二至丸治疗斑马鱼骨质疏松模型效益观察及破骨细胞自噬机制

目的?观察二至丸对泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松模型的治疗疗效,并明确其对破骨细胞分化的自噬调控机制。方法?选取正常培养3?d后活力较好的斑马鱼幼鱼,用25?μmol/L泼尼松龙建立斑马鱼骨质疏松症模型,造模2?d后分组,分为空白组、模型组、依替磷酸二钠(ED)组(300?mg/L)、墨旱莲组(50?μg/mL)、女贞子组(50?μg/mL)和二至丸组(100?μg/mL)。4?d后,用0.2%钙黄绿素进行染色,拍照并统计斑马鱼脊椎骨荧光面积;实时荧光定量PCR检测斑马鱼成骨分化基因碱性磷酸酶（ALP）、骨形态发生蛋白2b（Bmp-2b）、Runt相关转录因子2（Runx2）和破骨分化基因组织蛋白酶K（CTSK）、活化T细胞核因子（NFATC-1）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的表达。培养RAW264.7细胞至80%~90%密度后分为空白组、LPS诱导组(10?μg/L)、二至丸诱导组（100?μg/mL）、墨旱莲诱导组(50?μg/mL)和女贞子诱导组(50?μg/mL)。经LPS诱导细胞破骨分化及药物干预4?d后,实时荧光定量PCR检测RAW264.7细胞TRAP、CTSK、NFATC-1和自噬相关基因5（ATG5）,泛素结合蛋白62（p62）,雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和酵母ATG6同源物（Beclin）的mRNA表达。结果?与空白组比较,模型组椎骨荧光面积显著减少（P<0.01）,成骨标志基因表达显著降低（P<0.05~0.01）,破骨标志基因表达显著升高（P<0.05~0.01）;与模型组比较,ED组、女贞子组及二至丸组均显著改善了斑马鱼骨质疏松症（P<0.01）,且二至丸组显著优于墨旱莲组及女贞子组（P<0.01）。qPCR显示相较于空白组,模型组成骨分化标志物表达显著降低（P<0.05~0.01）,破骨分化标志物表达显著升高（P<0.05~0.01）。与模型组比较,ED组、墨旱莲组、女贞子组及二至丸组成骨标志基因表达显著升高（P<0.05~0.01）,二至丸组破骨标志基因表达显著降低（P<0.01）。体外研究显示,LPS诱导的细胞破骨分化基因CTSK、TRAP和NFATC-1及自噬相关基因mTOR、ATG5、Beclin、p62表达均升高（P<0.01）,二至丸组、墨旱莲组、女贞子组均可显著降低破骨分化基因和自噬相关基因的表达（P<0.05~0.01）。结论?二至丸可显著改善斑马鱼骨质疏松模型的临床症状,其机制可能与通过降低自噬相关基因表达从而抑制破骨细胞分化有关。      

雌激素对去卵巢大鼠骨组织Wnt16、β-catenin、OPG、RANKL表达的影响

目的研究雌激素对去卵巢大鼠骨组织中Wnt16、β-catenin、OPG、RANKL表达的影响,探讨雌激素对骨组织的保护作用。方法选取3月龄Wistar雌性大鼠40只,随机分为假手术组、去势组、实验组1和实验组2。两组实验组分别给予17β-雌二醇皮下注射4周和16周,其余两组给予等量0.9%氯化钠溶液。16周后测定骨组织中Wnt16、OPG、RANKL、β-catenin表达量,HE染色分析大鼠胫骨平台处骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数目（Tb.N）和骨小梁间距（Tb.SP）变化,ELISA法测定血清雌二醇（E2）水平。结果假手术组、实验组2与去势组比较,OPG、β-catenin、Wnt16mRNA、血清E2水平、Tb.Th和Tb.N明显升高,RANKL水平和Tb.SP明显下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。实验组1与去势组相比,β-catenin、血清E2水平、Tb.Th和Tb.N明显升高,RANKL水平和Tb.SP明显下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论雌激素可能通过上调Wnt16、β-catenin、OPG表达,下调RANKL表达,来预防骨质疏松。     

阿仑磷酸钠对大鼠成骨细胞代谢调控的研究

目的 探讨阿仑磷酸钠对大鼠成骨细胞代谢调控的影响.方法 取新生SD大鼠的颅骨,胶原酶法培养成骨细胞.用MTT、ALP检测和Western Blot方法 观察阿仑磷酸钠对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和OPG、RANKL蛋白表达的影响.结果 阿仑磷酸钠对成骨细胞增殖无明显影响,但能提高成骨细胞碱性磷酸酶活性,增强OPG蛋白的表达,降低RANKL蛋白的表达(P<0.05或P<0.01).结论 阿仑磷酸钠能促进成骨细胞的分化,并通过调节OPG/RANKL蛋白比值影响骨代谢.     

葛根素治疗去卵巢小鼠骨量丢失的疗效及对RANKL/RANK/OPG信号通路的影响

目的探讨葛根素治疗去卵巢小鼠骨量丢失的疗效及对核因子κB受体活化因子（RANKL）/核因子κB受体活化因子配体（RANK）/骨保护素（OPG）信号通路的影响。方法采用随机数字表法将30只雌性12周龄C57BL/6小鼠分为假手术组、模型组和葛根素治疗组,每组10只。模型组和葛根素治疗组小鼠切除双侧卵巢并结扎输卵管,假手术组小鼠去除卵巢周围等量的脂肪组织。术后第3天,葛根素治疗组小鼠给予100mg/kg剂量的葛根素（溶于0.4ml0.9%氯化钠溶液）灌胃干预,隔天1次,持续8周。模型组小鼠给予0.4ml0.9%氯化钠溶液灌胃,隔天1次,持续8周。假手术组小鼠不作处理。治疗8周后,摘取小鼠双侧股骨,采用微型计算机断层扫描仪扫描检测骨密度（BMD）和骨微结构变化,ELISA法检测血清β-I型胶原交联羧基末端肽（β-CTX）和抗酒石酸酸性磷酸酶5b（Trap5b）水平,抗酒石酸酸性磷酸酶（Trap）染色观察破骨细胞数量,qRT-PCR检测骨组织RANKL和OPGmRNA表达情况。结果与假手术组比较,模型组小鼠BMD、骨体积分数（BV/TV）、骨小梁数目（Tb.N）均减少,骨小梁间距（Tb.Sp）增宽,血清β-CTX、Trap5b水平均升高,破骨细胞数量增加,RANKLmRNA表达水平升高,OPGmRNA表达水平、OPG/RANKL比值均降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与模型组比较,葛根素治疗组BMD、BV/TV、Tb.N均增加,Tb.Sp变窄,血清β-CTX、Trap5b水平均降低,破骨细胞数量减少,RANKLmRNA表达水平降低,OPGmRNA表达水平、OPG/RANKL比值均升高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论葛根素能够延缓去卵巢小鼠骨量丢失,其机制可能是通过调控RANKL/RANK/OPG信号通路,抑制破骨细胞介导的骨吸收过程。     

佐剂性关节炎大鼠骨密度及血清骨保护素和核因子-κB受体激活因子配体的变化

目的：观察佐剂性关节炎大鼠的骨密度、血清骨保护素（ OPG）及核因子-κB受体激活因子配体（ RANKL）的表达。方法：将30只SD大鼠随机均分为正常对照组、模型1组、模型2组,除正常对照组外,其余大鼠均制成佐剂性关节炎模型。造模后第21天处死模型1组,第28天处死正常对照组和模型2组。以双能X线吸收测定法测量整体右侧胫骨和距胫骨远端约1 cm兴趣区检测骨密度;ELISA方法检测血清OPG、RANKL的表达。结果：模型1组大鼠兴趣区的骨密度明显低于正常对照组（P〈0.01）;模型2组大鼠兴趣区的骨密度均较模型1组和正常对照组显著降低（P〈0.01）;3组大鼠整体右侧胫骨骨密度值差异无统计学意义（P〉0.05）。模型1组、模型2组血清OPG、RANKL表达及OPG/RANKL比值与正常对照组差异均有统计学意义（P〈0.01）。同时模型1组与模型2组血清 OPG、RANKL 表达及 OPG/RANKL 比值差异亦均有统计学意义（P 〈0.01）。结论：佐剂性关节炎大鼠胫骨远端骨丢失的发生在整体胫骨之前。造模后第21天和第28天的 OPG 表达降低, RANKL表达升高,OPG/RANKL比值降低。     

壮骨止痛方对骨质疏松大鼠核因子κB受体活化因子配体和骨保护素的影响

目的 探讨壮骨止痛方对骨质疏松大鼠核因子κB受体活化因子（receptor activator of NF-κB，RANK）、核因子κB受体活化因子配体（receptoractivator of NF-κB ligand，RANKL）和骨保护素（osteoprotegrin，OPG）表达的影响。方法 将实验动物分为假手术组、模型组、壮骨止痛方高剂量治疗组、壮骨止痛方低剂量治疗组、雌二醇组5组，用酶联免疫免法测定大鼠血清中OPG、RANKL的水平。结果 模型组大鼠血清OPG降低、RANKL水平升高，经壮骨止痛方药物干预后，大鼠血清OPG水平明显下降、RANKL水平明显下降。结论 壮骨止痛方药物可以降低大鼠血清RANKL/OPG的比值，激活RANKL/RANK/OPG信号系统，达到预防治疗骨质疏松的作用。     

非诺贝特对高甘油三酯血症并骨质疏松大鼠骨代谢的影响

目的 探讨非诺贝特对去卵巢骨质疏松并高甘油三酯(TG)血症大鼠股骨中细胞核因子κB受体活化因子配体/护骨素(RANKL/OPG)mRNA表达的影响.方法 将40只3月龄雌性SD大鼠,用果糖饲养复制高TG模型,大鼠共分为去卵巢+果糖组、去卵巢+果糖+非诺贝特(FF)组、去卵巢+普食组、假手术+果糖组.12周后取股骨检测细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL) mRNA、护骨素(OPG)mRNA表达水平.结果 去卵巢+果糖组的TG水平高于去卵巢+普食组(P＜0.01),也高于去卵巢+果糖+FF组(P＜0.01);去卵巢+果糖组RANKL mRNA/OPG mRNA水平,均高于去卵巢+果糖+FF组、去卵巢+普食组和假手术+果糖组(P＜0.01或＜0.05).结论 非诺贝特可通过降低TG而保持RANKL mRNA/OPG mRNA的平衡.     

鹿角壮骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨细微结构及骨代谢影响的实验研究

目的 观察鹿角壮骨胶囊对去卵巢大鼠骨细微结构及骨代谢的影响并探讨其机制.方法 120只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、仙灵骨葆组,鹿角壮骨胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组,除假手术组外,其余均切除双侧卵巢,干预12周后检测各组血清雌二醇(E2)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)、骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型原胶原N-端前肽(PINP)和Ⅰ型胶原交联C-末端肽(S-CTX)水平,采用双能X线骨密度测量仪测定左侧股骨骨密度;显微镜下观察右股骨小梁的结构变化,并检测右股骨组织形态计量学参数平均骨小梁面积(％Tb.Ar)、骨小梁宽度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)以及骨小梁数目(Tb.N),采用免疫组织化学染色法检测大鼠股骨骨保护蛋白(OPG)及核因子-κ β受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达.结果 ①鹿角壮骨胶囊各组血清E2、TRACP-5b及BALP高于模型组(P＜0.01),血清PINP和S-CTX水平低于模型组(P＜0.01);②鹿角壮骨胶囊各组股骨骨密度高于模型组(P＜0.01);③鹿角壮骨胶囊各组Tb.Ar、Tb.Th和Tb.N显著高于模型组(P＜0.01),Tb.Sp显著低于模型组(P＜0.01);④鹿角壮骨胶囊各组股骨OPG蛋白表达高于模型组(P＜0.01),股骨RANKL蛋白表达低于模型组(P＜0.01).结论 鹿角壮骨胶囊不仅能有效地改善去卵巢大鼠激素水平和骨细微结构,而且可提高大鼠骨密度,降低骨转化.     

重组人骨保护素对牙周炎大鼠牙槽骨RANKL 、OPG蛋白表达的影响

目的：探讨重组人骨保护素（rhOPG）对牙周炎大鼠牙槽骨RANKL、OPG蛋白表达的影响,为rhOPG应用于牙周炎的治疗提供实验依据。方法选择22只Wistar大鼠,采用随机数字表法选择2只健康大鼠作为健康组;其余20只作为实验组,建立牙周炎大鼠模型,再将其分为实验对照组（n＝10）和rhOPG组（n＝10）,rhOPG组大鼠于上颌第2磨牙牙周袋间隙局部注入10 mg／kg rhOPG治疗。实验对照组大鼠于相同部位注射等体积灭菌注射用水。采用链霉素抗生物素蛋白‐过氧化物酶（SP）检测牙槽骨RANKL、OPG蛋白的表达。结果与健康组比较,实验组大鼠牙槽骨OPG表达水平较低,差异有统计学意义（P＜0．05）,而RANKL表达水平两组差异无统计学意义（P＞0．05）。与实验对照组比较,rhOPG组大鼠牙槽骨组织OPG蛋白的表达水平明显上调,而RANKL蛋白的表达明显下调（P＜0．05）。治疗后rhOPG组大鼠牙槽骨中OPG表达水平明显高于治疗前,而RANKL表达水平明显低于治疗前,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 rhOPG能调节牙周炎大鼠牙槽骨RANKL、OPG的表达。     

TRAF6敲低对低氧状态下IL⁃17调控人牙周膜成纤维细胞表达OPG及RANKL的影响

目的：探讨敲低肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor receptor?associated factor 6,TRAF6）对人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）在低氧状态经白介素17（interleukin 17,IL?17）刺激表达骨保护素（osteoprotegerin,OPG）及核因子κB受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor?κB ligand,RANKL）的影响。方法：将hPDLCs细胞设为常氧加IL?17组、低氧加IL?17组以及单纯低氧组,每组内分为阴性对照组（TRAF6?NC组）和干扰组（TRAF6?shRNA组）。将靶向TRAF6基因的shRNA慢病毒载体（TRAF6?shRNA）感染hPDLCs,通过倒置显微镜观察病毒感染效率并用RT?PCR方法验证,用Western blot及RT?PCR方法检测分析hPDLCs低氧诱导因子（hypoxia inducible factor?1,HIF?1）、OPG及RANKL的表达变化。结果：低氧加IL?17组RANKL与OPG蛋白相对表达量的比值RANKL/OPG高于常氧加IL?17组及低氧组。在低氧加IL?17条件下,与TRAF6?NC组相比,TRAF6?shRNA组RANKL表达减少,RANKL与OPG相对表达量的比值RANKL/OPG减少。结论：TRAF6参与低氧状态下IL?17刺激hPDLCs表达骨吸收分子的调控,敲低TRAF6可使低氧状态下IL?17诱导的hPDLCs表达骨吸收分子减少。     

金刚丸对骨质疏松大鼠骨代谢和血清骨钙素的影响

目的 探讨金刚丸对骨质疏松大鼠骨代谢和血清骨钙素的影响.方法 将60只SPF级大鼠随机分为正常对照组、模型组及高、中、低剂量组和己烯雌酚组,每组10只.高、中、低剂量金刚丸组每天分别以3.24、1.62、0.81 g/kg的剂量灌胃1次;己烯雌酚组大鼠每天给予1.0 mg/kg灌胃1次;正常对照组及模型组给予等体积的生...     

PERK信号通路对实验性绝经后骨质疏松雌性大鼠成骨细胞分化的影响

目的：探讨实验性雌性大鼠绝经后骨质疏松（PMOP）治疗前后骨组织中PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG的变化,阐明PERK信号通路在PMOP发生中的作用。方法：复制雌性大鼠卵巢去势骨质疏松模型。45只大鼠分为正常对照组（大鼠不做处理,15只）、骨质疏松组（雌性大鼠卵巢摘除,15只）和骨质疏松治疗组（大鼠卵巢摘除后尾静脉注射雌激素,15只）。观察各组大鼠血清中Ⅰ型胶原（ColⅠ）、碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OCN）水平。饲养3个月后取各组大鼠股骨骨干做病理切片,RT-PCR法检测各组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG基因表达水平,Westernblotting法分析PERK、ATF4、Runx2、osterix、RANKL和OPG蛋白表达水平。结果：与对照组比较,骨质疏松组大鼠血清中ColⅠ、ALP和OCN水平明显降低（P<0.05或P<0.01）;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠血清中ColⅠ、ALP和OCN水平明显升高（P<0.01）。与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2和osterix基因表达水平明显下降（P<0.05或P<0.01）,RANKL基因表达水平明显升高（P<0.01）;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨组织中PERK、ATF4、Runx2和osterix基因表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,RANKL基因表达水平明显降低（P<0.01）。与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中PERK、Runx2和osterix蛋白表达水平明显下降（P<0.05或P<0.01）,RANKL蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨组织中PERK、Runx2和osterix蛋白表达水平明显上升（P<0.05或P<0.01）,RANKL蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。HE染色,与对照组比较,骨质疏松组大鼠骨组织中骨吸收陷窝变大,骨吸收增强,导致骨质流失;与骨质疏松组比较,骨质疏松治疗组大鼠骨质吸收减弱,骨骼恢复正常结构。结论：雌性大鼠卵巢切除及注射雌激素治疗后,其骨组织中PERK表达趋势与成骨细胞转录因子Runx2和osterix变化一致,与破骨细胞转录因子RANKL表达相反,提示PMOP发病时成骨细胞功能减弱与PERK表达下降有关。     

桃叶珊瑚苷对去势大鼠骨质疏松的治疗作用及其机制研究

目的 探讨桃叶珊瑚苷治疗骨质疏松的作用及可能的机制,为临床治疗骨质疏松提供实验基础。方法 取48只健康雌性Wistar大鼠,随机分为桃叶珊瑚苷高剂量组（10 mg／kg）、桃叶珊瑚苷低剂量组（5 mg／kg）、模型组（等量生理盐水）、假手术组（等量生理盐水）4组,每组12只。除假手术组外,其余3组大鼠麻醉后切除双侧卵巢构建骨质疏松模型。各组大鼠连续给药8周后处死,收集血清样本,采用酶联免疫测试方法（ELISA）检测血清中碱性磷酸酶（ALP）与骨钙素（BGP）含量;取大鼠左侧股骨测定骨密度;观察胫骨组织形态改变;取大鼠右侧股骨测荧光定量PCR检测骨组织中OPG、RANK、RANKL mRNA表达。结果 ELISA结果显示,与假手术组比较,模型组ALP、BGP含量差异有统计学意义(P<0.01) ,桃叶珊瑚苷高剂量组ALP、BGP含量降低与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,高剂量组大鼠骨密度值显著升高(P<0.01),低剂量组骨密度值升高,差异有统计学意义（P<0.05）。骨组织形态发现,桃叶珊瑚苷高剂量组骨小梁结构紧密, 连续性较好,优于模型组。桃叶珊瑚苷高剂量组能提高了骨组织中OPG mRNA表达,降低了RANK mRNA的表达。结论 桃叶珊瑚苷能够促进骨形成,减缓骨丢失,其作用机制可能通过 OPG/RANKL/RANK系统发挥作用。     

强骨合剂通过Wnt3a/β-catenin/VEGF信号通路促进血管生成改善围绝经期大鼠骨质疏松的研究

  目的  探讨强骨合剂对围绝经期骨质疏松SD大鼠的疗效及其可能的作用机制。  方法  采用HPLC建立强骨合剂标准指纹图谱。将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、强骨合剂高剂量(12 g · kg-1)组、低剂量(6 g · kg-1)组, 每组10只。双侧卵巢切除法制备围绝经期大鼠骨质疏松模型, 分别灌胃给予生理盐水,雌二醇,高、低剂量强骨合剂, 连续给药30 d。记录大鼠体质量和子宫质量, 检测大鼠骨力学相关指标, 股骨HE染色观察成骨细胞量及骨小梁面积。qPCR检测Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG mRNA表达水平; 免疫荧光检测VEGFR-2、CD31, 评价血管生成情况; Western blot检测股骨组织Wnt3a、p-GSK3β、VEGF、β-catenin、Lamin蛋白表达情况。  结果  10批次提取的强骨合剂指纹图谱相似度均大于0.9, 表明10批样品质量稳定。与模型组比较, 雌二醇组,强骨合剂高、低剂量组可显著改善大鼠子宫指数、骨密度、骨力学性能指标(P < 0.05, P < 0.01), 明显改善骨微结构, 提高股骨组织中Wnt3a、β-catenin、VEGF、OPG mRNA水平(P < 0.05, P < 0.01), 以及VEGF、CD31、Wnt3a、p-GSK3β、β-catenin、Lamin蛋白表达水平(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  强骨合剂可能通过Wnt3a/β-catenin信号通路调节VEGF表达, 促进血管生成, 从而提高大鼠骨密度, 改善骨组织形态, 进而发挥抗骨质疏松的作用。      

慢性间歇低氧对小鼠骨密度和骨代谢的影响

目的：探讨慢性间歇低氧（CIH）对骨密度（BMD）和骨代谢的影响。方法将16只12周龄C57BL/6雄性小鼠按随机数字表法分为慢性间歇低氧组（CIH组）和正常对照组（CON组）,每组8只。CON组小鼠在正常环境下饲养,CIH组小鼠在间歇低氧环境下饲养,低氧暴露时间为每日9：00-17：00,6d/周,共8周。于8周末取血,用ELISA法测定血清抗酒石酸酸性磷酸5b （TRACP-5b）、骨钙素（OC）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;取右侧股骨检测其BMD;取左侧股骨观察骨组织形态学改变,并分别采用免疫组化和real- time qPCR法检测骨保护蛋白（OPG）和核因子-κβ受体活化因子配体（RANKL）和其mRNA表达。结果与CON组相比,CIH组小鼠BMD、血清OC水平及OPG/RANKL mRNA比值均明显下降（P＜0.05或0.01）,而血清TRACP-5b、IL-6和TNF-α水平、骨组织内RANKL和mRNA表达均明显升高（P＜0.05或0.01）;但骨组织内OPG和mR-NA表达差异均无统计学意义（均P＞0.05）;小鼠股骨干骺端骨小梁分布稀疏,变细及断裂。血清IL-6水平与BMD呈负相关（P＜0.05）,与骨组织RANKL mRNA呈正相关（P＜0.01）;血清TNF-α水平与BMD呈负相关（P＜0.01）,与骨组织RANKL mRNA呈正相关（P＜0.05）。结论 CIH能导致骨吸收增加、骨形成下降和BMD下降,与低氧以及CIH引起的IL-6、TNF-α水平升高导致RANKL升高有关。     

长期应用糖皮质激素对大鼠骨组织中HMGB1、RAGE、OPG和RANKL表达的影响

目的:观察长期应用糖皮质激素(GC)对大鼠骨组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖化终产物受体(RAGE)、骨保护素(OPG)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响,探讨其导致激素性骨质疏松症的相关机制。方法:将48只健康成年SD大鼠随机分为低、中、高剂量GC组和对照组,每组12只。低、中、高剂量GC组大鼠分别给予肌肉注射醋酸泼尼松龙7.0、12.5、25.0 mg·kg^-1,对照组大鼠同时给予相同部位注射等量生理盐水。所有大鼠每周注射2 次,干预4周后取材。ELISA法检测大鼠血清中HMGB1、OPG和RANKL水平,HE染色检测大鼠骨组织病理形态学,免疫组织化学和Western blotting法检测大鼠骨组织中HMGB1、RAGE、OPG和RANKL蛋白的表达水平。结果:ELISA检测,各剂量GC组大鼠血清中HMGB1水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);OPG水平均较对照组降低,且随GC剂量增加OPG水平呈下降趋势,其中高剂量GC组与对照组和低、中剂量GC组OPG水平比较差异有统计学意义(P<0.05);各剂量GC组大鼠血清中RANKL水平均较对照组升高,且随GC剂量增加呈上升趋势,其中高剂量GC组与对照组和低、中剂量GC组RANKL水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色, 低剂量GC组大鼠股骨组织接近正常骨组织,中剂量GC组大鼠股骨组织镜下见软骨下区出现骨小梁变细,骨小梁间隙内出现肉芽纤维组织,可见坏死骨细胞及空骨陷窝;高剂量GC组大鼠股骨组织骨小梁紊乱并存在骨折,脂肪细胞空泡变性,骨髓腔水肿,造血细胞稀少,骨小梁周边成骨细胞数量减少,多核破骨细胞增多。免疫组织化学和Western blotting法检测,各剂量GC组大鼠骨组织中HMGB1蛋白表达水平均较对照组明显升高(P<0.05),各剂量GC组大鼠HMGB1蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);各组大鼠骨组织中RAGE蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);各剂量GC组大鼠骨组织中OPG蛋白表达水平均较对照组明显降低(P<0.05),各剂量GC组大鼠OPG蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05);中和高剂量GC组大鼠骨组织中RANKL蛋白表达水平均较对照组明显升高(P<0.05),中剂量GC组大鼠骨组织中RANKL表达低于高剂量组(P<0.05)。结论:大鼠使用过量GC后,骨组织中HMGB1水平升高,OPG/RANKL比例降低,这可能是激素性骨质疏松症的发病机制之一。     

牛膝多糖对老年骨质疏松大鼠模型骨代谢及生物力学特征的影响

目的 探讨牛膝多糖对老年骨质疏松大鼠模型骨代谢及生物力学特征的影响。 方法 将120只10月龄雌性SD大鼠随机分为6组，除对照组和假手术组，均以双侧卵巢摘除术制备骨质疏松模型。术后饲养3个月，低、中、高剂量组以100、200、400 mg/(kg·d)的牛膝多糖灌胃。采用ELISA实验测腹腔静脉血骨钙素(OC)、骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TPACP5b)、Ⅰ型胶原交联N-末端肽(NTX)与Ⅰ型胶原交联C-末端肽(CTX)水平；WB实验测定股骨与胫骨骨髓组织核因子κB受体活化因子(RANK)、RANK配体(RANK ligand，RANKL)及骨保护素(OPG)表达；液压伺服材料试验机测定椎体及股骨的最大应力和断裂吸收能量。 结果 与对照组、假手术组相比，模型组大鼠的血清OC和BAP含量，骨髓组织OPG和RANK表达降低，血清TPACP5b、NTX、CTX含量，骨髓组织RANKL表达升高；与模型组相比，低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠血清OC和BAP含量，骨髓组织OPG和RANK表达依次升高，血清TPACP5b、NTX、CTX含量，骨髓组织RANKL表达依次降低，组间差异有统计学意义(P＜0.05)；与对照组、假手术组相比，模型组大鼠的椎体和双侧股骨的最大应力及断裂吸收能量明显降低；与模型组相比，低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠的最大应力及断裂吸收能量依次升高；组间差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 牛膝多糖能够改善老年骨质疏松大鼠的骨代谢，提高骨密度和骨抗压能力，在抗骨质疏松领域具有潜在的应用价值。      

β-隐黄素对大鼠牙槽骨吸收的影响

目的 评估β-隐黄素对大鼠牙槽骨吸收的影响并探讨其在体内的作用机制.方法 30只雄性SD大鼠随机分为三组:正常组(N组)、牙周炎组(P组)、β-隐黄素干预组(E组).P组、E组双侧上颌磨牙用结扎加注射内毒素的方法诱导牙周炎模型.E组用β-隐黄素(12 μg/大鼠)进行干预,每48 h注射一次,共3次.动物在第8天被处死,取双侧上颌骨.右侧样本进行形态学分析,测量釉牙骨质界到牙槽嵴顶的距离.左侧样本进行组织学和免疫组织化学分析,检测牙槽嵴顶附近核因子kB受体活化因子配体(RANKL),骨保护素(OPG)的表达.用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测破骨细胞(OC).结果 E组与P组相比牙槽骨丧失(ABL)减少,炎症细胞浸润减少,RANKL免疫标记细胞及 TRAP阳性多核细胞减少(P＜0.05), OPG表达增加(P＜ 0. 05).而E组与N组相比,ABL值和OC数目差异无统计学意义.结论 β-隐黄素可通过上调OPG/RANKL的比值,减少成熟OC的数目从而预防牙槽骨的吸收.     

去卵巢大鼠骨质疏松症中Sost对Wnt信号通路的影响

目的观察去卵巢大鼠骨质疏松时股骨中Sost、lrp5和β-catenin的表达水平的变化,探讨Sost在去卵巢骨质疏松发生中的作用。方法 20只雌性SD大鼠随机分为去卵巢组和假手术组（对照组）,去卵巢组切除大鼠双侧卵巢诱发骨质疏松,假手术组开腹后仅切除少量脂肪即缝合。确定造模成功后自腹主动脉取血测定E2水平,利用骨骼强度检测仪对一侧股骨进行生物力学检测并用双能X线骨密度仪进行骨密度测定;提取另一侧股骨总RNA,行RT-PCR检测Sost、lrp5和β-catenin mRNA水平;提取总蛋白,利用Western blot检测Sost表达产物sclerosteosis、Lrp5和β-catenin的蛋白含量。结果与假手术组相比,去卵巢组大鼠血清E2浓度显著降低;股骨组织中Sost表达明显上调,lrp5的mRNA水平及蛋白水平检测变化不大,β-catenin mRNA变化不大,但蛋白含量显著减少;股骨抗弯曲力和抗压碎力明显减弱,骨密度降低。结论卵巢摘除术可导致SD大鼠E2分泌明显减少,进而诱发骨质疏松在此过程中伴有Sost基因表达水平增高,β-catenin降解增多,提示去卵巢后E2分泌减少导致大鼠骨质疏松发生其机制可能和Sclerosteosis竞争性结合LRP5,抑制Wnt通路,从而下调β-catenin有关。