补肾温阳中药对哮喘小鼠Foxp3-mRNA表达及CD4~+CD25~+调节性T细胞水平的影响研究

目的建立哮喘样气道炎症小鼠动物模型。观察补肾温阳中药对哮喘小鼠Foxp3-mRNA表达与活化以及对CD4+CD25+调节性T细胞的数量、分化与功能的影响,探讨补肾温阳法在防治过敏性哮喘气道炎症的作用机制。方法 100只BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组、哮喘模型组、中药干预组及中药+抗体干预组,除正常对照组外,其余各组均以卵白蛋白(OVA)致敏激发方法建立小鼠哮喘模型,中药+抗体干预组小鼠于激发前30min事先给予抗IL-10&抗TGF-β抗体滴鼻。同时,中药干预组组、中药+抗体干预组于实验的第1天至第21天,每只小鼠给予补肾温阳中药(用淫羊藿、巴戟天、补骨脂免煎颗粒配制500μl)灌胃qod,哮喘模型组、正常对照组予等量的生理盐水作对照。观察各组支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数结果;取小鼠左肺组织作病理切片观察炎症改变;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组BALF上清细胞因子IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度及血清IgE水平;分离小鼠脾脏细胞,以流式细胞仪方法检测CD4+CD25+Treg细胞比例;用RT-PCR方法检测转录因子Foxp3-mRNA的表达。结果哮喘模型组、中药+抗体干预组小鼠BALF中细胞总数以及淋巴细胞、中性粒细胞和EOS百分比分别均高于正常对照组、中药干预组(分别为P<0.01、P<0.05、P<0.05和P<0.01),而巨噬细胞百分比与正常对照组、中药干预组相比较,则分别有所降低(P<0.05)。正常对照组、中药干预组BALF中IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度分别高于哮喘模型组(P<0.01)和中药+抗体干预组(P<0.05);中药干预组BALF中IL-10、IFN-γ、TGF-β1浓度低于正常对照组(P<0.05);哮喘模型组BALF上清细胞因子(IL-10、IFN-γ、TGF-β1)浓度高于中药+抗体干预组(P<0.05)。血清IgE水平正常对照组、中药干预组均分别低于哮喘模型组(均为P<0.01)及中药+抗体干预组(均为P<0.05);中药干预组血清IgE水平低于正常对照组(P<0.05)。哮喘模型组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平较正常对照组、中药干预组均明显减低,差异有统计学意义(分别为P<0.01,P<0.05);与哮喘模型组、中药+抗体干预组比较,中药干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平显著增高,差异有统计学意义(均为P<0.05);与正常对照组比较,中药干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平较低,差异有统计学意义(P<0.01);与哮喘模型组比较,中药+抗体干预组小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量、FoxP3-mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(均为P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞、FoxP3-mRNA、细胞因子(IL-10、IFN-γ、TGF-β1)均参与了支气管哮喘的发病过程,补肾温阳中药可通过上调CD4+CD25+调节性T细胞数量、诱导FoxP3-mRNA的表达与活化、降低血清IgE水平及增加IL-10、IFN-γ、TGF-β1含量等机制来达到减轻哮喘炎症的作用。     

喘可治注射液诱导哮喘小鼠Foxp3~+调节性T细胞的免疫机制探讨

目的探讨喘可治注射液诱导Foxp3+调节性T细胞(Foxp3+Tr)在防治变应性哮喘的免疫调节机制。方法将Balb/C小鼠分为对照组、哮喘组、喘可治(CKZ)组三组,采取以OVA经腹腔注射致敏加滴鼻激发复制变应性哮喘模型,CKZ组给予喘可治注射液腹腔注射治疗,对照组与哮喘组给予生理盐水腹腔注射。分别观察各组小鼠的肺部病理改变,流式细胞术检测CD4、CD25、Foxp3的百分比,RT-PCR检测Foxp3、TGF-β、IL-10mRNA表达情况。结果①哮喘组较对照组表现出明显炎症反应,CKZ组较哮喘组气道炎症减轻;②哮喘组下调脾脏CD4+T、CD4+CD25+Tr、Foxp3+CD4+CD25+Tr比例;CKZ组上调CD4+T、CD4+CD25+Tr、Foxp3+CD4+CD25+Tr比例;哮喘组上调肺组织Foxp3、IL-10、TGF-βmRNA;CKZ组下调Foxp3、IL-10、TGF-βmRNA。结论哮喘小鼠表现出免疫异常的状态,喘可治注射液能够通过诱导Foxp3+调节性T细胞的生成,调整机体紊乱的免疫状态,使机体的免疫系统恢复平衡状态,从而发挥抑制炎症的免疫治疗作用。     

补肾益肺解毒法对Lewis肺癌小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞、Foxp3及B7-H3的影响

目的:研究补肾益肺解毒法对Lewis肺癌小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞(T regulatory cell,Treg)、转录因子Foxp3及共刺激因子B7-H3表达的影响。方法:建立32只6~8周龄C57BL/6雄性小鼠Lewis肺癌细胞皮下移植瘤模型后,将32只造模后小鼠随机分为模型组、中药组、化疗组及综合组,每组各8只,单笼饲养。模型组以0.4 m L生理盐水灌胃14 d,并分别在第1天、第3天、第5天腹腔注射生理盐水1 m L;中药组以0.4 m L中药液灌胃14 d,并分别在第1天、第3天、第5天腹腔注射生理盐水1 m L;化疗组以0.4 m L生理盐水灌胃14 d,分别在第1天、第3天、第5天腹腔注射DDP溶液1 m L;综合组以0.4 m L中药液灌胃14 d,在第1天、第3天、第5天腹腔注射DDP溶液1 m L。给予药物干预14d后,观察小鼠的一般状况、饲料消耗量、体质量、去瘤体质量、移植瘤质量等,流式细胞术检测各组小鼠外周血和移植瘤CD4~+CD25~+Treg细胞的比例、Foxp3以及B7-H3的含量。结果:补肾益肺解毒法可改善肺癌小鼠的行为体征,增加饲料消耗量、体质量和去瘤体质量,减少移植瘤重量,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。补肾益肺解毒法治疗可显著降低Lewis肺癌小鼠外周血和移植瘤CD4~+CD25~+Treg细胞、Foxp3以及B7-H3的水平,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:补肾益肺解毒法通过降低CD4~+CD25~+Treg细胞、Foxp3以及B7-H3的水平增强机体的抗肿瘤免疫应答发挥抑瘤作用。     

温阳补肾法治疗支气管哮喘作用机制的研究进展

支气管哮喘是严重影响人体健康的慢性呼吸道疾病,之前的诸多研究证实,肾虚与哮喘的关系密切,目前温阳补肾法治疗哮喘在临床上得到了广泛的运用。近年来从抗炎,改善气道痉挛以及调节HPA轴等方面深入探讨了温阳补肾法治疗哮喘的作用机制．从而为温阳补肾类中药治疗哮喘提供了科学依据。     

小青龙汤干预RORγt、Foxp3+在哮喘中的作用机制

支气管哮喘发病率高,西医治疗主要采用激素,长期应用不良作用明显,易致严重并发症,其防治是世界性难题。中医认为该病病机主要是寒饮伏肺,以温阳化饮法治之,疗效可靠,但生物学机制不清。新近研究发现,转录因子RORγt和Foxp3+可调控Th17/Treg细胞的分化和活性,防止促纤维化细胞因子释放,抑制纤维化进展,进而影响气道重塑。研究支气管哮喘寒饮伏肺证的气道重塑和小青龙汤改善气道重塑的机制,为哮喘气道重塑的临床治疗提供科学依据,客观反映小青龙汤治疗寒饮伏肺证哮喘的疗效具有重要意义。     

薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎小鼠Foxp3+CD4+CD25+调节性 T 细胞影响的研究

目的研究薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)小鼠外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的影响,探讨薏苡仁酯类风湿关节炎治疗中的可能机制。方法从25只小鼠随机选取5只为正常组,剩余20只小鼠进行CIA造模。造模成功后随机分为造模对照组10只及薏苡仁酯组10只。薏苡仁酯组予薏苡仁酯注射液25 m L/kg,正常组及造模对照组注射生理盐水25 m L/kg,均每天腹腔内注射1次。共用药21天。用药后对各组关节炎进行评分,计算关节炎指数,并应用流式细胞术测定小鼠外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg比例。结果与正常组比较,造模对照组关节炎指数明显升高(P0.01),薏苡仁酯组较造模对照组小鼠关节炎指数明显下降(P0.01)。与正常组比较,造模对照组Foxp3+CD4+CD25+Treg水平均明显下降(P0.01),薏苡仁酯组较造模对照组用药后Foxp3+CD4+CD25+Treg水平明显升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论薏苡仁酯能上调CIA小鼠Foxp3+CD4+CD25+Treg比例,可能在CIA的发病中具有一定的免疫调节作用。     

益髓生血颗粒对AA大鼠CD4 + CD25 + Foxp3调节性T细胞的影响

目的：观察益髓生血颗粒对再生障碍性贫血（Aplastic Anemia,AA）大鼠CD4 + CD25 + 调节性T细胞（Regulatory T Cell,Treg细胞）的影响及其治疗AA的作用机制。方法：取雄性SD大鼠按体重随机分组。其中模型组连续7周隔天皮下注射苯（1 mL ? kg -1 ）、取材10天前开始腹腔注射环磷酰胺（25 mL ? kg -1 ）,连续3天,第4周将模型组大鼠按体重随机分为模型组、司坦唑醇组、益髓生血颗粒组,灌胃给药。正常组及模型对照组给予等体积生理盐水。实验结束时,检测外周血WBC、RBC、HGB、PLT;制备血涂片、骨髓涂片;免疫组织化学法检测脾组织Treg细胞Foxp3蛋白表达;RT-PCR法检测骨髓组织Foxp3 mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组WBC、RBC、HGB、PLT均显著减少（P<0.01）,血涂片示血细胞通透性差、白细胞减少、退化细胞增多,骨髓涂片示脂肪滴明显增加、造血细胞均明显降低、非造血细胞增多;经益髓生血颗粒组治疗后WBC、RBC、HGB、PLT均显著增加（P<0.01）,血涂片及骨髓涂片显示细胞通透性好转、形态趋于正常、脂肪滴明显减少,造血细胞均明显增加,脾组织Foxp3蛋白及骨髓组织Foxp3 mRNA表达明显升高（P<0.01）。结论：益髓生血颗粒可上调Foxp3的因及蛋白表达,调控AA免疫功能,进而改善AA免疫环境,促进骨髓造血功能的恢复,发挥治疗AA的重要作用。     

温阳补肾法在神经系统疾病治疗中的应用

笔者在临床工作中,对于神经系统某些疾病,常以温阳补肾法进行治疗,收到一定疗效,兹录数例于后,以兹研讨。一、震颤麻痹震颤麻痹,临床主要表现为运动减少、震颤和肌强直。中医按其表现称之为“颤振”。王肯堂认为本     

温阳化瘀法在治疗哮喘中的应用

哮喘是一种常见的慢性顽固性疾病，发作时喉中哮鸣声声，呼吸急促，甚至鼻翼煽动，喘息不能平卧。本病包括现代医学中的支气管哮喘，慢性息性支气管炎，嗜酸性粒细胞增多症或其它急性肺部过敏性疾患引起的哮喘。因其病因病机复杂，证侯多变，在治疗思路上各式各样。从阳虚血瘀症论治哮喘，以温阳化阏 要的治疗思路，在治疗上突破了“发时治其标，缓时治其本”的陈规，无论新病久病，扶正祛邪，攻补兼施标本同治，是治疗哮顺喘根本所     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞与肿瘤免疫治疗的新进展

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞(CD_4~+CD_(25)~+ regulatory T cells, CD_4~+CD_(25)~+ Tregs)可抑制机体对肿瘤的免疫应答,导致不利于肿瘤患者的对肿瘤的免疫耐受.以降低CD_4~+CD_(25)~+Tregs作用,增强对肿瘤的免疫应答为新策略的肿瘤免疫治疗探索已有初步进展.方法 包括去除CD_4~+CD_(25)~+Tregs、单克隆抗体、蛋白分子转移、阻断Tregs的迁移和分化、逆转Tregs的分化、阻断Tregs的功能、疫/瘤苗、将Tregs调控与其他治疗模式相组合、提升抑制效应细胞的阈值.     

吴银根运用温阳补肾法治疗支气管哮喘经验

总结吴银根教授运用温阳补肾法治疗支气管哮喘的临床经验。吴师推崇命门理论,重视隐性虚损,认为肾阳不足贯穿哮喘发病的始终。临证运用温阳补肾法治疗哮喘,兼健脾固本、温阳通络、祛除痰瘀,疗效满意并有利于激素撤减。并附验案1则。     

温阳补肾法防治支气管哮喘的现代机理研究

支气管哮喘是一种严重危害人体健康的反复发作的慢性气道炎症疾病。诸多研究表明,哮喘的发生和发展与肾虚密切相关,温阳补肾法是治疗肾虚哮喘的一个重要法则,在临床上取得了良好的疗效。笔者总结了近5年来温阳补肾法防治哮喘的现代机理研究,包括抗炎、调节免疫失衡、缓解气道高反应性、改善气道重塑以及调节神经轴等,从而为温阳补肾法防治哮喘提供更进一步的理论和科学依据。     

补肾法在支气管哮喘中的运用

支气管哮喘（以下简称哮喘）是一种常见病、多发病，属于中医哮证的范畴。众多医家对哮喘进行了广泛深人的研究，并卓有成效。现就近年来运用补肾法治疗哮喘作一综述：1肾虚与哮喘的发病关系《症因脉治·哮病》曰：“哮病之因，痰饮留伏，结成窠穴，潜伏于内。”由此可知，伏痰为本病病理关键。郝氏等认为伏痰为津液停聚所致，而肾为维持津液正常代谢的关键，若肾阳不足，气化失职，津液代谢即失常，停聚则为伏痰。肾阳不充则伏痰不去，伏痰每因外邪激动而搏击于气道，致本病呈慢性反复发作状态［‘j。且临床常见大部分哮喘患者在缓解期均伴…     

非急性发作期哮喘患者CD4+CD25+调节性T细胞含量水平观察

目的 对非急性发作期哮喘病人CD4+CD25+调节性T细胞的含量水平进行临床观察.方法 对60例非急性期哮喘患者按年龄分组,采用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞含量水平,与60例健康人进行比较,在不同年龄段间存在不同差异性.结果 ①4～19岁(少年组)P<0.05差异有显著性.②20～49年龄组(青年组):P>0.05差异无显著性.③50～70年龄组(老年组):P<0.05差异有显著性.结论 哮喘的发作可能与患者体内CD4+CD25+调节性T细胞水平有关,值得进一步研究和探讨,为临床治疗哮喘病提供了新的依据和新的思路.     

肝郁对哮喘大鼠辅助性T细胞17和调节性T细胞的影响

目的 研究肝郁(肝气郁结证)对哮喘大鼠辅助性T淋巴细胞17 (Th17)、调节性T细胞(Treg)、白细胞介素-17 (IL-17)、白细胞介素-10(IL-10)及气道炎症反应的影响,阐明肝郁型哮喘发病的免疫机制.方法 利用中医肝郁证动物模型和西医哮喘动物模型的建模方法,建立大鼠肝郁型哮喘的病证结合模型.收集支气管肺泡灌洗液(BALF)并进行细胞总数及分类计数、肺组织进行病理学观察;流式细胞术检测外周血中Th17和Treg细胞占CD4+T细胞比例;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清中IL-17、IL-10的水平.结果 肝郁哮喘组、哮喘模型组炎性细胞总数为[(96.86±4.43)×107/L、(88.22±3.22)×107/L]、嗜酸性粒细胞比例为[(27.58±4.65)％、(22.67±2.43)％]、Th17细胞比例为[(6.86±0.98)％、(6.01±0.77)％]、IL-17水平为[(48.88±8.06) pg/ml、(43.24±6.32) pg/ml]均高于正常对照组[(30.58±2.49)×107/L、(0.78±0.12)％、(2.80±0.82)％、(24.11±3.40) pg/ml];肝郁哮喘组和哮喘模型组Treg细胞比例[(3.09±0.55)％、(3.96±0.66)％]及IL-10水平[(19.79±2.80) pg/ml、(20.29±3.12) pg/ml]均低于正常对照组[(8.02±1.26)％、(30.79±4.01) pg/ml].肝郁哮喘组炎性细胞总数(96.86±4.43)×107/L、嗜酸性粒细胞比例(27.58±4.65)％、Th17细胞比例(6.86±0.98)％、L-17水平(48.88±8.06) pg/ml均高于哮喘模型组[(88.22±3.22)×107/L、(22.67±2.43)％、(6.01±0.77)％、(43.24±6.32) pg/ml];肝郁哮喘组Treg细胞比例(3.09±0.55)％低于哮喘模型组(3.96±0.66)％;肝郁哮喘组肺组织病理学观察症状较哮喘模型组严重.结论 肝气郁结证可促进哮喘的炎症反应、Th17/Treg平衡失调和IL-17水平增加而加重哮喘.合并肝郁证是哮喘反复发作的重要内在因素之一.     

补肾活血方对多发性骨髓瘤调节性T细胞水平的影响

目的：观察补肾活血方辅助治疗多发性骨髓瘤对调节性T细胞水平的影响。方法：将44例患者随机分为实验组与对照组各22例,2组均予化疗及支持治疗,实验组同时给予补肾活血方汤药口服。2组均治疗6疗程。治疗前后检测调节性T细胞水平的变化。结果：实验组治疗后调节性T细胞水平较治疗前降低,差异有非常显著性意义（P〈0.01）;2组治疗后比较,实验组调节性T细胞水平低于对照组,差异有非常显著性意义（P〈0.01）。结论：补肾活血方能够降低调节性T细胞水平,改善多发性骨髓瘤患者的免疫功能。     

益气活血化痰方辅助治疗COPD疗效及对患者肺功能、Foxp3~+调节性T细胞表达的影响分析

目的:研究益气活血化痰方辅助治疗慢性阻塞性肺病(COPD)疗效及对患者肺功能、Foxp3+调节性T细胞表达的影响。方法:将我院收治的130例COPD患者随机分为观察组(常规治疗+益气活血化痰方,n=65)与对照组(常规治疗,n=65),观察两组中医症状积分、治疗有效率、肺功能指标(FEV1、FEV1%、FEV1/FVC、FEV1pred)、外周血Foxp3mRNA相对表达量与Foxp3+调节性T细胞(CD4+、CD25+Treg细胞)百分比、并发症率。结果:治疗2周、4周后,两组中医症状积分均呈下降趋势,组间、组内差异显著(P0.05);治疗4周后,统计观察组、对照组治疗有效率分别为89.32%和83.33%,(P0.05);治疗4周后,对照组FEV1无显著性改善,观察组FEV1显著上升(P0.05),但与对照组治疗后无显著性差异(P0.05),两组FEV1%、FEVI/FVC、FEV1%pred均显著提高(P0.05),观察组各指标上升幅度更大(P0.05);治疗4周后,两组外周血外周血Foxp3mRNA相对表达量与CD4+、CD25+Treg细胞百分比均显著上升,且观察组两物质上升幅度越大(P0.05);两组并发症率无显著性差异(P0.05)。结论:益气活血化痰方辅助西医治疗可有效改善COPD患者临床症状,增强患者肺功能与机体免疫力,提高治疗有效率,值得临床推广。     

薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎小鼠Foxp3^+ CD4^+ CD25^+调节性T细胞影响的研究北大核心CSCD

目的研究薏苡仁酯对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)小鼠外周血中Foxp3+CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的影响,探讨薏苡仁酯类风湿关节炎治疗中的可能机制。方法从25只小鼠随机选取5只为正常组,剩余20只小鼠进行CIA造模。造模成功后随机分为造模对照组10只及薏苡仁酯组10只。薏苡仁酯组予薏苡仁酯注射液25 m L/kg,正常组及造模对照组注射生理盐水25 m L/kg,均每天腹腔内注射1次。共用药21天。用药后对各组关节炎进行评分,计算关节炎指数,并应用流式细胞术测定小鼠外周血Foxp3+CD4+CD25+Treg比例。结果与正常组比较,造模对照组关节炎指数明显升高(P<0.01),薏苡仁酯组较造模对照组小鼠关节炎指数明显下降(P<0.01)。与正常组比较,造模对照组Foxp3+CD4+CD25+Treg水平均明显下降(P<0.01),薏苡仁酯组较造模对照组用药后Foxp3+CD4+CD25+Treg水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论薏苡仁酯能上调CIA小鼠Foxp3+CD4+CD25+Treg比例,可能在CIA的发病中具有一定的免疫调节作用。     

温阳补肾方对哮喘小鼠骨髓树突细胞TLR信号的调节作用

目的通过观察哮喘小鼠骨髓树突细胞的表达,以及Toll样受体(TLR2和TLR4)在骨髓树突细胞中的表达,探讨温阳补肾方对TLR信号介导的骨髓树突细胞在哮喘发病机制中的作用。方法 50只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、中药组、西药组、中西医结合组,每组10只。各组进行相应干预。小鼠肺组织切片进行苏木素-伊红(HE)染色,观察形态结构及炎症浸润情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺泡灌洗液中的IL-4、IL-5、IFN-γ的含量;分离培养各组小鼠的骨髓树突细胞,在倒置相差显微镜和扫描电镜下观察树突细胞的形态变化;RT-PCR检测骨髓树突细胞中TLR2和TLR4 mRNA的表达。结果肺组织病理可见模型组小鼠气道黏膜层增厚,周围有明显的炎症细胞浸润,各治疗组炎症均有不同程度的减轻。与正常对照组比较,模型组小鼠肺泡灌洗液中IL-4表达水平上调,INF-γ水平下调,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,中药组、西药组、中西医结合组IL-4表达均下调,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,中药组和中西医结合组均可上调INF-γ水平,差异有统计学意义(P0.05)。模型组骨髓树突细胞中TLR2、TLR4 mRNA的表达明显高于正常对照组(P0.05),各治疗组均可下调骨髓树突细胞中TLR2、TLR4mRNA的表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论温阳补肾方可以降低哮喘小鼠的气道阻力和减轻气道炎性反应,这可能是温肾方通过介导BMDC-TLR2/TLR4通路的信号转导,从而显著上调Th1型细胞因子分泌,下调Th2型细胞因子表达,进而调节Th1/Th2的免疫平衡。     

论温阳补肾法在青春期多囊卵巢综合征中的应用

<正>笔者在医学从业中有幸得到中、西医两位大师真传,实乃大运。一位是著名中医妇科专家,博士后指导老师,被国家中医药管理局授予全国名老中医药专家郭志强传承工作室北京东直门医院郭志强教授;另一位是北京协和医院妇产科内分泌学组博士生导师林守清教授。在两位大师严格受训之下,一位中西医融合诊疗思维大夫出炉。