NLRP3对病毒感染心肌细胞凋亡及炎症反应的作用

【摘要】目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）对病毒感染的心肌细胞炎症及凋亡的影响。方法 分离培养SD乳鼠心肌细胞,采用基因沉默的方法敲减NLRP3基因的表达,然后随机分为4组,分别包括正常对照组、Scrambled siRNA组、CVB3+Scrambled siRNA组、CVB3+NLRP3 siRNA组。ELISA检测心肌损伤标志物CK MB、cTnI及IL 1β、IL 18等炎症因子水平,RT qPCR、Western blot检测NLRP3炎性小体通路的激活情况以及细胞内外源凋亡途径caspase 8、Bcl 2、Bax、caspase 9、caspase 3等的水平。结果 与正常对照组相比,CVB3+Scrambled siRNA组中NLRP3通路被激活,其下游的caspase 1被活化,IL 1β、IL 18表达增加（P＜005）,caspase 8、caspase 3、caspase 9活化增强,Bcl 2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增高,Bax/Bcl 2比值增大（P＜005）,心肌细胞凋亡及CK MB、cTnI均增加（P＜005）。敲减NLRP3基因表达后,与CVB3+Scrambled siRNA组比较, caspase 1活性被抑制,IL 1β、IL 18表达降低（P＜005）,caspase 3、caspase 9活性降低,Bcl 2下降程度减弱,Bax/Bcl 2比值降低（P＜005）,但对caspase 8、Bax的蛋白表达无明显影响（P＞005）。结论 NLRP3信号通路在病毒感染早期导致心肌细胞损伤过程中起重要作用,抑制NLRP3过度激活会减轻心肌细胞炎症损伤及细胞凋亡,可能是治疗病毒性心肌炎的潜在靶点。     

微RNA-21通过激活沉默信息调控因子1信号通路缓解多柔比星心肌毒性

目的 探讨微RNA-21（miR-21）能否减轻多柔比星（DOX）心肌毒性,并阐明沉默信息调控因子1（SIRT1）信号通路是否介导其作用。方法 用DOX（1 μmol/L）处理大鼠原代心肌细胞构建DOX心肌毒性模型。将心肌细胞分为8组：对照组、miR-21组、miR-21抑制剂组、DOX组、miR-21+DOX组、miR-21抑制剂+DOX组、Sirtinol+miR-21+DOX组、Sirtinol+DOX组,miR-21 mimics、miR-21抑制剂和Sirtinol（SIRT1抑制剂）分别于DOX处理前24 h加入细胞培养液中。DOX处理24 h后检测心肌细胞的细胞活力、凋亡率、凋亡相关蛋白和SIRT1信号通路表达情况。结果 与对照组相比,DOX处理24 h后心肌细胞活力降低,Bcl-2和SIRT1表达量降低,而Bax和cleaved Caspase-3表达量增加,细胞凋亡率增高,差异均有统计学意义（P<0.05）。与DOX组相比,miR-21可明显提高心肌细胞活力,上调Bcl-2和SIRT1表达,下调Bax和cleaved Caspase-3表达,降低细胞凋亡率,差异均有统计学意义（P<0.05）。抑制SIRT1信号通路可削弱miR-21对心肌细胞的保护作用（P<0.05）。结论 miR-21可通过激活SIRT1信号通路抑制心肌细胞凋亡,提高细胞活力,缓解DOX心肌毒性。     

银杏酮酯对过氧化氢诱导大鼠乳鼠 心肌细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨银杏酮酯( Ginkgo biloba extract 50,GBE 50)对过氧化氢诱导的大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用.方法利用体外培养模型,以过氧化氢0.2 mmol·L-1诱导心肌细胞损伤.乳大鼠心肌细胞分为正常对照组、过氧化氢组、过氧化氢+银杏酮酯0.2 mg· mL-1组.用MTT法检测心肌细胞存活率;Western Blot方法检测Bcl -2、Bax和Caspase -3的蛋白表达水平.结果与正常对照组相比,过氧化氢组使心肌细胞的存活率显著降低(P＜0.01),Bcl -2的蛋白表达水平明显降低(P＜0.01),而Bax和Caspase-3蛋白表达水平显著增加(P＜0.01),Bcl - 2/Bax的比率降低(P＜0.01);与过氧化氢组相比,过氧化氢+银杏酮酯组中,心肌细胞的存活率升高显著(P＜0.01),银杏酮酯使Bcl -2的蛋白表达水平明显升高,Bax和Caspase -3的蛋白表达水平明显降低(P＜0.01),Bcl - 2/Bax的比率升高(P＜0.01).结论银杏酮酯对过氧化氢诱导的乳大鼠心肌细胞凋亡具有抑制作用.     

Effect of heme oxygenase-1 on protection of myocardial cells by resveratrol against doxorubicin-induced apoptosis

目的 探讨血红素加氧酶1(HO-1)在白藜芦醇(RES)抑制阿霉素(DOX)致心肌细胞凋亡中的作用.方法 60 只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、DOX组、DOX+ RES组和DOX+ RES+HO-1抑制剂锡原卟啉(ZnPP)组,每组15只;除对照组外,均采用经腹腔注射DOX(总剂量12 mg/kg)建立心肌损伤模型.苏木精-伊红(HE)染色后光学显微镜下观察心肌组织病理学改变.采用化学比色法测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;分光光度法检测心肌组织HO-1和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性;Western blotting法检测心肌组织HO-1蛋白表达;免疫组织化学法检测心肌组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡率.结果 与对照组比较,DOX组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P＜0.01).与DOX组比较,DOX +RES组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率均显著降低(P＜0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P＜0.01);与DOX+ RES组比较,DOX+ RES+ZnPP组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P＜0.05).结论 HO-1参与RES对DOX致心肌细胞凋亡的抑制作用.     

α7⁃nAChR通过抑制软骨细胞凋亡延缓小鼠膝骨关节炎关节软骨退变

目的：探讨激活α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7?nAChR）对小鼠骨关节炎（osteoarthritis,OA）软骨细胞凋亡的作用及机制。方法：通过关节腔内注射碘乙酸钠（monosodium iodoacetate,MIA）建立小鼠OA模型。模型小鼠随机分成MIA单独给药组、0.5 mg/kg烟碱（nicotine,Nic）治疗组、1 mg/kg Nic治疗组和Nic +α7?nAChR特异性拮抗剂甲基牛扁碱（methyllycaconitine,MLA）治疗组,对照组小鼠则注射等体积的生理盐水。模型制备后7、14、21 d应用Von Frey纤维丝评价小鼠疼痛行为指标机械缩足反射潜伏期;第21天时处死小鼠,取膝关节标本进行甲苯胺蓝和番红固绿染色,评估膝关节软骨破坏情况并进行关节软骨退变评分;应用原位末端转移酶标技术（terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick end labelling,TUNEL）分析关节软骨细胞的凋亡水平;应用免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl?2、Bax、cleaved caspase?9和caspase?9的表达。结果：模型制备后21 d,MIA组小鼠机械缩足反射潜伏期阈值显著下降至（0.28 ± 0.02）g,关节软骨退变评分和蛋白聚糖损失评分分别升高至（5.33 ± 1.19）分和（2.33 ± 0.27）分,关节软骨细胞凋亡率升高至（31.83 ± 3.89）%。而1 mg/kg Nic能显著减轻MIA引起的小鼠膝关节疼痛行为（P < 0.05）,降低MIA诱导的软骨退变（P < 0.05）和关节软骨细胞凋亡坏死（P < 0.05）。进一步机制研究发现,MIA可明显降低Bcl?2的表达,增加Bax和cleaved caspase?9的表达,而Nic治疗组能逆转MIA诱导的软骨细胞凋亡相关蛋白表达的影响,显著升高Bcl?2的表达,降低Bax的表达和cleaved caspase?9/caspase?9的比率（P < 0.05）,上述这些Nic的作用均能被MLA消除。结论：激活α7?nAChR能抑制关节软骨细胞的凋亡,对OA模型小鼠的软骨损伤具有保护作用,其抗凋亡机制可能与线粒体凋亡途径有关。     

葛根素激活SIRT_3/SOD_2信号通路缓解多柔比星心脏毒性实验研究

目的:探究葛根素(Pue)能否减轻多柔比星(DOX)引起的心脏毒性及其具体机制。方法:通过一次性腹腔注射多柔比星(15 mg/kg)建立小鼠多柔比星心脏毒性急性模型。DOX给药前3 d每日通过腹腔注射给予SIRT_3特异性阻断剂3-TYP[50 mg/(kg·d)]给药3 d。DOX给药后每日通过腹腔注射给予葛根素[10 mg/(kg·d)],给药5 d。实验小鼠随机分为正常组(Control组),葛根素组(Pue组),多柔比星组(DOX组),多柔比星+葛根素组(DOX+Pue组),3-TYP+多柔比星+葛根素组(3-TYP+DOX+Pue组),3-TYP+多柔比星组(3-TYP+DOX组)。DOX给药5 d后检测小鼠心脏收缩舒张功能、心脏组织病理改变、血清LDH水平、氧化应激和凋亡情况。结果:与Control组小鼠相比,DOX组小鼠心功能明显受损,心肌细胞出现"空泡化"反应,血清内LDH水平、心肌组织心肌细胞内氧活性(ROS)产量、丙二醛(MDA)含量和心肌凋亡水平明显增加。葛根素给药可以有效减轻多柔比星心脏毒性,抑制心肌组织氧化应激损伤和凋亡,伴随SIRT_3/SOD_2信号的激活。而用SIRT_3特异性抑制剂3-TYP抑制SIRT_3信号通路后,葛根素的保护作用明显减弱(均P<0.05)。结论:葛根素可以通过激活SIRT_3/SOD_2信号通路抑制氧化应激损伤和凋亡缓解多柔比星心脏毒性。     

多柔比星对乳鼠心肌细胞TLR4/NF-κB信号通路的影响及地塞米松的干预实验研究

目的: 观察多柔比星(doxorubicin, DOX)对乳鼠心肌细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨多柔比星在心肌损伤中的可能发病机制及地塞米松(dexamethasone,DXM)对其干预作用.方法: 采用体外培养乳鼠心肌细胞,用多柔比星制备心肌细胞损伤模型.随机分为3组:对照组,将心肌细胞悬液换用无血清培养基继续培养未加任何药物;DOX组,在培养液中加入多柔比星1 mg/L;DXM + DOX组,在加入DOX 1 mg/L前30 min给予地塞米松32 mg/L.作用6 h后免疫组织化学法检测心肌细胞TLR4,TNF-α蛋白表达;分别作用2,6,24 h后用Western blot法对TLR4,NF-κB,TNF-α在心肌细胞的表达水平进行半定量分析;比色法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性.结果: DOX组心肌细胞TLR4,NF-κB,TNF-α表达较对照组明显增加(P<0.01);DXM+DOX组心肌细胞TLR4,NF-κB,TNF-α表达水平低于DOX组(P<0.01) ;与对照组比较,DOX组的LDH活性明显增高(P<0.01,6 h组);与DOX组比较,DXM+DOX组的LDH活性明显降低(P<0.01,6 h组);与对照组比较,DXM+DOX组的LDH活性稍高(P<0.05,6 h组).结论: 多柔比星作用于鼠心肌细胞,导致心肌细胞TLR4过度表达,激活其下游信号转导系统,表达细胞因子TNF-α,是其心肌细胞损伤的机制之一;DXM可以干预多柔比星心肌细胞TLR4及其下游信号转导NF-κB,TNF-α的过度表达,具有一定的心肌保护作用.     

血红素加氧酶1在白藜芦醇抑制阿霉素致心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨血红素加氧酶1(HO-1)在白藜芦醇(RES)抑制阿霉素(DOX)致心肌细胞凋亡中的作用。方法 60只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、DOX组、DOX+RES组和DOX+RES+HO-1抑制剂锡原卟啉(ZnPP)组,每组15只;除对照组外,均采用经腹腔注射DOX(总剂量12 mg/kg)建立心肌损伤模型。苏木精-伊红(HE)染色后光学显微镜下观察心肌组织病理学改变。采用化学比色法测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性;分光光度法检测心肌组织HO-1和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性;Western blotting法检测心肌组织HO-1蛋白表达;免疫组织化学法检测心肌组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡率。结果与对照组比较,DOX组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率均显著升高(P0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P0.01)。与DOX组比较,DOX+RES组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达及心肌细胞凋亡率均显著降低(P0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著升高(P0.01);与DOX+RES组比较,DOX+RES+ZnPP组小鼠的CK、LDH和Caspase-3活性、Bax蛋白表达和心肌细胞凋亡率均显著升高(P0.01),而HO-1活性及HO-1、Bcl-2蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论 HO-1参与RES对DOX致心肌细胞凋亡的抑制作用。     

阻断白介素⁃17对博来霉素诱导小鼠肺纤维化及肺组织Bax/Bcl⁃2表达的影响

目的：研究阻断白介素（interleukin,IL）?17对博来霉素诱导小鼠肺纤维化和肺组织Bax/Bcl?2表达的影响。方法：80只C57BL/6小鼠随机分为模型组、抗IL?17处理组、同型IgG处理组和PBS处理组。小鼠气管内一次性注入博来霉素诱导肺纤维化形成,PBS处理组给予等量生理盐水。4组小鼠分别从造模前1 d每隔3 d通过尾静脉给予抗鼠IL?17单克隆中和抗体或同型对照抗体或PBS。在造模后28 d,取各组小鼠肺组织,利用Masson染色及羟脯氨酸含量测定检测各组小鼠肺纤维化程度,通过流式细胞术测定肺组织细胞凋亡情况,采用免疫组织化学法检测肺组织Bax和Bcl?2的表达。结果：阻断IL?17后,小鼠肺纤维化程度明显降低（P < 0.01）,羟脯氨酸含量显著下降（P < 0.01）,细胞凋亡率明显降低（P < 0.01）,Bax表达明显减弱（P < 0.01）,Bcl?2表达虽无明显变化,但Bax/Bcl?2比值显著下降（P < 0.01）。结论：阻断内源性IL?17后,能显著降低博来霉素诱导的肺纤维化,显著降低肺组织细胞凋亡率和Bax/Bcl?2比值,这些数据提示阻断内源性IL?17活性改善博来霉素诱导的小鼠纤维化程度,可能与Bax/Bcl?2介导的线粒体细胞凋亡通路有关。     

环维黄杨星D对阿霉素致小鼠心脏毒性的保护作用

目的 研究环维黄杨星D(cyclovirobuxine D,Cvb-D)对阿霉素(doxorubicin,DOX)所致小鼠心脏毒性的影响.方法 52只C57小鼠分为4组(n=12):正常对照组(Control)、Cvb-D组、DOX组和Cvb-D+ DOX组,每天灌胃给予Cvb-D(1 mg/kg)或生理盐水,连续给药4d,第5天单次腹腔注射DOX(15 mg/kg)或生理盐水.心肌组织切片进行Masson's染色,光镜下观察各组小鼠心肌组织纤维化改变;测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)水平及组织Caspase-3活性;采用末端标记TUNEL法检测各组心肌细胞凋亡情况;利用Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达水平及其比值.结果 与正常对照组相比,Cvb-D预处理可明显抑制DOX引起的体质量下降(P＜0.05)以及心肌纤维化等组织形态学改变,显著抑制DOX引起的LDH、CK及Caspase-3活性升高(P＜0.05),缓解DOX引起的心肌细胞凋亡,并显著提高DOX诱导的Bcl-2/Bax蛋白表达比值降低(P＜0.05).结论 Cvb-D对DOX心脏毒性具有保护作用,并能够改善DOX引起的细胞凋亡.     

金属硫蛋白抑制阿霉素引起的心肌细胞凋亡作用研究

目的 研究锌诱导的金属硫蛋白(MT)对阿霉素(DOX)所致心肌细胞凋亡的的抑制作用并探讨其作用机制.方法 雄性C57BL小鼠随机分成4组(每组7只),即对照组、锌处理组、给药组和锌预处理给药组.各组小鼠连续2 d皮下给予ZnSO4 300 μmol/kg(锌处理组和锌预处理给药组)或等量生理盐水(对照组和给药组),第3 d单次腹腔注射DOX 15 mg/kg(给药组和锌预处理给药组)或等量生理盐水(对照组和锌处理组).DOX给药后第4 d处死小鼠,采用血红素镉饱和法测定心脏组织MT含量,ELISA法测定心肌凋亡指数,蛋白印迹分析(Western blot)测定心肌组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平.结果 与对照组相比,DOX引起小鼠心脏质量下降10%,且显著引起小鼠心肌细胞凋亡;经锌诱导后,心脏组织MT水平提高约25倍,且MT高表达能抑制DOX引起的凋亡细胞增加;进一步的研究发现,Bax蛋白表达水平在DOX给药后明显升高,而MT高表达抑制了Bax的表达升高;Bcl-2蛋白表达水平各组间的差异无统计学意义.结论 锌诱导的MT高表达能抑制DOX引起的心肌细胞凋亡,其作用机制主要与抑制DOX引起的Bax蛋白表达升高以及Bax/Bcl-2比值增加有关.     

TIR/BB环拟似物AS⁃1对小鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用研究

目的：研究TIR/BB环拟似物AS?1对小鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法：雄性C57BL/6小鼠随机分成4组：假手术组(sham)、肾缺血再灌注组(RIR)、AS?1+肾缺血再灌注组(AS?1+RIR)、溶剂+肾缺血再灌注组(溶剂+RIR)。采用夹闭双侧肾动、静脉45 min，再灌注24 h的方法构建肾缺血再灌注损伤模型。AS?1+RIR组与溶剂+RIR组在术前30 min按剂量50 mg/kg 分别腹腔注射AS?1和溶剂，再灌注24 h后检测肾功能参数、血清炎症因子、凋亡指标及磷酸化NF?κB p65(p? p65)表达水平。结果：与假手术组比较，缺血再灌注组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、TNF?α、IL?6、p?p65、Cleaved caspase3及 Bax的表达水平均明显提高(P ＜ 0.01)，肾间质CD68+ 和MPO炎症细胞浸润增多，Bcl?2的表达量明显降低(P ＜ 0.01)，Bcl?2/Bax 的比值也降低。给予AS?1处理后可以使Scr、BUN、TNF?α、IL?6、p?p65、Cleaved caspase3、及Bax的水平明显降低(P＜0.01)， CD68+ 和MPO炎症细胞浸润减少；Bcl?2的表达量升高(P ＜ 0.01)，Bcl?2/Bax的比值也升高。结论：TIR/BB环拟似物AS?1对小鼠肾缺血再灌注损伤有保护作用，其机制可能与其抑制NF?κB信号通路的活化，产生抗炎作用和抗凋亡作用有关。     

羟基积雪草苷对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的：研究羟基积雪草苷（ AC）对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,初步探讨其机制。方法：24只雄性SD大鼠,随机分为假手术组（ SH组）、心肌缺血再灌注模型组（ IR组）、羟基积雪草苷治疗组（ AC组）,每组8只。 AC组在冠状动脉左室支结扎60分钟前以6mg／100g体重的剂量静脉滴注羟基积雪草苷15分钟,其它2组同时点静脉滴注等剂量生理盐水。除SH组外,其它2组结扎冠状动脉左室支,使心肌缺血30分钟,再灌注60分钟。用7020全自动生化分析仪检测血清中乳酸脱氢酶（ LDH）、肌酸激酶（ CK）活性;TUNEL法检测各组大鼠缺血心肌细胞凋亡;RT－PCR法检测凋亡基因Bcl－2和Bax的mRNA表达。结果：与IR组比,羟基积雪草苷能降低血清中LDH、CK活性（P＜0．05）;降低心肌细胞凋亡指数（P＜0．05）;羟基积雪草苷组凋亡基因Bcl－2表达水平上升（P＜0．05）,Bax表达水平下降（P＜0．05）,Bcl－2／Bax比值升高（P＜0．05）。结论：羟基积雪草苷预处理能通过减少心肌细胞凋亡、抗脂质过氧化物产生等机制,对心肌缺血再灌注损伤产生保护作用。     

二氮嗪、环孢菌素A拮抗Aβ1 42致胆碱能神经元凋亡的研究

目的研究ATP敏感性钾离子通道开放剂二氮嗪、环孢菌素A及两者协同对β 淀粉样蛋白（Aβ1 42）致原代培养基底前脑胆碱能神经元凋亡的影响。方法采用2?μmol/L的Aβ1 42对原代培养大鼠胆碱能神经元进行干预,建立阿尔茨海默病（AD）细胞凋亡模型;采用500?μmol/L二氮嗪(预处理1?h)、20?μmol/L环孢菌素A以及两者协同对其干预,作用不同时间（24、72?h）后置于倒置显微镜下观察细胞形态;采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率,Wes tern blot法检测细胞内凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果① Aβ1 42作用胆碱能神经元72?h后,Bcl 2表达量降低（P＜0.01）,细胞色素C、Caspase 3、Cleaved caspase 3的表达量增加（P＜0.01,P＜0.001,P＜0.01）,Bax未见明显变化,Bcl 2/Bax比值降低（P＜0.01）,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低（P＜0.001）;② 二氮嗪、环孢菌素A以及两者协同作用24?h后Bcl 2的表达增加（P＜0.05, P＜0.01,P＜0.01）,作用72h能明显增加Bcl 2的表达(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),并提升Bc 2/Bax比率而抑制细胞色素C、Caspase 3、Cleaved caspase 3表达量(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),细胞存活率均增高(P＜0.01,P＜0.001)。结论Aβ1 42作用胆碱能神经元72?h能促使细胞凋亡,二氮嗪与环孢菌素A及两者协同可以明显拮抗Aβ1 42致细胞凋亡作用。     

当归对心肌梗塞后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的:探讨当归对大鼠心肌梗塞后梗塞灶边缘区心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法: 雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、心梗组(MI组)、当归干预组(MI+Angelica 组)。经结扎大鼠冠状动脉左前降支制备心肌梗塞模型,MI+Angelica组于造模24 h后,每日每只大鼠腹腔注射50%当归注射液3.5~4.0ml(含生药量1.75~2 g),MI组和 Sham组注射同等剂量的生理盐水,术后 1, 2, 3, 4 周处死动物。分别采用TUNEL染色及免疫组织化学法检测心肌细胞凋亡数、心肌细胞凋亡加速基因 Bax和凋亡抑制基因 Bcl 2 的蛋白表达水平。结果:① MI组和MI+Angelica组梗塞灶边缘区均有心肌细胞凋亡; 但MI+Angelica组心肌细胞凋亡数明显低于MI组(P< 0.01); ②与Sham组相比,MI组和MI+Angelica组Bax和Bcl 2基因的蛋白表达均明显升高,加入当归干预后,进一步增加Bcl 2基因的表达(与MI组比, P< 0.01),明显抑制Bax基因的表达(与MI组比, P< 0.01)。结论:心肌梗塞后梗塞灶边缘区有大量的心肌细胞凋亡,当归通过上调凋亡抑制基因Bcl 2和下调凋亡加速基因Bax的表达, 而抑制该区的心肌细胞凋亡, 进而减少梗塞灶边缘区心肌细胞的坏死, 有助于心肌梗塞的治疗和预防心肌梗塞后并发症的发生。     

miR-451a对慢性心衰细胞模型心肌细胞H9c2凋亡与自噬的影响

目的探究miR-451a对慢性心衰细胞模型心肌细胞H9c2凋亡与自噬的作用机制。 方法采用1 μmol/L阿霉素(DOX)建立慢性心衰细胞模型。将细胞实验分为Control组(正常心肌细胞H9c2)、DOX组(DOX培养)、DOX+miR-NC组(DOX培养转染对照miR-NC)、DOX+miR-451a组(DOX培养转染miR-451a模拟物miR-451a)、DOX+miR-451a+CCI-779组(DOX和CCI-779培养转染miR-451a)。qRT-PCR检测各组细胞miR-451a相对表达水平；CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖活性与凋亡；Western blotting检测剪切的Caspase-3(cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3I(LC3I)、LC3II、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70s6k、磷酸化mTOR(p-mTOR)、p-p70s6k蛋白表达。 结果成功建立慢性心衰细胞模型。与Control组比较,DOX组miR-451a相对表达水平、细胞活性、p-mTOR、p-p70s6k蛋白表达降低,而凋亡率、cleaved-Caspase-3、Bax、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达升高。与DOX+miR-NC组比较,DOX+miR-451a组miR-451a相对表达水平、细胞活性、p-mTOR、p-p70s6k蛋白表达升高,而凋亡率、cleaved-Caspase-3、Bax、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达降低。与DOX+miR-451a组比较,DOX+miR-451a+CCI-779组细胞活性降低,凋亡率、cleaved-Caspase-3、Bax、Beclin-1、LC3II/I蛋白表达升高。 结论miR-451a通过抑制mTOR信号通路促进慢性心衰细胞模型心肌细胞H9c2凋亡和自噬。     

熊果酸治疗急性胰腺炎大鼠的效果及作用机制

【摘要】目的 探讨熊果酸(UA)对急性胰腺炎(AP)大鼠的治疗作用以及可能的作用机制。方法 30只雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、急性胰腺炎组（AP组）和熊果酸组（UA组）,每组10只。除假手术组外,其余两组采用逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠（1 mL/ kg）诱导大鼠AP模型,假手术组注射等量生理盐水,造模30 min后,UA组给予熊果酸150 mg/kg灌胃,其余两组灌等体积蒸馏水,灌胃12 h后处死大鼠,收集胰腺和血清。酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中白介素1β（IL 1β）、白介素6（IL 6）、肿瘤坏死因子α（TNF α）含量,全自动生化分析仪测定血清中淀粉酶含量,HE和TUNEL染色观察胰腺病理和凋亡情况,蛋白免疫印迹实验检测胰腺Bcl 2、Bax、cleaved caspase3、p38MAPK、p p38MAPK表达情况,实时荧光定量PCR检测p38MAPK mRNA表达水平。结果 与AP组相比,UA组血清淀粉酶、TNF α、IL 1β、IL 6水平显著下降（P＜001）,胰腺病理情况好转,凋亡细胞减少,Bax/Bcl 2、p p38MAPK/ p38MAPK比值和cleaved caspase3表达量显著降低（P＜001）。结论 熊果酸能降低血清炎性因子和淀粉酶水平,改善胰腺病理损伤和凋亡,其作用机制可能与抑制p38MAPK活性有关。     

多柔比星对乳鼠心肌细胞TLR2、TLR4表达的影响

目的:观察Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(TLR4)在多柔比星(doxorubicin,DOX)损伤乳鼠心肌细胞中的表达,探讨多柔比星在心肌损伤中的可能发病机制。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,将培养的乳鼠心肌细胞随机分为2组,对照组将心肌细胞悬液换用无血清培养基继续培养,未加任何药物;多柔比星组在培养液中加入多柔比星1 mg/L。作用6 h后免疫组织化学法检测心肌细胞TLR2、TLR4蛋白表达;分别作用2,6 h后用蛋白质印迹法对TLR2、TLR4在心肌细胞的表达水平进行半定量分析。结果:多柔比星组心肌细胞TLR2、TLR4的表达较对照组明显增加(P<0.01)。结论:TLR2、TLR4作为模式识别受体可能介导了多柔比星心肌细胞损伤的固有免疫反应,是多柔比星心肌细胞损伤的机制之一。     

内毒素脂多糖诱导人牙髓细胞凋亡的机制

目的观察内毒素脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)对体外培养的人牙髓细胞的致凋亡作用及其对凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3)、B细胞淋巴瘤 2（Bcl 2）、B细胞淋巴瘤相关蛋白X（Bax）活性的影响。方法用不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、10.00、100.00?mg/L)的LPS作用于细胞,采用MTT染色法检测LPS对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡;采用免疫组织化学染色技术检测细胞的caspase 3、Bcl 2、Bax表达变化。结果不同浓度LPS组细胞的生长与对照组相比均受到显著的抑制(P＜0.05),细胞增殖抑制率呈剂量依赖关系;流式细胞术检测结果显示,不同浓度的LPS作用细胞72?h,细胞的凋亡率分别为3.1%、3.5%、12.1%、14.4%、24.3%、59.7%;免疫组织化学染色显示Bax表达增强,Bcl 2、caspase 3表达减弱。结论LPS可显著地抑制人牙髓细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低Bcl 2、caspase 3活性,升高Bax活性,并呈明显的量效关系。