPK信号转导通路后,p-p38含量明显减少（P〈0.01）。结论：补肾活血方可能通过p38 MAPK通路调控促进成骨细胞分化的功能,起到防治骨质疏松症的作用。     

补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠内皮细胞功能的影响

目的：观察补肾活血中药对实验性血瘀证大鼠血管内皮细胞功能的影响。方法：采用补肾活血中药药液灌服实验性血瘀证大鼠模型，将动物随机分为对照组、模型组、大剂量和小剂量共4组，每组10只。造模成功后，给药组灌服药物40天，然后下腔静脉取血，测定各观察指标和主动脉血管壁组织学变化。结果：补肾活血中药组血脂、血流变、内皮功能、凝血纤溶各项指标及组织形态学均有明显变化，接近正常组，与模型组有显著差异。结论：补肾活血中药有降低血液黏度、调节血脂和改善血管内皮细胞功能的作用。     

补肾活血方调控兔激素性股骨头坏死APN-AMPK信号通路的实验研究

目的通过干预脂联素(APN)-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)信号转导通路,观察股骨头局部血管重建,探讨采用补肾活血方治疗激素性股骨头坏死(SANFH)的作用机制。方法 27只健康成年白兔,随机分为正常组、造模组和实验组,每组9只,应用大肠杆菌脂多糖联合醋酸泼尼松龙诱导SANFH模型。实验组每天采用补肾活血方(5 mL/kg)灌胃,其他两组每天采用生理盐水(5 mL/kg)灌胃,疗程均为8周。实验过程中记录动物一般情况,造模前后、用药8周末分别对所有兔耳缘静脉取血2 mL,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测APN水平;检测实验组用药前后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、骨保护素(OPG)水平和股骨头B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达情况,并在用药8周末进行X线检测。结果造模组造模后APN浓度水平较造模前及正常组均下降(P0.05);实验组用药8周末APN水平较造模组升高(P0.05); TNF-α免疫组化水平明显下降,OPG免疫组化水平升高,同时股骨头中Bcl-2表达较用药前明显升高,Caspase-3表达水平下降(P0.05)。结论补肾活血方通过调节APN-AMPK信号传导通路中APN、TNF-α/OPG、Bcl-2/Caspase-3表达,对兔SANFH发挥有效干预。     

补肾活血中药对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的观察补肾活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞培养体系;收集补肾活血中药的含药血清,用10%含药血清代替10%的血清,绘制生长曲线,观察补肾活血中药含药血清促进骨髓间充质干细胞体外增殖的作用。结果所培养的大鼠骨髓细胞在表型表达和细胞形态上具备MSC特征,补肾活血中药含药血清组增长速度比空白对照组明显加快,并与剂量呈正比。结论补肾活血中药含药血清能促进干细胞在体外增殖。     

补肾活血方动员骨髓干细胞治疗急性心肌梗死的临床观察

目的:研究旨在初步观察补肾活血方对急性心肌梗死患者骨髓干细胞的动员作用。方法:急性心肌梗死患者40例随机分为补肾活血组和对照组,每组各20例。除常规治疗外,补肾活血组每日加服中药汤剂补肾活血方,每日1剂,连用2周。分别在治疗前和治疗后第3,5,7,14天,分别以流式细胞仪测定外周血中CD3+4细胞百分比及彩色多普勒超声诊断仪测定左室结构和功能,观察指标为左室舒张末内径(LVEDd)、左室收缩末内径(LVEDs)、左室射血分数(LVEF)。结果:(1)补肾活血组和对照组治疗后CD3+4细胞百分比均逐步升高,于第5天达到高峰,两组比较存在显著性差异(P0.01)。至治疗后第14天时,对照组测值已明显降低,而补肾活血组测值仍维持于较高水平(P0.05)。(2)经治疗28天后,补肾活血组LVEF增至(60.88±3.17)%,与治疗后7天时所测得的(51.75±5.63)%比较,呈明显改善(P0.01);与对照组相比较,LVEF改善明显(P0.05)。补肾活血组LVEDd及LVEDs则分别由治疗7天后时测值(62.31±5.60)mm与(41.87±4.92)mm降低至治疗28天后测值(52.51±2.32)mm与(33.56±3.66)mm,前后比较均有显著性差异(分别为P0.01与P0.05);而对照组LVEDd及LVEDs治疗后7天与治疗后28天比较未见显著性差异(P0.05)。结论:本研究初步证实了心梗后存在自发的骨髓干细胞动员现象。补肾活血方有可能通过动员骨髓造血干细胞,达到提高外周血骨髓干细胞水平的作用,从而能缩小梗死面积,对心肌梗死后心功能的恢复具保护作用。     

补肾活血中药对大鼠慢性高眼压模型多焦视网膜电图的影响

目的：观察补肾活血中药对大鼠慢性高眼压（elevated intraocular pressure,EIOp）模型视功能损害的干预作用。方法：采用烙闭上巩膜静脉的方法诱导产生慢性EIOP大鼠模型,将52只SD大鼠随机分为补肾活血高、中、低剂量组、模型组、空白组。连续灌胃8周,于8周末进行多焦视网膜电图（mulfifocal electroretinogram,mfERG）检测。结果：通过对大鼠mfERG-阶函数核（first older kernel,FOK）的观察发现,补肾活血中药有助于总波及1、2、3、4环P1波反应密度、总波P1波峰潜时、2环及3环N1波反应密度,3环、4环N1波峰潜时的恢复。结论：补肾活血中药可以改善大鼠慢性EIOP模型的视功能,有助于mfERG反应密度和波峰潜时的恢复。     

补肾活血中药促进骨折愈合的实验研究

目的为探讨补肾活血中药在促进骨折愈合中的作用。方法本实验采取家兔双侧桡骨中段手术造成３ｍｍ横断缺损的骨折模型，分别应用补肾活血、活血祛瘀、补肾接骨的３类中药，观察不同配伍的中药对促进骨折愈合的作用。结果补肾活血中药在Ｘ线检查、生物力学测定、组织学检查等方面促进骨折愈合的作用明显优于另两个单一用药组。结论补肾活血中药可缩短血肿机化时间，促进局部血管内皮细胞、成纤维细胞增生及毛细血管再生，增加骨折局部的微量元素，加快内外骨痂的生成，从而使骨折愈合过程缩短。     

中药川贝母对哮喘模型小鼠MMP-2,MMP-9和TIMP-1的影响

观察中药川贝母对哮喘模型小鼠气道重塑及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的影响,探讨其治疗哮喘的作用机制。BALB/C小鼠,随机分为正常组、模型组、高剂量组、低剂量组、阳性对照组。除正常组外,其他各组用卵蛋白(OVA)建立哮喘小鼠模型。造模成功后高剂量组和低剂量组分别按18.0,9.0 mg·kg-1剂量给予中药川贝母灌胃;阳性对照组于腹腔注射0.5 mg·kg-1剂量地塞米松;正常组和模型组等量生理盐水灌胃,每天1次,连续28 d。观察各组小鼠气道反应性的变化,支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和白细胞分类的变化以及支气管管壁厚度和支气管平滑肌厚度的变化;ELISA法检测MMP-2,MMP-9,TIMP-1水平;RT-PCR检测MMP-2,MMP-9,TIMP-1 mRNA的表达。结果显示,模型组气道反应性、BALF中细胞总数以及中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞计数、支气管管壁厚度和支气管平滑肌厚度明显高于正常组(P0.01),高剂量组和低剂量组与阳性对照组则明显低于模型组(P0.05或P0.01);模型组MMP-2,MMP-9和TIMP-1水平和mRNA表达明显高于正常组(P0.01),高剂量组和低剂量组与阳性对照组则明显低于模型组,差异具有统计学意义(P0.01)。推断中药川贝母可改善哮喘模型小鼠气道重塑状态,其机制可能与其降低MMP-2,MMP-9和TIMP-1有关。