转化生长因子β介导腹膜粘连形成的分子机制研究进展

手术后形成的腹膜粘连是腹部外科难以攻克的课题。大量研究证实,转化生长因子β(TGF-β)在术后腹膜粘连的形成中具有重要作用。近年来,大量学者就TGF-β介导腹膜粘连形成的分子机制进行了多方面的研究。该文简单概述TGF-β通过Smads、丝裂原活化蛋白激酶和Rho A GTPase/ROCK等信号通路介导腹膜粘连的形成,以期为术后腹膜粘连的预防提供潜在的靶点。     

川芎嗪对大鼠腹膜粘连中TGF-β1表达的影响

目的探讨川芎嗪对大鼠腹膜粘连中TGF-β1表达的影响。方法制作S-D大鼠腹膜粘连模型,关腹前注射川芎嗪注射液(约为50mg/kg)和生理盐水;术后7d行二次开腹手术,链霉亲和素免疫组化法(SABC法)检测粘连组织中TGF-β1蛋白的表达,酶联免疫(ELISA法)定量检测血液及腹腔积液中TGF-β1的浓度。结果川芎嗪组腹腔积液中的TGF-β1浓度(206.37±25.56ng/ml)明显低于模型组(293.42±29.61ng/ml)和生理盐水组(287.46±30.55ng/ml)(P<0.05)。粘连组织中染色强度和血液中的TGF-β1浓度值在模型组(244.98±31.47ng/ml)、生理盐水组(258.14±26.38ng/ml)和川芎嗪组(251.79±27.42ng/ml)三组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论川芎嗪抑制腹腔积液中TGF-β1的表达,但对粘连组织和血液中的TGF-β1含量无影响。     

葛根素对体外培养人腹膜间皮细胞保护作用的研究

目的:了解葛根素对体外培养的人腹膜间皮细胞增殖活性、氧化应激和转移生长因子-β1(TGF-β1)分泌的影响.方法:体外培养人腹膜间皮细胞,分对照组,腹膜透析液(PDS)组及葛根素1、2、3组(葛根素终浓度依次为50、100、200μg·ml-1)5组观察.检测各组间皮细胞的增殖活性,上清MDA、SOD、GSH水平以及TGF-β1的含量并进行比较.结果:在PDS干预下腹膜间皮细胞MTT还原能力明显下降,上清液MDA水平较对照组显著升高,SOD、GSH水平较对照组显著降低.葛根素组MDA水平显著低于PDS组,SOD、GSH水平显著高于PDS组.腹膜间皮细胞在PDS干预下分泌TGF-β1较对照组显著增加,葛根素组TGF-β1分泌与PDS组比较有显著下降.结论:葛根素可以拮抗商业性PDS对腹膜间皮细胞增殖活性的抑制作用,可以抑制氧化应激和TGF-β1分泌.     

辛伐他汀抑制腹膜透析相关性腹膜纤维化的实验研究

目的 研究辛伐他汀对大鼠腹膜透析模型腹膜形态和功能以及腹膜转分化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,初步探讨其对腹膜纤维化的防治作用及可能机制.方法 采用4.25%合糖透析液+脂多糖致腹膜纤维化模型.将大鼠随机分成3组:对照组、模型组、辛伐他汀组,辛伐他汀组在造模同时给予辛伐他汀20mg/(kg·d)灌胃.第30天后,测定各组腹膜功能,取壁层腹膜组织进行Masson染色,测定各组腹膜胶原厚度,RT-PCK方法检测脏层腹膜TGF-β1mRNA的表达,ELISA方法测定腹膜透析液TGF-β1的水平.结果 模型组腹膜较对照组明显增厚(P<0.05),纤维胶原大量沉积,超滤量明显下降(P<0.05);辛伐他汀治疗组腹膜病变较模型组均有不同程度减轻,超滤量增多(P<0.05);模型组腹膜TGF-β1 mRNA的表达及腹膜透析液TGF-β1的水平明显高于对照组(P<0.05),辛伐他汀治疗组较模型组均显著降低(P<0.05).结论 辛伐他汀可下调腹膜TGF-β1 mRNA的表达,延缓腹膜纤维化的进展.     

转化生长因子β与术后腹膜粘连

<正>术后腹膜粘连形成是外科常见和棘手的临床问题,对其形成机制目前已有较深入的认识,但分子学机制目前尚不清楚。已知许多细胞因子参与腹膜损伤和腹膜粘连形成,其中转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)起到一个关键的作用。     

pcDU_6质粒载体介导的TGFβ_1 shRNA抑制TGFβ_1在人腹膜间皮细胞中的表达

目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的 pcDNA3.1( )载体 (命名为 pcDU6) ,2对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由 6碱基序列间隔的反向互补序列 ,构建成TGFβ1短发夹RNA的产生质粒。采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGFβ1RNA的pcDNA3.1( )的载体质粒入 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)半定量分析HPMC中TGFβ1mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGFβ1蛋白质水平。结果 :HPMC在 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS的刺激下可明显上调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组较 pc DU6空载体组明显下调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组间比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;pcDNA3.1( )的载体质粒介导的反义RNA组与 pcDU     

卡巴胆碱对大鼠腹腔粘连形成和粘连组织TGF-β1表达的影响

目的 研究卡巴胆碱对大鼠腹腔粘连的干预作用及其对粘连组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响.方法 22只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(n=6)、腹腔粘连组(n=8)、卡巴胆碱干预组(n=8,50μg/kg).采用开腹后无菌干纱布摩擦大鼠盲肠蚓突盲端、并损伤侧腹壁法制作大鼠腹腔粘连动物模型.各组于术后第14天处死动物,参考Phillips 5级分类法评估大鼠腹腔粘连程度.取粘连盲肠组织切片行HE染色观察粘连组织病理变化,免疫组织化学法观察粘连组织TGF-β1表达变化情况.结果 卡巴胆碱干预组腹腔粘连组织面积明显减少.粘连程度评分(O.874±0.641)明显低于腹腔粘连组(3.125±0.641),P＜0.01;卡巴胆碱干预组与腹腔粘连组比较,粘连组织HE染色显示炎症反应轻,偶见增生纤维结缔组织;免疫组织化学染色示假手术组与卡巴胆碱干预组TGF-β1表达水平均显著低于腹腔粘连组.结论 卡巴胆碱可能通过抑制大鼠腹腔粘连组织炎症反应和TGF-β1表达影响腹腔粘连的形成.     

防粘连膜治疗新西兰大白兔宫腔粘连的效果

目的：观察氧化再生纤维素防粘连膜（ Interceed ）治疗新西兰大白兔宫腔粘连的疗效和安全性。方法采用机械和感染双重损伤法构建新西兰大白兔宫腔粘连动物模型。将48只雌兔随机分为4组：正常对照组、Interceed对照组、模型组、Interceed治疗组。正常对照组：行假手术,不造模。 Interceed对照组：正常兔宫腔内放置Interceed;模型组、Interceed治疗组采用机械和感染双重损伤法构建宫腔粘连动物模型。模型组：建模后不作治疗;Interceed治疗组：建模后1周宫腔内放置Interceed。每组分别于治疗前（建模后1周）、治疗后2周和4周各处死4只,收集双侧子宫组织,HE染色观察子宫内膜形态及腺体计数;Masson染色检测子宫内膜纤维化程度;免疫组化法检测子宫内膜转化生长因子β1（TGF－β1）的蛋白表达。结果（1）Interceed对照组各时间点子宫内膜腺体数量、纤维化面积比率、TGF－β1蛋白表达与正常对照组比较差异均无统计学意义（ P＞0.05）。（2）在治疗前,模型组和Interceed治疗组子宫内膜腺体数量均低于正常对照组（ P＜0.001）,而纤维化面积比率和TGF－β1蛋白表达均高于正常对照组（P＜0.001）。（3）在治疗后2、4周, Interceed治疗组TGF－β1蛋白表达均高于正常对照组（P＜0.001）,而腺体数量、纤维化面积比与正常对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）;Interceed治疗组子宫内膜腺体数量、纤维化面积比率、TGF －β1蛋白表达与模型组比较差异均有统计学意义（ P＜0.001）。结论 Interceed可以有效治疗新西兰大白兔宫腔粘连,并且对新西兰大白兔子宫内膜无明显不良影响。     

透明质酸联合羟乙基淀粉预防术后腹腔粘连的作用机制初探

目的:探讨透明质酸(HA)与羟乙基淀粉(HES)联合作用下,大鼠腹腔粘连组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达情况。方法:建立大鼠术后肠粘连模型,20只SD大鼠随机分成4组:假性粘连组、生理盐水对照组、透明质酸与羧甲基纤维素(HA-CMC)对照组和HA-HES实验组。用HE染色方法观察腹膜粘连程度以及用免疫组化的方法检测组织中TGF-β1和TNF-α的表达情况。结果:HA-HES实验组粘连分级及粘连发生率比生理盐水组和HA-CMC对照组明显减轻,差异显著(P<0.05)。结论:HA-HES防粘连剂能够明显减轻术后腹腔粘连程度,抑制术后腹膜损伤部位TGF-β1及TNF-α的表达。     

依匹斯汀联合人胎盘组织液治疗慢性荨麻疹的临床研究

目的：观察依匹斯汀联合人胎盘组织液治疗慢性荨麻疹的疗效和安全性。方法：将118例慢性荨麻疹患者随机分为治疗组60例予口服依匹斯汀,隔日肌肉注射人胎盘组织液;对照组：58例口服依匹斯汀。观察治疗第7、14天和28天的临床疗效和不良反应。结果：用药后7、14天和28天治疗组和对照组的有效率分别为51.67％、70．00％、91．67％和43．10％、67．24％、82．76％,差异有统计学意义。治疗组没有发生严重的不良反应。结论：依匹斯汀联合人胎盘组织液治疗慢性荨麻疹安全有效。     

子痫前期患者胎盘组织中细胞间黏附分子1的表达

目的:检测子痫前期患者和正常孕妇胎盘组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达水平,探讨其在子痫前期发病机制中的作用.方法:采用免疫组化PV-9000法检测50例子痫前期患者(其中轻度子痫前期20例,重度子痫前期30例)和30例正常孕妇子宫胎盘绒毛合体滋养细胞ICAM-1的表达情况.结果:重度子痫前期患者胎盘绒毛合体滋养细胞ICAM-1的表达明显高于正常孕妇组和轻度子痫前期组(P＜0.05),轻度子痫前期组与正常孕妇组ICAM-1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论:重度子痫前期患者胎盘绒毛合体滋养细胞ICAM-1的表达增强,可能通过引起母胎界面炎症反应而参与子痫前期的发病.     

几丁糖预防术后腹腔粘连的实验研究

目的探讨几丁糖对术后腹腔粘连的预防作用.方法将45只大鼠随机分为A、B、C 3组,于腹腔内浆膜损伤部位分别注入1%乳酸液、32%右旋糖酐-70液和2%几丁糖乳酸液各2 ml,术后14 d处死动物,观察各组腹腔粘连状况.结果 3组粘连分级比较有显著性差异(P＜0.01),C组粘连发生率与另2组有显著差异(P＜0.05).光镜下C组炎症反应轻微,纤维增生不明显;电镜下C组纤维细胞分泌胶原能力弱,间皮细胞增生活跃.结论几丁糖可有效降低大鼠术后腹腔粘连的发生和粘连程度,其作用优于右旋糖酐-70,且不影响切口的愈合.     

几丁糖预防术后肠粘连的临床对照观察

目的观察医用几丁糖预防术后肠粘连的效果。方法2004年9月～2006年2月共143例病人行剖腹手术,随机分成试验组和对照组,试验组(72例)应用医用几丁糖预防术后肠粘连,对照组(71例)术后直接关腹。结果试验组经过至少6个月的随访无1例发生肠粘连,对照组出现10例肠粘连症状,3例严重者出现粘连性肠梗阻。结论医用几丁糖是一种较理想的预防术后肠粘连的生物材料。     

鳖甲煎丸对腹膜透析相关腹膜纤维化的影响及机制探讨

目的探讨鳖甲煎丸对腹膜透析(PD)小鼠腹膜纤维化的抑制作用及可能机制。方法采用ICR小鼠4.25%腹透液2.0 mL每日腹腔注射一次,并于第3、5、7天联合脂多糖0.8 mg/kg腹腔注射造模;鳖甲煎丸1.2 g/kg每日灌胃一次,干预6周后,测腹透超滤量,HE染色和Masson染色观察壁层腹膜形态改变及腹膜厚度;Western blot检测脏层腹膜组织N-cadherin、ZO-1的蛋白表达水平,及pAkt、总Akt的蛋白表达水平。结果腹膜透析(PD)组、鳖甲煎丸(BJJW)组与对照(Control)组比较,超滤量均显著下降(P0.05);壁层腹膜均显著增厚(P0.01)。脏层腹膜ZO-1蛋白表达降低,N-cadherin蛋白表达升高,pAkt也明显升高(均P0.01)。BJJW组与PD组比较,超滤量明显改善(P0.05),壁层腹膜厚度降低(P0.01);脏层腹膜ZO-1蛋白表达增加,N-cadherin蛋白表达下降,pAkt也明显下降(均P0.01)。结论鳖甲煎丸抑制腹膜纤维化,PI3K/Akt信号调节腹膜间皮细胞上皮-间质细胞转分化(EMT)是其机制之一。     

胎盘生长因子于胎儿生长受限时在胎盘及蜕膜组织中的表达

目的 研究胎儿生长受限(fetal growth restriction, FGR)时胎盘生长因子(placenta growth factor, PLGF)在胎盘及蜕膜组织中的表达.方法 采用免疫组织化学和分子原位杂交的方法对正常妊娠和胎儿生长受限的胎盘及蜕膜组织中的PLGF及PLGF mRNA的表达进行检测,并通过计算机软件对组织中表达的情况进行定量分析. 结果①胎盘生长因子及其mRNA在正常组与FGR组间表达的部位相同,主要在胎盘的合体滋养细胞中表达,在绒毛间质细胞、内皮细胞及蜕膜细胞中也是有少量表达.②FGR组15例患者的胎盘合体滋养细胞、绒毛间质细胞、内皮细胞及蜕膜组织中PLGF的表达均较正常组明显减少.③FGR组15例患者的上述组织细胞中PLGF mRNA 的转录水平也较正常组明显降低.结论 胎儿生长受限时,胎盘及蜕膜中PLGF及PLGF mRNA中表达较正常妊娠时明显减少,提示滋养细胞合成及分泌PLGF的功能下降,这可能是胎儿生长受限发病机制中的一个重要环节.     

芍药苷对大鼠术后肠粘连影响及其作用机制探讨

目的 探讨芍药苷对SD大鼠术后肠粘连的作用效果。方法 选取40只雄性SD大鼠,采用电脑抽号随机分配成4组：空白对照组（Sham组）、对照组（Control组）、透明质酸钠盐阳性对照组（hyaluronate,HA组）以及芍药苷（paeoniflorin）组,每组10只大鼠。Sham组正常开腹后找到盲肠向外拉出然后放回;其余各组均采用盲肠摩擦+对应腹壁损伤模型进行肠粘连造模。芍药苷组术后给予芍药苷灌胃;透明质酸钠组术中腹腔放置透明质酸钠。造模成功后第10天处死所有动物,评估并比较4组大鼠形成粘连的程度及范围,进而进行粘连评分;病理学分析炎症渗出;取粘连组织进行蛋白质印迹（Western blot）分析肿瘤生长因子β（TGF-β）、白细胞介素8（IL-8）的表达;通过ELISA试剂盒检测各组血TGF-β、IL-8的表达水平。结果 术后第10天开腹后肉眼宏观评估粘连程度及范围,与对照组比较,芍药苷组中粘连等级及评分均降低,差异有统计学意义（P<0.50）;HE病理学分析显示芍药苷组炎症渗出显著降低;ELISA检测结果显示,芍药苷组TGF-β、IL-8低于Control组,差异有统计学（P<0.05）;进一步Western blot定量分析检测TGF-β、IL-8的表达在芍药苷组中显著降低（P<0.05）。结论 芍药苷可显著降低术后TGF-β、IL-8的表达,较临床常用的透明质酸钠效果更显著,有望成为术后用于预防肠粘连的药之一。     

球囊子宫支架预防宫腔粘连术后再粘连形成的临床研究

目的探讨球囊子宫支架预防宫腔粘连术后再粘连形成及减少子宫出血的有效性。方法选取2010年3月～2013年3月浙江省人民医院妇科收治的宫腔粘连患者106例为研究对象,将其分为观察组和对照组,每组各53例。观察组给予宫腔镜下电切割术＋球囊子宫支架放置术＋宫内节育器放置术＋人工周期治疗,对照组给予宫腔镜下电切割术＋宫内节育器放置术＋人工周期治疗。术后1、3个月随访,均予宫腔镜检查,观察并比较两组宫腔形态恢复情况、术后出血量、月经恢复情况、再粘连发生情况及感染、子宫穿孔、大出血等并发症发生情况。结果研究组总有效率（92.45%）高于对照组（79.25%）,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗1、3个月后,研究组宫腔粘连率（20.75%、7.55%）低于对照组（33.96%、16.98%）,两组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;研究组术后出血量及并发症总发生率[（121.37±24.19）mL、13.21%）]低于对照组[（198.61±29.37）mL、52.83%],两组相比差异有统计学意义（P〈0.05）;研究组月经恢复率（88.68%）高于对照组（66.04%）,两组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论球囊子宫支架预防宫腔粘连术后再粘连形成效果显著,可有效预防宫腔粘连,减少子宫出血及并发症的发生。