左归降糖舒心方含药血浆对ox-LDL诱导J774 A.1巨噬细胞焦亡及凋亡的影响

目的 研究左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞焦亡及凋亡状态的影响,探讨该方治疗糖尿病动脉粥样硬化斑块的新靶点.方法 SD大鼠随机分成3组,连续5 d灌胃相应的药物制备含药血浆:空白组(灭菌超纯水)、左归降糖舒心方组(25.92 g/kg)、西药联合用药组(二甲双胍0.83 g/kg+阿托伐他汀钙12.45 mg/kg).应用ox-LDL诱导细胞焦亡及凋亡状态.通过CCK-8法比较各组J774A.1细胞增殖情况,计算细胞存活率,筛选含药血浆及ox-LDL干预浓度.将分化完全的J774A.1巨噬细胞随机分为空白血浆组、模型组、左归降糖舒心方含药血浆组、西药联合含药血浆组,每组6个复孔.诱导及给药24 h后,LDH释放实验检测细胞膜完整性及细胞焦亡水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、gasdermin D(GSDMD)蛋白、凋亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及B细胞白血病淋巴瘤相关蛋白基因(Bax)蛋白的表达水平.结果 含药血浆及空白血浆在浓度为10％水平对细胞增殖无明显抑制作用,作为含药血浆实验干预浓度.ox-LDL在100 mg/L浓度下,可明显降低细胞存活率,故考虑以100 mg/L ox-LDL为诱导细胞焦亡及凋亡的造模浓度.与空白组比较,模型组细胞存活率明显降低,LDH释放率增高(P<0.01);同时细胞凋亡明显增多(P<0.01);模型组在ox-LDL诱导下,细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达上调,促进凋亡相关因子Caspase-3及Bax表达增强(P<0.01).与模型组比较,左归降糖舒心方含药血浆组细胞存活率增高,LDH释放率及细胞凋亡率明显降低(P<0.01);左归降糖舒心方含药血浆可显著抑制ox-LDL所致的NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Caspase-3及Bax表达水平上调(P<0.01).而且,左归降糖舒心方含药血浆组阻断ox-LDL引起的焦亡过程细胞膜破坏及凋亡的作用效应优于西药联合含药血浆组(P<0.01).结论 在体外左归降糖舒心方含药血浆可有效维持巨噬细胞正常功能状态,其作用机制可能与调控NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Caspase-3及Bax表达,抑制细胞内焦亡及凋亡过程有关.     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞凋亡及Caspase-12表达的影响

目的 探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及内质网应激凋亡因子Caspase-12 mRNA和蛋白表达水平的变化及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用.方法 将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组,25 mmol/L葡萄糖,10％空白血浆)、高糖组(B组,200 mmol/L葡萄糖,10％空白血浆)、左归降糖益肾方含药血浆组(C组,200 mmol/L葡萄糖,10％含药血浆),4-苯基丁酸含药血浆组(D组,200 mmol/L葡萄糖,10％含药血浆).培养48 h后,采用免疫荧光细胞化学法、流式细胞术检测足细胞凋亡情况;Western blot法、RT-PCR法分别检测Caspase-12蛋白或mRNA表达水平的变化.结果 与A组比较:在高糖状态下B组足细胞凋亡率、Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与B组比较:C组、D组足细胞凋亡率,Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).与C组比较:D组足细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P＜0.05);但Caspase-12 mRNA和蛋白的表达水平,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 Caspase-12表达上调,是足细胞凋亡的分子机制之一;10％左归降糖益肾方含药血浆可能通过降低Caspase-12的表达水平,从而保护足细胞.     

基于PERK/ATF4/CHOP信号通路研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导的ARPE-19细胞的作用机制

目的 研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导ARPE-19细胞的影响及其可能机制。方法 构建细胞内质网应激损伤模型,将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组。对细胞进行形态观察,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞蛋白激酶样内质网激酶（PERK）、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白（CHOP）蛋白的表达。结果 选用浓度50μmol/L衣霉素干预ARPE-19细胞造模。观察细胞形态发现,滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组ARPE-19细胞较模型组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少。与空白组相比,模型组和空白血清组的细胞存活率下降（P<0.01）,凋亡率明显上升（P<0.01）,PERK、ATF4、CHOP蛋白表达上调（P<0.01）。与模型组相比,滋阴明目方含药血清组细胞存活率上升（P<0.01）,凋亡率明显下降（P<0.01）,PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调（P<0.01）。结论 滋阴明目方含药血清可以...     

左归降糖解郁方对大鼠海马神经元细胞的保护作用

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症（DD）细胞模型海马神经元损伤的保护作用。方法建立DD细胞模型,并采用左归降糖解郁方含药血浆进行干预,阳性对照组采用二甲双胍合氟西汀含药血浆。药物干预24 h,NSE鉴定神经细胞,MTT测定细胞存活率,TUNEL染色测定凋亡小体,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）法检测海马神经元细胞葡萄糖消耗情况。结果 NSE法鉴定海马神经元细胞纯度达93%以上;左归降糖解郁方组在第24、48、72 h细胞存活率分别为80.5%、78.7%、73.2%,与模型组比较差异具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,且其海马神经元细胞存活率在72 h时增加较二甲双胍合氟西汀组更明显（P〈0.05）;TUNEL染色显示左归降糖解郁方含药血浆组免疫阳性细胞数明显减少,凋亡率为13.2%;左归降糖解郁方可明显消耗培养基中葡萄糖浓度,从12 h开始与模型组相比差异均有显著性统计学意义（P〈0.01）。结论左归降糖解郁方对DD细胞模型海马神经元细胞具有保护作用。     

前列地尔对暴发性肝衰竭大鼠eIF2α/ATF4/CHOP通路及肝功能的影响

目的探究前列地尔(PGE1)对暴发性肝衰竭(FHF)大鼠对肝功能的影响,并探讨其对真核翻译起始因子2α(eIF2α)/激活转录因子4(ATF4)/C/EBP同源蛋白(CHOP)通路的调控作用。方法 SPF级SD雄性大鼠90只按随机数表法分为对照组、模型组、阳性对照组、低、中、高剂量PGE1组,除对照组外,其它组大鼠均采用腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)-大肠杆菌内毒素脂多糖(LPS)的方法建立FHF大鼠模型,对照组腹腔注射等量的生理盐水。造模6 h后,阳性对照组及低、中、高剂量PGE1组分别尾静脉注射促肝细胞生长素1.36 mg/kg,PGE112.5、25、37.5μg/kg,每天1次,连续给药3 d,对照组和模型组尾静脉注射等量的生理盐水。在造模72 h后处死大鼠,腹主动脉采血,检测血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)水平;解剖取肝组织用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠肝组织病理学变化;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肝组织中eIF2α/ATF4/CHOP/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3) mRNA和蛋白、磷酸化-eIF2α(p-eIF2α)蛋白水平。结果与对照组相比,模型组肝细胞广泛变性并有局灶性坏死,中央静脉受损,血清ALT、AST、TBIL,肝组织中eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA及p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白水平均升高(P0.05);与模型组相比,阳性对照组、低、中、高剂量PGE1组肝细胞损害有所降低,坏死细胞数量减少,血清ALT、AST、TBIL水平,肝组织中eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA及p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白水平降低(P0.05);且随着PGE1给药剂量的增加,低、中、高剂量PGE1组血清ALT、AST、TBIL水平,肝组织中eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA及p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白水平依次降低(P0.05),呈剂量依赖性;与阳性对照组相比,低、中剂量PGE1组血清ALT、AST、TBIL水平,肝组织中eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA及p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白水平均升高(P0.05),高剂量PGE1组血清ALT、AST、TBIL水平,肝组织中eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3 mRNA及p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP、Caspase-3蛋白水平差异无统计学意义(P0.05)。结论 PGE1可能通过抑制eIF2α/ATF4/CHOP通路表达,减轻大鼠肝细胞凋亡,达到保护肝的作用,可能作为FHF潜在的治疗药物。     

D-β-羟基丁酸通过激活Notch1/Hes1通路和抑制内质网应激改善大鼠急性心肌梗死

探究D-β-羟基丁酸（DβHB）对大鼠急性心肌梗死（AMI）的作用及其可能的作用机制。方法 40只SPF级SD大鼠随机分为对照组、心梗组、DβHB组和阳性对照组,每组10只。除对照组外,其余组通过结扎冠状动脉左前降支近端建立AMI大鼠模型。DβHB组大鼠腹腔注射DβHB 100 mg·kg-1·d-1,阳性对照组大鼠腹腔注射倍他乐克12mg·kg-1·d-1,对照组和心梗组大鼠注射等量生理盐水,持续给药3周。超声心动图检测心功能;HE染色检测心脏病理学变化;TTC染色检测心肌梗死面积;ELISA试剂盒检测LDH和CK-MB活性;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;Western blot检测凋亡、Notch1/Hes1通路和内质网应激相关蛋白水平。结果 与对照组相比,心梗组大鼠心肌结构紊乱,存在明显炎性细胞浸润和间质水肿,心功能明显降低,心肌梗死面积、LDH活性、CK-MB活性、心肌细胞凋亡率、Bax、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4和CHOP蛋白表达明显升高（均P＜0.05）,Bcl-2蛋白水平明显降低（P＜0.05）,Notch1、NICD和Hes1蛋白水平差异无统计学意义（P＞0.05）;与心梗组相比,DβHB组和阳性对照组大鼠心肌病理学变化有明显改善,心功能明显提升,心肌梗死面积、LDH活性、CK-MB活性、心肌细胞凋亡率、Bax、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4和CHOP蛋白水平明显降低（P＜0.05）,Bcl-2、Notch1、NICD和Hes1蛋白水平明显升高（P＜0.05）。结论 DβHB可能通过激活Notch1/Hes1通路和抑制内质网应激改善大鼠急性心肌梗死。     

Mfn2通过抑制内质网应激减轻椎间盘退变大鼠髓核细胞凋亡

目的 研究Mfn2对椎间盘退变大鼠髓核细胞内质网应激及细胞凋亡的作用及机制。方法 离体培养正常大鼠NP细胞为control组,离体培养椎间盘退变大鼠NP细胞分为model组、OE-Mfn2组、OE-NC组及4-PBA组。Western blot法检测Mfn2、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bcl-2、Bax、caspase-3的蛋白水平;qRT-PCR检测Mfn2、PERK、eIF2α、ATF4mRNA水平;免疫共沉淀实验验证Mfn2与PERK互作关系;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Mfn2可特异性结合PERK;与model组比较,OE-Mfn2组Mfn2、Bcl-2水平及细胞活力增加(P＜0.05),PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bax、caspase-3水平及凋亡率降低(P＜0.05)。结论 Mfn2可通过降低ERS抑制椎间盘退变大鼠NP细胞凋亡。     

3种化痰方剂含药血清超滤组分对THP-1源性巨噬细胞活性及泡沫化的影响

【目的】观察3种化痰方剂（黄连温胆汤、瓜蒌薤白半夏汤、二陈汤）含药血清超滤组分对人白血病单核细胞（THP-1）源性巨噬细胞活性及其泡沫化的影响。【方法】以佛波酯（PMA）诱导THP-1为巨噬细胞,经氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）处理建立动脉粥样硬化泡沫细胞模型;制备3种化痰方剂含药血清及空白血清经10 KD超滤器超滤后,作用于泡沫细胞模型。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法及油红染色观察各组对巨噬细胞存活率和泡沫化的影响;通过流式细胞术检测各组对巨噬细胞凋亡率的影响。【结果】 THP-1经100 nmol/L PMA诱导24 h后,与50μg/mL ox-LDL共孵育24 h,获得泡沫细胞模型。黄连温胆汤含药血清超滤成分作用于巨噬细胞,可明显提高存活率,抑制泡沫化,降低细胞凋亡率。二陈汤和瓜蒌薤白半夏汤含药血清超滤成分可增加泡沫化,未见显著抗凋亡作用。【结论】黄连温胆汤具有抗动脉粥样硬化作用,可能与其能抗巨噬细胞凋亡,降低巨噬细胞脂质吞噬作用相关;二陈汤和瓜蒌薤白半夏汤可能具有提高巨噬细胞脂质吞噬功能的作用。     

硫化氢通过抑制ROS介导的内质网应激改善脓毒症心肌损伤的研究

  目的  探讨硫化氢（H₂S）对脓毒症心肌损伤中活性氧（ROS）介导的内质网应激的影响。  方法  采用盲肠结扎穿刺术（CLP）诱导SD大鼠脓毒症模型,将大鼠随机分成假手术（sham）组、脓毒症（CLP）组、脓毒症+硫氢化钠（NaHS）（CLP+NaHS）组。超声心动图观察各组大鼠左心室功能,检测大鼠血浆H₂S的水平;通过乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平检测以及ROS染色评估大鼠心肌氧化应激水平;HE染色观察大鼠心肌组织形态变化,透射电子显微镜观察心肌细胞线粒体超微结构;Western blot检测细胞内源性硫化氢合成酶半胱硫氨酸-γ-裂解酶（CSE）、3-巯基丙酮酸硫转移酶（3-MST）表达变化,内质网应激标志性蛋白:磷酸化（p）-激酶蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、p-细胞翻译启始因子2α（eIF2α）、p-肌醇需要酶1α（IRE1α）、活化转录因子（ATF）4和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达变化;TUNEL染色观察大鼠心肌细胞凋亡变化。   结果  脓毒症大鼠左室射血分数（LVEF）、左心室缩短分数（LVFS）降低（P<0.05）,血浆H₂S降低（P<0.05）,血浆H₂S与LVEF和LVFS呈线性相关（r2=0.62、r2=0.64,P均<0.05）。脓毒症组大鼠ROS水平明显增强,LDH水平增高（P<0.05）,MDA表达增强（P<0.05）,GSH表达下降（P<0.05）;在HE染色中可见炎性细胞浸润,心肌细胞水肿,透射电子显微镜可观察到线粒体明显损伤,可见线粒体水肿,嵴结构溶解等情况;Western blot结果显示,CSE、3-MST表达水平有所下降（P<0.05）,内质网应激标志性蛋白p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、ATF4和CHOP蛋白表达水平升高（P<0.05）;TUNEL染色结果显示心肌细胞凋亡水平明显增加（P<0.05）。NaHS处理后,LVEF和LVFS升高（P<0.05）,血浆H₂S升高（P<0.05）。心肌氧化应激水平降低,HE与透射电镜显示心肌形态学有改善,线粒体损伤减轻,CSE、3-MST水平升高（P<0.05）,p-PERK、p-eIF2α、IRE1α、CHOP蛋白表达下降（P<0.05）,心肌细胞凋亡水平有所下降（P<0.05）。  结论  H₂S通过抑制ROS介导的内质网应激,减少脓毒症心肌细胞凋亡,从而改善脓毒症心肌功能障碍。     

左归降糖益肾方含药血浆对高糖培养小鼠足细胞凋亡的影响

目的：探讨在高糖作用下,体外培养的小鼠足细胞凋亡及bax、bcl-2表达水平的变化,及左归降糖益肾方含药血浆的调控作用。方法将体外培养的小鼠足细胞随机分为空白组(A组,25 mmoL/L葡萄糖,10%空白血浆)、高糖组(B组,200 mmoL/L 葡萄糖,10%空白血浆)、左归降糖益肾方含药血浆组（C 组,200 mmoL/L 葡萄糖,10%含药血浆）,4-苯基丁酸（4-PBA）含药血浆组（D组,200 mmoL/L葡萄糖,10%含药血浆）。采用间接免疫荧光细胞化学法检测足细胞凋亡情况;MTT自动比色法检测足细胞活力,蛋白质印迹法和逆转录-聚合酶链反应法分别检测bax及bcl-2蛋白或mRNA表达水平的变化。结果与A组相比,B组足细胞活力降低,bax及 bcl-2蛋白或mRNA的表达水平均升高（P＜0.01）;与B组相比,C组、D组足细胞活力升高,bax蛋白或mRNA的表达水平均降低（P＜0.05或P＜0.01）,bcl-2蛋白或mRNA的表达水平均升高（P＜0.01）;与C组比,D组足细胞活力升高（P＜0.05),但bax及bcl-2蛋白或mRNA的表达水平,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 bax及bcl-2蛋白或mRNA表达水平的升高,是足细胞损伤的分子机制之一;左归降糖益肾方含药血浆可以通过影响bax及bcl-2蛋白或mRNA的表达水平,从而抑制足细胞凋亡。     

左归降糖舒心方调控TLR4/NF-κB通路抑制糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化的机制研究

目的 基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路探讨左归降糖舒心方对糖尿病心肌病MKR小鼠心肌纤维化及炎症因子的影响。方法 以8周龄雄性MKR小鼠为实验对象,采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）40 mg/kg构建糖尿病心肌病模型,随机分为中药高剂量组[33.67 g/（kg·d）左归降糖舒心方2 g/mL]、中药低剂量组[16.84 g/（kg·d）左归降糖舒心方2 g/mL]、西药联合组[0.23 g/（kg·d）二甲双胍联合1.5 mg/（kg·d）依那普利]和模型组（等容量蒸馏水）;另设FVB小鼠为空白对照组（等容量蒸馏水）。每组10只,连续给药8周后取材。收集尾静脉血液检测空腹血糖水平;采用HE、Masson染色观察心肌病理改变,电镜观察心肌组织超微结构变化;采用ELISA检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;采用Wes...     

黄连化浊胶囊对sar-1A敲除诱导COP-II功能障碍的胰岛β细胞内质网应激的干预效应

摘要：目的：黄连化浊胶囊对sar-1A敲除诱导 COP-II 功能障碍的内质网应激的干预效应。方法： Min6细胞转染sar-1AsiRNA分为空白组（Min6细胞）、NC组（Min6细胞转染sar-1A-NC-siRNA）及sar-1AsiRNA组（Min6细胞转染sar-1A-siRNA）。收集sar-1A siRNA转染的Min6细胞，分为空白组：细胞+10%的空白血清培养，5%、10%及20%黄连化浊胶囊组：分别与5%、10%及20%的黄连化浊胶囊含药血清培养，罗格列酮组：细胞在10%的鼠罗格列酮含药血清中培养。分别采用qPCR检测sar-1A表达；免疫荧光检测sec31荧光强度，免疫印迹检测胰岛素原（proinsulin）、p-eIF2α、CHOP、Xbp1、IRE1、x-box蛋白表达。结果：空白组与NC组细胞sar-1A、sec31荧光强度及proinsulin、p-eIF2α、CHOP、Xbp1、IRE1、x-box蛋白表达无意义（P＞0.05），与NC组相比，sar-1AsiRNA组sar-1A、sec31荧光强度及proinsulin降低，p-eIF2α、CHOP、Xbp1、IRE1、x-box蛋白升高，存在差异（P＜0.05）。与空白组相比，5%、10%、20%黄连化浊胶囊组及罗格列酮组sar-1A表达均升高，5%、10%、20%黄连化浊胶囊组组间sar-1A表达逐渐升高，存在差异（P＜0.05）；空白组及5%黄连化浊胶囊组的Min6细胞sec31、proinsulin、p-eIF2α、CHOP、Xbp1、IRE1、x-box比较无意义（P＞0.05），与5%黄连化浊胶囊组相比，10%、20%的黄连化浊胶囊组及罗格列酮组的Min6细胞sec31、proinsulin增加，p-eIF2α、CHOP、Xbp1、IRE1、x-box降低，存在差异（P＜0.05），其余组别比较无意义（P＞0.05）。结论：sar-1A敲除后胰岛β细胞存在COP-II功能障碍，黄连化浊胶囊可减少sar-1A敲除后胰岛β细胞的内质网应激，有望为内质网应激导致的胰岛β细胞的治疗提供新的干预靶点。     

左归降糖舒心方对高脂饮食MKR小鼠糖脂代谢及炎症反应的影响

目的 探讨左归降糖舒心方对高脂饮食转基因2型糖尿病MKR小鼠糖脂代谢及炎症反应的影响。方法 用左归降糖舒心方干预治疗高脂饮食转基因2型糖尿病MKR小鼠,采用电化学法测定空腹血糖浓度,采用全自动生化分析仪检测血脂和炎症因子超敏C反应蛋白（hs-CRP）,采用ELISA法检测血清胰岛素与肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果 高脂饲料喂养的MKR小鼠空腹血糖高于MKR组,但无统计学意义（P＞0.05）;血清胰岛素、血脂（TC、LDL-C、HDL-C）、血清hs-CRP和TNF-α水平高于MKR组（P＜0.01）,而三酰甘油（TG）下降,低于MKR组（P＜0.01）。经左归降糖舒心方或文迪雅干预治疗后,除左归降糖舒心方低剂量组血糖和hs-CRP下降不显著（P＞0.05）,其他各组MKR小鼠血糖、血清胰岛素、TG、血清hs-CRP和TNF-α水平显著下降（P＜0.05、0.01）,TC和LDL-C下降无统计学意义（P＞0.05）;左归降糖舒心方高剂量组HDL-C显著上升（P＜0.01）,而文迪雅组升高不显著（P＞0.05）。左归降糖舒心方作用呈剂量依赖性。结论 左归降糖舒心方能调节高脂饮食MKR小鼠糖脂代谢、减少炎症因子的产生、保护血管、降低糖尿病并发血管病变的风险。     

内质网应激诱导慢性间歇低氧幼鼠认知相关的脑损害

目的 探讨内质网应激对慢性间歇低氧幼鼠脑损害的机制。方法 取SPF级健康雄性SD幼鼠32只,随机分为4组：间歇低氧（IH）2、4周组（2IH,4IH组）,对照2、4周组（2C,4C组）,每组8只。采用八臂迷宫测试各组幼鼠工作记忆错误（WME）、参考记忆错误（RME）、总错误数（TE）,观察海马神经元凋亡变化,测定免疫球蛋白结合蛋白（BiP）、转录激活因子4（ATF4）、C/EBP同源蛋白（CHOP）和磷酸化RNA激活蛋白激酶的内质网类似激酶（p-PERK）的表达水平。结果 慢性间歇低氧导致幼鼠学习记忆能力下降,与2周组比较,4周组明显（WME：3.38±0.52 vs 2.12±0.84;RME：4.25±0.71 vs 3.00±0.93;TE：7.62±0.74 vs 5.12±0.64,P均<0.01）;IH组海马神经元发生凋亡,4周组最明显（20.78%±2.63% vs 14.94%±1.59%,P<0.01）。IH组幼鼠海马BiP、ATF4和CHOP mRNA表达均增加,4IH组ATF4、CHOP mRNA表达显著升高（ATF4：3.50±0.24 vs 1.92±0.13,P<0.01;CHOP：3.09±0.22 vs 1.95±0.18,P<0.01）。2IH、4IH组p-PERK、CHOP蛋白表达上调,4IH组表达明显升高（p-PERK 3.72±0.21 vs 1.85±0.07,P<0.01;CHOP：4.29±0.27 vs 2.69±0.11,P<0.01）。结论 慢性间歇低氧可上调记忆相关脑区BiP、CHOP、ATF4 mRNA和p-PERK、CHOP蛋白的表达,表明内质网应激诱导慢性间歇低氧幼鼠认知相关的脑损害;PERK/ATF4/CHOP信号通路可能是内质网应激的分子机制。     

冠心平含药血清对氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响

目的 观察冠心平含药血清对氧化低密度脂蛋白（ oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL）诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化的调控作用。方法 将RAW264.7巨噬细胞分为对照组,模型组,冠心平含药血清低、中、高剂量组,以80 μg/mL ox-LDL刺激24 h,诱导巨噬细胞泡沫化模型,采用不同浓度冠心平含药血清进行干预。油红O染色观察巨噬细胞内脂滴形成;ELISA法检测巨噬细胞内游离胆固醇（free cholesterol,FC）与胆固醇酯（cholesterol esterase,CE）的表达水平;实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞清道夫受体A（scavenger receptor-A,SR-A）和CD36 mRNA表达水平。结果 冠心平中、高剂量能够显著减少巨噬细胞泡沫化;低剂量显著增加巨噬细胞FC水平（P<0.05）,高剂量显著降低巨噬细胞CE水平（P<0.05）;冠心平高剂量显著增加SR-A mRNA表达水平（P<0.05）,低、中、高剂量均显著增加CD36 mRNA表达水平（P<0.05）。结论 冠心平能够抑制巨噬细胞的泡沫化,这或许是冠心平治疗动脉粥样硬化的潜在机制之一。     

芪蛭三七汤对心肌梗死大鼠心室重构及内质网应激凋亡的影响*

目的 探讨芪蛭三七汤对心肌梗死（MI）大鼠心室重构及心肌细胞内质网应激凋亡的影响。方法 采用冠状动脉结扎法复制大鼠心肌梗死模型,分为空白对照组（n?=15）、假手术组（n?=14）、MI组（n?=11）及芪蛭三七汤干预模型组（QZ组）（n?=13）。空白对照组、假手术组和MI组大鼠均灌胃给予无菌生理盐水,QZ组大鼠灌胃给予22.68?g/kg芪蛭三七汤溶液,连续给药4周。采用超声心动图评价大鼠心功能,western blotting检测大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白以及蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）-真核细胞翻译起始因子2α（eIF2α）通路相关蛋白的表达。结果 ①心功能比较：与空白对照组和假手术组大鼠比较,MI组大鼠左室射血分数（LVEF）和短轴缩短率（FS）降低,而左室舒张末径（LVEDd）、左室收缩末径（LVESd）增加（P?<0.05）。QZ组大鼠LVEF和FS高于MI组大鼠,LVEDd和LVESd低于MI组大鼠（P?<0.05）。与空白对照组和假手术组大鼠比较,MI组大鼠左室压上升最大速率（+dp/dtmax）和左室压下降最大速率（-dp/dtmax）绝对值降低（P?<0.05）。QZ组大鼠+dp/dtmax和-dp/dtmax绝对值高于MI组大鼠（P?<0.05）。空白对照组和假手术组大鼠无梗死区域。QZ组大鼠梗死范围低于MI组大鼠（P?<0.05）。②心肌细胞凋亡指标：MI组大鼠非梗死区心肌凋亡指数（AI）高于空白对照组和假手术组大鼠（P?<0.05）。QZ组大鼠非梗死区心肌AI低于MI组大鼠（P?<0.05）。与空白对照组和假手术组比较,MI组大鼠心肌组织促凋亡蛋白caspase-3、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达量升高,而抗凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）表达量降低（P?<0.05）。与MI组大鼠比较,QZ组大鼠心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达量降低,Bcl-2蛋白表达量升高（P?<0.05）。③PERK-eIF2α信号通路：与空白对照组和假手术组比较,MI组大鼠心肌组织葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、p-PERK、p-eIF2α及活化转录因子4（ATF4）蛋白表达量升高（P?<0.05）。而与MI组大鼠比较,QZ组大鼠心肌组织GRP78、p-PERK、p-eIF2α及ATF4蛋白表达量降低（P?<0.05）。结论 芪蛭三七汤可减轻大鼠心肌梗死后心室重构,其机制可能与抑制PERK-eIF2α信号通路的激活诱导的内质网应激凋亡有关。     

大黄素诱导人肾上皮HK-2细胞凋亡及内质网应激的介导作用

目的 研究大黄素诱导人肾小管上皮HK-2细胞凋亡的作用及其机制是否与内质网应激有关。方法 不同浓度大黄素处理HK-2细胞不同时间。MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、转录激活因子3（ATF3）和X盒结合蛋白1（XBP1）的基因表达,Western blotting法检测caspase-3、GRP78、CHOP、真核生物启动因子2α（eIF2α）的蛋白表达。结果 大黄素以浓度相关方式降低HK-2细胞存活率,诱导caspase-3剪切。RT-PCR检测表明,大黄素能诱导内质网相关基因GRP78、CHOP、ATF3基因表达,Western blottinh检测结果进一步证实大黄素能诱导GRP78、CHOP的蛋白表达。大黄素还明显诱导eIF2α磷酸化和XBP1 mRNA剪切。在大黄素给药之前给予内质网应激干扰药4-苯基丁酸和salubrinal,能增加HK-2细胞的存活率。结论 大黄素能诱导HK-2凋亡,内质网应激参与了大黄素诱导HK-2细胞凋亡的作用。     

一氧化氮清除剂Carboxy-PTIO对短暂性局灶性脑缺血大鼠PERK/p-eIF2α通路的调节作用

目的 观察一氧化氮（nitric oxide,NO）清除剂Carboxy-PTIO （C-PTIO）对大脑中动脉梗死（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型大鼠再灌注后24 h脑组织中PERK/p-eIF2α通路介导的细胞死亡的影响,探究NO的产生对大鼠脑内内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）介导的神经元凋亡的影响。方法 将18只健康雄性SD大鼠依据数字表法随机分为假手术（Sham）组、MCAO组和MCAO+C-PTIO组,每组6只。大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型制作采用改良线栓法,并于缺血90 min后拔出线栓进行再灌注。术中监测大鼠肛温,使其维持在正常范围。于再灌注后24 h处死大鼠,迅速取脑,用免疫荧光染色检测大鼠脑组织冰冻切片缺血半暗带区p-eIF2α和C/EBP homologous protein （CHOP）的表达水平,用免疫荧光双标法将NO介导的蛋白质损伤标志物3-硝基酪氨酸（3-nitrotyrosine,3-NT）分别与p-eIF2α和CHOP进行定位。结果 1） Sham组大鼠没有p-eIF2α和3-NT染色阳性细胞,偶见CHOP染色阳性细胞,MCAO组大鼠脑组织缺血半暗带区3-NT、p-eIF2α、CHOP均大量表达（P<0.05）。2）与MCAO组相比,经腹腔注射给予C-PTIO后,缺血再灌注大鼠脑组织半暗带区3-NT、p-eIF2α、CHOP表达均明显减少（P<0.05）。3）缺血再灌注大鼠脑组织半暗带区,3-NT分别与p-eIF2α和CHOP免疫荧光染色共定位。结论 在脑缺血再灌注过程中,NO介导的氧化应激损伤引起ERS,并激活PERK/eIF2α通路引起细胞凋亡;抑制NO的产生,可以减弱这一过程,起到神经保护作用。     

护肝清脂片药物血清对非酒精性脂肪肝细胞模型内质网应激的影响

目的探讨护肝清脂片药物血清对混合脂肪酸诱导的非酒精性脂肪肝HepG2细胞模型内质网应激（ER stress）的影响及其 可能机制。方法油酸和棕榈酸以2∶1比例混合制备成1 mmol/L游离脂肪酸（FFA）混合液,诱导HepG2细胞24 h发生脂肪变 性,建立NAFLD体外模型,将HepG2细胞分为对照组（CON）、FFA组、护肝清脂片低剂量组（HG-L）、护肝清脂片中剂量组（HGM） 、护肝清脂片高剂量组（HG-H）及非诺贝特阳性对照组（FF）,在加入1 mmol/L FFA前分别加入各组对应的药物血清作用 24 h,CON组及FFA组则加入大鼠空白血清作为对照。油红O染色观察细胞内脂滴分布;试剂盒检测细胞内甘油三酯（TG）含 量及培养上清液谷草转氨酶（AST/GOT）、谷丙转氨酶（ALT/GPT）的水平;透射电镜观察细胞内质网形态结构的改变;Western blot、qRT-PCR技术检测ERS相关信号分子GRP78、PERK、p-PERK、ATF6、ATF4、XBP-1、CASPASE-12、CHOP、PKC-δ、p-PKC-δ 蛋白及（或）mRNA的表达情况。利用siRNA 瞬时转染技术沉默PKC-δ在HepG2细胞中的表达后观察GRP78、PERK、p-PERK、 CASPASE-12和CHOP蛋白表达变化。结果与CON组相比,FF组HepG2细胞油红染色可见红色脂滴密布细胞质,TG、AST、 ALT含量升高（P<0.001）;与FF组相比,HG-L、HG-M、HG-H及FF均在不同程度上降低TG、AST、ALT含量,减少细胞内脂滴堆 积,差异有统计学意义（P<0.05）,并能够在蛋白及mRNA水平上有效地下调ERS相关信号分子GRP78、p-PERK、ATF6、ATF4、 CHOP、CASPASE-12、XBP-1、PKC-δ、p-PKC-δ的表达,差异有统计学意义（P<0.05）。在1 mmol/L FFA共同作用下,PKC-δ siRNA转染组GRP78、p-PERK、CHOP、CASPASE-12蛋白表达均较对照组明显下调,差异具有统计学意义（P<0.001）。然而,与 PKC-δ siRNA +FFA组相比,PKC-δ siRNA+HG-H组GRP78 和P-PERK表达下调更显著（P<0.001,0.01）,CHOP和CASPASE- 12则无统计学差异（P>0.05）。结论护肝清脂片药物血清可以有效地防治混合脂肪酸诱导的NAFLD细胞模型脂肪变性,改善 HepG2功能状态,有效地缓解1 mmol/L游离脂肪酸所致的内质网应激,其作用机制在一定程度上与下调PKC-δ表达有关。